CC BY
18
клинически значимыми при оценке раннего повреждения почек. При этом исходный уровень структурного биомаркера КОЛЬ в моче
позволил прогнозировать развитие хронической болезни почек в отдаленном послеоперационном периоде.
Сведения об авторах статьи: Павлов Валентин Николаевич - д.м.н., профессор, зав. кафедрой урологии с курсом ИПО, ректор ГБОУ ВПО БГМУ Минздрава России. Адрес: 450000, г. Уфа, ул. Ленина, 3. E-mail: [email protected].
Пушкарев Алексей Михайлович - д.м.н., зав. отделением урологии РКБ им.Г.Г.Куватова, профессор кафедры урологии с курсом ИПО ГБОУ ВПО БГМУ Минздрава России. Адрес: 450000, г. Уфа, ул. Ленина, 3.
Кондратенко Яков Владимирович - врач-уролог урологического отделения ГБУЗ РКБ им. Г.Г. Куватова. Адрес: 450005, г. Уфа, ул. Достоевского, 132.
Сафиуллин Руслан Ильясович - д.м.н., профессор кафедры урологии с курсом ИПО ГБОУ ВПО БГМУ Минздрава России. Адрес: 450000, г. Уфа, ул. Ленина, 3. E-mail: [email protected]
Алексеев Александр Владимирович - к.м.н., врач-уролог отделения ДЛТ ГБУЗ РКБ им. Г.Г. Куватова, ассистент кафедры урологии с курсом ИПО ГБОУ ВПО БГМУ Минздрава России. Адрес: 450000, г. Уфа, ул. Ленина, 3. Ямалитдинова Регина Рифатовна - ассистент кафедры урологии с курсом ИПО ГБОУ ВПО БГМУ Минздрава России. Адрес: 450000, г. Уфа, ул. Ленина, 3.
Насибуллин Ильдар Марсович - докторант кафедры урологии с курсом ИПО ГБОУ ВПО БГМУ Минздрава России. Адрес: 450000, г. Уфа, ул. Ленина, 3.
Ракипов Ильнур Галинурович - аспирант кафедры урологии с курсом ИПО ГБОУ ВПО БГМУ Минздрава России. Адрес: 450000, г. Уфа, ул. Ленина, 3.
ЛИТЕРАТУРА
1. Злокачественные новообразования в России в 2012 году (заболеваемость и смертность) / под ред. А.Д. Каприна, В.В. Старин-ского, Г.В. Петровой. - М.: ФГБУ «МНИОИ им. П.А. Герцена» Минздрава России, 2014. - 250 с.
2. Коган, М.И. Сравнительный анализ результатов радикальной цистэктомии и кишечной деривации мочи при выполнении межкишечных анастомозов аппаратным и ручным швом / М.И. Коган, О.Н. Васильев // Онкоурология. - 2012. - № 1. - С. 36-42.
3. Качество жизни и отдаленные результаты радикальной цистэктомии у больных инвазивным раком мочевого пузыря / П.В. Глыбочко [и др.] // Саратовский научно-медицинский журнал. - 2008. - Т. 4, N° 3. - С. 97-101.
4. Клинические рекомендации. Урология / под ред. Н.А. Лопаткина. - 2-е изд., перераб. - М.: ГЭОТАР-Медиа, 2013. - 416 с.
5. Матвеев, Б.П. Рак мочевого пузыря / Б.П. Матвеев // Клиническая онкоурология / под ред. Б.П. Матвеева. - М.: Вердана, 2003. - 406 с.
6. Моноцитарный хемотаксический протеин-1 и р2-микроглобулин в оценке повреждения почечной паренхимы при оперативном лечении нефролитиаза / П.В. Глыбочко [и др.] // Урология. - 2012. - № 1. - С. 4-10.
7. Acute renal failure-definition, outcome measures, animal models, fluid therapy and information technology needs: the Second Internation Consensus Conference of the Acute Dialysis Quality Initiative (ADQI) / R. Ballomo [et al.] // Crit. Care. - 2004. - Vol. 8. - P. 2004-2012.
8. Association between increases in urinary neutrophil gelatinase-associated lipocalin and acute renal dysfunction after adult cardiac surgery / G. Wagener [et al.] // Anestesiology. - 2006. - Vol. 105, № 3. - P. 485-491.
9. A framework and key research questions in AKI diagnosis and staging in different environments / P.T. Murray [et al.] // Clin. J. Am. Soc. Nephrol. - 2008. - Vol. 3. - P. 864-868.
10. Causes and mechanisms of acid-base and electrolyte abnormalities in cancer patients / G. Miltiadous [et al.] // Eur. J. Intern. Med. -2008. - Vol. 19, № 1. - P. 1-7.
11. Kristjansson, A. Renal function in the setting of urinary diversion / A. Kristjansson, W. Mansson // World J. Urol. - 2004. - Vol. 22, № 3. - P. 172-177.
12. Prognostic value of cystatin C in acute heart failure in relation to other markers of renal function and NT-prpBNP / J. Lassus [et al.]; for the FINNAKVA Study group // Eur. Heart J. - 2007. - Vol. 28. - P. 1841-1847.
13. Parikh, C.R. New biomarkers of acute kidney injury / C.R. Parikh, P. Devarajan // Crit. Care Med. - 2008. - Vol. 36, № 4. - P. 159-165.
14. Limitations of creatinine as a filtration marker in glomerylopatic patients / O. Shemens [et al.] // Kidney Int. - 1985. - Vol. 28, № 5. - P. 830-838.
15. Nguyen, M.T. Biomarkers for the early detection of acute kidney injury / M.T. Nguyen, P. Devarajan // Pediatr. Nephrol. - 2008. -Vol. 23. - P. 2151-2157.
16. Shibata, H. Cancer and electrolytes imbalance / H. Shibata // Gan To Kagaku Ryoho. - 2010. - Vol. 37, № 6. - P. 1006-1010.
17. Thurairaja, R. The orthotopic neobladder/ R.Thurairaja, F.C. Burkhard, U.E. Studer // BJU Int. - 2008. - V. 102, № 9. - P. 1307-1313.
УДК 616.61-006.694 + 575.174.015.3
© Д.Г. Пасечник, М.И. Коган, З.М. Ахохов, А.А. Гусев, А.К. Логвинов, С.А. Заруцкий, 2015
Д.Г. Пасечник, М.И. Коган, З.М. Ахохов, А.А. Гусев, А.К. Логвинов, С.А. Заруцкий ОДНОНУКЛЕОТИДНЫЕ ПОЛИМОРФИЗМЫ ГЕНОВ, СВЯЗАННЫХ С РЕНИН-АНГИОТЕНЗИНОВОЙ СИСТЕМОЙ, У БОЛЬНЫХ С ПОЧЕЧНО-КЛЕТОЧНЫМ РАКОМ
ГБОУ ВПО «Ростовский государственный медицинский университет» Минздрава России, г. Ростов-на-Дону
Цель исследования - определить эффекты однонуклеотидных полиморфизмов (8КРз) в 5 генах, вовлеченных в регуляцию артериального давления, на развитие и клинико-патологические особенности рака почки (ПКР). Из образцов крови 60 пациентов, перенесших радикальную нефрэктомию по поводу ПКР, выделялась ДНК с последующей идентификацией SNPs ^699 и ^4762 в гене AGT, ^5186 в гене AGTR1, ^1403543 в гене ЛОТК2, ^1799998 в гене CYP11B2 методом ПЦР в реальном времени. Было установлено, что чаще встречались AGT_rs699 (р<0.00001), AGTR1_rs5186 (р<0.0004) у пациентов с ПКР, чем в здоровой популяции. Значимая корреляция между ПКР в сочетании с артериальной гипертензией выявлена для AGTR1_rs5186 (OR = 4,12, 95% С1: 3,56-4,68, р = 0,01). Наиболее часто у пациентов с ПКР выявлялись сочетания 34 SNP (61,6%). Наши результаты показывают, что изменения в ренин-ангиотензин-альдостероновой системе (РААС) могут
быть связаны с развитием и прогрессией ПКР. Определение SNP генов можно использовать в оценке прогноза ПКР и рисков развития и прогрессии хронической болезни почек у данной категории пациентов.
Ключевые слова: почечно-клеточный рак, однонуклеотидный полиморфизм, ренин-ангиотензиновая система.
D.G. Pasechnik, M.I. Kogan, Z.M. Akhokhov, A.A. Gusev, A.G. Logvinov, S.A. Zarutskij SINGLE NUCLEOTIDE POLYMORPHISMS OF GENES RELATED TO THE RENIN-ANGIOTENSIN SYSTEM IN PATIENTS WITH RENAL CELL CANCER
The purpose of this paper is to determine the effects of single nucleotide polymorphisms (SNPs) in 5 genes involved in regulation of arterial pressure on the development and the clinicopathological aspects of renal cancer (RCC).
Blood samples of 60 patients subjected to radical nephrectomy for RCC were used to obtain DNA for subsequent identification of SNPs rs699 and rs4762 in the AGT gene, rs5186 in the AGTR1 gene, rs1403543 in the AGTR2 gene, rs1799998 in the CYP11B2 gene by the PCR method in real time. It was established that cancer patients show consistently higher frequencies of SNPs AGT_rs699 (р<0.00001), AGTR1_rs5186 (p<0.0004) compared with the healthy population. A significant correlation between RCC combined with arterial hypertension was recorded at AGTR1_rs5186 (OR = 4.12, 95% CI: 3.56-4.68, p = 0.01). The most frequent combinations in RCC patients were from 3 to 4 SNP (61,6%). Our results show that the RAAS effects are consistently related to the development and progression of RCC. Identification of the SNP genes can be used for prognosis of the RCC course and the risks of development and progression of CKD in this category of patients.
Key words: renal cell carcinoma, single nucleotide polymorphism, renin-angiotensin system.
Артериальная гипертензия является одним из факторов риска развития рака почки (РП). Кроме того, способствуя прогрессии хронической болезни почек (ХБП), гипертензия снижает общую выживаемость больных. В связи с этим представляет интерес изучение таргетных генов, связанных с ренин-ангиотензин-альдостероновой системой
(РААС), регулирующей артериальное давление. Особый интерес изучения РААС связан и с исследованиями, свидетельствующими о том, что ангиотензин-2 (АН-2) может участвовать в регуляции процессов пролиферации и дифференцировки эпителия канальцев почки [6]. В ряде исследований показано, что АН-2, воздействуя на первый или второй тип рецепторов, может влиять на ряд ключевых свойств опухоли (пролиферация, ангиогенез, инвазия), обуславливая ее прогрессию. Природные вариации генов, связанных с регуляцией активности РААС, могут объяснять индивидуальные особенности активации этой системы и ее влияния на прогрессию рака. Тем не менее публикации, посвященные роли РААС в развитии почечно-клеточного рака (ПКР), единичны. Б.А. Goldfarb й а1. (1994) продемонстрировали экспрессию первого и второго типов рецепторов в опухолях почек [3]. Takada (1983) выявил наличие ангиотен-
зин-1 превращающего фермента (АПФ) в клетках раковой опухоли почки [5]. Dolley-Hitze et al. (2010) указали на прогностическое значение экспрессии рецепторов первого и второго типов к АН-2 при ПКР, а Miyajma et al.(2002) обнаружили в экспериментальной модели способность АН-2 индуцировать ан-гиогенез при ПКР [2,4]. Andreotti et al. (2010) на большой группе больных показали связь между риском ПКР у пациентов с артериальной гипертензией и однонуклеотидными полиморфизмами (SNP) в промоторной части гена ангиотензиногена (ANG) [1].
Материал и методы
Для оценки влияния однонуклеотидных полиморфизмов в генах, участвующих в регуляции активности РААС, на развитие и кли-нико-патологические особенности рака почки из образцов крови 60 пациентов, перенесших радикальную нефрэктомию, была выделена ДНК с последующей идентификацией SNPs rs699 и rs4762 в гене AGT, rs5186 в гене AGTR1, rs1403543 в гене AGTR2, rs1799998 в гене CYP11B2 методом ПЦР в реальном времени. Характеристика изучаемых SNP представлена в табл.1. В качестве контроля частоты распространения вариантов аллелей в популяции использовали global minor allele frequency (MAF) из базы проекта HapMap.
Таблица 1
Характеристика SNP генов, связанных с РААС_
Вид SNP Характер мутации Значение
AGT_rs699 Замена тимидина (Т) на цитозин (С) в позиции 704 Повышение уровня транскрипции гена ангиотензиногена, повышение уровня ангиотензиногена
AGT_rs4762 Замена цитозина (С) на тимидин (Т) в позиции 521 Повышение уровня транскрипции гена ангиотензиногена, повышение уровня ангиотензиногена
AGTR1_rs5186 Замена аденина (А) на цитозин (С) в позиции 1166 промоторной части гена Повышение активности первого типа рецептров к ангиотензину-2
AGTR2_rs1403543 Замена гуанина на аденин (А) в позиции 1675 Уменьшение экспрессии рецепторов второго типа к ангиотензину-2
CYP11B2_rs1799998 Замена цитозина (С) на тимидин (Т) в позиции 344 проторной части гена Повышение активности альдостерон синтазы и уровня альдестерона
Таблица 4
Оценивали возможную связь между исследуемыми 8КР и полом, возрастом пациентов, наличием артериальной гипертензии, стадией, степенью дифференцировки и гистологическим типом рака, наличием метастазов и признаков хронической болезни почек (показатель скорости клубочковой фильтрации (СКФ) по Кокрофту-Голту ниже 90 мл/мин/1.73м2).
Статистический анализ проводили на языке программирования R 3.1.0. Для оценки ассоциаций и значимых связей использовали отношение шансов (OR), критерии хи-квадрат и Манна-Уитни.
Результаты и обсуждение Средний возраст пациентов был 56 лет (диапазон от 22 до 78 лет). Преобладали мужчины (65%). Анализ клинико-морфологи-ческих особенностей опухолей показал, что чаще встречались местно распространенные
формы рака (стадия рТ3 и выше) (66,7%), умеренной степени дифференцировки (55%). Гематогенные метастазы встретились в 18 (30%) наблюдениях. Превалирующей гистологической формой был светлоклеточный вариант почечно-клеточного рака (90%).
При анализе однонуклеотидных полиморфизмов установлено, что у больных раком почки чаще выявлялись SNPs AGT_rs699, АОТЯ2_ге 1403543, СУР11В2_ге1799998, AGTR1_rs5186. Однако значимая связь между раком почки и аллельными вариантами генов отмечена только для AGT_rs699 и АОТЯ1_ге5186 (табл.2).
Достоверная ассоциация между наличием у пациентов артериальной гипертензии и рака имела место исключительно при АОТЯ1_ге5186 (ОЯ = 4,12, 95% С1: 3,56-4,68, р = 0,01) (табл.3).
Таблица 2
Частота встречаемости генов, связанных с РААС
Вид Частота мутантных аллелей в популяции (МАБ по данным НарМар), % Частота мутантных аллелей у пациентов с ПКР, % р-1еуе1
АОТ ^699 41 75 < 0,00001
АОТ ^4762 15 20 < 0,06
АОТЯ1 ^5186 27 55 < 0,0004
АОТЯ2 ^1403543 56 65 < 0,39
СУР11В2 799998 55 65 < 0,25
Анализ ассоциаций генов, связанных с РААС, артериальной гипертензией, хронической болезнью почек
Таблица 3
Вид Клинический параметр ОЯ (С1 95%) Р
АОТ_^699 Артериальная гипертензия Хроническая болезнь почек (СКФ менее 90 мл/мин/1,73м2) 0,82 (0,24-2,82) 0,5 (0,1-2,4) 0,76 0,39
АОТ_^4762 Артериальная гипертензия Хроническая болезнь почек (СКФ менее 90мл/мин/1,73м2 1,2 (0,32-4,56) 0,53 (0,06-4,8) 0,79 0,57
АОТЯ1_^5186 Артериальная гипертензия Хроническая болезнь почек (СКФ менее 90мл/мин/1,73м2 4,12 (1,34-12,63) 1,54 (0,33-7,14) 0,01 0,31
А0ТЯ2_^1403543 Артериальная гипертензия Хроническая болезнь почек (СКФ менее 90мл/мин/1,73м2 1,1 (0,37-3,29) 4,38 (0,5-38,26) 0,87 0,18
СУР 11 В2_ге1799998 Артериальная гипертензия Хроническая болезнь почек (СКФ менее 90мл/мин/1,73м2 0,8 (0,26-2,44) 1,73 (0,32-9,43) 0,69 0,53
Анализ ассоциаций генов, связанных с РААС, стадией, степенью дифференцировки рака почки
Вид Уровень значимости р
Местно распространенные раки (стадия Т3-Т4) Метастические раки Раки низкой степени дифференцировки (ядерный индекс 3-4)
АОТ ^699 0,88 0,76 0,08
АОТ ^4762 0,89 0,79 0,54
АОТЯ1 ^5186 0,66 0,01 0,13
АОТЯ2 ^1403543 0,84 0,87 0,18
СУР11В2 ^1799998 0,84 0,32 0,06
При сопоставлении частоты 8КР генов с полом и возрастом пациентов, стадией, степенью дифференцировки и гистологической формой рака достоверных корреляций выявлено не было (табл.4).
Однако анализ связей внутри возрастных групп позволил обнаружить в группе пациентов младше 55 лет корреляцию между AGT521 и
снижением рисков метастазов (OR = 0.04, 95% С1: 0.003-0.512, р = 0,01). У 61,6% больных раком почки обнаружено сочетание 3 и 4 SNP. Наиболее часто наблюдались ассоциации АОТ_ге699, АОТЯ1_ге5186, АОТЯ2_ге 1403543, СУР11В2_ге 1799998 (13,3%), АОТ_ге699, А0ТЯ2_ге1403543, СУР11В2_ге1799998 (10%),
ЛОТ_ге699, ЛаТЯ1_ге5186, ЛаТК2_ге1403543 (8,3%).
Заключение. Наши результаты подтверждают, что компоненты РААС могут влиять на развитие и прогрессию рака почки. Обнаружена достоверная связь между раком
почки и аллельными вариантами генов ЛОТ_ге699 и ЛаТЯ1_ге5186. Выявление генов, участвующих в регуляции артериального давления, может использоваться в оценке прогноза течения РП и рисков развития и прогрессии ХБП у этой категории больных.
Сведения об авторах статьи:
Пасечник Дмитрий Геннадьевич - к.м.н., руководитель ЦНИЛ ГБОУ ВПО РостГМУ Минздрава России. Адрес: 344022, г. Ростов-на-Дону, пер. Нахичеванский, 29.
Коган Михаил Иосифович - д.м.н., профессор, зав. кафедрой урологии и репродуктивного здоровья человека с курсом детской урологии-андрологии ФПК и ППС ГБОУ ВПО РостГМУ Минздрава России. Адрес: 344022, г. Ростов-на-Дону, пер. Нахичеванский, 29.
Ахохов Залимхан Муаедович - аспирант кафедры урологии и репродуктивного здоровья человека с курсом детской уро-логии-андрологии ФПК и ППС ГБОУ ВПО РостГМУ Минздрава России. Адрес: 344022, г. Ростов-на-Дону, пер. Нахиче-ванский, 29.
Гусев Андрей Анатольевич - к.м.н., доцент кафедры урологии и репродуктивного здоровья человека с курсом детской урологии-андрологии ФПК и ППС ГБОУ ВПО РостГМУ. Адрес: 344022, г. Ростов-на-Дону, пер. Нахичеванский, 29. Логвинов Александр Константинович - к.б.н., зав. отделом оптических и молекулярно-биологических методов исследования ЦНИЛ ГБОУ ВПО РостГМУ Минздрава России. Адрес: 344022, г. Ростов-на-Дону, пер. Нахичеванский, 29. Заруцкий Станислав Александрович - к.э.н., научный сотрудник ЦНИЛ ГБОУ ВПО РостГМУ Минздрава России. Адрес: 344022, г. Ростов-на-Дону, пер. Нахичеванский, 29.
ЛИТЕРАТУРА
1. Variants in blood pressure genes and the risk of renal cell carcinoma / G. Andreotti [et al.] //Carcinogenesis. - 2010. - Vol.31, №4. - P. 614-20.
2. Angiotensin-2 receptors (AT1-R and AT2-R), new prognostic factors for renal clear-cell carcinoma? / T. Dolley-Hitze [et al.]// Br. J Cancer. - 2010. - Vol.23, №103(11). - P.1698-705.
3. Goldfarb D.A. The renin-angiotensin system: revised concepts and implications for renal function / D.A. Goldfarb, A.C. Novick // Urology. - 1994. - Vol.43, №4. - P.572-83.
4. Angiotensin II type I antagonist prevents pulmonary metastasis of murine renal cancer by inhibiting tumor angiogenesis / A. Miyajima [et al.] //Cancer Res. - 2002. - Vol.1, № 62 (15). - P.4176-9.
5. Takada, Y. Characterization and immunohistologic demonstration of angiotensin-converting enzyme in human renal cell carcinoma / Y Takada, K Hiwada, T. Kokubu // Oncodev Biol Med. - 1983. - Vol.4, №5. - P.327-34.
6. Wolf G. Angiotensin II and tubular development. //Nephrol. Dial. Transplant. - 2002. - Vol.17 ( Suppl 9). - P.48-51.
УДК: [616.61-006.6-02:616.1]-079.4(045)
© В.М. Попков, Д.А. Дурнов, Н.Б. Захарова, А.Н. Понукалин, Д.Ю. Потапов, 2015
В.М. Попков, Д.А. Дурнов, Н.Б. Захарова, А.Н. Понукалин, Д.Ю. Потапов
ЗНАЧЕНИЕ ФАКТОРОВ АНГИОГЕНЕЗА В ДИАГНОСТИКЕ РАКА ПОЧКИ
ГБОУ ВПО «Саратовский государственный медицинский университет им. В.И. Разумовского» Минздрава России, г. Саратов
Проведен анализ результатов исследования более 100 пациентов с объемными образованиями почек, получавших лечение в клинической больнице им. С.Р. Миротворцева. Выполнена оценка диагностической значимости уровня фактора роста эндотелия сосудов (VEGF). Установлено, что наибольшее значение при дифференциальной диагностике между доброкачественными и злокачественными образованиями имеет определение содержания в сыворотке крови VEGF.
Ключевые слова: рак почки, ангиогенез, VEGF.
V.M. Popkov, D.A. Durnov, N.B. Zakharova, A.N. Ponukalin, D.Yu. Potapov THE ROLE OF ANGIOGENESIS FACTORS IN THE DIAGNOSIS OF RENAL-CELL CARCINOMA
The analysis of the survey results of more than 100 patients with kidney masses treated in the MCH n.a. S.R. Mirotvorcev has been made. The evaluation of the diagnostic value of VEGF was carried out. It was found that the maximum value in the differential diagnosis between benign and malignant tumors is the definition of VEGF in the serum.
Key words: renal-cell carcinoma, angiogenesis, VEGF.
Почечно-клеточный рак является в настоящее время одной из наиболее важных проблем онкоурологии в связи с ежегодно возрастающими показателями заболеваемости [4, 10]. В России по темпам прироста рака почки (РП) занимает первое место (41,35%) в общей популяции и второе место (42, 94%)
после рака предстательной железы у мужчин. Примерно у 25-33% больных к моменту установления диагноза выявляются отдаленные метастазы, у 30-40% возникает рецидив болезни после выполнения радикальной операции [3,4,6]. Уровень поздней диагностики рака почки в 3 раза выше, чем при других урологи-
