CC BY
118
УДК 661.122
В.Н. ВАСИЛЬЕВ
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ФАРМАКОХИМИЧЕСКОЙ СОВМЕСТИМОСТИ КОМПОНЕНТОВ АНТИОКСИДАНТНОЙ ЛЕКАРСТВЕННОЙ СМЕСИ ДЛЯ ИНТРААРТИКУЛЯРНОГО ВВЕДЕНИЯ
Ключевые слова: антиоксидантная лекарственная смесь (АЛС), кислота аскорбиновая, унитиол, новокаин.
Изучено количественное содержание компонентов АЛС для внутрисуставного введения. Кислота аскорбиновая определена поляриметрическим методом, унитиол и кислота аскорбиновая — прямым йодометрическим титрованием, а новокаин — лаурилсульфатометрическим титрованием. Проведено определение водородного показателя (рН) и выполнена тонкослойная хроматография (ТСХ) АЛС. Установлено, что между кислотой аскорбиновой, унитио-лом и новокаином отсутствует фармакохимическое взаимодействие. Сделано заключение, что АЛС можно использовать для внутрисуставного введения.
V.N. VASILYEV
THE DEFINITION OF PHARMACOCHEMICAL COMPATIBILITY OF THE COMPONENTS OF THE ANTIOXIDANT MEDICAL COMPAUND FOR INTRA-ARTICULAR INTRODUCTION
Key words: antioxidant medical compound (AMC), ascorbic acid, unitiol, novocaine.
The quantitative content of the components of the AMC for intra-articular introduction has been studied Ascorbic acid was defined by the polarimetric method; unitiol and ascorbic acid were defined by the straight iodometric titration; novocaine was defined by the laurylsulfatometric titration. And also the determination of hydrogenous index (pH) and the thin-layer chromatography (TLC) of AMC have been made. So, the conclusion has been made that there is no pharmacochemical interaction between ascorbic acid, unitiol and novocaine and it means that AMC can be used for intra-articular introduction.
В настоящее время всё ещё остаётся актуальной проблема местного внутрисуставного лечения послеоперационных гемосиновитов суставов.
Как правило, после эвакуации выпота широко применяют внутрисуставное введение суспензий глюкокортикостероидов (ГКС) с местными анестетиками. ГКС оказывают противовоспалительное действие, обладают имму-нодепрессивной активностью [6], усиливают катаболизм в месте введения, замедляют процессы регенерации, что важно для заживления послеоперационных ран, вызывают местнодистрофические процессы в тканях [10] и эро-зирование хряща [8]. Нередко после интраартикулярного введения возникает кратковременное микрокристаллическое воспаление сустава [8, 10]. Водородный показатель суспензий ГКС находится в кислом диапазоне значений, что намного ниже нормального внутрисуставного показателя рН, равного 7,768 [7]. ГКС усиливают внутрисуставной ацидоз при воспалении.
Для местного лечения послеоперационных гемосиновитов перспективно применять такие лекарственные препараты (ЛП), которые обладают высокой биодоступностью к очагу воспаления, оказывают выраженное терапевтическое действие, имеют минимальные побочные эффекты и низкую стоимость. Таким требованиям отвечает предлагаемая нами для внутрисуставного введения АЛС, состоящая из растворов кислоты аскорбиновой 5%, унитиола 5% и новокаина 0,5% для инъекций, взятых в соотношении 1:1:1 с общим объёмом 3 мл, которая готовится ex tempore из ЛП (заявка на патент № 2009143691/15(062153)). Поскольку в литературе нет данных об интраар-
^>о
но —сн I
тикулярном введении этих ЛП в смеси, нами проведено исследование, направленное на определение фармакохимической совместимости растворов кислоты аскорбиновой 5%, унитиола 5% и новокаина 0,5% для инъекций, что и явилось целью данной работы.
Acidum Кислота аскорбиновая содержит ендиольную группу,
ascorbinicum которая придает ей кислотные и восстановительные свойст-
н° он ва. Имеет два асимметрических атома углерода (С4 и С5), и
н^^ поэтому оптически активна, обладает свойством вращать
плоскость поляризации поляризованного луча света. Кислота аскорбиновая выступает в качестве донора и акцептора протона водорода, регулирует его транспорт во многих биохи-сн2он мических реакциях, обладает выраженными антиоксидант-
ными свойствами, ингибирует перекисное окисление липидов (ПОЛ), обрывает стадию инициирования путём обезвреживания суперок-сиданионрадикала, гидроксильного радикала [2, 9]. Также она участвует в регулировании окислительно-восстановительных процессов; поддерживает коллоидное состояние межклеточного вещества и нормальную проницаемость капилляров, угнетая гиалуронидазу; способствует фагоцитозу; тормозит высвобождение и ускоряет деградацию гистамина; угнетает образование простаглан-динов и других медиаторов воспаления [6]. Кроме того, рН раствора кислоты аскорбиновой 5% для инъекций позволяет проводить коррекцию кислотноосновного состояния синовиальной среды.
Унитиол содержит две сульфгидрильные группы, которые придают восстановительные и хелатообразую-н2о щие свойства. Асимметрических атомов углерода нет.
Унитиол имеет высокую реакционную способность, ингибирует неферментативное и ферментативное ПОЛ [9], обрывает стадии инициирования и разветвления цепи, восстанавливая перекись водорода и липоперекиси, образует с ионами металлов переменной валентности (железо и др.) прочные хелатные комплексы, которые не катализируют реакции разветвления [4] и синтеза супероксида-нионрадикала. Унитиол нормализует проницаемость капилляров, ингибирует активацию компонентов калликреин-кининовой системы, которым отводится важная роль в индуцировании таких кардинальных признаков воспаления, как боль и отёк [5].
Novocainum Новокаин содержит первичную аро-
матическую аминогруппу, третичный атом азота, сложноэфирную группу, ароматическое кольцо. Асимметрических атомов углерода нет. Новокаин обладает умеренной местноанестезирующей активностью, подавляет проведение болевых импульсов по нервным волокнам и устраняет спазм гладкой мускулатуры, проявляя умеренное сосудорасширяющее действие [6].
Unithiolum
сн2 - 8н I
сн - 8н I
сн2— ВОзЫа
:ын2
с - о- сн2 -сн2- N
о
нс1
Первоначально было установлено, что качество изучаемых объектов соответствует требованиям нормативных документов1. Определено в испытуемых образцах кислоты аскорбиновой 0,0515 г, унитиола 0,049 г и новокаина 0,00505 г.
С учетом необходимости введения в полость суставов растворов с нейтральным рН определён водородный показатель ЛП и АЛС на ионометре универсальном ЭВ-74. Результаты эксперимента представлены в табл. 1.
Как видно из табл. 1, АЛС имеет рН 6,3, близкий к нейтральному, что подтверждает целесообразность использования смеси в медицинской практике в отличие от раздельного введения кислых растворов новокаина и суспензий ГКС.
В дальнейшей работе методом ТСХ [11] было изучено поведение компонентов АЛС с целью выявления образования побочных продуктов. ТСХ проводили на пластинах марки 8огЬШ ПТСХ-П-В-УФ (ТУ 26-11-17-89) размерами 5x5 см, изготовленных ЗАО «Сорбполимер», г. Краснодар, Россия. Длина пробега растворителя составляла 4 см. На линии старта отмечали места для нанесения метчиков - растворов для инъекций кислоты аскорбиновой, унитиола, новокаина и определяемого объекта - АЛС. Неподвижной фазой являлся силикагель. В качестве подвижной фазы использовалась хроматографическая система этанол 95% - вода 5:1 и 1 капля кислоты хлористоводородной концентрированной.
Для хроматографирования к 1 мл исследуемого раствора для инъекций прибавляли 2 мл воды. АЛС получали, взяв по 1 мл каждого раствора для инъекций. Наносили микрошприцем «Газохром 101» по 0,5 мкл каждого раствора отдельно. ТСХ проводили восходящим методом в подготовленной камере в течение 25 мин.
После высушивания пластинку проявляли в УФ-излучении (^ = 254 нм). Наблюдали свечение пластинки, на которой просматривались 4 тёмных пятна, соответствующих кислоте аскорбиновой и новокаину. Унитиол в УФ-свете не просматривался. Для его обнаружения детектировали пластину раствором хлорида кобальта (II). Наблюдали 2 коричневых пятна, соответствующих унитиолу (рис. 1).
Проведённые ТСХ-исследования показали, что в АЛС побочные продукты не образуются.
Для количественного определения кислоты аскорбиновой и унитиола выбраны: фармакопейный йодометрический метод, принятый для унитиола, который позволяет определить кислоту аскорбиновую и унитиол совместно на основе их
1 ФС 42-3516-98 Раствор кислоты аскорбиновой 5% или 10% для инъекций; ФС 42-3124-95 Раствор новокаина 0,25%, 0,5%, 1% или 2% для инъекций; ФС 42-3068-94 Раствор унитиола 5% для инъекций.
Таблица 1
Результаты определения рН
Исследуемые объекты Определено рН рНтт рНтах
Раствор кислоты аскорбиновой 5% для инъекций 6,8 5,7 -7,0*
Раствор унитиола 5% для инъекций 4,2 3,1 -4,5*
Раствор новокаина 0,5% для инъекций 4,1 3,8 -4,5*
АЛС 6,3 5,3 -6,6
Суспензия гидрокортизона ацетата 2,5% 4,4 4,0 -5,0**
Примечание. Даны средние значения 5 определений.
* ФС 42-3516-98 Раствор кислоты аскорбиновой 5% или 10% для инъекций; ФС 42-3124-95 Раствор новокаина 0,25%, 0,5%, 1% или 2% для инъекций; ФС 42-3068-94 Раствор унитиола 5% для инъекций.
** ФС 42-2896-99 Суспензия гидрокортизона ацетата 2,5% для инъекций.
« О
• •
• •
1 2 3 4
Рис. 1. Хроматограмма исследования АЛС: 1 - раствор кислоты аскорбиновой 5%; для инъекций (Яу = 0,75); 2 - раствор унитиола 5% для инъекций (Яу = 0,85);
3 - раствор новокаина 0,5% для инъекций (Яу = 0,6); 4 - АЛС
восстановительных свойств, и поляриметрический метод определения кислоты аскорбиновой [1] как соединения с двумя асимметрическими атомами углерода.
Первоначально установили, что новокаин в испытанных условиях с раствором йода не реагирует. Затем раздельно определяли кислоту аскорбиновую и унитиол йодометрическим методом. Исследования показали, что йодо-метрия позволяет правильно установить
раздельное содержание кислоты аскорбиновой (0,0515 г в 1 мл) и унитиола (0,049 г в 1 мл).
Далее проводили количественное определение кислоты аскорбиновой и унитиола йодометрическим методом в АЛС. Для этого к 3 мл смеси прибавляли 0,25 мл 1% раствора формальдегида, 30 мл воды и титровали 0,1 моль/л раствором йода до синего окрашивания (индикатор - крахмал).
Рассчитывали содержание кислоты аскорбиновой и унитиола в 1 мл смеси по титру среднему, исходя из состава по прописи (1):
йаск.к + йун
Т ср. ------------------------------------------, (1)
йаск.к йун
Таск.к Тун
где Тср. - титр средний, Тср. = 0,009940 г/мл; ааск.к. - содержание кислоты аскорбиновой в навеске, ааск.к. = 0,05 г; аун. - содержание унитиола в навеске, аун = 0,05 г; Таск.к. - титр кислоты аскорбиновой по 0,1 моль/л раствору йода, = 0,008806 г/мл; Тун. - титр унитиола по 0,1 моль/л раствору йода;
-*ун.
Т
Ж
Тун. = 0,01141 г/мл.
Результаты представлены в табл. 2.
Результаты количественного определения кислоты аскорбиновой и унитиола йодометрическим методом по титру среднему
Таблица 2
Объект исследо- вания Взято смеси, мл Содержание в 3 мл смеси, г Израсходовалось 0,1 моль/л раствора йода, мл Определено кислоты аскорбиновой и унитиола, г
кислота аскорбиновая унитиол
АЛС 3 мл 0,0500 0,0500 10,20 0,1001
Примечание. Даны средние значения 5 определений.
Для определения кислоты аскорбиновой поляриметрическим методом в растворе для инъекций и в АЛС учитывались размер трубки и соотношение компонентов смеси 1:1:1. На исследование брали 3 мл раствора кислоты аскорбиновой 5% для инъекций с 6 мл воды и 9 мл АЛС. Поскольку раствор кислоты аскорбиновой 5% для инъекций готовится с добавлением стабилизаторов (натрия гидрокарбоната и натрия сульфита) в исследуемые растворы необходимо вводить 2 капли кислоты хлористоводородной концентрированной для перевода натрия аскорбината в кислоту аскорбиновую. Угол вращения испытуемых растворов определяли на поляриметре П-161 М. Рассчитывали граммовое содержание кислоты аскорбиновой в 1 мл раствора по формуле:
Г аск.к. —
а * Р * Рразб.
(2)
[а]*I * а
где а - угол вращения, а = +0,39°; Р - 1 мл раствора кислоты аскорбиновой 5% для инъекций; Гразб. - объём разбавления, Гразб. = 9 мл; [а] - удельное вращение, [а] = +24°; I - толщина слоя (длина трубки), I = 0,9504 дм; а - навеска, а = 3 мл. Результаты опытов и расчётов представлены в табл. 3.
Таблица 3
Результаты количественного определения кислоты аскорбиновой поляриметрическим методом
Объект исследования Взято кислоты аскорбиновой, г/3 мл Объём, мл Угол вращения, ±° Определено
г/1 мл %
Раствор кислоты аскорбиновой 5% для инъекций 0,1500 9 +0,39° 0,0513 102,6
АЛС 0,1500 9 +0,39° 0,0513 102,6
Примечание. Даны средние значения 5 определений.
Как видно из табл. 3, испытанная методика поляриметрии позволяет установить содержание кислоты аскорбиновой в ЛП и в АЛС.
Данные йодометрического и поляриметрического определения мы применили к установлению количественного содержания унитиола в 1 мл АЛС. Расчёт вели по формуле:
( а- Р -Гразб.
1 ун. • I V йода — ——=------
[а]-1 • 0?2 • Таск.к.
Гун —-
К * Р
(3)
где Гун. - количественное содержание унитиола в 1 мл АЛС, Гун. = 0,049 г; Р - 1 мл АЛС; а1 - навеска АЛС при йодометрическом определении, а1 = 1 мл; а2 - навеска АЛС при поляриметрическом определении, а2 = 3 мл; Гйода - объем 0,1 моль/л раствора йода, Гйода = 10,2 мл; К - коэффициент поправки 0,1 моль/л раствора йода, К = 0,9876.
Для количественного анализа новокаина в АЛС фармакопейные методы невозможно применить из-за участия кислоты аскорбиновой и унитиола в химических процессах, проходящих при определении новокаина. Поэтому использован метод лаурилсульфатометрии [3] с учетом наличия в строении новокаина третичного атома азота. Этот метод основан на образовании труднорастворимого лаурилсульфата новокаина.
кн2
СН3(СН2)п0803№
НС1_
-№С1
С — О— СН2 - СН2— N ;
„.С2Н5
'С2Н5
кн2
+ __С2Н5
с— О- СН2 —СН2 — N
" I
О
н
0380(СН2)пСН3
Э = М.м.
При титровании к 1 мл раствора новокаина 0,5% для инъекций прибавляли 4 мл воды, 1 мл 0,1 моль/л кислоты хлористоводородной, 2 капли диме-тилового жёлтого, 10 мл хлороформа, тщательно перемешивали и титровали 0,01 моль/л раствором лаурилсульфата натрия (ЛСН). В конце титрования прибавляли 2 капли метиленового синего и титровали до фиолетовой окра-
а
+
О
ски. Коэффициент поправки 0,01 моль/л раствора ЛСН равен 1,0055. 1 мл 0,01 моль/л раствора ЛСН соответствует 0,002728 г новокаина.
При определении новокаина в АЛС к 3 мл смеси прибавляли 2 мл воды, 3,5 мл 0,1 моль/л кислоты хлористоводородной и далее поступали, как указано выше. Полученные результаты представлены в табл. 4.
Таблица 4
Результаты количественного определения новокаина лаурилсульфатометрическим методом
Объект исследования Взято Объём 0,01 моль/л ЛСН, мл Определено
а, мл г/мл теоретически практически г/мл %
Раствор новокаина 0,5% для инъекций 1 0,00500 1,82 1,85 0,00507 101,4
АЛС 3 0,00500 1,85 0,00507 101,4
Примечание. Даны средние значения 5 определений.
Как видно из табл. 4, методика лаурилсульфатометрии позволяет установить содержание новокаина в 0,5% растворе для инъекций и в АЛС.
Результаты исследования фармакохимической совместимости компонентов АЛС для интраартикулярного введения представлены в сводной табл. 5.
Таблица 5
Результаты количественного определения кислоты аскорбиновой, унитиола и новокаина в растворах для инъекций и в антиоксидантной лекарственной смеси
Состав Раствор кислоты аскорбиновой 5% для инъекций 1 мл Раствор унитиола 5% для инъекций 1 мл Раствор новокаина 0,5% для инъекций 1 мл АЛС, 3 мл
Кислота аскорбиновая а, ±° +0,39° +0,39o
определено,г 0,0513 0,0513
Г - Г 1 min 1 max 0,0475 - 0,0525 0,0475 - 0,0525
Кислота аскорбиновая +Унитиол объём йода, мл 10,20
определено,г 0,1001
Унитиол объём йода, мл 4,35 10,20
определено,г 0,049 0,049
Г - Г 1 min 1 max 0,045-0,055 0,045 - 0,055
объём ЛСН, мл 1,85 1,85
Новокаин определено,г 0,00507 0,00507
Г . - Г 1 min 1 max 0,00485 - 0,00515 0,00485 - 0,00515
Примечание. Даны средние значения 5 определений.
Обсуждение результатов (табл. 5). Опытные данные и расчёты показали, что результат количественного определения кислоты аскорбиновой, унитиола и новокаина в АЛС соответствует содержанию этих веществ по прописи. Компоненты смеси не образуют побочных продуктов (ТСХ). Значение рН АЛС является оптимальным для интраартикулярного введения.
Таким образом, исследования подтвердили отсутствие химического взаимодействия между кислотой аскорбиновой, унитиолом и новокаином, что позволяет сделать заключение о фармакохимической совместимости данных ЛВ и подтверждает возможность использования АЛС для внутрисуставного введения.
Литература
1. Арефина Н.Ф., Хомов ЮА, Березина Е.С. Методы поляриметрии и рефрактометрии в фармацевтическом анализе: учеб. пособие. 3-е изд., перераб. и доп. / Пермская гос. фармацевтическая академия. Пермь, 2006. 60 с.
2. Афанасьев И.Б. Свободно-радикальные ингибиторы и промоторы в биологических процессах // Кислородные радикалы в химии, биологии и медицине: сб. науч. статей / Рижск. мед. ин-т. Рига, 1988. С. 9-25.
3. Ванькова Н.А., Чекрышкина Л.А. Экстракционно-титриметрическое определение папаверина гидрохлорида в лекарственных формах // Фармацевтический журнал. 1988. № 6. С. 44-47.
4. Западнюк В.И., Курляндчиков В.Н. Фармакологическая активность унитиола и применение его в клинике: обзор литературы // Врачебное дело. 1973. N° 8. С. 122-125.
5. Масленников Е.Ю., Перепечай Л.Д., Вилков Г.А. Экспериментально-клиническое обоснование внутрисуставного введения унитиола при реактивных травматических артритах // Ортопедия, травматология и протезирование. 1985. № 5. С. 54-55.
6. Машковский М.Н. Лекарственные средства. 15-е изд., перераб., испр. и доп. М.: Новая Волна, 2006. 1206 с.
7. Павлова В.Н. Синовиальная среда суставов. М.: Медицина, 1980. 296 с.
8. Редин В.А., Иванов Л.И. Хирургические осложнения местной и общей глюкокортикостероидной терапии. Чебоксары: Изд-во Чуваш. ун-та, 1998. 118 с.
9. Соколовский В.В. Тиоловые антиоксиданты в молекулярных механизмах неспецифической реакции организма на экстремальное воздействие: (обзор) // Вопросы медицинской химии. 1988. № 6. С. 2-10.
10. Условия и требования к внутрисуставному и периартикулярному введению глюкокортикостероидных препаратов: метод. указания №2001/25: утв. Министерством здравоохранения России 05.12.2000. М., 2001. 12 с.
11. Чекрышкина Л.А., Эвич Н.И. Инструментальные методы в фармацевтическом анализе: учеб. пособие / Пермская гос. фармацевтическая академия. Пермь, 2005. 211 с.
ВАСИЛЬЕВ ВЛАДИМИР НИКОЛАЕВИЧ. См. с. 2S1.
УДК 616.12-053
ИВ. ВИНОГРАДОВА
СТАНОВЛЕНИЕ ЦЕНТРАЛЬНОЙ ГЕМОДИНАМИКИ У НЕДОНОШЕННЫХ ДЕТЕЙ С ОЧЕНЬ НИЗКОЙ И ЭКСТРЕМАЛЬНО НИЗКОЙ МАССОЙ ТЕЛА С ДЫХАТЕЛЬНЫМИ НАРУШЕНИЯМИ*
Ключевые слова: новорожденные, недоношенные, дети с экстремально низкой массой тела, гемодинамика, дыхательные нарушения, становление центральной гемодинамики.
Изучен механизм адаптации гемодинамики у недоношенных новорожденных с экстремально низкой и очень низкой массой тела с дыхательными нарушениями. Выявлено, что имеет место высокое функциональное напряжение гемодинамики с морфофункциональной незрелостью и сохраняющимся фетальным типом кровотока, на второй-третьей неделях жизни внутрисер-дечное кровообращение по сравнению с таковым у детей без дыхательных нарушений характеризуется меньшими диастолическим и систолическим объемами левого желудочка, ударным объемом левого желудочка, лево-правым сбросом крови через большое открытое овальное окно, длительно сохраняющимся функционирующим артериальным протоком.
I.V. VINOGRADOVA FORMATION OF CENTRAL HAEMODYNAMICS AT PREMATURELY BORN CHILDREN WITH VERY LOW AND EXTREMELY LOW WEIGHT OF THE BODY WITH RESPIRATORY INFRINGEMENTS
Key words: newborns, prematurely born, children with extremely low weight of a body, haemody-namics, respiratory infringements, formation of central haemodynamics.
The mechanism of adaptation of haemodynamics at prematurely born newborns with extremely low and very low weight of a body with respiratory infringements was studied, is revealed that high functional pressure of haemodynamics with immaturity and remaining фетальном blood-groove type takes place, on 2—3 week of life intrawarm blood circulation in comparison with children without respiratory infringements is characterized smaller diastolic and систолическим by volumes of the left ventricle, shock volume of the left ventricle, the is left-right dump of blood through big an open oval window, is long remaining a functioning arterial channel.
Актуальной проблемой педиатрии является рождение детей с малой массой тела. Наиболее частыми причинами развития критических состояний у
* Исследование выполнено по госконтракту № П1292 ФЦП «Научные и научно-педагогические кадры инновационной России» на 2009-2013 гг.
