CC BY
2
Репродуктивное здоровье девочки
Уварова Е.В.1, 2, Казакова А.В.3, Лимарева Л.В.3 Линева О.И.3, Дуфинец И.Е.3
1 Федеральное государственное бюджетное учреждение «Национальный медицинский исследовательский центр акушерства, гинекологии и перинатологии имени академика В.И. Кулакова» Министерства здравоохранения Российской Федерации, 117997, г. Москва, Российская Федерация
2 Федеральное автономное образовательное учреждение высшего образования Первый Московский государственный медицинский университет имени И.М. Сеченова Министерства здравоохранения Российской Федерации (Сеченовский Университет), 119991, г. Москва, Российская Федерация
3 Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования «Самарский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации, 443079, г Самара, Российская Федерация
Определение ассоциаций полиморфизмов генов иммунной системы с видовым составом микрофлоры влагалища у девочек с развившимся вульвовагинитом
В статье представлена информация о выявленных ассоциациях полиморфизмов генов цитокинов с видовым составом микрофлоры влагалища у девочек с развившимся вульвовагинитом, результаты клинико-анамнестического и лабораторного обследования девочек, показавшие закономерные ассоциации микрофлоры влагалища с носитель-ством определенных точечных мутаций полиморфных генов иммунного ответа. Материал и методы. Исследование проводилось на базе детского поликлинического отделения № 1 государственного бюджетного учреждения здравоохранения Самарской области «Самарская городская поликлиника № 13 Железнодорожного района» (ГБУЗ СО СГП № 13) с февраля 2013 г. по август 2016 г. Условия включения в исследование: информированное согласие на анкетирование, медицинское вмешательство и использование полученных результатов в научных публикациях (подписание законным представителем девочек в возрасте до 15 лет или самой пациенткой в возрасте 15 лет и старше). Проведены специальные исследования 226 образцов соскобов отделяемого слизистой оболочки влагалища методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) в режиме реального времени, включающие определение состава микрофлоры влагалища, а также определены полиморфизмы генов иммунного ответа 226 образцов буккального соскоба. Результаты. Установлено, что носительство высокопродуктивного аллеля С в локусе 3953 провоспалительного гена IL-1b, так же как низкопродуктивного аллеля С в локусе 592 и в локусе 819 противовоспалительного гена IL-10, увеличивает шанс развития воспалительных заболеваний вульвы и влагалища от 2 до 4 раз.
Имеются закономерные ассоциации микрофлоры влагалища с носительством определенных точечных мутаций полиморфных генов иммунного ответа.
Заключение. Оценка индивидуальных генетических особенностей организма, связанных с наличием аллельных вариантов генов иммунной системы, поможет определить конституциональную возможность к высокому или низкому уровню синтеза соответствующих иммунокомпетентных молекул (цитокинов, образраспознающих рецепторов) и возможности прогнозирования воспалительных заболеваний вульвы и влагалища.
Для корреспонденции
Дуфинец Ирина Евгеньевна -кандидат медицинских наук, ассистент кафедры акушерства и гинекологии Института педиатрии ФГБОУ ВО СамГМУ Минздрава России Адрес: 443079, г. Самара, ул. Гагарина, д. 18 Телефон: (937) 206-45-64 E-mail: dr.dufinets@yandex.ru https://orcid.org/0000-0002-1936-2322
Ключевые слова: вульвовагинит; микрофлора влагалища; бактериальный вульво-вагинит; аллели; полиморфизм генов цитокинов
Финансирование. Исследование не имело спонсорской поддержки. Конфликт интересов. Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.
Для цитирования: Уварова Е.В., Казакова А.В., Лимарева Л.В., Линева О.И., Дуфинец И.Е. Определение ассоциаций полиморфизмов генов иммунной системы с видовым составом микрофлоры влагалища у девочек с развившимся вульвовагинитом // Репродуктивное здоровье детей и подростков. 2023. Т. 19, № 4. С. 79-89. 001: https://www.doi. огд/10.33029/1816-2134-2023-19-4-79-89 Статья получена 07.09.2023. Принята в печать 01.12.2023.
Uvarova E.V.1, 2, Kazakova A.V.3, Limareva L.V.3, Lineva O.I.3, Dufinets I.E.3
1 National Medical Research Center for Obstetrics, Gynecology and Perinatology named after Academician V.I. Kulakov, Ministry of Health of the Russian Federation, 117997, Moscow, Russian Federation
2 I .M. Sechenov First Moscow State Medical University, Ministry of Health of the Russian Federation (Sechenov University), 119048, Moscow, Russian Federation
3 Samara State Medical University, Ministry of Health of the Russian Federation, 443079, Samara, Russian Federation
Determination of associations of polymorphisms of immune system genes with the species composition of the vaginal microflora in girls with developed vulvovaginitis
The article presents information on the identified associations of cytokine gene polymorphisms with the species composition of the vaginal microflora in girls with developed vulvovaginitis, the results of a clinical, anamnestic and laboratory examination of girls, which showed regular associations of the vaginal microflora with the carriage of certain point mutations of polymorphic immune response genes. Material and methods. The study was conducted on the basis of the children's outpatient department No. 1 of the Samara City Clinic No. 13 of the Zheleznodorozhny District (GBUZ SO SGP No. 13) from February 2013 to August 2016. Condition for inclusion in the study: informed consent for questionnaires, medical intervention and use of the results obtained in scientific publications (signed by the legal representative of girls under the age of 15 years or by the patient herself aged 15 years and older).
Special studies of 226 samples of scrapings of the vaginal mucosa were carried out using real-time PCR, including determination of the composition of the vaginal microflora, and polymorphisms of the immune response genes of 226 buccal scraping samples were determined. Results. It has been established that carriage of the highly productive allele C at locus 3953 of the pro-inflammatory IL-1b gene, as well as the low-productive allele C at locus 592 and locus 819 of the anti-inflammatory IL-10 gene, increases the chance of developing inflammatory diseases of the vulva and vagina by 2 to 4 times.
There are natural associations of vaginal microflora with the carriage of certain point mutations of polymorphic immune response genes. Conclusion. Assessment of the individual genetic characteristics of the body associated with the presence of allelic variants of immune system genes will help determine the constitutional possibility of a high or low level of synthesis of the corresponding immunocompetent molecules (cytokines, pattern recognition receptors) and the possibility of predicting inflammatory diseases of the vulva and vagina. Keywords: vulvovaginitis; vaginal microflora; bacterial vulvovaginitis; alleles; polymorphism of cytokine genes
Funding. The study had no sponsor support.
Conflict of interests. The author declare no conflict of interests.
For citation: Uvarova E.V., Kazakova A.V., Limareva L.V., Lineva O.I., Dufinets I.E. Determination of associations of polymorphisms of immune system genes with the species composition of the vaginal microflora in girls with developed vulvovaginitis. Reproduktivnoe zdorov'e detey i podrostkov [Pediatric and Adolescent Reproductive Health]. 2023; 19 (4): 79-89. DOI: https://www.doi.org/10.33029/1816-2134-2023-19-4-79-89 (in Russian) Received 07.09.2023. Accepted 01.12.2023.
В августе 2012 г. завершился 5-летний транснациональный проект «Микро-биом человека». По результатам этого исследования был сделан вывод, что генетический материал микроорганизмов в 360 раз превышает объем информации, зашифрованной в геноме человека. Результаты этого проекта стали основой «научного взрыва», который, к сожалению, остался почти незамеченным клиницистами.
В настоящее время считается доказанным, что главная причина развития заболеваний, связанных с нарушением нормального микробного пейзажа слизистых оболочек, состоит в неблагополучии иммунобиологического гомеостаза макроорганизма [1-3]. Нарушение нормоценоза вызывается угнетением местных иммунных реакций, которые приводят к снижению иммунобиологической защиты, что создает условия для реализации патоген-
ного действия комменсалов, что, в свою очередь, еще более усугубляет иммунологическую несостоятельность организма [4, 5]. Важную роль в механизмах иммунной защиты играют цитокины [6]. Изучение уровней цитокинов в биологических жидкостях позволяет получить информацию о текущем состоянии иммунной системы, о тяжести воспалительного процесса любого генеза и его прогнозе, о стадии развития аллергических и аутоиммунных заболеваний и др. Однако необходимо учитывать то обстоятельство, что, несмотря на внушительное число публикаций по данной проблеме, ни один из используемых в научных исследованиях методов оценки цитокинового статуса не нашел применения в рутинной клинической практике, прежде всего из-за высокой индивидуальной вариабельности уровней цитокинов [7- 9]. Данная проблема, отчасти, может быть решена оценкой индивидуальных генетических особенностей организма, связанных с наличием аллельных вариантов (полиморфизмов) генов цито-кинов, определяющих конституциональную возможность к высокому или низкому уровню синтеза соответствующих молекул. Многочисленные данные свидетельствуют о клинической значимости оценки функциональных полиморфизмов генов иммунного ответа, определяющих варианты воспалительного ответа и развития специфических иммунологических реакций при инфекционной патологии, в том числе женского репродуктивного тракта [10-12]. Вместе с тем в большинстве исследований оценивается ограниченный перечень полиморфизмов генов иммунного ответа без учета синергизма, антагонизма и плейотропности действия большинства иммунорегулирующих молекул, оценки рецепторов и сигнальных путей, что в настоящее время представляется весьма затруднительным [13-15]. Таким образом, для окончательного объяснения роли каждого полиморфизма необходимо продолжение исследований при различных клинических
состояниях с учетом этнических и региональных особенностей, что объясняет актуальность исследования проблемы в таком крупном региональном центре, как Самара.
Цель исследования - выявить ассоциации полиморфизмов генов цитокинов с видовым составом микрофлоры влагалища у девочек с развившимся вульво-вагинитом.
Материал и методы
Исследование проводилось на базе детского поликлинического отделения № 1 государственного бюджетного учреждения здравоохранения Самарской области «Самарская городская поликлиника № 13 Железнодорожного района» (ГБУЗ СО СГП № 13) с февраля 2013 г. по август 2016 г. Стартовым условием отбора в исследование было подписание законным представителем девочек в возрасте до 15 лет или самой пациенткой в возрасте 15 лет и старше добровольного информированного согласия на анкетирование, медицинское вмешательство и использование полученных результатов в научных публикациях.
Проведены специальные исследования 226 образцов соскобов отделяемого слизистой оболочки влагалища методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) в режиме реального времени, включающие определение состава микрофлоры влагалища, а также определены полиморфизмы генов иммунного ответа 226 образцов бук-кального соскоба.
Критерии включения: возраст от 2 до 17 лет включительно, отсутствие субъективных жалоб, соматическое и гинекологическое здоровье, соответствие физического, полового и психического развития возрастным нормативам. Критерии исключения: применение антибактериальных препаратов за 1 мес до обследования и наличие острых воспалительных заболеваний на момент осмотра и забора материала.
Изучение молекулярно-генетических характеристик микробиоты влагалища и полиморфизмов генов иммунного ответа было выполнено на 167 участницах исследования. Их разделили на 2 группы: основная и группа сравнения. В основную группу вошли 52 девочки, у которых через 1 год наблюдения диагностирован бактериальный вульвовагинит. В группу сравнения вошли девочки без воспалительных заболеваний вульвы и влагалища - 115 человек. В свою очередь, каждую группу разделили согласно периодизации полового развития по Таннеру: I, II-III и IV-V стадии.
Взятие материала производили со слизистой оболочки преддверия влагалища или из заднего свода влагалища через гименальные кольца с помощью универсального зонда. ДНК из биологического материала выделяли с помощью комплекта реагентов ПРОБА-ГС (ДНК-технология, Россия). Выявление ДНК условно-патогенных микроорганизмов (УМП) осуществляли с помощью наборов реагентов, предназначенных для исследования состояния биоценоза урогени-тального тракта с детекцией результатов в режиме реального времени. Для амплификации использовали детектирующий термоциклер DTlite в комплектации 4S1 (ДНК-технология, Россия).
Определялось количество микроорганизмов в биологической пробе, пропорциональное общей обсемененности соответствующего биоценоза.
Спектр диагностируемых показателей включал контроль взятия материала (КВМ), общей биологической массы (ОБМ), наличие микоплазм [Mycoplasma hominis, Ureaplasma (urealyticum + parvum)], дрожжеподобных грибов (Candida spp.); Lactobacillus spp., Enterobac-terium spp., Streptococcus spp., Staphylococcus spp., Gardnerella vaginalis/Prevotella bivia/Porphyromonas spp., Eubacterium spp., Sneathia spp./Leptotrichia spp./Fusobacte-rium spp., Megasphaera spp./Veillonella spp./ Dialister spp., Lachnobacterium spp./Clos-
tridium spp., Mobiluncus spp./Corinebacte-rium spp., Peptostreptococcus spp., Atop-obium vaginae, а также идентификация патогенов (Mycoplasma genitalium). Показателем адекватности процедуры получения биоматериала было достаточное количество геномной ДНК человека (КВМ), попадающей в пробу из эпителиальных клеток, при правильной технике взятия биоматериала. Показатель КВМ оценивался в абсолютных значениях (геном-эквивалент на образец - ГЭ/обр.), за минимально достаточный уровень принимался показатель, равный 104 ГЭ/обр. При снижении данного показателя результат ПЦР в режиме реального времени считался недостоверным. Уровень КВМ был валиден во всех случаях, что подтверждает объективность последующего анализа полученных результатов.
Для выявления роли полиморфизма генов иммунного ответа в развитии и характере течения воспалительных заболеваний вульвы и влагалища, исходя из иммунопатогенеза, с помощью метода ПЦР были изучены особенности распределения у девочек частот аллелей и генотипов полиморфных вариантов генов провоспалительных и противовоспалительных цитокинов. Выявляли следующие полиморфизмы:
• IL-1ß (T-31C), IL-1ß (T-511C), IL-1ß(C-3953T),
IL-1ß (G-1473C) в гене IL-1ß;
• IL-6 (C-174G) в гене IL-6;
• TNFa (G-308A) в гене TNFa;
• IL-10 (G-1082A), IL-10 (С-592А), IL-10
(C-819T) в гене IL-10;
• TGFßl (Arg25Pro) в гене TGFßl.
Все исследуемые полиморфизмы связаны с характеристикой иммунного статуса человека и входят в список рекомендованных для изучения в клинико-диагностических целях на XXV Международном совещании по гистосовместимости и иммуногенетике (Бразилия, 2008) [16, 17].
Выделение ДНК из буккального соскоба и выявление полиморфизмов генов методом ПЦР осуществляли
с помощью реагентов производства ООО «ЛИТЕХ», Россия (Комплект реагентов для экспресс-выделения ДНК из буккаль-ного соскоба и тест-системы SNP-ЭКС-ПРЕСС соответственно). С образцами выделенной ДНК параллельно проводили 2 реакции амплификации, используя 2 пары аллельспецифичных праймеров. Для амплификации использовали детектирующий термоциклер DTlite в комплектации 4S1 (ДНК-технология, Россия). Применяли электрофорезную детекцию результатов. Результаты анализа позволяли дать 3 типа заключений: гомозигота по аллелю 1, гетерозигота, гомозигота по аллелю 2.
Сбор и хранение данных осуществляли в пакете Microsoft Ехсе1. Для статистического анализа использовали специализированное программное обеспечение: SPSS 21 (лицензия № 20130626-3).
Для исследования генетических предпосылок возникновения вульвовагинита использовали следующие подходы. Для сопоставления 2 групп по количественным признакам применяли ^-критерий Манна-Уитни. Различие между группами полагали статистически значимым при p<0,05. Для выявления взаимосвязи переменных проводили расчет коэффициента ранговой корреляции по Спирмену.
Оценку соответствия выявленных частот генотипов закону Харди-Вайнберга в сравнении с ожидаемыми частотами генотипов равновесного распределения по критерию Пирсона х2, а также выявление ассоциаций и значимость различий в частоте встречаемости качественных признаков в группах осуществляли онлайн с помощью программы «DeFinetti» на сайте Института генетики человека (Мюнхен, Германия: http://ihg.gsf.de/cgi-bin/hw/hwa1 .pl). Рассчитывали отношения шансов (ОШ) c указанием 95% доверительного интервала (ДИ). Анализировали только те полиморфизмы, у которых выявленные частоты генотипов соответствовали распределению Харди-Вайнберга.
Как возможный фактор риска возникновения вульвовагинита у девочек были рассмотрены полиморфизмы генов прово-спалительных и противовоспалительных цитокинов.
Сравнения частот различных аллелей и генотипов с учетом соответствия закону Харди-Вайнберга в группах здоровых девочек и девочек с вульвовагинитом приведены в табл. 2 и 3. Анализ полученных результатов выявил, что частота встречаемости генотипов полиморфных вариантов проанализированных генов в обеих группах соответствовала равновесию Харди-Вайнберга, за исключением полиморфизма провоспалительного цитокина TNFa (G-308A) у здоровых девочек (достоверность гипотезы об отклонения от распределения Харди-Вайнберга, р=0,003), который в дальнейшем не учитывался.
Исследование выполнено на базе ГБУЗ Самарской области «Самарская городская поликлиника № 13 Железнодорожного района», детское поликлиническое отделение № 1, г. Самара.
Результаты
Сравнение частот встречаемости аллелей и генотипов генов провоспа-лительных цитокинов у девочек с реализованным бактериальным вульво-вагинитом и без патологии выявило статистически значимые отличия для полиморфизма гена IL-1ß в локусе 3953: низкопродуктивный аллель С встречался чаще у девочек с воспалительными изменениями во влагалище: 35,0±5,8 против 21,0±2,9% у девочек без патологии (р=0,014). Частота встречаемости остальных изученных полиморфизмов генов провоспалительных цитокинов в группах статистически значимо не отличалась. Вместе с тем отмечена тенденция к преобладанию в группе девочек с развившимся вульвовагинитом носителей низкопродуктивного аллеля С в позиции 511 в гене IL-1ß: 69,0±5,7 против 60,0± 3,4% у здоровых девочек (табл. 1).
Таблица 1. Частота встречаемости аллелей и генотипов генов провоспалительных цитокинов у девочек с реализованным бактериальным вульвовагинитом и без патологии
Table 1. Frequency of occurrence of alleles and genotypes of proinflammatory cytokine genes In girls with and without bacterial vulvovaginitis
Генотип, аллель Наблюдаемая частота встречаемости, л/% Расчетная частота встречаемости, абс. Соответствие распределению Харди-Вайнберга, р
с вульвовагинитом без патологии сравнение частот аллелей с вульво-вагинитом без патологии с вульвовагинитом без патологии
X2 Р
И-1в (T-31C) rs1143627 (аллель Т - высокопродуктивный)
ТТ 18/47,4 52/44,4 17,1 49,4 0,483 0,310
СТ 15/39,5 48/41,0 16,8 53,3
СС 5/13,2 17/14,5 4,1 14,4
Т 67,0±5,7 65,0±3,3 0,12 0,732
С 33,0±5,7 35,0±3,3
IL-1fi (T-511C) rs16944 (аллель Т - высокопродуктивный)
ТТ 4/11,4 19/17,3 3,5 18,0 0,700 0,695
СТ 14/40,0 51/46,4 15,1 53,0
СС 17/48,6 40/36,4 16,5 39,0
Т 31,0±5,7 40,0±3,4 1,83 0,176
С 69,0±5,7 60,0±3,4
IL-10 (G-1473C) rs1143623 (аллель G - высокопродуктивный)
GG 15/38,5 49/40,5 13,6 47,7 0,337 0,697
CG 16/41,0 54/44,6 18,9 56,5
CC 8/20,5 18/14,9 6,6 16,7
G 59,0±6,0 63,0±3,2 0,37 0,544
С 41,0±6,0 37,0±3,2
IL-10 (C-3953T) rs114363470,0 (аллель Т - высокопродуктивный)
ТТ 16/44,4 74/66,1 15,3 70,7 0,714 0,077
СТ 15/41,7 30/26,8 16,3 36,6
СС 5/13,9 8/7,1 4,3 4,7
Т 65,0±5,8 79,0±2,9 6,01 0,014
С 35,0±5,8 21,0±2,9
IL-6 (C -174G) rs1800795 (аллель G - высокопродуктивный)
СС 6/17,7 21/18,3 7,1 21,7 0,729 0,851
GC 19/55,9 58/50,4 16,9 56,5
GG 9/26,5 36/31,3 10,1 36,7
С 46,0±5,6 43,0±3,2 0,09 0,758
G 54,0±5,6 57,0±3,2
TNFa (G-308A) rs1800629 (аллель А - высокопродуктивный)
GG 23/82,1 62/70,5 22,3 57,3 0,257 0,003
AG 4/14,3 18/20,5 5,4 27,4
AA 1/3,6 8/9,1 0,3 3,3
G 89,0±4,6 81,0±3,4 2,20 0,138
А 11,0±4,6 19,0±3,4
Что касается полиморфизмов генов противовоспалительных цитокинов (см. табл. 2), то были найдены статистически значимые различия между группами по распределению вариантов С-592А и С-819Т гена IL-10: высокопродуктивные аллели С локуса 592 и локуса 819 чаще встречались у девочек с вульвовагинитами (68,0±6,2 против 44,0±4,5% у здоровых девочек и 79,0±2,8 против 63,0±5,8% соответственно).
У носительниц различных аллелей генов иммунного ответа было охарактеризовано абсолютное и относительное содержание микроорганизмов и микробных ассоциаций во влагалище.
Все девочки были сгруппированы с учетом стадии полового развития и наличием аллелей генов цитокинов, для которых была выявлена ассоциация с воспалительными заболеваниями вульвы и влагалища: IL-1p C-3953T, IL-10 С-592А и C-819T.
Количество Enterobacterium spp. во влагалище девочек с I стадией полового развития достоверно выше (lg3,97±0,19 ГЭ/обр., р=0,027) у гомозигот по аллелю С гена IL-1e локуса 3953.
У девочек на II-III стадии полового развития гомозиготных по аллелю СС была самая редкая (38,5%) встречаемость Lactobacillus spp. относительно групп гете-розигот СТ и гомозигот ТТ и определялась Ureaplasma (urealyticum + parvum) в количестве lg3,60±1,30 ГЭ/обр. У девочек, гомозиготных по ТТ, абсолютное (lg3,05± 0,05 ГЭ/обр., р=0,036) и относительное количество (lg0,08±0,07 ГЭ/обр., р=0,43) Eubacterium spp. было меньше, чем при носительстве других аллелей гена IL-1p локуса 3953.
Низкое количество Staphylococcus spp. (lg3,53±0,31 ГЭ/обр., р=0,043) и факультативных анаэробов (lg3,50±0,26 ГЭ/обр., р=0,012) диагностировалось у девочек IV и V стадии полового развития по Тан-неру, гомозиготных по аллелю Т. При этой стадии полового развития частота
встречаемости Streptococcus spp. (7,7%) и Lachnobacterium spp./Clostridium spp. (30,8%) во влагалище была меньше у гомозигот по аллелю Т.
Анализ структуры микробного спектра влагалища при различных полиморфизмах генов IL-10 (C-819T) у девочек с I стадией полового развития характеризуется минимальным содержанием аэробов и факультативных анаэробов (lg 3,68±0,33 ГЭ/обр., р=0,025), большой долей содержания облигатных анаэробов (99,94±0,04%), отсутствием Streptococcus spp. у гомозигот по аллелю Т (генотип ТТ). Высокое относительное содержание Mobi-luncus spp./Corynebacterium spp. (7,43± 1,70%) отмечено у девочек-носительниц аллеля СС.
Минимальное количество Staphylococcus spp. (lg 3,30±0,23 ГЭ/обр, р=0,033) наблюдалось у гетерозигот по гену IL-10 C-819T. Те же данные получены при определении относительного содержания микроорганизмов.
Для девочек на II и III стадии полового развития было характерно наличие в 100% образцов Gardnerella vaginalis/ Prevotella bivia/Porphyromonas spp. у гомозигот по аллелю Т гена IL-10 (C-819T).
У девочек на IV и V стадии полового развития статистически достоверных отличий количественного содержания микроорганизмов в зависимости от полиморфизмов гена IL-10 (C-819T) не выявлено.
Биоценоз влагалища у девочек с разными полиморфизмами гена IL-10 (С-592А) на I стадии полового развития имел следующие характеристики: ОБМ достоверно была выше (lg 6,29±0,26 ГЭ/обр., р=0,019) у девочек, гомозиготных по аллелю С. У гетерозигот Lactobacillus spp. и Urea-plasma (urealyticum + parvum) во влагалище не встречались. У девочек, гомозиготных по аллелю А, выявлено низкое содержание Gardnerella vaginalis/Prevotella bivia/ Porphyromonas spp. (lg 4,59±0,27 ГЭ/обр., р=0,010), факультативных анаэробов, как в абсолютных (lg 3,63±0,31 ГЭ/обр.,
Таблица 2. Частота встречаемости аллелей и генотипов генов противовоспалительных цитокинов у девочек с бактериальным вульвовагинитом и без патологии
Table 2. Frequency of occurrence of alleles and genotypes of anti-Inflammatory cytokine genes In girls with and without bacterial vulvovaginitis
Генотип, аллель Наблюдаемая частота встречаемости, л/% Расчетная частота встречаемости, абс. Соответствие распределению Харди-Вайнберга, р
с вульвовагинитом без патологии сравнение частот аллелей с вульвовагинитом без патологии с вульвовагинитом без патологии
X2 Р
IL-10 (С-819Т) rs1800871 (аллель С - высокопродуктивный)
СС 14/40,0 66/61,7 13,83 65,9 1,000 1,000
ТС 16/45,7 36/33,6 16,34 36,1
ТТ 5/14,3 5/4,7 4,83 4,9
С 79,0±2,8 63,0±5,8 6,82 0,01
Т 21,0±2,8 37,0±5,8
IL-10 (G -1082 A) rs1800896 (аллель G - высокопродуктивный)
GG 8/33,3 39/37,5 6,5 37,0 0,237 0,418
GA 9/37,5 46/44,2 12,0 50,1
AA 7/29,2 19/18,3 5,5 17,0
G 52±8,1 60,0±3,5 0,91 0,34
А 48,0±8,1 40,0±3,5
IL-10 (С-592А) rs1800872 (аллель С - высокопродуктивный)
СС 17/50,0 17/23,9 15,6 14,0 0,257 0,152
АС 12/35,3 29/40,8 14,9 35,1
АА 5/14,7 25/35,2 3,6 22,0
С 68,0±6,2 44,0±4,5 20,38 0,000006
А 32,0±6,2 56,0±4,5
TGFP1 (G -915C, Arg-25Pro) rs1800471 (аллель G, Arg-25 - высокопродуктивная)
ArgArg 4/44,4 27/73,0 4,0 25,1 1,000 0,056
ArgPro 4/44,4 7/18,9 4,0 10,7
ProPro 1 / 11,1 3/8,1 1,0 1,1
Arg 67,0±11,1 82,0±5,1 2,20 0,19
Pro 33,0 18,0
р=0,017), так и в относительных единицах (4,73±4,62%, р=0,048). Высокое количество облигатных анаэробов (lg 6,19± 0,23 ГЭ/обр., р=0,016) отмечено в группе с генотипом СС.
У девочек на II и III стадии полового развития относительное содержание Megasphaera spp./Veillonella spp./ Dialister spp. (10,09±3,03, р=0,05) было максимальным у гетерозигот АС.
У девочек на IV-V стадии полового развития, гомозиготных по аллелю А (генотип АА), ОБМ (lg 7,80±0,20 ГЭ/обр., р=0,05) и содержание Staphylococcus spp.
(lg 4,26±0,26 ГЭ/обр., р=0,05) были выше, чем при других сочетаниях аллелей. Высокое количественное содержание Atopobium vaginae (lg 4,30±0,45 ГЭ/обр.) во влагалище отмечено у девочек, гомозиготных по аллелю С (генотип СС) гена IL-10 (С-592А).
Многочисленные исследования доказали [18], что развитие воспаления обеспечивается синтезом комплекса цитокинов, поддерживающих и регулирующих этот процесс. Современные представления об иммунологических аспектах патогенеза вульвовагинита свидетельствуют о клю-
чевой роли дисбаланса в системе субпопуляций ТМ-/ТИ2-лимфоцитов, опосредованного цитокиновым профилем [19].
Присутствие определенных аллелей является фактором риска и может служить прогностическим критерием при развитии акушерско-гинекологической патологии. Вместе с тем данные исследований о связи аллелей с тем или иным заболеванием или выраженностью воспалительного процесса неоднозначны, что объясняют, прежде всего, различиями распределения в разных этнических группах и даже региональными особенностями при существующих общих тенденциях.
Оценка индивидуальных генетических особенностей организма, связанных с наличием аллельных вариантов генов иммунной системы, поможет определить конституциональную возможность к высокому или низкому уровню синтеза соответствующих иммунокомпе-тентных молекул (цитокинов, образраспоз-нающих рецепторов и др.) и возможности прогнозирования воспалительных заболеваний вульвы и влагалища.
Выводы
1. Установлено, что носительство высокопродуктивного аллеля С в локусе 3953 провоспалительного гена И-1Ь, так же как низкопродуктивного аллеля С в локусе 592, и в локусе 819 противовоспалительного гена 0.-10 увеличивает шанс развития воспалительных заболеваний вульвы и влагалища от 2 до 4 раз.
2. Имеются закономерные ассоциации микрофлоры влагалища с носительством определенных точечных мутаций полиморфных генов иммунного ответа.
Заключение
Оценка индивидуальных генетических особенностей организма, связанных с наличием аллельных вариантов генов иммунной системы, поможет определить конституциональную возможность к высокому или низкому уровню синтеза соответствующих иммунокомпетентных молекул (цитокинов, образраспознающих рецепторов) и возможности прогнозирования воспалительных заболеваний вульвы и влагалища.
Сведения об авторах
Уварова Елена Витальевна (Elena V. Uvarova) - член-корреспондент РАН, доктор медицинских наук, профессор, заведующий 2-м гинекологическим отделением (гинекологии детского и юношеского возраста) ФГБУ «НМИЦ АГП им. В.И. Кулакова» Минздрава России, профессор кафедры акушерства, гинекологии, перинатологии и репродукто-логии ИПО ФГАОУ ВО Первый Московский государственный медицинский университет им. И.М. Сеченова Минздрава России (Сеченовский Университет), президент Межрегиональной общественной организации «Ассоциация детских и подростковых гинекологов», главный внештатный гинеколог детского и юношеского возраста Минздрава России (Москва, Российская Федерация) E-mail: elena-uvarova@yandex.ru https://orcid.org/0000-0002-3105-5640
Казакова Анна Владимировна (Anna V. Kazakova) - профессор, доктор медицинских наук, заведующий кафедрой акушерства и гинекологии Института педиатрии ФГБОУ ВО СамГМУ Минздрава России (Самара, Российская Федерация) E-mail: a.v.kazakova@samsmu.ru https://orcid.org/0000-0002-9483-8909
Лимарева Лариса Владимировна (Larisa V. Limareva) - доктор биологических наук, заведующий лабораторией неинфекционной иммунологии научно-образовательного образовательного профессионального центра генетических и лабораторных технологий ФГБОУ ВО СамГМУ Минздрава России (Самара, Российская Федерация) E-mail: l.v.limareva@samsmu.ru https://orcid.org/0000-0013-7453-4357
Линева Ольга Игоревна (Olga I. Lineva) - профессор, доктор медицинских наук, профессор кафедры акушерства и гинекологии Института педиатрии ФГБОУ ВО СамГМУ Минздрава России (Самара, Российская Федерация) E-mail: o.i.lineva@samsmu.ru https://orcid.org/0000-0003-4170-2167
Дуфинец Ирина Евгеньевна (Irina E. Dufinets) - кандидат медицинских наук, ассистент кафедры акушерства и гинекологии Института педиатрии ФГБОУ ВО СамГМУ Минздрава России (Самара, Российская Федерация) E-mail: dr.dufinets@yandex.ru https://orcid.org/0000-0002-1936-2322
Литература
1. Цыган В.Н., Иванов А.М., Камилова Т.А. и др. Генетический полиморфизм цитокинов // Вестник Российской военно-медицинской академии. 2010.Т. 30, № 2. С. 211—219.
2. Шевченко А.В., Голованова О.В., Коненков В.И. Особенности полиморфизма промоторных регионов генов цитокинов IL1, IL4, IL5, IL6, IL10 и TNF-a у европеоидного населения Западной Сибири // Иммунология. 2010. № 4. С. 176—181.
3. Уварова Е.В. Детская и подростковая гинекология: руководство для врачей. Москва : Литера, 2009. 392 с.
4. Анкирская А.С. Неспецифические вагиниты // Клиническая микробиология и антимикробная терапия. 2000. Т. 17, № 2. C. 23-28.
5. Юровская В.П. и др. Возрастные особенности половых органов девочек. Методические рекомендации для ординаторов и студентов. Ростов-на-Дону : Изд. РГМУ, 2009. 16 с.
6. Яковлева Э.Б. и др. Оптимизация лечения и профилактики вульвовагинитов у девочек нейтрального периода // Медико-социальные проблемы семьи. 2010. Т. 15, № 3. С. 65-68.
7. Рутинская А.В. Особенности микробиоценоза влагалища у девочек препубертатного возраста // Медико-социальные проблемы семьи. 2014. Т. 19, № 2. С. 132-136.
8. Байрамова Г.Р. Хронический рецидивирующий вульвоваги-нальный кандидоз: принципы диагностики и возможности терапии // Акушерство и гинекология. 2008. № 6. С. 64-66.
9. Баранов И.И. Экология влагалища и воспалительные заболевания половых органов // Гинекология. 2010. Т. 12, № 3. С. 4-6.
10. Радзинский В.Е., Хамошина М.Б., Лебедева М.Г. и др. Репродуктивный потенциал России - грани проблемы, перспективы коррекции // Амбулаторно-поликлиническая практика -новые горизонты: сб. тезисов Всерос. конгресса. Москва, 2010. С. 280-282.
11. Бебнева Т.Н., Летуновская А.Б. Роль эстриола в поддержании биоценоза влагалища // Гинекология. 2011. Т. 13, № 2. С. 22-26.
12. Бодиенкова Г.М., Титова Ж.В. Роль полиморфизма и экспрессии отдельных генов цитокинов в формировании патологии (Обзор) // Успехи современного естествознания. 2015. № 1. С. 616-620.
13. Розенберг В.Я., Бутыльский А.Н., Кузник Б.И. Возрастная динамика показателей гемограммы и иммунного статуса у детей различного возраста // Медицинская иммунология. 2011. Т. 13, № 2-3. С. 261-266.
14. Бурменская О.В. Молекулярно-генетические маркеры иммунного ответа при воспалительных заболеваниях органов женской репродуктивной системы: дис. ... докт. биол. наук. Москва, 2014. 249 с.
15. Симбирцев А.С. Цитокины в патогенезе инфекционных заболеваний человека // Медицинский академический журнал. 2013. Т. 13, № 3. С. 18-24.
16. Бурменская О.В. Молекулярно-генетические маркеры иммунного ответа при воспалительных заболеваниях органов женской репродуктивной системы: дис. ... докт. биол. наук. Москва, 2014. 249 с.
17. Цыган В.Н., Иванов А.М., Камилова Т.А. Генетический полиморфизм иммуногенной сигнальной системы // Журнал инфектологии. 2011. Т. 3, № 2. С. 21-27.
18. Вельтищев Ю.Е. Становление и развитие иммунной системы у детей, иммунная недостаточность. Лекция для врачей № 21 // Приложение к журналу Российский Вестник перинатологии и педиатрии. Москва, 2000. 92 с.
19. Симбирцев А.С., Симбирцев А.С., Громова А.Я. Функциональный полиморфизм генов регуляторных молекул воспаления // Цитокины и воспаление. 2005. № 1. C. 3-10.
References
1. Tsygan V.N., Tsygan V.N., Ivanov A.M., Kamilova T.A., et al. Genetic polymorphism of cytokines. Vestnik Rossiyskoy voenno-meditsinskoy akademii [Bulletin of the Russian Military Medical Academy]. 2010; 30 (2): 211-9. (in Russian)
2. Shevchenko A.V., Golovanova O.V., Konenkov V.I. Features of polymorphism of the promoter regions of the cytokine genes IL1, IL4, IL5, IL6, IL10 and TNF-a in the Caucasian population of Western Siberia. Immunologiya [Immunology].2010; (4): 176-81. (in Russian)
3. Uvarova E.V. Pediatric and adolescent gynecology: a guide for doctors. Moscow: Litterra, 2009. 392 p. (in Russian)
4. Ankirskaya A.S. Nonspecific vaginitis. Klinicheskaya mikrobi-ologiya i antimikrobnaya terapiya [Clinical microbiology and antimicrobial therapy]. 2000; 17 (2): 23-8. (in Russian)
5. Yurovskaya V.P., et al. Age-related characteristics of the genital organs of girls. Methodological recommendations for residents and students. Rostov-on-Don: Publishing house. RGMU, 2009. 16 p. (in Russian)
6. Yakovleva E.B., et al. Optimization of treatment and prevention of vulvovaginitis in girls of the neutral period. Mediko-sotsial'nye
problemy sem'i [Medical and social problems of the family]. 2010; 15 (3): 65-8. (in Russian)
7. Rutinskaya A.V. Features of vaginal microbiocenosis in prepubertal girls. Mediko-sotsial'nye problemy sem'i [Medical and social problems of the family]. 2014; 19 (2): 132-6. (in Russian)
8. Bayramova G.R. Chronic recurrent vulvovaginal candidiasis: principles of diagnosis and treatment options. Akuscherstvo i ginekologiya [Obstetrics and gynecology]. 2008; 6: 64-6. (in Russian)
9. Baranov I.I. Ecology of the vagina and inflammatory diseases of the genital organs. Gihekologiya [Gynecology]. 2010; 12 (3): 4-6. (in Russian)
10. Radzinsky V.E., Khamoshina M.B., Lebedeva M.G., et al. Reproductive potential of Russia - facets of the problem, prospects for correction // In: Ambulatorno-poliklinicheskaya praktika — novye gorizonty [Outpatient practice - new horizons]. Collection of abstracts of the All-Russian Congress. Moscow, 2010. P. 280-2. (in Russian)
11. Bebneva T.N., Letunovskaya A.B. The role of estriol in maintaining the vaginal biocenosis. Akuscherstvo [Gynecology]. 2011; 13 (2): 22-6. (in Russian)
12. Bodienkova G.M., Titova Zh.V. The role of polymorphism and expression of individual cytokine genes in the formation of pathology (Review). Uspekhi sovremennogo estestvoznaniya [Advances in modern natural science]. 2015; (1): 616—20. (in Russian)
13. Rosenberg V.Ya., Butylsky A.N., Kuznik B.I. Age dynamics of hemogram indicators and immune status in children of different ages. Meditsinskaya immunologiya [Medical immunology]. 2011; 13 (2-3): 261-6. (in Russian)
14. Burmenskaya O.V. Molecular genetic markers of the immune response in inflammatory diseases of the female reproductive system: diss. ... doc. biol. Sciences. Moscow, 2014. 249 p. (in Russian)
15. Simbirtsev A.S. Cytokines in the pathogenesis of human infectious diseases. Maditsinskiy akademicheskiy zhurnal [Medical academic journal]. 2013; 13 (3): 18-24. (in Russian)
16. Burmenskaya O.V. Molecular genetic markers of the immune response in inflammatory diseases of the female reproductive system: diss. ... doc. biol. Sciences. Moscow, 2014. 249 p. (in Russian)
17. Tsygan V.N., Ivanov A.M., Kamilova T.A. Genetic polymorphism of the immunogenic signaling system. Zhurnal infektologii Journal of Infectology]. 2011; 3 (2): 21-7. (in Russian)
18. Vel'tishchev Yu.Ye. Formation and development of the immune system in children, immune deficiency. Lecture for doctors No. 21. Prilozheniye k zhurnalu Rossiyskiy Vestnik perinatologii i pediatrii [Appendix to the journal Russian Bulletin of perinatology and pediatrics]. Moscow, 2000. 92 p.
19. Simbirtsev A.S., Gromova A.Ya. Functional polymorphism of genes for regulatory molecules of inflammation. Tsitokiny i vospaleniye [Cytokines and inflammation]. 2005; (1): 3-10. (in Russian)
