CC BY
163
УДК 615.322:582+633.88
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ФЛАВОНОИДОВ В ЛЕКАРСТВЕННЫХ ПРЕПАРАТАХ, СОДЕРЖАЩИХ ЭКСТРАКТ ГИНКГО БИЛОБА
Кисилёва А.Н., Стрелычева К.А., Коган Е.Г, Шаталова М.Э., Васильева О.В., Кордина О.В., Гершунина О.Ю.
Смоленский государственный медицинский университет, Россия, 214019, Смоленск, ул. Крупской, 28
e.g.kogan@yandex.ru - Коган Евгений Геннадьевич
Резюме. Были проанализированы два лекарственных препарата на основе экстракта гинкго двулопастного, по содержанию флавоновых гликозидов. Оба образца имели сертификат качества, подтверждающий, что в их состав входит стандартизированный экстракт листьев гинкго двулопастного, содержащий минимум 24% флавоновых гликозидов. Общее содержание флавоновых гликозидов определяли методом высокоэффективной жидкостной хроматографии в сочетании с УФ-детекцией. Работа показала различие в качестве образцов, полученных на основе стандартизированного (EGb 761®) и нестандартизированного сухого экстракта листьев гинкго двулопастного. Ключевые слова: Гинкго двулопастного листьев экстракт, флавоноиды.
DETERMINATION OF FLAVONOIDS IN MEDICINAL PRODUCTS CONTAINING GINKGO BILOBA EXTRACT
Kisiliova A.N., Strelycheva K.A., Kogan E. G., Shatalova M.E., VasiVeva O. V., Kordina O. V., Gershynina O. Y.
Smolensk State Medical University, Russia, 214019, Smolensk, Krupskaya St., 28 Summary. Two drugs based on the extract of Ginkgo biloba, were analysed according to the content of flavone glycosides. Both samples had a quality certificate, confirming that the content of 24% flavone glycosides in the standardized extract of Ginkgo biloba. The total content of flavone glycosides was determined by high-performance liquid chromatography with UV detection. The study showed a difference in the quality of the samples obtained on the basis of standardized (EGb 761®) and non-standardized dry extract of Ginkgo biloba. Key words: Ginkgo biloba leaf extract, flavonoids.
Введение. Хронические нарушения мозгового кровообращения (ХНМК) -прогрессирующая форма
цереброваскулярной патологии,
характеризующаяся многоочаговым или диффузным ишемическим поражением головного мозга с постепенным развитием комплекса неврологических и
нейропсихологических расстройств [3, 5]. Это одна из наиболее распространенных форм цереброваскулярной патологии, обычно возникающая на фоне общих сердечно-сосудистых заболеваний.
Термин «дисциркуляторная
энцефалопатия» был предложен в 1958 г. выдающимися отечественными
неврологами - профессорами Г.Э. Максудовым и В.М. Коганом [1]. Под этим термином было предложено понимать хроническое прогрессирующее диффузное поражение головного мозга в результате хронической ишемии и гипоксии, которое
проявляется прогрессирующими
когнитивными и другими
неврологическими расстройствами. В 1985 году данный термин был включен в отечественную классификацию
сосудистых заболеваний головного мозга, принятую на пленуме Всесоюзного общества неврологов [2].
Безрецептурные средства,
применяемые в комплексной терапии ХНМК, часто входят в перечень назначений врача. Часто препаратами первого ряда в терапии данного заболевания являются ангиопротекторы -препараты гинкго билоба. Они способны нормализовать кровоснабжение головного мозга, повысить усвоение кислорода тканями, повысить устойчивость мозга к возникающей гипоксии. Кроме того, эти препараты способны справиться с такими симптомами, сопровождающими ХНМК
как когнитивные нарушения, шум в ушах и головокружение.
На российском фармацевтическом рынке присутствует порядка 12 препаратов, основу которых составляет гинкго двулопастного сухой экстракт [4].
Лист гинкго двулопастного содержит две основные группы веществ, определяющих его биологическую активность и являющихся показателями подлинности сырья. Первую группу составляют терпеновые ди- и трилактоны (билобалиды и гинкголиды). Вторую группу представляют биофлавоноиды, при этом важным показателем качества сырья является соотношение флавоноидных агликонов кемпферола, кверцетина [4].
Целью работы явилось определение количественного и качественного содержания флавоноидов гинкго двулопастного в 2 образцах: образец №1 (производитель Франция) и образец №2 (производитель Россия).
Методика. В исследования принимали участие два образца, в состав которых входит экстракт гинкго двулопастного.
Подготовка образцов для исследования. Содержимое капсул и растертые таблетки, содержащие около 0,3 грамма сухого экстракта, помещают в круглодонную колбу объемом 250 мл, прибавляют 80 мл смеси метанол-вода-соляная кислота (60:20:8). Экстракцию проводят на кипящей водяной бане с обратным холодильником в течение 1-1,5 часа. Экстракт охлаждают до комнатной температуры, надосадочную жидкость фильтруют через целлюлозный фильтр с размером пор до 0,45 мкм в мерную колбу объемом 100 мл. Объем экстракта доводят дистиллированной водой до 100 мл.
Качественный состав
анализируемых объектов определялся методом тонкослойной хроматографии
(ТСХ) по интенсивности характерного свечения пятен при воздействии УФ-излучения.
Качественный и количественный состав флавоновых гликозидов
определялся методом ВЭЖХ на колонке Kromosil С18, 5 мкм, 250 мм х 4,6 мм ID производства НПФ АП ЛЮМЭКС (Россия). Используется градиентное элюирование с подвижной фазой метанол - ортофосфорная кислота, pH 2,6 (53:47) при скорости потока 1,2 мл/мин, температуре 25°С, с УФ-детекцией при 370 нм. Объем вводимой пробы 10 мкл. Применялся хроматограф Agilent 1100, состоящий из четырехканального градиентного насоса с дегазатором, автосамплера, термостата и диодно-матричного детектора. Сбор и обработка хроматограмм осуществлялась с помощью программ «ChemStation B.01.03» и «ACD/SpecManager 10.05».
Для определения содержания флавонолгликозидов найденные
концентрации кверцетина умножают на коэффициент 2,5; кемпферола - на 2,05.
Результаты исследования и их обсуждение. Содержание суммы флавоновых гликозидов гинкго
двулопастного должно быть не менее 24%. Согласно фармакопее США, определяется также содержание кверцетина и кемпферола.
Из двух анализируемых образцов только образец №1 содержит стандартизированный экстракт листьев гинкго двулопастного марки EGb 761® (далее - EGb 761®), в отношении которого накоплена наибольшая международная доказательная база эффективности при ХМК [1].
Результаты хроматографического скрининга методом ВЭЖХ. Как видно из представленных рисунков 1-3, на хроматограммах четко выделяется 9 пиков
Рис. 1. Хроматограмма EGb 761(g) Рис. 2. Хроматограмма образца № 1
Рис. 3. Хроматограмма образца №2
Полученные результаты ещё раз подтверждают, что образец №1 имеет хроматографический профиль,
аналогичный образцу №1 и EGb 761®. Тем не менее, мы отмечаем, что содержание пиков 5а и 5b выше для партии образца №1. Сумма из 9 пиков не соответствует
партии образца №2. Это обстоятельство ещё раз подтверждает выдвинутую нами гипотезу: партия образца №2 была изготовлена из экстракта гинкго двулопастного, который по качеству отличается от EGb 761® (табл. 1).
Таблица 1. Результаты хроматографического скрининга методом ВЭЖХ
Требование НД Образец №1 Образец №2
Всего 9 пиков 10,66-15,99% 14,65% 17,70%
Содержание гликозидов.
флавоновых
Рис. 4. Хроматограмма EGb 761® Рис. 5. Хроматограмма образца №1
Рис. 6. Хроматограмма образца №2
Таблица 2. Результаты количественного определения флавоновых гликозидов методом ВЭЖХ
Требование НД Образец №1 Образец №2
Всего 8.8-10,8 мг/ед* 10,0 мг/табл 10,3 мг/капс
Флавоновых гликозидов в БОЬ 761® должно быть: от 22,0% до 26,4%
Исходя из того, что каждый образец содержит 40 мг/ед (в соответствии с указанием в инструкции), содержание флавоновых гликозидов в каждой из единиц продукции должно быть от 8,8 до 10,6 мг. Полученные результаты показывают, что оба препарата соответствуют требованиям НТД по содержанию флавоновых гликозидов.
Заключение. На основании проведенного исследования, мы можем сказать, что образец №2 содержит 40 мг экстракта гинкго двулопастного, но есть высокая вероятность того, что используемый экстракт не является стандартизированным экстрактом листьев гинкго двулопастного марки EGb 761®.
Литература
1. Максудов Г.А. Дисциркуляторная энцефалопатия. В кн.: Сосудистые заболевания нервной системы / Под ред. Е.В. Шмидта. - М.: Медицина, 1975. - С. 501-512.
2. Шмидт Е.В. Классификация сосудистых поражений головного и спинного мозга // Журнал невропатологии и психиатрии. -1985. - Т. 85. - № 9. - С.192-203.
3. Штульман Д.Р., Левин О.С. Неврология. Справочник практического врача. 2-е изд. - М. : Медицина, 2002. -784 с.
4. Эллер К.И., Балусова А.С., Комарова Е.Л. // Рынок БАД. - 2005. - №4 (24). - С. 29-30.
5. Яхно Н.Н., Дамулин И.В., Захаров В.В. Дисциркуляторная энцефалопатия. - М.: Медицина, 2000. - 32 с.
