CC BY
133
Определение естественных антител к эндогенным биорегуляторам у людей с острой и хронической болью методом иммуноферментного анализа и их связь с гендерными особенностями
В.С. Морозова1, О.Ю. Полывяная1, С.Н. Петроченко1, В.В. Шипицын2, М.А. Мягкова1, И.А. Мосейкин3
1 Институт физиологически активных веществ РАН, Черноголовка Московской обл.
2 Московский научно-практический центр наркологии Департамента здравоохранения Москвы
3 Кафедра рефлексологии и мануальной терапии ГБОУ ДПО РМАПО, Москва
В работе изучено изменение уровней естественных антител (е-Ат) к бета-эндорфину, орфанину, серотонину, дофамину и ангиотензину у людей с острой и хронической болью и установлена их связь с гендерными особенностями. Было обследовано 36 здоровых людей и 109 пациентов, страдающих дорсопатией с хроническим болевым синдромом. В ходе проведенной работы установлено, что изменение уровней естественных антител к эндогенным биорегуляторам мало зависит от длительности болевого синдрома, но имеет гендерную направленность.
Ключевые слова: естественные антитела, эндогенные биорегуляторы, ИФА, боль.
Согласно определению Международной ассоциации по изучению боли (LASP), «боль — это неприятное ощущение и эмоциональное переживание, связанные с реальным или потенциальным повреждением тканей либо описываемые в терминах такого повреждения» [1]. Ежедневно в мире около 4 млн больных страдают от болей разной интенсивности: 10-15 % от умеренной боли, 30-40 % от боли средней интенсивности, 60-80 % от сильных болей [2]. Неоднозначность понятия «боль» и многообразие проявлений боли по-разному оценивают врачи и психологи. Они различают боль как первичную и вторичную, острую и хроническую, висцеральную (жгучая, колющая, тупая), физическую и психогенную. Полный ответ на этот вопрос нельзя получить без анализа сведений
о механизмах, процессах и явлениях в тех системах мозга, которые воспринимают и перерабатывают импульсы, возникающие вследствие воздействия на организм болевых факторов.
Что же является причиной возникновения болевых ощущений? В начале ХХ века было выяснено, что структуры, отвечающие за возникновение и передачу болевых ощущений, находятся на разных уровнях нервной системы [3]. С развитием науки стало понятно, что важная роль в развитии ноцицепции принадлежит иммунной и эндокринной системам. Установлено участие целого ряда эндогенных биорегуляторов в этом процессе. К ним в первую очередь относятся такие
нейромедиаторы, как серотонин, дофамин, эндорфин, орфанин, ангтиотензин.
Серотонин — одно из веществ, являющихся химическим передатчиком импульсов между нервными клетками человеческого мозга. Восприимчивые к серотонину нейроны расположены практически по всему мозгу. Существенное значение придается серотонину в деятельности антиноцицептивной системы, центральной регуляции болевой чувствительности. Показано, что снижение его содержания приводит к ослаблению анальгетического эффекта, понижению болевых порогов, большей частоте развития болевых синдромов. От содержания серотонина в ЦНС зависит и степень выраженности болеутоляющего действия морфина и других наркотических анальгетиков. Полагают также, что анальгетическое действие серотонина может опосредоваться эндогенными опиатами, поскольку он способствует высвобождению бета-эн-дорфина из клеток передней доли гипофиза. Местное (например, внутримышечное) введение экзогенного серотонина вызывает сильную боль в месте введения. Предположительно серотонин наряду с гистамином и простагландинами, раздражая рецепторы в тканях, играет роль в возникновении болевой импульсации из места повреждения или воспаления.
Дофамин — нейротрансмиттер, тесно связанный с чувством удовольствия и двигательным поведением, играет роль в адаптации организма к стрессовым
ситуациям, травмам, кровопотерям и др. Влияет на переносимость человеком болевой импульсации — так как боль неразрывно связана с удовольствием, мысль о будущем вознаграждении может сильно повлиять и на то, насколько остро человек чувствует боль. Если вознаграждение адекватно, такие вещества, как дофамин, подавляют болевые рецепторы.
Бета-эндорфин — нейропептид из группы эндорфи-нов, образующийся во многих клетках ЦНС и являющийся эндогенным лигандом опиоидных рецепторов, участвует в устранении отрицательных эмоций и боли. Для эндорфинов основной мишенью является так называемая опиоидная система организма, и опиоидные рецепторы в частности. Психологически, воздействуя на опиоидные рецепторы, и эндорфины и энкефалины вызывают эйфорию — «форму болезненно повышенного настроения». Эйфория включает в себя не только эмоциональные изменения, но и целый ряд психических и соматических ощущений, чувствований, за счет которых достигается положительный эмоциональный сдвиг.
Орфанин (ноцицептин) — пептид, обладающий наибольшей гомологией с опиоидным пептидом ди-норфином А, относится к классу опиоидных пептидов. Его фармакологическое действие весьма разнообразно: стимулирует активность нейронов, обеспечивает анальгезию в спинном мозге, регулирует высвобождение гормонов гипофиза в покое и при стрессе [4]. Пептид является природным лигандом нечувствительных к налоксону огрЬап-рецепторов, сопряженных с G-белками, этот тип рецепторов имеет высокую степень гомологии с к-опиоидными рецепторами [5-7].
Ангиотензин — олигопептидный гормон, помимо известной роли в контроле над кровяным давлением, предположительно влияет на восприятие боли. Проведены исследования [8], показывающие, может ли ангиотензин, преобразовывающий ингибитор фермента, изменить связанный с гипертонией уровень восприятия боли у людей.
В настоящее время доказано, что деятельность иммунной системы не ограничивается только выявлением и уничтожением чужеродных антигенов. Все более прочную позицию занимают представления об ее способности контролировать и неиммунные функции организма [9]. В частности, иммуноциты и их секреторные продукты принимают активное участие в регуляции механизмов физиологической и патологической боли [10].
В последнее десятилетие накоплен значительный фактический материал, который убедительно свидетельствует о существенной роли иммунологических механизмов в развитии болевых синдромов. Исследования в области нейроиммунного взаимодействия показывают, что при развитии ряда заболеваний могут происходить изменения гуморального иммунитета, связанные с продукцией естественных антител (е-Ат), специфичных к эндогенным биорегуляторам (ЭБ).
В частности, существует тесная взаимосвязь механизмов регуляции болевой чувствительности и работы иммунокомпетентных клеток организма. Однако роль антител в развитии болевых синдромов (БС) у человека пока изучена мало.
Целью настоящего исследования явилось определение уровня е-Ат к бета-эндорфину, орфанину, серотонину, дофамину и ангиотензину при острой и хронической боли и выявление их различий в группах мужчин и женщин, больных дорсопатией с хроническим болевым синдромом.
Материалы и методы
Было обследовано 109 пациентов (51 мужчин и 58 женщин) с дорсопатией поясничного отдела позвоночника. Возраст пациентов составил от 16 до 72 лет (средний возраст 47 ± 12 лет). В качестве контрольной группы исследовали сыворотку крови 36 здоровых людей (17 женщин и 19 мужчин) в возрасте от 22 до 58 лет (средний возраст 38 ± 9 лет). У исследуемых лиц осуществляли забор 5 мл венозной крови натощак, в первый день при поступлении. Пробирки с кровью помещали в термостат на 30 мин. при температуре 37 °С либо оставляли на 18 часов при температуре
4 °С и далее центрифугировали при 3000 об/мин. Полученные образцы хранили до момента тестирования.
Образцы сыворотки исследовали на наличие антител к бета-эндорфину, орфанину, серотонину, дофамину и ангиотензину методом твердофазного иммуноферментного анализа (ИФА) на полистироль-ных планшетах фирмы Nunc (Дания). Синтез конъюгированных антигенов осуществляли по методике, разработанной нами ранее [11, 12]. Процедуру ИФА проводили в условиях, описанных в работе [13].
Статистическую обработку данных проводили с помощью программы Statistica 6.0. Для оценки эмпирических распределений полученных данных использовали критерий нормальности. В случае нормального распределения признаков значимость их различий в группах определяли с помощью t-критерия Стьюдента. Для распределений, отличающихся от нормального, использовали таблицы сопряженности с применением критерия х2. Достоверными считали различия между группами при р < 0,05.
Обсуждение результатов
1. При проведении иммуноферментного анализа антител к бета-эндорфину, орфанину, серотонину, дофамину и ангиотензину было обнаружено значительное повышение их уровней в группе больных по сравнению с показателями у здоровых для всех нейромедиаторов. Эти результаты подтверждают данные, полученные нами ранее [14]. В таблице представлены статистически обработанные результаты проведенного эксперимента
При дальнейшем исследовании уровня е-Ат к перечисленным выше нейромедиаторам у здоровых людей
Таблица. Результаты сравнения групп доноров с пациентами
Эндогенные биорегуляторы Доноры, средние по группе значения ОО в ИФА* 450 Пациенты, средние по группе значения ОР„„ 450 в ИФА**
Бета-эндорфин 0,57 ± 0,14 1,01 ± 0,30
Серотонин 0,68 ± 0,13 0,86 ± 0,25
Дофамин 0,66 ± 0,13 0,90 ± 0,26
Орфанин 0,62 ± 0,16 1,02 ± 0,29
Ангиотензин 0,64 ± 0,16 0,87 ± 0,22
*р < 0,05.
**Р < 0,01 (в сравнении с донорами).
установлено нормальное распределение разброса значений показателя оптической плотности ко всем исследуемым веществам. Это позволило использовать параметрические методы статистики для определения отличия в распределении уровней е-Ат к перечисленным выше показателям в группах больных мужчин и женщин с острой и хронической болью.
Для этого проводили сравнение показателей значений оптической плотности, полученных для естественных АТ в группе здоровых мужчин с аналогичными показателями в группе здоровых женщин. Установили, что значения р, полученные по всем исследуемым эндогенным биорегуляторам, оказались больше 0,01, что позволило сделать вывод об отсутствии различий у здоровых людей по полу. Затем группу здоровых поделили на три подгруппы по возрасту: первая — до 39 лет, вторая — от 40 до 55 лет, третья — старше 55 лет. При сравнении групп между собой значение р во всех случаях оказалось больше 0,01. Таким образом, уровень Ат к бета-эндорфину, орфанину, серотонину, дофами-
ну и ангиотензину у здоровых мужчин и женщин не зависит от возраста и пола, а колеблется в пределах Хср ± с (нормы).
Для описания степени отклонения от нормы исследуемых показателей у больных корешковым синдромом были рассчитаны Хср (среднее значение) и с (среднеквадратичное отклонение) по данным здоровых людей для каждого нейромедиатора. Эти значения представлены в таблице.
В качестве нормальных значений уровня антител к ЭБ приняли интервал Хср ± с, для повышенных значений этот интервал составил диапазон от (Хср + с) до (Хср + 3с), к высоким относили значения, превышающие порог Хср + 3с.
Рис. 1. Различия в уровнях е-АТ к андогенным биорегуляторам у больных с острыми и хроническими болями в спине
90 ■
80 • 77
остр остр остр хрон хрон хрон
норма повыш высок норма повыш высок
Исследуемых поделили на две группы: одна с острой, другая с хронической болью. Внутри групп выделили по три подгруппы в соответствии с вышеописанным принципом. Результаты представлены на рис. 1.
Как видно из полученных данных, по уровню е-Ат к ангиотензину значительно большее количество людей с острой болью имели повышенные значения е-Ат: 77 % по сравнению с 45 % в группе с хронической болью (р < 0,05). Подобное распределение показателей наблюдалось и для других нейромедиаторов — 53 и 33 % для е-Ат к бета-эндорфину, 53 и 36 % для е-Ат к серотонину, 50 и 34 % для е-Ат к орфанину. Однако для данной выборки эти различия наблюдаются на уровне тенденций (0,05 < р < 0,1). Для е-Ат к дофамину достоверной разницы в группах с острой и хронической болью не было выявлено (37 и 43 % пациентов с повышенным уровнем е-Ат). Предположительно, такое распределение может говорить о том, что ангиотензин играет более узкую роль в развитии боли, в то время как роль других медиаторов более многозначна. Поэтому для е-Ат к ангиотензину показана четкая картина различия по пациентам разных групп даже на небольшой выборке.
По приведенному выше способу больных в группах мужчин и женщин поделили на три подгруппы, различающиеся диапазоном уровня обнаруживаемых е-Ат. Далее провели сравнение подгрупп между собой. Результаты, полученные в каждой из групп, представлены на рис. 2.
Анализируя полученные результаты, можно отметить, что различия в уровнях е-Ат в группах между мужчинами и женщинами определяются не для всех исследуемых веществ, а степень наблюдаемых показателей варьирует от группы к группе. Так, по орфанину достоверно больше женщин имеют высокое (больше 3с) значение уровня е-Ат (58 % женщин и только 25 % мужчин). А по серотонину и дофамину достоверно меньшее количество женщин имеют отличные от нормального диапазона значения уровня антител (57 % женщин и 82 % мужчин для дофамина, 48 % женщин и 17 % мужчин для серотонина). При этом группы с высоким уровнем антител к указанным нейромедиаторам отличаются недостоверно (17 % женщин и 28 % мужчин по дофамину, 13 % женщин и 20 % мужчин по серотонину). Это подтверждает предположение, что вклад в процесс развития боли далеко не одинаков для разных ЭБ.
Выводы
В результате проведенного экспериментального исследования установлено, что определение уровня е-Ат к эндогенным нейромедиаторам может служить маркером состояния патологической алгической системы. Показано, что длительность болевого синдрома влияет на содержание е-Ат. Однако полученные данные
свидетельствуют о том, что эта зависимость не является диагностически значимой. Различия по полу достоверно отражаются на распределении уровней е-Ат к исследуемым эндогенным веществам. Этот факт необходимо учитывать при выборе терапии. Таким образом, в ходе проведенной работы установлено, что изменение уровней естественных антител к эндогенным биорегуляторам мало зависит от длительности болевого синдрома, но имеет гендерную направленность.
Литература
1. Хвисюк О.М., Марченко В.Г., Вітенко І.С. та ін. Традиційні та нетрадиційні методи лікування в клінічній і спортивній медицині. — Х.: Фоліо, 2007. — 409 с.
2. Новиков Г. А. Лечение хронической боли онкологического генеза / Г. А. Новиков, Н. А. Осипова. — М., 2005. — 168 c.
3. Скоромец A.A., Скоромец Т.А., Скоромец А.П., Тиссен Т.П. Спинальная ангионеврология: руководство для врачей. — М., Медпресс информ, 2003. — 607 с.
4. Navolotskaya E.V., Malkova N.V., Zargarova T.A., Lepikhova T.N., Zav>yalov V.P., Lipkin V.M. Synthetic beta-endorphinlike peptide immunorphin binds to non-opioid receptors for P-endorphin on T lymphocytes // Peptides. — 2001. — V. 22. — P. 2009-13.
5. Nakanishi S., Inoue A., Kita Т., Nakamura M., Chang A.C., Cohen S.N., Numa S. Nucleotide sequence of cloned cDNA for bovine corticotropin-beta-lipotropin precursor // Nature. — 1979. — V. 278. — P. 423-7.
6. Oh Y., Alpuche-Aranda C., Berthiaume E., Jinks Т., Miller S.I., Swanson J.A. Rapid and complete fusion of macrophage lysosomes with phagosomes containing Salmonella typhimurium // Infection and Immunity. — 1996. — V. 64. — P. 3877-83.
7. Ortega E., Forner M.A., Barriga C. Effect of P-endorphin on adherence, chemotaxis and phagocytosis of Candida albicans by peritoneal macrophages // Сотр. Immun. Microbiol. Infect. Dis. — 1996. — V. 19. — P. 267-74.
8. Guasti l., Zanotta D., Diolisi A., Garganico D., Simoni C., Gaudio G., Grandi A.M., Venco A. (). Changes in pain perception during treatment with angiotensin converting enzyme-inhibitors and angiotensin II type 1 receptor blockade // Journal of hypertension. — 2002. — Vol. 20, pp. 485-491.
9. Фролов Б.А. Физиология и патология нейроэндокринной регуляции. — М.: Медицина, 2006. — С. 192-199.
10. Marchand F. Role of the immune system in chronic pain / F. Marchand, M. Perretti, S.B. McMachon // Nat Rev Neurosci. 2005. — Vol. 6. — № 7. — P. 521-532.
11. Мягкова М.А., Лушникова М.В., Полевая О.Ю. Иммуноглобулины, связывающие биогенные амины у больных с наркотической зависимостью // Иммунология. — 1992. — № 3. — С. 45-47.
12. Полевая О.Ю., Самсонов В.А., Мягкова М.А. Иммуноглобулины, связывающие опиоидные пептиды у больных
дерматитом и опийной наркоманией // Иммунология. — 1991. — № 2. — С. 42-44.
13. Мягкова М.А., Панченко Л.Ф. Новый подход в диагностике и профилактике наркомании на основе определения антител к наркотическим веществам и эндогенным биорегуляторам // Наркология. — 2004. — № 6. — С. 49-51.
14. Мягкова М.А., Морозова В.С., Петроченко С.Н., Левашова А.И., Мосейкин И.А., Шипицин В.В., Со-кольчик Е.И., Брюн Е.А. Сравнительный анализ гуморальных факторов иммунитета у пациентов с хроническим болевым синдромом: сборник статей Международной конференции «Рецепторы и внутриклеточная сигнализация» (г. Пущино Московской обл., 24-26 мая 2011 г.). — Пущино, 2011. — Т. 2. — С. 534-539.
Detection of natural antibodies to endogenous bioregulators in people with acute and chronic pain by ELISA method and its’ relation to gender characteristics.
V.S. Morozova1, O.Yu. Polyvyanaya1, S.N. Pet-rochenko1, V.V. Shipitsyn2, M.A. Myagkova1, I.A. Mo-seykin3.
1 Russian Academy of Science Institute for Physiologically Active Compounds, Chernogolovka, Moscow region, Russia
2 Moscow Research and Practical Center for Narcology of Moscow Health Department, Moscow, Russia
3 Botkin hospital, Moscow, Russia.
Changes in levels of natural antibodies (n-Ab) to beta-endorphin, dopamine, serotonin, orphanin and angiotensin in people with acute and chronic pain and its’ relation with gender is established in the paper. 36 healthy people and 109 patients suffering from a dorsopathy with a pain syndrome have been investigated. The obtained data indicate that the levels of n-Ab to the above-mentioned endogenous bioregulators weakly depends on the duration of pain, but have a gender tendency
Key words: natural antibodies, endogenous bioregulators, ELISA, pain.
«АстраЗенека» объявила об усилении своего портфеля препаратов для лечения онкологических заболеваний
В рамках конгресса Американского общества клинической онкологии (ASCO) в США «АстраЗенека» объявила о том, что в 2013 г. два препарата в ее онкологическом портфеле перейдут в III фазу клинических исследований. В соответствии с новой стратегией «АстраЗенека», объявленной в марте 2013 г., онкология является одной из ключевых для компании
терапевтических ооластеи, а стратегическим приоритетом
На конгрессе Американского общества клинической онкологии (ASCO) в Чикаго, США, были представлены результаты клинических исследований II фазы препарата, относящегося к классу пероральных PARP-ингибиторов. Как показывают результаты исследований, новая молекула может применяться для поддерживающей терапии пациенток с рецидивирующим платиночувствительным раком яичников при наличии мутации гена BRCA. «АстраЗенека» планирует проведение III фазы исследования препарата с участием данной группы пациенток уже во второй половине 2013 г.
«АстраЗенека» также представила данные исследования селективного MEK ингибитора для лечения прогрессирующей увеальной меланомы. Во второй половине 2013 г. планируется начать III стадию клинических исследований молекулы в сочетании с полусинтетическим противоопухолевым препаратом растительного происхождения в качестве терапии второй линии немелкоклеточного рака легкого при наличии мутации гена KRAS.
становится ускорение разраоотки новых молекул.
Мене Пангалос, исполнительный вице-президент направления «Инновационные препараты (открытие и ранние стадии разработок в области малых молекул)», отметил: «Поскольку онкология является одной из трех приоритетных терапевтических областей для «АстраЗенека», мы намерены инвестировать в инновационные методы лечения этого социально значимого заболевания. Результаты, которых нам удалось достичь в отношении препаратов Олапариб и Селуметиниб, а также увеличение числа малых молекул и биопрепаратов, находящихся на ранних этапах разработки, позволят нам создать мощный портфель противоопухолевых препаратов таргетного действия».
Оптимизация обмена опытом в медицинском сообществе в области инновационной терапии онкологических заболеваний также является одним из важных направлений деятельности «АстраЗенека» как на глобальном уровне, так и в России.
