CC BY
34
Для корреспонденции
Шишкина Виктория Викторовна - кандидат медицинских наук,
доцент, доцент кафедры гистологии, директор НИИ
Экспериментальной биологии и медицины ФГБОУ ВО ВГМУ
им. Н.Н. Бурденко Минздрава России
Адрес: 394066, Российская Федерация, г. Воронеж,
Московский проспект, д. 185а
Телефон: (920) 412-80-69
E-mail: 4128069@gmail.com
https://orcid.org/0000-0001-9185-4578
Шишкина В.В.1, Клочкова С.В.2, 3, Алексеева Н.Т.1, Самодурова Н.Ю.1, Никитюк Д.Б.4, 5
Обсуждение иммуноморфологической роли взаимодействий тучных клеток и Helicobacter pylori в слизистой оболочке желудка
Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования «Воронежский государственный медицинский университет имени
H.Н. Бурденко» Министерства здравоохранения Российской Федерации, 394066, г. Воронеж, Российская Федерация
Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования «Российский университет дружбы народов», 117198, г. Москва, Российская Федерация
Государственное автономное учреждение здравоохранения города Москвы «Московский научно-практический центр медицинской реабилитации, восстановительной и спортивной медицины Департамента здравоохранения города Москвы», 105120, г. Москва, Российская Федерация
Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Федеральный исследовательский центр питания, биотехнологии и безопасности пищи, 109240, г. Москва, Российская Федерация
Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования Первый Московский государственный медицинский университет имени И.М. Сеченова Министерства здравоохранения Российской Федерации (Сеченовский Университет), 119991, г. Москва, Российская Федерация
N.N. Burdenko Voronezh State Medical University of the Ministry of Healthcare of the Russian Federation, 394036, Voronezh, Russian Federation Peoples' Friendship University of Russia, 117198, Moscow, Russian Federation Moscow Centre for Research and Practice in Medical Rehabilitation, Restorative and Sports Medicine of Moscow Healthcare Department, 105120, Moscow, Russian Federation Federal Research Centre of Nutrition, Biotechnology and Food Safety, 109240, Moscow, Russian Federation
I.M. Sechenov First Moscow State Medical University of Ministry of Healthcare of the Russian Federation (Sechenov University), 119991, Moscow, Russian Federation
Финансирование. Исследование не имело спонсорской поддержки. Конфликт интересов. Авторы декларируют отсутствие конфликта интересов.
Для цитирования: Шишкина ВВ., Клочкова СВ., Алексеева Н.Т., Самодурова Н.Ю., Никитюк Д.Б. Обсуждение иммуноморфологической роли взаимодействий тучных клеток и Helicobacter pylori в слизистой оболочке желудка // Вопросы питания. 2022. Т. 91, № 1. С. 98-108. DOI: https://doi.org/10.33029/0042-8833-2022-91-1-98-108
Статья поступила в редакцию 14.09.2021. Принята в печать 11.01.2022.
Funding. The study had no sponsor support.
Conflict of interest. The authors declare no conflict of interest.
For citation: Shishkina V.V., Klochkova S.V., Alexeeva N.T., Samodurova N.Yu., Nikityuk D.B. Discussion of the immunomorphological role of interactions between mast cells and Helicobacter pylori in the gastric mucosa. Voprosy pitaniia [Problems of Nutrition]. 2022; 91 (1): 98-108. DOI: https://doi. org/10.33029/0042-8833-2022-91-1-98-108 (in Russian) Received 14.09.2021. Accepted 11.01.2022.
Discussion
of the immunomorphological role of interactions between mast cells and Helicobacter pylori in the gastric mucosa
Shishkina V.V.1, Klochkova S.V.2, 3, Alexeeva N.T.1, Samodurova N.Yu.1, Nikityuk D.B.4- 5
2
3
4
5
2
3
4
5
Индуцированный Helicobacter pylori гастрит составляет 70% от доли данной патологии другой этиологии. Особенности течения длительной воспалительной реакции слизистой оболочки напрямую связаны с механизмами патогенности бактерии, а также с особенностями иммуногенеза в ограниченных пределах специфического тканевого микроокружения структур органа. Одними из ключевых игроков (промоторов) в регуляции каскада воспалительных медиаторов и формировании индуцибельного типа экспрессии цитокинов являются тучные клетки. Обладая широким арсеналом биологически активных веществ, тучные клетки способны участвовать в формировании иммунного ответа и резистентности слизистой оболочки желудка, модулируя как про-, так и противовоспалительные эффекты. Антигенпредставляющие свойства тучных клеток вызывают интерес в аспекте взаимодействия с H. pylori и индукции колонизации бактерий в слизистой оболочке.
Цель работы - оценить триптазный профиль тучных клеток слизистой оболочки желудка в иммунопатогенезе H. pylori-ассоциированного гастрита.
Материал и методы. Исследовано 19 биоптатов слизистой оболочки желудка с неизвестным статусом инфици-рованности H. pylori. Для обзорной микроскопии микропрепараты окрашивали гематоксилином и эозином, а также красителем Гимза. Наличие инфицирования H. pylori слизистой оболочки желудка определяли с помощью иммуногисто-химического метода. С использованием технологии двойного иммунофлюоресцентного маркирования детектировали локализацию триптаза-позитивных тучных клеток и штаммов H. pylori.
Результаты. У пациентов, инфицированных H. pylori (n=12), отмечалось статистически значимое увеличение количества триптаза-позитивных тучных клеток (177,99±30,55 против 88,58+11,49; р<0,05) с активизацией секреторных путей и высвобождением протеазы во внеклеточный матрикс слизистой оболочки желудка. Количественные показатели тучных клеток у группы пациентов с невыявленным патогеном (n=7), но имеющих признаки хронического воспалительного процесса слизистой оболочки желудка, были статистически значимо ниже по сравнению с группой инфицированных пациентов. В гастробиоптатах выявлена солокализация триптаза-позитивных тучных клеток и штаммов H. pylori (с формированием участков скопления крупных свободнолежащих гранул вокруг желез, имеющих выраженную степень обсемененности H. pylori), что свидетельствует о тесной вовлеченности в развитие воспалительных реакций слизистой оболочки желудка.
Заключение. Показаны особенности взаимодействия тучных клеток и H. pylori, раскрывающие неизвестные ранее аспекты патогенеза гастрита. Полученные данные могут служить ценным знанием для выбора стратегии лечения H. pylori-ассоциированного гастрита.
Ключевые слова: Helicobacter pylori; желудок; гастрит; тучные клетки; триптаза
Helicobacter pylori induced gastritis accounts for 70% of cases in the structure of this pathology. Features of the long-term inflammatory reaction of the mucous membrane are directly related to the mechanisms of bacterial pathogenicity, and features of immunogenesis within narrow limits of the specific tissue microenvironment of organ structures. Mast cells appear to be one of the key players (promoters) in the regulation of the inflammatory mediator cascade and the formation of cytokine-induced expression. Possessing a wide arsenal of biologically active substances, mast cells are able to participate in the formation of the immune response and resistance of the gastric mucosa, modulating both pro- and anti-inflammatory effects. The antigen-presenting features of mast cells are of interest in terms of interaction with H. pylori and induction of mucosa bacterial colonization.
The aim of study was to assess the mast cell tryptase profile of the gastric mucosa in the immunopathogenesis of H. pylori-associated inflammation.
Material and methods. The study included 19 biopsies of the gastric mucosa with unknown status of H. pylori infection. Microslides were stained with hematoxylin and eosin, and Giemsa's dye for plain microscopy. H. pylori infection of the gastric mucosa was detected using the immunohistochemical method. Using double immunofluorescent labeling, localization of tryptase-positive mast cells and H. pylori strains was detected.
Results. In patients infected with H. pylori (n=12), there was a significant increase in the number of tryptase-positive mast cells (177.99±30.55 vs 88.58+11.49; p<0.05) with activation of secretory pathways and release of protease into the extracellular matrix of the gastric mucosa. The quantitative parameters of mast cells in the group of patients with an undetected pathogen and signs of a chronic inflammation of the gastric mucosa were statistically significantly lower than in the group of infected patients. Co-localization of tryptase-positive mast cells and H. pylori strains (with the formation of areas of large free-lying granule accumulation around the glands with pronounced degree of H. pylori contamination) was detected in gastrobiopsy specimens, the fact evidencing their close involvement in the development of inflammatory reactions of the gastric mucosa.
Conclusion. The study demonstrated the features of mast cells and H. pylori interaction revealing previously unknown aspects of gastritis pathophysiology. The data obtained contribute a valuable insight to choose a treatment strategy for H. pylori-associated gastritis.
Keywords: Helicobacter pylori; stomach; gastritis; mast cells; tryptase
Серьезной проблемой мирового общественного здравоохранения остается онкологическая заболеваемость, в структуре которой рак желудка занимает 4-е место [1]. Данная патология является одной из ведущих причин смертности населения во всем мире [1, 2]. Значительная доля рака желудка возникает на фоне воспаления слизистой оболочки желудка, наиболее частой причиной которого является Helicobacter pylori - основной фактор риска развития не только гастрита, язвенной болезни, но и рака желудка [2, 3]. К настоящему времени инфицированность составляет не менее половины человеческой популяции [4], однако у большинства инфицированных людей нет клинических проявлений [5, 6]. Колонизация и длительное инфицирование H. pylori в желудке человека почти всегда приводит к хроническому гастриту, язвенной болезни или опухоли желудка [4]. Мужское население подвержено более высокому риску развития рака желудка, нежели женское [2]. Гендерное различие может быть обусловлено значительным увеличением количества рецепторов андрогенов в стромальных клетках на поздней стадии рака желудка у мужчин. Эпидемиологические исследования в сочетании с результатами, полученными в экспериментах на животных, подтверждают, что эрадикация H. pylori эффективно предотвращает канцерогенез желудка и гастрит без выраженной атрофии или кишечной метаплазии [7]. Таким образом, профилактика рака является одной из приоритетных задач здравоохранения, требующей комплексного многоаспектного подхода. Известно, что характер питания может влиять на течение различных патологических процессов, включая гастрит, в том числе ассоциированный с H. pylori, и рак желудка [8]. Многочисленные исследования типа «случай-контроль» отмечают значительную корреляцию между потреблением соли и смертностью от рака желудка среди мужчин и женщин во всем мире [8-10]. Наличие инфекции H. pylori еще больше усиливает канцерогенез, это подтверждают экспериментальные исследования на модели монгольской песчанки [10]. Ряд исследований отмечает, что инфицированность населения H. pylori часто связана с социально-экономическим статусом и условиями жизни в детском возрасте [1, 2, 11]. За последние десятилетия в развитых странах наряду с экономическим улучшением отмечается снижение распространенности инфекции H. pylori. Это может быть связано с улучшением санитарно-гигиенических условий, уменьшением потребления соленой и консервированной пищи, а также с увеличением частоты использования противомикробных препаратов. В то же время некоторые региональные особенности питания населения могут способствовать возникновению болезней желудка [7]. Описанная более 130 лет назад польским профессором Валерием Яворским бактерия H. pylori до сих пор остается не разгаданной в некоторых аспектах иммунопатогенеза заболеваний желудочно-кишечного тракта [9]. Особый тип воспалительной реакции при геликобактерной инфекции, характеризующийся одновременной смешанной острой и хронической формой с тесным вовлечением системы врожденного иммуни-
тета, представляет высокий научный интерес на протяжении длительного времени [10, 12, 13]. Способность бактерии превращаться из спиральной в кокковую форму в зависимости от физиологической активности также является одним из уникальных механизмов, который бактерия использует для выживания в желудочно-кишечном тракте хозяина [9]. В патогенезе гастрита, ассоциированного с H. pylori, принимают активное участие различные виды иммунокомпетентных клеток: макрофаги, нейтрофилы, эозинофилы, дендритные клетки, Т- и В-лимфоциты, а также тучные клетки (ТК) [5, 6, 13]. Открытые более 140 лет назад выдающимся немецким ученым Паулем Эрлихом, эти клетки происходят из миелоидных клеток - предшественниц красного костного мозга и оказывают обширную палитру физиологических и патогенетических эффектов [14]. Локализация ТК различна и уникальна в специфическом тканевом микроокружении, распределение клеток в организме весьма вариабельно: они обнаруживаются практически во всех органах человека, особенно велико их количество в погранично расположенных структурах: коже, органах дыхательной и пищеварительной систем, включая желудок [13, 14]. Обладая широким функциональным спектром, ТК координируют взаимодействия иммунокомпетентных и клеток других систем в пределах ограниченного локуса ткани, выступая в роли «дирижеров» состояния специфического тканевого микроокружения [14]. Воспаление, ассоциированное с H. pylori, характеризуется повышенным количеством провоспалительных цитокинов и хемокинов, связанных с активацией хемотаксиса для многих воспалительных клеточных форм, стимуляцией процессов апоптоза и т.д. [5, 15, 16]. ТК являются уникальными клетками, способными хранить и быстро высвобождать ряд предварительно сформированных цитокинов, как, например, фактор некроза опухоли а (ФНОа) и хемокинов CXCL8, CCL2, CCL3, CCL4 [17-19]. Специфической протеазой ТК является триптаза - полифункциональный компонент, тесно вовлеченный в формирование как физиологических, так и патологических реакций организма [17]. Секретируя триптазу, ТК инициируют воспаление, приводят к возрастанию проницаемости капилляров, рекрутинга гранулоцитов, изменению межклеточного сигналинга, активности других клеток и неклеточных компонентов [15-17]. Известна роль триптазы в активации матриксных металлопротеиназ, способных вызывать деградацию практически всех волокнистых элементов соединительной ткани, тем самым ремоделируя ткань как в норме, так и патологии [17-19]. Триптаза ТК может способствовать как заживлению ран, так и развитию внутриорганного фиброза, регулируя миграцию и синтетическую способность фибробластов [18, 20-22]. Данный факт важно учитывать в аспекте патогенеза H. pylori-ассоциированного гастрита. В настоящее время выявление триптазы является одним из наиболее эффективных методов определения численности популяции ТК в органе [14, 23]. Точная диагностика инфекции, ассоциированной с H. pylori, является обяза-
тельным условием для эффективного лечения многих гастродуоденальных заболеваний [3, 4, 8]. Известна способность ТК, подобно нейтрофилам, формировать внеклеточные ловушки для развития антибактериальных эффектов [24].
Цель работы - с использованием технологии двойного иммуномаркирования с одновременной детекцией триптазы ТК и H. pylori оценить триптазный профиль ТК и возможные биологические эффекты в иммунопатоге-незе H. pylori-ассоциированного гастрита.
Материал и методы
Изучены гастробиоптаты 19 пациентов с неизвестным статусом инфицированности H. pylori: 2 биоптата из антрального отдела, 2 из тела и 1 из угла желудка (в соответствии с протоколом взятия материала международных классификаций хронического гастрита). Пробоподготовка биоптатов включала фиксацию нейтральным раствором 10% формалина в течение 24-48 ч, использование гистологического процессора МТР (SLEE, Германия), заливку в парафин в модульной системе Tissue-Tek® TEC™ 5 (Sakura Seiki Co., Ltd., Япония) и изготовление гистологических срезов на полуавтоматическом ротационном микротоме Accu-Cut® SRM™ 200 (Sakura Finetek Europe B.V., Нидерланды). Для обзорной микроскопии микропрепараты окрашивали гематоксилином и эозином, а также красителем Гимза. Наличие инфицирования H. pylori слизистой оболочки желудка определяли с помощью иммуногистохимиче-ского метода [12, 25]. Для идентификации H. pylori срезы депарафинировали и инкубировали с кроличьими моно-клональными антителами (ab172611, разведение 1 : 500) в течение ночи. Затем наносили вторичные козьи антикроличьи антитела AmpliStainTM anti-Rabbit 1-Step HRP #AS-R1-HRP, которые выявляли реагентом ImmPACT™ DAB Peroxidase Substrate Kit (#SK-4105) согласно инструкции изготовителя. В результате при завершении окрашивания данной методикой на микропрепаратах желудка визуализировались различные формы H. pylori с вариабельной степенью обсемененности. Отдельно проводили иммуногистохимическую детекцию триптазы ТК мышиными моноклональными антителами (ab2378, разведение 1 : 2000) в течение ночи. Затем наносили вторичные антитела, конъюгированные с HRP (Goat anti-Mouse IgG H&L, #AS-M1-HRP), которые выявляли реагентом ImmPACT™ DAB Peroxidase Substrate Kit (#SK-4105). Окрашивание данной методикой на микропрепаратах желудка визуализировало триптаза-по-зитивные ТК, отдельно расположенные гранулы либо фрагменты цитоплазмы. Для оценки взаимодействия ТК и H. pylori в иммунопатогенезе воспаления применяли технологию множественного иммуномаркирования [25]. В качестве первичных антител использовали кроличьи моноклональные антитела к H. pylori (ab172611, разведение 1 : 500) и мышиные моноклональные антитела к триптазе (ab2378, разведение 1 : 2000) и инкубировали
в течение ночи. Затем наносили вторичные антитела: Goat Anti-Rabbit IgG H&L (Cy3®) и Anti-Mouse IgG H&L (Alexa Fluor® 488), которые проявляли реагентом DAPI Staining Solution в течение 24 с и наносили флюоресцентную среду для заключения.
Для установления уровня выраженности атрофиче-ских изменений слизистой оболочки желудка определение стадии хронического гастрита осуществляли согласно современной классификации хронического гастрита OLGA - Operative Link for Gastritis Assessment, модифицированный вариант OLGA system [26].
Гастробиоптаты изучали на микроскопе ZEISS Axio Imager 2 с системой фотодокументирования изображений. Обрабатывали полученные снимки с помощью программы ZEN 2.3 (Carl Zeiss, ФРГ). Количество триптаза-позитивных TK в биопсийном материале определяли с помощью планиметрического анализа на поле зрения с использованием объектива x20. Для подсчетов при имеющейся возможности использовали 60 полей зрения на аппаратно-программном комплексе для биологических исследований с системой документирования исследовательского микроскопа ZEISS Axio Imager 2 (Carl Zeiss Microscopy, Германия). Изображения были документированы цветной камерой для светлопольной микроскопии Camera Axiocam 506 color. В дальнейшем полученные числовые значения пересчитывались для получения количественных данных, отражающих плотность распределения TK на мм2 биопсийного материала.
Статистический анализ проводили с помощью пакета программного обеспечения SPSS (V. 13.0). Результаты представлены в виде среднего значения (М±т) (стандартная ошибка среднего). Для оценки достоверности различий между двумя группами использовали f-критерий Стьюдента или U-критерий Манна-Уитни в случае непараметрического распределения.
Результаты и обсуждение
Анализ слизистой оболочки биоптатов желудка у пациентов с неизвестным статусом инфицирован-ности H. pylori проводили комплексно. На первом этапе с использованием иммуногистохимического подхода проводили идентификацию патогена в гастробиоптатах. В 12 из 1Q образцах были обнаружены бактерии с различной степенью обсемененности (рис. 1).
У 7 пациентов методами морфологического анализа H. pylori не обнаружен, однако были выявлены признаки воспалительного процесса. В большинстве (57,1%) случаев отмечался хронический геликобактерный гастрит антральной локализации, морфологические изменения остальных соответствовали фундальному (28,6%) и диффузному типу (14,3%) распространенности. Степень обсемененности H. pylori оценивали по шкале от 0 до 3, где 0 - отсутствие H. pylori, 3 - выраженная степень [26]. Анализируя количественные и качественные характеристики экспрессии триптазы TK у пациентов с положительным статусом инфицирования H. pylori,
В/С Г/D
Рис. 1. Слизистая оболочка желудка пациентов, инфицированных H. pylori (А-В) и неинфицированных (Г)
Железы желудка с выраженной степенью обсемененности, 3 по шкале (А, В); Б - H. pylori в просвете желудочных желез слабой степени обсемененности, 1 по шкале. Г - патоген не выявлен. Иммуногистохимическое окрашивание с применением антител к H. pylori (ab172611, разведение 1: 500). А-В - шкала 10 мкм; Г - шкала 50 мкм.
Fig. 1. The gastric mucosa of patients infected with H. pylori (A-C) and uninfected (D)
Glands of the stomach with a pronounced degree of contamination, 3 on a scale (A, C); B - H. pylori in the lumen of the gastric glands of a weak degree of contamination, 1 on a scale. D - pathogen is not deteted. Method: immunohistochemical staining using antibodies to H. pylori (ab172611, dilution 1: 500). Scale bars: 10 jm (A-C), 50 jm (D).
был выявлен ряд признаков, отсутствующих у группы пациентов с отрицательным статусом. Содержание триптаза-позитивных ТК было статистически значимо выше у пациентов, инфицированных H. pylori (табл. 1, 2, рис. 2А).
В данном аспекте высокая плотность ТК у пациентов с геликобактерной инфекцией может расцениваться как дополнительное морфологическое свидетельство активности гастрита по сравнению с группой пациентов с отрицательным статусом. Реакция ТК
Таблица 1. Численность триптаза-позитивных тучных клеток (ТК) в слизистой оболочке желудка пациентов с положительным статусом инфицирования H. pylori (на 1 мм2)
Table 1. The number of tryptase-positive mast cells (MCs) in the gastric mucosa of patients with a positive status of H. pylori infection (per 1 mm2)
Биоптат, № № of biopsy Количество ТК The number of MCs Функциональная характеристика дегрануляции Functional characteristic of degranulation Группы гранул Group of granules Межклеточное взаимодействие Intercellular interaction
сильная strong слабая weak нет дегрануляции no degranulation
1 151,13 78,39 33,94 38,79 86,48 1,62
2 442,34 121,87 148,95 171,52 112,84 31,60
3 102,54 29,96 22,64 54,60 37,95 2,00
4 158,43 98,82 34,30 13,88 121,68 5,72
5 124,50 43,41 25,39 54,88 77,81 5,73
6 123,41 86,28 19,66 17,47 89,55 3,28
7 144,20 68,00 40,97 35,23 55,71 1,64
8 133,01 54,46 56,56 21,99 83,79 8,38
9 370,11 138,54 76,20 152,40 108,86 34,64
10 130,68 13,46 7,92 107,71 57,82 5,54
11 175,19 9,61 13,31 152,28 72,44 2,22
12 80,28 45,10 16,35 15,36 37,66 5,95
M±a 177,99±30,55 65,66±11,29 41,35±10,78 69,68±16,49 78,55±7,67 9,02±3,17
слизистой оболочки желудка при наличии H. pylori в большем числе случаев выражалась интенсивной дегрануляцией.
Также отмечалось более высокое содержание изолированно локализованных триптаза-позитивных гранул ТК в строме желудка и отдельно расположенных фрагментов ТК, что позволяет предположить активизацию формирования автономных триптаза-содержащих структур в условиях инфицирования, обеспечивающих расширение площади формирования селективных эффектов (рис. 2Б). Вероятнее всего, такой формат контролирования местного гомеостаза в условиях присутствия H. pylori имеет свои преимущества, поскольку в целом достигается одновременная аккумуляция триптазы в большем количестве локусов слизистой оболочки и, соответственно, повышается эффективность регуляции специфического тканевого микроокружения. Обращает на себя внимание возрастание частоты вну-
трипопуляционного контактирования ТК друг с другом в условиях присутствия H. pylori, что может отражать закономерности их функциональной активности при гелико-бактер-обусловленном гастрите. Клеточная ассоциация тучная клетка-фибробласт, осуществляющая контроль над процессами ангиогенеза, ремоделирования внеклеточного матрикса стромы слизистой оболочки желудка, статистически значимо чаще встречалась у пациентов с подтвержденным H. pylori-ассоциированным процессом (рис. 2В).
С помощью технологии двойного иммунофлюорес-центного маркирования триптазы ТК и H. pylori удалось выявить особенности в отношении гистотопографии триптазы, с формированием участков скопления крупных свободнолежащих гранул вокруг желез, имеющих выраженную степень обсемененности H. pylori (см. табл. 1, рис. 3). Обращала на себя внимание интенсивная инфильтрация эпителиоцитов слизистой оболочки же-
Таблица 2. Численность триптаза-позитивных тучных клеток (ТК) в слизистой оболочке желудка пациентов с отрицательным статусом инфицирования H. pylori (на 1 мм2)
Table 2. The number of tryptase-positive mast cells (MCs) in the gastric mucosa of patients with a negative status of H. pylori infection (per 1 mm2)
Биоптат, № № of biopsy Количество ТК The number of MCs Функциональная характеристика дегрануляции Functional characteristic of degranulation Группы гранул Group of granules Межклеточное взаимодействие Intercellular interaction
сильная strong слабая weak нет дегрануляции no degranulation
13 33,48 18,78 6,53 7,35 22,87 0,82
14 61,88 46,88 3,00 12,00 0,00 2,44
15 94,45 36,64 30,13 27,68 64,32 1,63
16 118,34 65,14 35,83 17,37 83,60 1,09
17 99,66 53,00 21,62 23,33 53,10 3,12
18 114,33 68,60 17,97 20,42 46,55 4,08
19 97,92 45,54 33,02 19,36 110,44 7,97
M±a 88,58±11,49 47,80±6,42 21,16±4,86 18,21±2,58 54,41 ±13,89 3,02±0,93
Рис. 2. Слизистая оболочка желудка пациентов, инфицированных H. pylori
А, Б - иммуногистохимическое окрашивание с применением антител к триптазе тучных клеток. А - высокая плотность распределения триптаза-позитивных тучных клеток с признаками активной секреции протеазы во внеклеточный матрикс; Б - локус слизистой с автономно расположенными триптаза-позитивными гранулами; В - тучная клетка в тесной ассоциации с фибробластом перива-скулярной локализации. Окрашивание методом Гимза. А, В - шкала 20 мкм; Б - шкала 10 мкм.
Fig. 2. Gastric mucosa of patients infected with H. pylori
A, B - immunohistochemical staining using antibodies to mast cell tryptase. A - high density of distribution of tryptase-positive mast cells with signs of active secretion of protease into the extracellular matrix; B - locus in the mucosa with autonomously located tryptase-positive granules; C - MC in close association with fibroblast, perivascular localization. Method - Giemsa's dye. Scale bars: 20 ym (A, C), 10 ym (B).
ч
5 цт
Б/В
I
А/А В/С
Рис. 3. Слизистая оболочка желудка. Множественное иммуномаркирование триптазы тучных клеток и H. pylori
А-В: отмечается аккумуляция протеазы вокруг желез, инфицированных H. pylori; Б - солокализация триптаза-позитивных тучных клеток с кокковыми формами H. pylori; В - железистый эпителий слизистой оболочки желудка с высокой степенью обсемененно-сти H. pylori (3 по шкале). Ядра докрашены DAPI в синий цвет, триптаза (#ab2378, разведение 1: 2000) визуализируется зеленым цветом (Alexa Fluor 488), H. pylori (#ab172611, разведение 1: 500) - красным (Cy3). А - шкала 20 мкм, Б - шкала 5 мкм, В - шкала 10 мкм.
Fig. 3. Gastric mucosa. Multiple immunofluorescent labeling of mast cell tryptase and H. pylori
A-C - accumulation of protease around the glands infected with H. pylori is noted; B - colocalization of tryptase-positive mast cells with coccal forms of H. pylori; C - glandular epithelium of the gastric mucosa with a high degree of H. pylori contamination (3 on a scale). Nuclei counterstained with DAPI (blue channel), tryptase (#ab2378, dilution 1: 2000, Alexa Fluor 488, green channel), H. pylori (#ab172611, dilution 1: 500, Cy3, red channel). Scale bars: A, C - 20 jm, B - 10 jm.
лудка в области базальной мембраны триптаза-позитив-ными гранулами ТК у пациентов с H. pylori в отличие от неинфицированных пациентов. Атрофические явления были отмечены в 2 биоптатах желудка пациентов, инфицированных H. pylori, с максимально высоким количеством ТК (биоптаты № 2 и 9, см. табл. 1). Известно, что с нарастанием стадии атрофии увеличивается риск рака желудка кишечного типа, так как на стадии III-IV риск развития рака желудка кишечного типа возрастает в 6 раз [27, 28].
Анализируя полученные данные, необходимо отметить активизацию экспрессии триптазы ТК, коррелирующей c увеличением степени выраженности воспалительного компонента слизистой оболочки желудка
у пациентов с H. pylori в гораздо большей степени относительно неинфицированных пациентов. С одной стороны, не вызывает сомнения, что ТК имеют важное значение в формировании резистентности слизистой оболочки желудка и участвуют в восстановлении целостности поврежденных тканей [16, 17, 20]. Секреция триптазы ТК увеличивает муцинообразование железистыми эпителиоцитами и, как следствие, проявляет про-тективные свойства слизистой в ответ на воздействие геликобактериальной уреазы [28].
Клеточная ассоциация фибробластического диффе-рона и ТК направлена на эффективное регулирование обновления волокнистого компонента внеклеточного ма-трикса стромы слизистой оболочки желудка. Триптаза
способна усиливать миграцию фибробластов, оказывать митогенное действие, стимулировать синтез коллагена [16, 17, 20, 29], что необходимо учитывать, с одной стороны, как инициирующий компонент в репаративных процессах слизистой, а с другой стороны, данные эффекты могут стать причиной фиброза [15, 19, 21, 30]. Тесная солокализация ТК с эпителиоцитами желудка в области базальной мембраны у инфицированных пациентов позволяет предполагать их участие в регуляции клеточного обновления [31]. Известно, что триптаза ТК в составе экзосом может попадать в ядра клеток и регулировать клеточную пролиферацию [17]. Показано, что тканевое микроокружение при H. pyfori-ассоциированном гастрите с повышенным количеством триптаза-пози-тивных ТК может оказывать проонкогенные эффекты [31]. Однако секретом данных клеток может проявлять провоспалительные и онкогенные свойства во время инфицирования H. pylori за счет выработки ряда цитокинов, усиления адгезии между опухолевыми клетками и эндоте-лиоцитами сосудов, запуска апоптоза эпителия желудка [16, 30, 32]. ТК могут быть активированы провоспалитель-ными цитокинами, одним из них является ИЛ-33, индуцированный H. pylori. Повышение продукции данного цито-кина различными клетками слизистой оболочки желудка, в свою очередь, запускает высвобождение ТК провос-палительных медиаторов, таких как сериновые протеазы и ФНОа, участвующих в индукции апоптоза эпителиальных клеток желудка и подавлении клеточного обновления, что является триггерным фактором в развитии рака желудка вследствие длительно текущего хронического воспаления [15, 16, 30, 31]. Воспалительная реакция на инфицирование H. pylori в слизистой оболочке желудка обладает специфичностью и состоит в одновременно протекающих острых и хронических реакциях воспаления, отличающихся от классического течения благодаря способности бактерии длительное время ускользать от клеток иммунной системы организма за счет явления молекулярной мимикрии [5, 6].
Заключение
Рак желудка остается важной глобальной проблемой мирового здравоохранения. Длительно протекающий воспалительный процесс при H. pyfori-ассоциированном гастрите многокомпонентен и зависит от множества факторов. Диета играет важную роль в профилактике и лечении заболеваний желудка. Организм человека, тонко реагируя на малейшие гомеостатические сдвиги в результате питания, особенно при его нарушении, способен запускать ряд процессов, приводящих к развитию заболеваний. Всемирная организация здравоохранения определила непосредственную взаимосвязь пищевых рационов с возникновением ряда заболеваний, в том числе пищеварительной системы, и злокачественных образований [33]. Особенности и характер питания пациента оказывают влияние на риск развития рака желудка, течение уже имеющегося заболевания и эффективность лечения. Все больше данных эпидемиологических исследований указывают на то, что некоторые продукты обладают противоопухолевой активностью в отношении рака желудка и способны ингиби-ровать клеточную пролиферацию, индуцировать апоптоз и аутофагию, подавлять ангиогенез и метастазирование, уменьшать инфицированность H. pylori [34]. Очевидно, что роль ТК в данном процессе неоднозначна, обусловливается особенностями клеточного микроокружения, зависит от степени повреждения слизистой оболочки, бактериальной обсемененности и длительности течения воспалительного процесса. Полифункциональность трип-тазы позволяет при проведении молекулярно-морфоло-гического анализа более полно раскрывать значение ТК в развитии как адаптивных, так и патологических реакций, рассматривая специфичную протеазу не только в качестве информативного диагностического и прогностического биомаркера H. pyfori-ассоциированного гастрита, но и как перспективную фармакологическую мишень терапии данного заболевания, в том числе с учетом коррекции характера питания.
Сведения об авторах
Шишкина Виктория Викторовна (Victoria V. Shishkina) - кандидат медицинских наук, доцент, доцент кафедры гистологии, директор НИИ Экспериментальной биологии и медицины ФГБОУ ВО ВГМУ им. Н.Н. Бурденко Минздрава России (Воронеж, Российская Федерация) E-mail: 4128069@gmail.com https://orcid.org/0000-0001-9185-4578
Клочкова Светлана Валерьевна (Svetlana V. Klochkova) - доктор медицинских наук, профессор кафедры анатомии человека Медицинского института ФГАОУ ВО РУДН, старший научный сотрудник отдела спортивной медицины и клинической фармакологии ГАУЗ МНПЦ МРВСМ ДЗМ (Москва, Российская Федерация) E-mail: swetlana.chava@yandex.ru https://orcid.org/0000-0003-2041-7607
Алексеева Наталия Тимофеевна (Natalia T. Alexeeva) - доктор медицинских наук, профессор, заведующий кафедрой нормальной анатомии человека ФГБОУ ВО ВГМУ им. Н.Н. Бурденко Минздрава России (Воронеж, Российская Федерация) E-mail: alexeevant@list.ru https://orcid.org/0000-0003-1510-8543
Самодурова Наталья Юрьевна (Natalia Yu. Samodurova) - кандидат медицинских наук, доцент, доцент кафедры эпидемиологии ФГБОУ ВО ВГМУ им. Н.Н. Бурденко Минздрава России (Воронеж, Российская Федерация) E-mail: nataly.samodurov@yandex.ru https://orcid.org/0000-0002-4065-2471
Никитюк Дмитрий Борисович (Dmitriy B. Nikityuk) - член-корреспондент РАН, доктор медицинских наук, профессор, директор ФГБУН «ФИЦ питания и биотехнологии», профессор кафедры оперативной хирургии и топографической анатомии ФГАОУ ВО Первый МГМУ им. И.М. Сеченова Минздрава России (Сеченовский Университет) (Москва, Российская Федерация) E-mail: nikitjuk@ion.ru https://orcid.org/0000-0002-2259-1222
Литература
11.
12.
13.
15.
WHO report on cancer: setting priorities, investing wisely and providing 18. care for all. Geneva: World Health Organization; 2020. Bray F., Ferlay J., Soerjomataram I., Siegel R.L., Torre L.A., Jemal A. Global cancer statistics 2018: GLOBOCAN estimates of incidence and 19. mortality worldwide for 36 cancers in 185 countries // CA Cancer J. Clin. 2018. Vol. 68, N 6. P. 394-424. DOI: https://doi.org/10.3322/caac.21492 Tsukamoto T., Nakagawa M., Kiriyama Y., Toyoda T., Cao X. Prevention of gastric cancer: eradication of Helicobacter pylori and beyond // Int. 20. J. Mol. Sci. 2017. Vol. 18, N 8. P. 1699. DOI: https://doi.org/10.3390/ ijms18081699 21.
Santos M.L.C., de Brito B.B., da Silva F.A.F., Sampaio M.M., Marques H.S., Oliveira E. Silva N. et al. Helicobacter pylori infection: beyond gastric manifestations // World J. Gastroenterol. 2020. Vol. 26, N 28. 22. P. 4076-4093. DOI: https://doi.org/10.3748/wjg.v26.i28.4076 PMID: 32821071
Baj J., Forma A., Sitarz M., Portincasa P., Garruti G., Krasowska D. 23. et al. Helicobacter pylori virulence factors-mechanisms of bacterial pathogenicity in the gastric microenvironment // Cells. 2021. Vol. 10, N 1. P. 27. DOI: https://doi.org/10.3390/cells10010027 PMID: 33375694 Sharndama H.C., Mba I.E. Helicobacter pylori: an up-to-date overview on the virulence and pathogenesis mechanisms // Braz. J. Microbiol. 2022. 24. DOI: https://doi.org/10.1007/s42770-021-00675-0 Самодурова Н.Ю., Мамчик Н.П., Истомин А.В., Клепиков О.В., Соколенко Г.Г. Определение территорий риска по уровню алиментарно-зависимых заболеваний с учетом региональных особенно- 25. стей структуры питания населения // Вестник Российского государственного медицинского университета. 2018. № 5. С. 42-47. Konturek J.W. Discovery by Jaworski of Helicobacter pylori and its 26. pathogenetic role in peptic ulcer, gastritis and gastric cancer // J. Physiol. Pharmacol. 2003. Vol. 54, N 3. P. 23-41.
Molnar B., Galamb O., Sipos F., Leiszter K., Tulassay Z. Molecular pathogenesis of Helicobacter pylori infection: the role of bacterial virulence factors // Dig. Dis. 2010. Vol. 28, N 4-5. P. 604-608. DOI: 27. https://doi.org/10.1159/000320060
Nozaki K., Shimizu N., Inada K., Tsukamoto T., Inoue M., Kumagai T. et al. Synergistic promoting effects of Helicobacter pylori infection and high-salt diet on gastric carcinogenesis in Mongolian gerbils // Jpn. J. Cancer Res. 2002. Vol. 93, N 10. P.1083-1089. DOI: https://doi. 28. org/10.1111/j.1349-7006.2002.tb01209.x
Sabbagh P., Javanian M., Koppolu V., Vasigala V.R., Ebrahimpour S. Helicobacter pylori infection in children: an overview of diagnostic 29. methods // Eur. J. Clin. Microbiol. Infect. Dis. 2019. Vol. 38. P. 10351045. DOI: https://doi.org/10.1007/s10096-019-03502-5 Velin D., Michetti P. Immunology of Helicobacter pylori infection // Digestion. 2006. Vol. 73, N 2-3. P. 116-123. 30.
Ieni A., Barresi V., Rigoli L., Fedele F., Tuccari G., Caruso R. Morphological and cellular features of innate immune reaction in Helicobacter pylori gastritis: a brief review// Int. J. Mol. Sci. 2016. Vol. 17, N 1. P. 109. DOI: https://doi.org/10.3390/jms17010109
Atiakshin D., Samoilova V., Buchwalow I., Boecker W., Tiemann 31.
M. Characterization of mast cell populations using different methods
for their identification // Histochem. Cell Biol. 2017. Vol. 147, N 6.
P. 683-694. DOI: https://doi.org/10.1007/s00418-017-1547-7
Mukai K., Tsai M., Saito H., Galli S. Mast cells as sources of cytokines, 32.
chemokines, and growth factors // Immunol. Rev. 2018. Vol. 282, N 1.
P. 121-150. DOI: https://doi.org/10.1111/imr.12634
Zhang Z., Kurashima Y. Two sides of the coin: mast cells as a key
regulator of allergy and acute/chronic inflammation // Cells. 2021. 33.
Vol. 10, N 7. P. 1615. DOI: https://doi.org/10.3390/cells10071615
Atiakshin D., Buchwalow I., Samoilova V., Tiemann M. Tryptase as a 34.
polyfunctional component of mast cells // Histochem. Cell Biol. 2018.
Vol. 149, N 5. P. 461-477. DOI: https://doi.org/10.1007/s00418-018-
1659-8
Overed-Sayer C., Rapley L., Mustelin T., Clarke D. Are mast cells instrumental for fibrotic diseases? // Front. Pharmacol. 2014. Vol. 4. P. 174. DOI: https://doi.org/10.3389/fphar.2013.00174 Tan R.J., Sun H.Q., Zhang W., Yuan H., Li B., Yan H. et al. A 21-35 kDa mixed protein component from Helicobacter pylon activates mast cells effectively in chronic spontaneous urticaria // Helicobacter. 2016. Vol. 21, N 6. P. 565-574.
Алексеева Н.Т. Участие клеточного компонента в регенерации раны // Журнал анатомии и гистопатологии. 2014. № 3. С. 9—15. Levi-Schaffer F., Piliponsky A.M. Tryptase, a novel link between allergic inflammation and fibrosis // Trends Immunol. 2003. V.24. P. 158—161. DOI: https://doi.org/10.1016/S1471-4906(03)00058-9 Atiakshin D., Buchwalow I., Tiemann M. Mast cells and collagen fibrillogenesis // Histochem. Cell Biol. 2020. Vol. 154, N 1. P. 21-40. DOI: https://doi.org/10.1007/s00418-020-01875-9 Atiakshin D.A., Shishkina V.V., Gerasimova O.A., Meshkova V.Y., Samodurova N.Y., Samoilenko T.V. et al. Combined histochemical approach in assessing tryptase expression in the mast cell population // Acta Histochem. 2021. Vol. 123, N 4. P. 151711. DOI: https://doi. org/10.1016/j.acthis.2021.15171
Elieh Ali Komi D., Kuebler W.M. Significance of mast cell formed extracellular traps in microbial defense // Clin. Rev. Allergy Immunol. 2022. Vol. 62, N 1. P. 160-179. DOI: https://doi.org/10.1007/s12016-021-08861-6
Buchwalow I.B., Boecker W. Immunohistochemistry: Basics and Methods. 1st ed. Springer; Berlin/Heidelberg, 2010. 153 p. ISBN 978-3642-42502-8. DOI: https://doi.org/10.1007/978-3-642-04609-4 Кононов А.В. Роль патологоанатомического заключения «Хронический гастрит» в системе персонифицированной канцерпре-венции // Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии. 2018. Т. 28, № 4. С. 91-101. DOI: https://doi. org/10.22416/1382-4376-2018-28-4-91-101
Shigeto K., Kawaguchi T., Koya S., Hirota K., Tanaka T., Nagasu S. et al. Profiles combining muscle atrophy and neutrophil-to-lymphocyte ratio are associated with prognosis of patients with stage IV gastric cancer // Nutrients. 2020; Vol. 12, N 6. P. 1884. DOI: https://doi.org/10.3390/ nu12061884
Zaib S., Tayyab Younas M., Zaraei S.O., Khan I., Anbar H., El-Gamal M. Discovery of urease inhibitory effect of sulfamate derivatives: Biological and computational studies // Bioorg. Chem. 2021. Vol. 119. P. 105545. Шишкина В.В., Атякшин Д.А. Тучные клетки и фибриллогенез коллагена в условиях невесомости // Журнал анатомии и гистопатологии. 2019. Т. 8, № 3. С. 79-88. DOI: https://doi.org/10.18499/2225-7357-2019-8-3-79-88
Lv Y.P., Teng Y.S., Mao F.Y., Peng L.S., Zhang J.Y., Cheng P. et al. Helicobacter pylori-induced IL-33 modulates mast cell responses, benefits bacterial growth, and contributes to gastritis // Cell Death Dis. 2018. Vol. 9, N 5. P. 457. DOI: https://doi.org/10.1038/s41419-018-0493-1
Micu G., Stäniceanu F., Sticlaru L., Popp C., Bastian A., Gramadä E. et al. Density of tryptase-positive mast cells correlated with the presence of H. pylori in gastric neoplasia // Rom. J. Intern. Med. 2015. Vol. 53, N 3. P. 227-236. DOI: https://doi.org/10.1515/rjim-2015-0030 Caruso R.A., Parisi A., Crisafulli C., Bonanno A., Lucian R., Branca G. et al. Intraepithelial infiltration by mast cells in human Helicobacter pylori active gastritis // Ultrastruct. Pathol. 2011. Vol. 35, N 6. P. 251-255. DOI: https://doi.org/10.1080/21505594.2015.1043505 Грабарь В.Ф. Оценка связи питания и здоровья спецконтингента // Гигиена и санитария. 2008. № 4. C. 49-52.
Mao Q.Q., Xu X.Y., Shang A., Gan R.Y., Wu D.T., Atanasov A.G. et al. Phytochemicals for the prevention and treatment of gastric cancer: effects and mechanisms // Int. J. Mol. Sci. 2020. Vol. 21, N 2. P. 570. DOI: https://doi.org/10.3390/yms21020570
References
WHO report on cancer: setting priorities, investing wisely and providing care for all. Geneva: World Health Organization; 2020.
Bray F., Ferlay J., Soerjomataram I., Siegel R.L., Torre L.A., Jemal A. Global cancer statistics 2018: GLOBOCAN estimates of incidence and
2
4
6
7
9
2
mortality worldwide for 36 cancers in 185 countries. CA Cancer J Clin. 2018; 68 (6): 394-424. DOI: https://doi.org/10.3322/caac.21492
3. Tsukamoto T., Nakagawa M., Kiriyama Y., Toyoda T., Cao X. Prevention of gastric cancer: eradication of Helicobacter pylori and beyond. Int J Mol. Sci. 2017; 18 (8): 1699. DOI: https://doi.org/10.3390/yms18081699
4. Santos M.L.C., de Brito B.B., da Silva F.A.F., Sampaio M.M., Marques H.S., Oliveira E. Silva N., et al. Helicobacter pylori infection: beyond gastric manifestations. World J Gastroenterol. 2020; 26 (28): 4076-93. DOI: https://doi.org/10.3748/wjg.v26.i28.4076
5. Baj J., Forma A., Sitarz M., Portincasa P., Garruti G., Krasowska D., et al. Helicobacter pylori virulence factors-mechanisms of bacterial pathogenicity in the gastric microenvironment. Cells. 2021; 10 (1): 27. DOI: https://doi.org/10.3390/cells10010027
6. Sharndama H.C., Mba I.E. Helicobacter pylori: an up-to-date overview on the virulence and pathogenesis mechanisms. Braz J Microbiol. 2022. DOI: https://doi.org/10.1007/s42770-021-00675-0
7. Samodurova N., Mamchik N., Istomin A., Klepikov O., Sokolenko G. Determination of risk territories by the level of alimentary-dependent diseases, taking into account the regional characteristics of the population's nutrition structure. Vestnik Rossijskogo gosudarstvennogo medi-cinskogo universiteta [Bulletin of the Russian State Medical University]. 2018; 5: 42-7. (in Russian)
8. Konturek J. Discovery by Jaworski of Helicobacter pylori and its pathogenetic role in peptic ulcer, gastritis and gastric cancer. J Physiol Pharmacol. 2003; 54: 23-41.
9. Molnar B., Galamb O., Sipos F., Leiszter K., Tulassay Z. Molecular pathogenesis of Helicobacter pylori infection: the role of bacterial virulence factors. Dig Dis. 2010; 28: 604-8. DOI: https://doi. org/10.1159/000320060
10. Nozaki K., Shimizu N., Inada K., Tsukamoto T., Inoue M., Kum-agai T., et al. Synergistic promoting effects of Helicobacter pylori infection and high-salt diet on gastric carcinogenesis in Mongolian gerbils. Jpn J Cancer Res. 2002; 93 (10): 1083-9. DOI: https://doi. org/10.1111/j.1349-7006.2002.tb01209.x
11. Sabbagh P., Javanian M., Koppolu V., Vasigala V.R., Ebrahimpour S. Helicobacter pylori infection in children: an overview of diagnostic methods. Eur J Clin Microbiol Infect Dis. 2019; 38: 1035-45. DOI: https://doi.org/10.1007/s10096-019-03502-5
12. Velin D., Michetti P. Immunology of Helicobacter pylori infection. Digestion. 2006; 73 (2-3): 116-23.
13. Ieni A., Barresi V., Rigoli L., Fedele F., Tuccari G., Caruso R. Morphological and cellular features of innate immune reaction in Helicobacter pylori gastritis: a brief review. Int J Mol Sci. 2016; 17 (1):109. DOI: https://doi.org/10.3390/ims17010109
14. Atiakshin D., Samoilova V., Buchwalow I., Boecker W., Tiemann M. Characterization of mast cell populations using different methods for their identification. Histochem Cell Biol. 2017; 147 (6): 683-94. DOI: https://doi.org/10.1007/s00418-017-1547-7
15. Mukai K., Tsai M., Saito H., Galli S. Mast cells as sources of cytokines, chemokines, and growth factors. Immunol Rev. 2018; 282 (1): 121-50. DOI: https://doi.org/10.1111/imr.12634
16. Zhang Z., Kurashima Y. Two sides of the coin: mast cells as a key regulator of allergy and acute. Chronic Inflammation Cells. 2021; 10 (7): 161-5. DOI: https://doi.org/10.3390/cells10071615
17. Atiakshin D., Buchwalow I., Samoilova V., Tiemann M. Tryptase as a polyfunctional component of mast cells. Histochem Cell Biol. 2018; 149 (5): 461-77. DOI: https://doi.org/10.1007/s00418-018-1659-8
18. Overed-Sayer C., Rapley L., Mustelin T., Clarke D. Are mast cells instrumental for fibrotic diseases? Front Pharmacol. 2014; 4: 174. DOI: https://doi.org/10.3389/fphar.2013.00174
19. Tan R., Sun H.Q., Zhang W., Yuan H., Li B., Yan H., et al. A 21-35 kDa mixed protein component from Helicobacter pylori activates mast cells effectively in chronic spontaneous urticaria. Helicobacter. 2016; 21 (6): 565-74.
20. Alekseeva N.T. Participation of the cellular component in wound regeneration. Zhurnal anatomii i gistopatologii [Journal of Anatomy and Histopathology]. 2014; 3 (1): 9-15. (in Russian)
21. Levi-Schaffer F., Piliponsky A.M. Tryptase, a novel link between allergic inflammation and fibrosis. Trends Immunol. 2003; 24: 158-61. DOI: https://doi.org/10.1016/S1471-4906(03)00058-9
22. Atiakshin D., Buchwalow I., Tiemann M. Mast cells and collagen fibril-logenesis. Histochem Cell Biol. 2020; 154 (1): 21-40. DOI: https://doi. org/10.1007/s00418-020-01875-9
23. Atiakshin D.A., Shishkina V.V., Gerasimova O.A., Meshkova V.Y., Samodurova N.Y., Samoilenko T.V., et al. Combined histochemical approach in assessing tryptase expression in the mast cell population. Acta Histochem. 2021; 123 (4): 15-7. DOI: https://doi.org/10.1016/j. acthis.2021.15171
24. Elieh Ali Komi D., Kuebler W.M. Significance of mast cell formed extracellular traps in microbial defense. Clin Rev Allergy Immunol. 2022; 62 (1): 160-79. DOI: https://doi.org/10.1007/s12016-021-08861-6
25. Buchwalow I., Boecker W. Immunohistochemistry: basics and methods. 1st ed. Springer; Berlin/Heidelberg, Germany; 2010: 153 p. ISBN 9783-642-42502-8. DOI: https://doi.org/10.1007/978-3-642-04609-4
26. Kononov A.V. The role of the pathological report "Chronic gastritis" in the system of personified cancer prevention. Rossi ski zhurnal gastro-jenterologii, gepatologii, koloproktologii [Russian Journal of Gastro-enterology, Hepatology, Coloproctology]. 2018; 28 (4): 91-101. DOI: https://doi.org/10.22416/1382-4376-2018-28-4-91-101 (in Russian)
27. Shigeto K., Kawaguchi T., Koya S., Hirota K., Tanaka T., Nagasu S., et al. Profiles combining muscle atrophy and neutrophil-to-lymphocyte ratio are associated with prognosis of patients with stage IV gastric cancer. Nutrients. 2020; 12 (6): 1884. DOI: https://doi.org/10.3390/ nu12061884
28. Zaib S., Tayyab Younas M., Zaraei S., Khan I., Anbar H., El-Gamal M. Discovery of urease inhibitory effect of sulfamate derivatives: Biological and computational studies. Bioorg Chem. 2021; 119: 105-545.
29. Shishkina V.V., Atjakshin D.A. Mast cells and collagen fibrillogen-esis under zero gravity. Zhurnal anatomii i gistopatologii [Journal of Anatomy and Histopathology]. 2019; 8 (3): 79-88. DOI: https://doi. org/10.18499/2225-7357-2019-8-3-79-88 (in Russian)
30. Lv Y.P., Teng Y.S., Mao F.Y., Peng L.S., Zhang J.Y., Cheng P., et al. Helicobacter pylori-induced IL-33 modulates mast cell responses, benefits bacterial growth, and contributes to gastritis. Cell Death Dis 2018; 9 (5): 457. DOI: https://doi.org/10.1038/s41419-018-0493-1
31. Micu G., Stäniceanu F., Sticlaru L., Popp C., Bastian A., Gramadä E., et al. Density of tryptase-positive mast cells correlated with the presence of H. pylori in gastric neoplasia. Rom J Intern Med. 2015; 53 (3): 227-36. DOI: https://doi.org/10.1515/rjim-2015-0030
32. Caruso R., Parisi A., Crisafulli C., Bonanno A., Lucian R., Branca G., et al. Intraepithelial infiltration by mast cells in human Helicobacter pylori active gastritis. Ultrastruct Pathol. 2011; 35 (6): 251-5. DOI: https://doi.org/10.1080/21505594.2015.1043505
33. Grabar V.F. Evaluation of the relationship between nutrition and health of the special contingent. Hygiene and sanitation [Gigiena i Sanitaria]. 2008; 4: 49-52.
34. Mao Q.Q., Xu X.Y., Shang A., Gan R.Y., Wu D.T., Atanasov A.G., et al. Phytochemicals for the Prevention and treatment of gastric cancer: effects and mechanisms. Int J Mol Sci. 2020; 21 (2): 570. DOI: https:// doi.org/10.3390/ims21020570
