CC BY
184
УДК 633.88
П.Б. Лубсандоржиева Н.Б. Болданова 2
определение экдистерона в многокомпонентном адаптогенном средстве методом вэжх
1 ФГБУН «Институт общей и экспериментальной биологии» СО РАН (Улан-Удэ) 2 ФГБУН Байкальский институт природопользования СО РАН (Улан-Удэ)
В 15-компоненшмом адаптогенном средстве Адаптофит. идентифицирован экдистерон методом ВЭЖХ
Ключевые слова: экдистерон, адаптогенное средство
determination of ecdysterone in multicomponent adaptogenic remedy by hplc method
P.B. Lubsandorzhieva N.B. Baldanova 2 11nstitute of General and Experimental Biology SD RAS, Ulan-Ude 2 The Baikal Institute of Nature Management SD RAS, Ulan-Ude
Ecdysterone was identified, in a 15-componentaI adaptogenic remedy Adaptophyte by HPLC method.
Key words: ecdysterone, adaptogenic remedy
В практической фармации широко внедряются адаптогенные средства, позволяющие обеспечить высокий уровень работоспособности и здоровья в экстремальных условиях жизни. Особенно актуально создание комбинированных лекарственных средств, содержащих нетоксичные, высокоэффективные вещества, не относящихся к «допингам». К таким веществам относятся фитоэкдистероиды, содержащиеся в Rhaponticum carthamoides ^ПЫ) DC. Экдистероиды R. carthamoides обладают анаболической активностью [3, 6, 8], оказывают благотворное влияние на нервную, сердечную системы, сексуальную и репродуктивную функции организма [8].
В корнях и семенах R. carthaimoides содержится около 20 соединений стероидной природы, основными из которых являются 20-гидроксиэкдизон (экдистерон), инокостерон, аюгастерон, интегристерон, 29-гидрокси-24(28)-дигидромакистерон С и макистерон С [1, 7, 8]. Содержание экдистерона в различных частях растения составляло 0,04 — 0,81 %, 0,03—1,22 % и
0,27—1,51 % в корнях, надземной части и семенах, соответственно [8]. Метод ВЭЖХ характеризуется достаточно высокой чувствительностью для обнаружения экдистероидов, селективностью определения и включен в фармакопейную статью на лекарственные формы из R. carthamoides [4]. Содержание экдистероидов в растительном сырье и лекарственных средствах, содержащих R. carthamoides определяют методом абсолютной калибровки и по методу внутреннего стандарта с использованием парацетамола [2, 5]
Цель работы: — качественное обнаружение и количественное определение содержания экдисте-рона в 15-компонентном адаптогенном средстве, содержащем 13 % корней Rhaponticum carthamoides ^1Ы) DC методом ВЭЖХ.
методика
5,0 г Адаптофита экстрагировали 40% этиловым спиртом в соотношении сырье: экстрагент (1:10), спиртовое извлечение анализировали на хроматографе Agilent 6330 Ion Trap с масс-спектрометрическим детектором Ultra Scan и УФ-детектированием (г. Улан-Удэ).
Количественное определение экдистерона по методу абсолютной калибровки выполнено на хроматографе GILSTON, модель 305 (производитель — Франция); инжектор ручной, модель RHEODYNE 7125 (USA) с последующей компьютерной обработкой результатов исследования с помощью программы Мультихром для «Windows» (ВИЛР, г. Москва). В качестве неподвижной фазы была использована металлическая колонка размером 4,6 X 250 мм Kromasil C18, с размером частиц 5 мкн, в качестве подвижной фазы метанол — вода
— фосфорная кислота (40:60:0,5). Скорость подачи элюента 0,8 мл/мин, время — 50 мин, детектирование проводилось с помощью УФ-детектора «GILSTON» UV/VIS модель 151, при длине волны 242 нм.
Исходную смесь Адаптофита дважды экстрагировали при комнатной температуре 80 %-ным спиртом этиловым. Извлечение фильтровали, шрот экстрагировали 40 %-ным спиртом на водяной бане при температуре 100 °С дважды, затем кипящей водой в течение 30 мин. Полученные извлечения объединили, спирт отогнали на роторном испарителе, водный остаток высушили под вакуумом. Выход экстракта сухого — 38,73 % от массы исходной смеси Адаптофита.
В хроматограф вводили по 20 мкл исследуемого раствора и раствора РСО и хроматографировали в выше приведенных условиях. Идентификацию экдистерона проводили по сравнению времени удерживания стандартного образца.
Расчёт количественного содержания экдисте-рона производили методом абсолютной калибровки с помощью компьютерной программы. Количественное содержание экдистерона вычисляли по формуле:
,
SCT x50xmx(100-W)
где: S — площадь пика экдистерона в исследуемом растворе; Scm —площадь пика стандартного раствора РСО экдистерона; С — концентрация РСО экдистерона, г; m — навеска исследуемого образца, г; W — потеря в массе при высушивании, %.
результаты
При комбинированном детектировании анализируемого спиртового раствора Адаптофита отражается природа состава исследуемой смеси, а при УФ-детектировании достоверно регистрируются сигналы хромофорсодержащих компонентов Адап-тофита, отражающие их структурные особенности. Стероидные соединения R. carthamoides, содержащие ароматические структурные фрагменты,
а, ß-ненасыщенный карбонильный структурный фрагмент, определяются при регистрации поглощения при 240 — 280 нм. Экдистерон имеет полосу поглощения в УФ спектре при 242 — 248 нм, а в масс-спектре должны наблюдаться интенсивные пики с m/z 481 [M + H], 463 [M + H-H2O], 442 [M + H-H2O], 427 [M + H- H2O] [1, 7, 8].
В ходе детектирования в течение 30,8 мин спиртового раствора Адаптофита на хроматограмме зарегистрированы сигналы 81 веществ при 190-400 нм (рис. 1).
Анализ спектральных (УФ, МС) данных обнаруженных веществ показал, что вещество с характерными для экдистерона данными на хроматограмме отсутствует.
Для достоверного обнаружения экдистерона в Адаптофите использован экстракт сухой, в котором концентрация минорных веществ более высокая. ВЭЖХ-анализ выполнен с использованием стандартного вещества экдистерона.
На хроматограмме экстракта сухого Адаптофи-та регистрируются 6 пиков разной интенсивности (рис. 2). Экдистерон с временем удерживания 22,92
Intens.
K1Q0
3.D
2.5 2.□
1.5
SIGMD156.D:TIC +AII М5
—і—і-1—і-1—і----1—і—і—і—і—і—і—і—і—і—і—і—і—і—і—і—і---1—і------1—і—і—і—і—і—і—і—і—ґ
5 10 15 2D 26 M Time- [min]
Рис. 1. Хроматограмма спиртового раствора Адаптофита.
Рис. 2. Хроматограмма экстракта сухого Адаптофита.
Таблица 1
Хроматографические данные стандартного образца экдистерона и экстракта сухого Адаптофита
Время удерживания, мин Высота пика, mV Площадь пика, mVxcек Площадь, в % Название вещества
22,7 400,80 29636,72 30,8 Экдистерон (РСО)
22,92 4,36 316,43 0,3288 Экдистерон Адаптофита
мин идентифицирован по сравнению со стандартным образцом. Количественное содержание экдистерона вычислено по методу абсолютной калибровки по вышеприведенной формуле и составляет 0,06 % (табл. 1).
Проведенные опыты показали, что в 15 компонентном адаптогенном средстве Адаптофит, в состав которого входят 13 % корней R. carthamoides, возможно качественно определить присутствие основного фитоэкдистероида - экдистерона методом ВЭЖХ в присутствии стандартного образца. Количественное содержание экдистерона в Адап-тофите ниже 0,1 % и находится в пределах ошибки метода, что затрудняет проблему стандартизации Адаптофита по содержанию экдистерона.
Таким образом, в экстракте сухом Адаптофита в присутствии достоверного образца идентифицировано основное стероидное вещество Rhaponticum carthamoides (Willd) DC. — экдистерон со временем удерживания - 22,92 мин.
литература
1. Балтаев У.А., Абубакиров Н.К. Фитоэкди-стероиды Rhaponticum carthamoides // Химия природных соединений. — 1987. — № 5. — С. 681—684.
2. Биляч Я.И. Исследование и стандартизация лекарственного средства для повышения физической работоспособности: автореф. дис. ... канд. фарм. наук. — Пятигорск, 2009. — 23 с.
3. Гаджиева Р.М., Португалов С.Н., Панюшкин В.В., Кондратьева И.И. Сравнительное из-
учение анаболизирующего действия препаратов растительного происхождения экдистена, леветона и «Прайм-Плас» // Экспериментальная и клиническая фармакология. — 1995. — № 5. — С. 46 — 48.
4. Корневище с корнями рапонтикума сафлоровидного (левзеи сафлоровидной). Фармакопейная статья ФС 42-2707-90. — М.: Минздрав СССР, 1990. - 7 с.
5. Пунегов В.В., Савиновская Н.С. Метод внутреннего стандарта для определения экдистерои-дов в растительном сырье и лекарственных формах с помощью ВЭЖХ // Растит. ресурсы. — 2001. — Т. 37, Вып. 1. — С. 97—102.
6. Сыров В.Н. Фитоэкдистероиды: биологические эффекты в организме высших животных и перспективы использования в медицине // Экспериментальная и клиническая фармакология. — 1994. — № 5. — С. 61—66.
7. Budësînsky M., Vokâc K., Harmatha J., Cvacka J. Additional minor esdysteroid components of Leuzea carthamoides // Steroids. — 2008. — Vol. 73. — P. 502 — 514.
8. Kokoska L., Janovska D. Chemistry and pharmacology of Rhaponticum carthamoides: A review // Phytochemistry. — 2009. — Vol. 70. — P. 842 — 855.
9. Rubin V.G., Pavel K.G., Karaulov A.E. Aspects of application of high performance liquid chromatography in analysis of fatty acids, carotenoids and sterols in lipids and lipid preparations from marine organisms // Problems of Fisheries. — 2006. — Vol. 7, N 2 (26).
— P. 304 — 317.
сведения об авторах
Лубсандоржиева Пунцык-Нима Базыровна - кандидат фармацевтических наук, старший научный сотрудник лаборатории медико-биологических исследований ФГБУН «Институт общей и экспериментальной биологии» СО РАН (670047, г. Улан-Удэ, ул. Сахъяновой, 6; e-mail: bpunsic@mail.ru)
Болданова Наталья Батлаевна - старший научный сотрудник лаборатории химии природных систем ФГБУН Байкальский институт природопользования СО РАН
