CC BY
74
УДК 546.22:547.87:663.12
В. Р. Ахметова (д.х.н., проф., с.н.с.)1, Р. А. Зайнуллин(д.х.н., проф.)2 , Р. Р. Хайруллина(к.х.н., н.с.)1 , Г. Р. Хабибуллина (к.х.н., с.н.с.)1, Р. В. Кунакова (д.х.н., проф., зав. каф.)2
ОДНОРЕАКТОРНЫЙ СИНТЕЗ И РОСТОСТИМУЛИРУЮЩАЯ АКТИВНОСТЬ В ОТНОШЕНИИ SACCHAROMYCES CEREVISIAE НАСЫЩЕННЫХ N^-ГЕТЕРОЦИКЛОВ
1 Институт нефтехимии и катализа Российской академии наук 450075, г. Уфа, проспект Октября, 141; тел./факс (347)2842750 2Уфимский государственный университет экономики и сервиса, кафедра специальной химической технологии 450078, г. Уфа, ул. Чернышевского, 145; тел/факс (347)2520532, e-mail: vnirara@mail.ru
V. R. Akhmetova1, R. A. Zainullin2, R. R. Khairullina1, G. R. Khabibullina1, R. V. Kunakova2
ONE-POT SYNTHESIS OF SATURATED N,S-HETEROCYCLES AND THEIR GROWTH-PROMOTING ACTIVITY IN RESPECT OF SACCHAROMYCES CEREVISIAE
1 Institute of Petrochemistry and Catalysis, Russian Academy of Sciences 141, Prospekt Oktjabrja, Ufa, Russia, 450075; ph. (347)2842750 2Ufa State University of Economics and Service 145, Chernyshevskogo ul., Ufa, Russia, 450078; ph. (347)2520532, e-mail: vnirara@mail.ru
Однореакторный синтез 1,3,5-тиадиазинан-4-ти-она, 5-ацил-1,3,5-дитиазинанов и 3,7-дитиа-1,5-диаза-бицикло[3.3.0]октана осуществлен муль-тикомпонентной реакцией биологически активных аминосубстратов (амида ацетилсалициловой кислоты, тиосемикарбазида, тиомочевины, гидразина) с формальдегидом и сероводородом. Структура синтезированных соединений установлена методами спектроскопии ИК-, ЯМР- 1Н и 13С. Обнаружена ростостимулирующая активность синтезированных соединений на дрожжах БассНатотусез сетею1з1а — сахаромицетов, продуцирующих этанол. Тестируемые соединения оценивали в дозировке 0.1; 0.2; 0.5 мг/100 мл сусла. Контроль осуществляли подсчитывая количество дрожжевых клеток с использованием камеры Горяева и микроскопа.
Ключевые слова: 5-ацил-1,3,5-дитиазинаны; 3,7-дитиа-1,5-диаза-бицикло[3.3.0]октан; дрожжи БассНатотусез сетеи1з1ае; реакция тиометилиро-вания; однореакторный синтез; ростостимулирую-щая активность; 1,3,5-тиадиазинан-4-тион.
One-pot synthesis of 1,3,5-thiadiazine-4-thione, 5-acyl-1,3,5-thiadiazinane and 3.7-dithia-1,5-diaza-bicyclo[3.3.0]octane was carried out by multicomponent reaction of biologically active aminosubstituted (acetylsalicylic acid amide, thiosemicarbazide, thiourea, hydrozine) with formaldehyde and hydrogen sulfide. The structures of synthesized compounds have been established by the methods of spectroscopy IR, NMR 1H and 13C. The growth-promoting activity of the synthesized compounds on yeast Saccharomyces cerevisiae — produces ethanol was found. Test compounds were evaluated in a dose of 0.1; 0.2; 0.5 mg/100 ml of wort. The control was carried out by counting the number of yeast cells using the camera Goriaev and microscope.
Key words 5-acyl-1,3,5-dithiazinanes; 3,7-dithia-1,5-diaza-bicyclo-[3.3.0]octane; 1,3,5-thiadiazine-4-thion; thiomethilation reaction; one-pot synthesis; growth-promoting activity; yeast, Saccharomyces cerevisiae.
Работа выполнена при финансовой This work was financially supported
поддержке Министерства образования by the Ministry of Education and Science и науки РФ (госзадание № 2014/484). of the Russian Federation (state task
№>2014/484).
Дата поступления 15.10.14
В последнее десятилетие новый импульс в развитии получила концепция эффективного использования биоресурсов в создании альтернативного топлива. В ряде стран уже успешно используют возобновляемые источники энергии растительного происхождения, а также сельскохозяйственные и промышленные отходы путем сбраживания в биотопливо с помощью сахаромицетов. Важным в этой отрасли является увеличение выхода биомассы, а также улучшение качества микроорганизмов с помощью экологически чистых стимуляторов роста. Известно использование природных фито-гормонов, например, цитокининов и гибберел-линов и экстрактов растений 1'2, усиливающих рост дрожжей Saccharomyces cerevisiae — продуцента этанола.
Учитывая, что фитогормоны являются труднодоступными для промышленных целей, весьма перспективными могут оказаться экологически сбалансированные химические продукты. Мы предположили, что модификация биологически активных аминосубстратов трансформацией по группам NH2 в биогенные гетероциклы — 1,3,5-дитиазинаны и 1,3,5-тиа-диазинаны — позволит создать новые биорегуляторы в отношении микроорганизмов, в частности, дрожжей Saccharomyces cerevisiae.
Насыщенные шестичленные гетероциклы— 1,3,5-дитиазинаны, 1,3,5-тиадиазинаны обнаружены в природе и их производные используются в медицине, сельском хозяйстве, пищевой промышленности. Так, замещенные 1,3,5-ди-тиазинаны были идентифицированы в виде серосодержащих летучих соединений в пищевых продуктах 3 — 5,6-дигидро-2,4,6-триметил-4Н-1,3,5-дитиазин (тиалдин) обладает органолеп-тическими свойствами, подобными ростбифу, мясу птицы, жареным креветкам, сушеным кальмарам 4-6. Сходные соединения выявлены в летучих компонентах лука Allium cepa L. 7, а также арахисовом масле 8. В связи с этим 5,6-дигидро-2,4,6-триалкил-4Н-1,3,5-дитиазины используются в качестве пищевых ароматизаторов 9. Аккумуляция производных 1,3,5-ди-тиазинанов и 1,3,5-тиадиазинанов в пищевых продуктах обусловлена биохимическими трансформациями серосодержащих аминокислот 10,11. Они образуются при нагревании в результате взаимодействия альдегида, сероводорода и аммиака, возникающих в результате деградации липидов, аминокислот и тиамина 9. Методика их извлечения из природных источников включает использование дистилляции и экстрагирования по методу Ликенс—Никерсона 6'8.
Между тем, производные 3,5-дизамещен-ных-1,3,5-тиадиазинан-2-тионов, имеющих в кольце другую комбинацию атомов S и N, проявляют антибактериальную и антифунгальную активность in vitro 12, а также антипротозой-ное, антигельминтное и туберкулостатическое свойства 13. Сообщается об их использовании при лечении атеросклероза и в качестве проти-воэпилептического средства 13. Кроме того, 1,3,5-тиадиазины проявили высокую биологическую активность в отношении насекомых" 14
вредителей 14.
Учитывая приведенные многочисленные примеры биологической активности и потенциал практического применения у вышеперечисленных серо- и азотсодержащих гетероциклов, представляет интерес поиск новых практически важных свойств биологической активности производных 1,3,5-дитиазинана и 1,3,5-тиади-азинана.
Ранее нами был разработан синтез 5-аце-тилсалицилоил-1,3,5-дитиазинана на основе реакции тиометилирования ацетилсалицилои-ламида с СН2О и H2S 15. Аналогично, с использованием реакции тиометилирования на основе тиомочевины разработан синтез 1,3,5-тиадиазинан-4-тиона 16, исходя из гидразина — 3,7-дитиа-1,5-диазабицикло[3.3.0]октана 17 и на основе тиосемикарбазида — ^-(1,3,5-дитиа-зинан-5-ил)тиомочевины 18.
Целью данной работы является изучение ростостимулирующей активности вышеперечисленных соединений на дрожжах Sаccha-romyces cerevisia — сахаромицетах, продуцирующих этанол.
Материалы и методы исследования
Для синтеза 1,3,5-дитиазинанов (3, 4), 1,3,5-тиадиазинана (6) и дитиадиазабицикло-октана (8) использовали коммерчески доступные исходные соединения чистотой > 95%.
Методика тиометилирования ами-носубстратов с помощью СН2О и H2S в присутствии н-BuONa. а) В стеклянный реактор при 40 оС помещали 3 моля 37%-ного водного раствора формальдегида (CH2O), бар-ботированием насыщали его сероводородом (H2S) в течение 1 ч. В другом реакторе при комнатной температуре (20 оС) смешали исходный амид 1 или 2 с н-BuONa в н-BuOH в мольном соотношении 1:2. Через 10 мин смесь амида с н-BuONa по каплям прибавляли к водному раствору тиометилирующей смеси (CH2O — H2S) и полученную реакционную
смесь перемешивали 7 ч, поддерживая заданную температуру (40 оС). Нейтрализовали разбавленной HCl, выпавшие кристаллы отфильтровывали, промывали горячей водой, спиртом и сушили на воздухе.
5-Ацетилсалицилоил-1,3,5-дитиазинан (3). Бесцветное кристаллическое вещество, выход 84%, т.пл. 106—107 оС. Физико-химические характеристики 5-ацетилсалицилоил-1,3,5-дитиа-зинана идентичны приведенным в работе 15.
№(1,3,5-Дитиазинан-5-ил)тиомочевина (4). Бесцветное кристаллическое вещество, выход 92%, т.пл. 145—146 оС. Физико-химические характеристики ^-(1,3,5-дитиазинан-5-ил)тиомочевины идентичны приведенным в работе 18.
б) Реакцию проводили аналогично методике а) при температуре 70 оС и соотношении исходных реагентов тиокарбамид (5) — CH2O — H2S — н-BuONa, 1:2:1:4. Получили 1,3,5-тиади-азинан-4-тион (6), бесцветное кристаллическое вещество, выход 60%, т.пл. 178—180 оС. Физико-химические характеристики 1,3,5-тиадиази-нан-4-тиона идентичны приведенным в работе 16.
в) Реакцию проводили аналогично методике а) при температуре 0 оС и соотношении исходных реагентов гидразин 7 — CH2O — H2S — н-BuONa, 1:4:2:4. Получили 3,7-дитиа-1,5-диаза-бицикло[3.3.0]октан (8). Бесцветные кристаллы, выход 80%, т.пл. 56—58 оС. Физико-химические характеристики 3,7-дитиа-1,5-диаза-бицикло[3.3.0]октана идентичны приведенным в работе 17.
Методика тестирования ростости-мулирующей активности синтезированных соединений на дрожжах S. cerevisiae. В работе использовали штаммы дрожжей Saccharomyces cerevisiae расы 717 для получения этилового спирта, полученные из коллекции ВНИИПБТ (Санкт-Петербург). Для культивирования Saccharomyces cerevisiae в качестве питательной среды использовали солодовое сусло. Дрожжевую разводку готовили, исходя из расчета 0.1 г дрожжей на 100 мл питательной среды, разливали в конические колбы в одинаковом объеме для культивирования. Путем последовательных разведений готовили растворы тестируемых соединений и вносили их в среду, содержащую S. cerevisiae. Тестируемые соединения оценивали в дозировке 0.1; 0.2; 0.5 мг/100 мл сусла.
В качестве контроля использовали ячменное солодовое сусло без добавления химических соединений. Дрожжи инкубировали в термостате при 25 оС до стационарной фазы рос-
та. Через каждые 12 ч подсчитывали количество живых и погибших клеток с использованием камеры Горяева и светового микроскопа Микмед-5 (ЛОМО, Россия) с комплексом визуализации ТСА-3.0 С. Также оценивали морфологические характеристики дрожжей — внешний вид клеток, состояние клеточной стенки и просматриваемых в цитоплазме органелл. Размер клеток оценивали с помощью окуляр-микрометра. Для анализа оценивали не менее 3000 клеток. Статистическую значимость между вариантами оценивали с помощью 1-крите-рия Стьюдента при доверительной вероятности 0.95. Повторность экспериментов трехкратная.
Результаты и их обсуждение
Однореакторный синтез 5-ацетилсалици-лоил-1,3,5-дитиазинана (3), Ы-(1,3,5-дитиази-нан-3-ил)тиомочевины (4) и 1,3,5-тиадиази-нан-4-тиона (6) осуществлен реакцией тиоме-тилирования аминосубстратов (амида ацетилсалициловой кислоты, тиосемикарбазида, тиомочевины) под действием формальдегида и И2Б. Вместе с тем на основе реакции тиомети-лирования гидразина с формальдегидом и И25 синтезирован 1,5-диаза-3,7-дитиа-бицикло[3.-3.0]октан (8). Перечисленные аминосубстраты обладают, как известно, собственной биологической активностью.
Отметим, что повышению селективности в синтезе целевых соединений способствует про-мотирование реакции тиометилирования н-бу-тилатом натрия. В результате, взаимодействием амида ацетилсалициловой кислоты 1, тиосе-микарбазида 2 с СИ20 и И2Б в присутствии промотора н-ВиОЫа при мольном соотношении КЫИ2 — СИ20 — И2Б — н-ВиОЫа, равном 1:3:2:2 в условиях (н-ВиОИ, 40 оС, 7 ч) получены 1,3,5-дитиазинаны 3 и 4 с выходами 84% и 92%, соответственно 15'18. Синтез 1,3,5-тиа-диазинан-4-тиона (6) с выходом 60% реализован с участием тиомочевины 5, СИ20 и И25 н-ВиОЫа при соотношении реагентов 1:2:1:4 при температуре 80 оС 16. Аналогично в присутствии 4-х-мольного избытка н-Ви0Ыа осуществляется селективный синтез бициклоокта-на 8 реакцией гидразина 7 с СИ20 и И2Б в соотношении 1:4:2 при 0 оС (схема) 17.
Структура синтезированных соединений подтверждена данными ИК-, ЯМР- и 13С. Характерно, что вследствие инверсии гетероциклических систем в соединениях 3, 6 и 8 в спектрах ЯМР 1Н метиленовые протоны резонируют в виде синглетов. Отличительной осо-
Я—N
S
)
Я—ЫИ2 (1,2)
(3,4)
Я= о-ЛсС6И4С(0) (1,3) И2ЫС(8)ЫИ (2,4)
о
Л
СН20+Н28
И2N NИ2
(5)
И
NИ2NИ2 (7)
б:
гг
(8)
Л,
ИЫ N1
Б' (6)
г 2 то1 и-БиОЫа И 4 то1 и-БиОЫа
Схема
Б
Б
бенностью соединения 4 является неэквивалентность экваториальных и аксиальных мети-леновых протонов в цикле как при С(2), так и С(4,6) атомах, которые резонируют при 8Н 3.60 м.д. (С(2)Не) и 4.60 м.д. (С(2)НЙ) и 8Н 3.96 м.д. (С(4,6)Не) и 4.92 м.д. (С(4,6)НЙ) соответственно. В спектре ЯМР 13С соединения 4 наблюдаются два углеродных сигнала 1,3,5-дитиазинанового каркаса: 8С 31.02 м.д. [8СИ28] и 58.25 м.д. [8СИ2Ы]. Согласно данным ИБОС эксперимента для соединения 4 в растворе заторможена инверсия цикла вследствие стабилизации его конформации. В спектрах ЯМР 1Н соединения 4 проявляются сигналы первичной и вторичной аминогрупп при 8Н 7.66 м.д. и 8.22 м.д., соответственно. Структуры соединений 6 и 8 подтверждены РСА 16,19.
Оценку биологической активности соединений проводили на тест-объекте БассЬ,атотусе$ сетеъ1$1ае. Дрожжи 5. сетею1$1ае являются часто применяемой в биологических исследованиях модельной системой, что обусловлено широким распространением, удобством культивирования и быстрым ростом клеток, в частности, используемой для токсикологической
20
оценки поллютантов окружающей среды 20. Следует отметить, что мы обнаружили лишь одну публикацию, в которой была исследована антимикробная активность тетрагидротиадиа-зинтионов — структурных аналогов синтезированных нами соединений — с использованием в качестве тест-объекта различных микроорганизмов, в том числе 5. сетею1$1ае 21.
При микроскопировании клеток 5. сетею1$1ае установлено, что клетки имели ти-
пичную круглую или овальную форму. Во всех вариантах присутствовали живые одиночные и почкующиеся клетки, посторонняя микрофлора не наблюдалась. При скрининге тестируемых соединений выявлены некоторые изменения в их морфологии (рис. 1). В контроле у 6% клеток наблюдалось утолщение клеточной стенки, зернистость и увеличенная вакуоль. При применении дитиазинана 3 4% клеток имели зернистую цитоплазму и увеличенную вакуоль, кроме того, были обнаружены клетки, сгруппированные в виде цепочек. Следует отметить, что в варианте с применением ^-(1,3,5-дитиазинан-5-ил)тиомочевины (4) существенных различий по сравнению с контролем не было выявлено.
В варианте с использованием соединения 8 контуры клеток дрожжей ровные, оболочки не утолщены; во всех клетках просматривается вакуоль. При применении тиадиазинантиона 6 клетки в основном круглой формы, стенки слегка утолщены, контуры четкие ровные, просматривается небольшая вакуоль. Число мертвых клеток — до 2%. Клетки расположены отдельно друг от друга, в некоторых полях зрения отмечались небольшие скопления. Длинных ветвящихся цепочек не наблюдалось.
Количественная оценка показала, что исследуемые соединения оказывали стимулирующее влияние на рост дрожжей: во всех вариантах происходило возрастание общего количества (рис. 2а) и почкующихся клеток (рис. 2б). Следует также отметить некоторое увеличение размеров клеток 5. сетею1$1ае по сравнению с контролем (рис. 2в).
3 4
Рис. 1. Морфология Saccharomyces cerevisiae при воздействии на них синтезированных соединений:
1 — контроль, 2 — 5-ацетилсалицилоил-1,3,5-дитиазинан (3), 3 — 3,7-дитиа-1,5-диаза-бицикло[3.3.0]ок-тан (8), 4 — 1,3,5-тиадиазинан-4-тион (6). Увеличение х 100, дозировка 0.5 мг/100 мл сусла.
общее количество клеток, млн./мл
180 -г— 160 — 140 — 120 — 100 — 80 60 40 20 0
б
а
диаметр клетки, мкм
в
Рис. 2. Влияние синтезированных соединений на рост и размеры Saccharomyces cerevisiae. Обозначения те же, что и на рис. 1.
Таблица
Сравнительная характеристика образцов с различной дозировкой соединения 6
Дозировка (6), мл Общее кол-во клеток, млн/мл Процент почкующихся клеток Процент мертвых клеток Размеры клеток, мкм Краткая характеристика клеточной стенки Состояние цитоплазмы Наличие вакуоли Посторонняя микрофлора
0 90 30 1 4 Контуры четкие, ровные. Стенки слегка утолщены. Гомогенная. Слегка зернистая Вакуоли средние по величине Не обнаружена
0.1 126 44 1 5 Контуры четкие ровные. Стенки слегка утолщены Гомогенная. Небольшая зернистость Вакуоли средние по величине Не обнаружена
0.2 130 45 1 5 Контуры четкие ровные. Стенки слегка утолщены гомогенная Небольшая зернистость Вакуоли средние по величине Не обнаружена
0.5 148 58 0 6 Контуры четкие ровные. Стенки не утолщены гомогенная Небольшая зернистость Вакуоли не большие Не обнаружена
Для тиадиазинантиона 6 была определена зависимость доза—эффект (табл.). Как показали результаты, во всех вариантах клетки дрожжей имели круглую или слегка овальную форму. Из табл. видно, что с увеличением концентрации соединения 6 возрастало общее количество клеток и их размер. Полученные результаты свидетельствуют о стимулирующем
Литература
1. Пат. №2483105 РФ / Павловская Н. Е., Гнеушева Е. А., Полехина Н. Н. // Б. И.- 2013.-№15.
2. Войнов Н.А., Волова Т. Г., Зобова Н. В., Маркова С. В., Франк Л. А., Шишацкая Е. И. Современные проблемы и методы биотехнологии.- Красноярск: ИПК СФУ, 2009.- 418 с.
3. Shankaranarayana M. L., Raghavan B., Abraham K. O., Natarajan C. P. Volatile sulfur compounds in food flavors. // CRC Critical Reviews in Food Technology.- 1974.- V.4. №3.- P.395.
4. Kawai T., Ishida Y., Kakiuchi H., Ikeda N., Higashida T., Nakamura S. Flavor components of dried squid. // J. Agric. Food Chem.- 1991.-V.39, №4.- P.770.
5. Shi H., Ho C.-T. The flavour of poultry meat. In Flavor of Meat and Meat Products. Glasgow: Blackie Academic and Professional, 1994.-Chapter 4, P.52-70.
6. Siegmund B., Leitner E., Mayer I., Pfannhauser W, Farkas P, Sadecka, J, Kovac M. 5,6-Dihydro-2,4,6-trimethyl-4H-1,3,5-dithiazine - an aroma-active compound formed in course of the Likens-Nickerson extraction. // Z Lebensm Unters Forsch.- 1997.- A205.- P. 73.
7. Farkas P., Hradsky P., Kovac M. Novel flavour components identified in the steam distillate of onion (Allium cepa L.). // Z Lebensm. - Unters Forsch.- 1992.- V. 195.- P. 459.
действии тиадиазинантиона 6 на рост дрожжей S. cerevisiae.
В дальнейшем планируется исследовать влияние данных соединений на бродильную активность дрожжей, что позволит определить перспективы их дальнейшего практического применения.
References
1. Pavlovskaja N. E., Gneusheva I. A., Polekhina N. N. [Method for production of Saccharomyces Cerevisiae yeast growth stimulant]. Patent RF, no. 2483105, 2013.
2. Voinov N.A., Volova T. G., Zobova N. V., Markova S. V., Frank L. A., Shishatskaya E. I. Sovremennye problemy i metody biotehnologii [Modern problems and methods of biotechnology]. Krasnoyarsk, IPK SFU Publ., 2009, 418 p.
3. Shankaranarayana M. L., Raghavan B., Abraham K. O., Natarajan C. P. [Volatile sulfur compounds in food flavors]. CRC Critical Reviews in Food Technology, 1974, v.4, no.3, p. 395.
4. Kawai T., Ishida Y., Kakiuchi H., Ikeda N., Higashida T., Nakamura S. [Flavor components of dried squid]. J. Agric. Food Chem., 1991, v.39, no.4, p.770.
5. Shi H., Ho C.-T. [The flavour of poultry meat]. In Flavor of Meat and Meat Products. Glasgow: Blackie Academic and Professional, 1994, Chapter 4, pp.52-70.
6. Siegmund B., Leitner E., Mayer I., Pfannhauser W., Farkas P., Sadecka J., Kovac M. [5,6-Dihydro-2,4,6-trimethyl-4H-1,3,5-dithiazine - an aroma-active compound formed in course of the Likens-Nickerson extraction]. Z Lebensm Unters Forsch., 1997, A205, p. 73.
7. Farkas P., Hradsky P., Kovac M. [Novel flavour components identified in the steam distillate of onion (Allium cepa L.)]. Z Lebensm Unters Forsch., 1992, v. 195, p. 459.
8. Velluz A., Bronner H., Naf R. Some 5,6-dihydro-4#-1,3,5-dithiazines in peanut butter // Flavour and fragrance journal.— 1994.— V.9.— P.81.
9. Werkhoff P., Guentert M., Hopp R. Dihydro 1,3,5 dithiazines: Unusual flavor compounds with remarkable organoleptic properties // Food Reviews International.- 1992.- V.8, №3.- P. 391.
10. Zhang Y, Chien M., Chi-Tang H. J. Comparison of the Volatile Compounds Obtained from Thermal Degradation of Cysteine and Glutathione in Water. // J. Agr. Food. Chem.-1988.- V.36.- P.992.
11. Zhang Y, Chi-Tang H., Chi-Tang H. Volatile compounds formed from thermal interaction of
2.4-decadienal with cycteine and glutathione. // J. Agr. Food. Chem.- 1989.- V. 37.- P.1016.
12. Saplam E., Sarac S., Kilic E., Ozalp M., Ertan M. Synthesis and antimicrobial activity of some
3.5-disubstituted-tetrahydro-2# -1,3,5-thiadiazine-2-thione derivatives. // Turk J. Pharm. Sci.- 2011. V.8, №2.- P.159.
13. RodrHguez H., Su6rez M., Albericio F. Thiadiazines, W,W-Heterocycles of Biological Relevance. // Molecules.- 2012.- V.17.- P. 7612.
14. Kanno H. An approach to a novel insect growth regulator buprofezin (Applaud). // Pure & Appl. Chem.- 1987.- V.59.- P.1027.
15. AxMeTOBa B. P., Xaftpy^^HHa P. P., Haflbipry.no-Ba r. P., a^eMH^eB y. M. // »OpX.- 2008.-T.44, №2.- C.200.
16. Akhmetova V. R., Khairullina R. R., Bush-marinov I. S., Khairullina R. R., Tyumkina T. V., Yanybin V. M. Multicomponent reactions of urea and its derivatives with CH2O and H2S in the synthesis of 1,3,5-thiadiazinane-4-(thi)ones and macroheterocycles. // ARKIVOC.- 2011.- V. 8. P. 149.
17. AxMeTOBa B. P., Haflbipry.noBa r. P., Xa^H3o-Ba C. P. h gp. // »OpX.- 2006.- T. 42.-Bho. 1.- C.151.
18. naT. 2414460 PO / AxMeTOBa B. P., Xaftpy^H-Ha P. P., KyHaKOBa P. B., ^^eMKneB y. M. // B. H.- 2011.- №8.
19. Bushmarinov I. S., Antipin M. Yu., Akhmeto-va V. R., Nadyrgulova G. R.; Lyssenko K. A. Stereoelectronic effects in N-C-S systems: experimental and ab Initio AIM study. // J. Phys. Chem.- 2008.- V.112. №22.- P.5017.
20. Fai P.B., Grant A. A comparative study of Saccharomyces cerevisiae sensitivity against eight yeast species sensitivities to a range of toxicants. // Chemosphere.- 2009.- V.75.-P.289.
21. Pat. №3946006 US / Eggensperger H., Diehl K.-H. Tetrahydrothiadiazinethiones // 1976.
8. Velluz A., Bronner H., Naf R. [Some 5,6-dihydro-4#-1,3,5-dithiazines in peanut butter]. Flavour and fragrance journal, 1994, v.9, p.81.
9. Werkhoff P., Guentert M., Hopp R. [Dihydro 1,3,5 dithiazines: Unusual flavor compounds with remarkable organoleptic properties]. Food Reviews International, 1992, v.8, no.3, p. 391.
10. Zhang Y, Chien M., Chi-Tang H. J. [Comparison of the Volatile Compounds Obtained from Thermal Degradation of Cysteine and Glutathione in Water]. J. Agr. Food. Chem., 1988, v.36, p. 992.
11. Zhang Y, Chi-Tang H., Chi-Tang H. [Volatile compounds formed from thermal interaction of
2.4-decadienal with cycteine and glutathione]. J. Agr. Food. Chem., 1989, v. 37, p.1016.
12. Saрlam E., Sarac S., Kilic E., Ozalp M., Ertan M. [Synthesis and antimicrobial activity of some
3.5-disubstituted-tetrahydro-2# -1,3,5-thiadiazine-2-thione derivatives]. Turk J. Pharm. Sci., 2011, v.8, no.2, p.159.
13. Rodraguez H., su6tcz M., Albericio F. [Thiadiazines, W,W-Heterocycles of Biological Relevance]. Molecules, 2012, v.17, p. 7612.
14. Kanno H. [An approach to a novel insect growth regulator buprofezin (Applaud)]. Pure & Appl. Chem., 1987, v.59, p.1027.
15. Akhmetova V.R., Khairullina R.R., Nadyrgulova G.R., Dzhemilev U.M., Kunakova R.V. [Multicomponent heterocyclization of carboxamides with H2S and CH2O]. Russian Journal of Organic Chemistry, 2008, v. 44, no. 2, pp. 190-196.
16. Akhmetova V. R., Khairullina R. R., Bush-marinov I. S., Khairullina R. R., Tyumkina T. V., Yanybin V. M. [Multicomponent reactions of urea and its derivatives with CH2O and H2S in the synthesis of 1,3,5-thiadiazinane-4-(thi)ones and macroheterocycles]. ARKIVOC, 2011, v. 8, p. 149.
17. Akhmetova V.R., Khafizova S.R., Khairullina R.R., Paramonov E.A., Dzhemilev U.M., Nadyrgulova G.R., Kunakova R.V. [Cyclocondensation of hydrazine, formaldehyde, and hydrogen sulfide in the presence of acids and bases]. Russian Journal of Organic Chemistry, 2006, v. 42, no.1, pp. 145-147.
18. Akhmetova V. R., Khajrullina R. R., Kunakova R. V., Dzhemilev U. M. [Method of producing n-(1,3,5-dithiazinan-5-yl)-thiourea]. Patent RF, no. 2414460, 2011.
19. Bushmarinov I. S., Antipin M. Yu., Akhmetova V. R., Nadyrgulova G. R.; Lyssenko K. A. [Stereoelectronic effects in N-C-S systems: experimental and ab Initio AIM study]. J. Phys. Chem., 2008, v.112, no. 22, p.5017.
20. Fai P.B., Grant A. [A comparative study of Saccharomyces cerevisiae sensitivity against eight yeast species sensitivities to a range of toxicants.]. Chemosphere, 2009, v.75, p.289.
21. Eggensperger H., Diehl K.-H. [Tetrahydrothiadi-azinethiones]. Patent USA. no. 3946006, 1976.
