CC BY
19
НАЦИОНАЛЬНЫЕ ПРИОРИТЕТЫ РОССИИ. 2011. № 2 (5). СПЕЦИАЛЬНЫЙ ВЫПУСК
ОБСЛЕДОВАНИЕ ИРКУТЯН
НА НАЛИЧИЕ АНТИТЕЛ К ВИРУСУ ГРИППА
В МЕЖЭПИДЕМИЧЕСКИЙ ПЕРИОД
Е.А. Чапоргина, Г.А. Данчинова, Е.В. Арбатская, А.В. Ляпунов, М.А. Хаснатинов, Т.В. Миронова, И.В. Петрова, В.В. Долгих, Д.В. Кулеш
НЦ проблем здоровья семьи и репродукции человека СО РАМН, г. Иркутск
Сведения об этиологической структуре вирусов гриппа и вклад каждого из основных вариантов возбудителей в эпидемический процесс, а также оценка иммунитета населения представляют большую научную и практическую значимость. В настоящее время среди населения одновременно циркулирует два субтипа гриппа А - НШ1 и Н3Ш с периодическим доминированием одного из них. После эпидемии 2009 г. отмечено преобладание субтипа НШ1 (Г.Г. Онищенко, 2009).
Целью данного этапа работ было получение информации о наличии антител к вирусам гриппа А и В у жителей г. Иркутска разных возрастных групп в межэпидемический сезон.
Материалы и методы. Материалом для исследований стали сыворотки крови 359 клинически здоровых иркутян, обратившихся в Центр диагностики клещевых инфекций по факту укуса клеща в межэпидемический по гриппу период 2010 г. (июль-сентябрь). Образцы проб не вызывали спонтанной агглютинации эритроцитов и не имели признаков бактериальной или грибковой контаминации. Выборка была равновесна по полу и включала 196 женщин и 194 мужчины в возрасте от 0 до 88 лет. В исследовании участвовали разные возрастные группы: дети (0-14 лет), взрослые различного трудоспособного возраста и пенсионеры (5588 лет). Для детальной интерпретации результатов проводили более мелкую градацию возрастных групп.
Для получения результатов использованы реакции гемагглютинации (РГА) и торможения гемагглютина-ции (РТГА) с диагностикумами гриппозными (сухими) для РТГА производства НИИ гриппа РАМН (Санкт-Петербург) согласно инструкции производителя. В исследовании использовали антигены вирусов гриппа В и вирусов гриппа А: НШ1, Н2Ш, Н3Ш, Н0Ш, Н5Ш. Учет реакции проводили визуально, сыворотки с титром торможения гемагглютинации 1:40 и выше считали иммунными.
Результаты. При проведении сероэпидемиологи-ческого обследования иркутян для выявления коллективного иммунитета к вирусу гриппа только у 13,4 % людей не содержалось защитного титра антител к вирусам гриппа. Эту группу представляли люди старшего поколения - от 65 лет (свыше 58 %), дети от 10 до 14 лет (27,1 %) и взрослые от 15 до 19 лет (14,6 %). Примечательно, что никто из 359 человек не имел диагностических титров антител к вирусу так называемого высокопатогенного птичьего гриппа Н5Ш.
Антитела к вирусам гриппа А серотипа Н3Ш выявлены более чем у половины населения г. Иркутска (51,9 %), на втором и третьем местах люди, в сыворотках крови которых выявлены антитела к Н0Ш, - 45,1 %, к НШ1 - 37,4 %. Менее 6 % общего населения и только
в возрасте от 45 до 69 лет (15 % из обследованных людей этой группы) имеют специфический иммунитет к вирусу Н2Ш.
По нашим наблюдениям, антитела к Н3Ш, Н0Ш и НШ1 имеются у всех возрастных групп населения. Наиболее высокий процент к Н3Ш выявлен в возрастных группах от 5 до 30 лет (67,8 %). Среди детей до 14 лет всего 14,3 % содержат антитела к Н0Ш, однако с увеличением возраста этот показатель возрастает и составляет около 55 %. По серотипу гриппа НШ1 отмечен высокий процент позитивных проб сывороток крови у всех людей, кроме возрастных групп от 25 до 34 лет (24,1 %).
Напряженность иммунного ответа также существенно различалась у разных возрастных групп. Так, к вирусам гриппа Н3Ш наивысшие титры антител (1:320) были отмечены у детей от 10 лет и молодых людей до 19 лет, тогда как у людей среднего возраста (3049 лет) наименьшие средние геометрические титры (порядка 1:50). Такие же максимальные титры антител наблюдались у иркутян в возрасте 15-19 и 25-29 лет к серотипу вируса Н0Ш.
Характерно, что грипп В часто наслаивается на заболеваемость гриппом А и вызывает смешанные эпидемии. Заболеваемость гриппом В обусловлена почти ежегодным формированием нового дрейф-варианта (Ю.З. Гендон, 2008). Нами антитела к вирусу гриппа В обнаружены у 39,0 % иркутян всех возрастов с относительно низким процентом позитивных проб у детей от 0 до 4 лет (15,1 %). Иммунитет к вирусу гриппа В возрастает до максимальных значений у детей 5-9 лет, у других возрастных групп он остался примерно на одном уровне (от 1:50 до 1:100).
Обсуждение. Таким образом, сероэпидемиоло-гическое обследование 359 иркутян на наличие антител к вирусу гриппа показало, что у большинства из них имеется иммунитет к различным вирусам гриппа А (в порядке убывания Н3Ш, Н0Ш, НШ1) и гриппа В. Примечательно, что у 15 % иркутян в возрастных группах старше 45 лет обнаружены антитела к антигену вируса гриппа Н2Ш. Согласно литературным данным, этот вирус был этиологическим агентом известной пандемии 1957-1958 гг., после чего исчез из человеческой популяции. Итоги проведенных исследований подтверждают эту гипотезу: нами не выявлены антитела к Н2Ш в сыворотках крови людей моложе 45 лет. Это обстоятельство позволяет предположить, что вирус Н2Ш не имеет значения в современном эпидемическом процессе гриппа.
При анализе полученных материалов выявлено доминирование серопозитивных сывороток крови людей к серотипу Н3Ш и близкородственным вариантам
ПРОЧИЕ ИНФЕКЦИИ
гриппа НШ1и H0N1, которые некоторыми исследователями относятся к дрейф-вариантам одного и того же возбудителя (Taubenberger J.K., 2006). По нашим результатам, людей с положительными сыворотками к вирусу H0N1 на 8 % больше, чем к H1N1.
Более трети иркутян имеют иммунитет к вирусу гриппа В, что свидетельствует о том, что вирус гриппа В наряду с вирусами гриппа А имеет большое значение в эпидемическом процессе гриппоподобных заболеваний.
Проведение сероэпидемиологических исследований на наличие антител к вирусу гриппа имеет большое значение, так как на их основании можно произвести оценку состояния популяционного иммунитета, проконтролировать и спрогнозировать эпидситуацию среди конкретных групп населения. И, безусловно, зная современное состояние проблем гриппа и коллективного иммунитета у людей, можно дать прогноз дальнейшего развития и помочь в противодействии вирусным угрозам.
АПОПТОГЕННАЯ АКТИВНОСТЬ ТОКСИГЕННЫХ ШТАММОВ КОРИНЕБАКТЕРИЙ ДИФТЕРИИ В ОТНОШЕНИИ ПЕРИТОНЕАЛЬНЫХ МАКРОФАГОВ МЫШЕЙ
Э.Л. Алутина, Г.Г. Харсеева
ГОУ ВПО «Ростовский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации
Целью работы явилось изучение апоптогенной активности токсигенных штаммов C.diphtheriae на ма-крофагальной модели беспородных белых мышей.
Материалы и методы. В работе были исследованы штаммы: C.diphtheriae gravis tox + №665 из коллекции ФГБУ ГИСК им. Л.А. Тарасевича Минздравсоцразвития России, C.diphtheriae gravis tox+, выделенный от больного дифтерией в г. Ростове-на-Дону, штаммы S.aureus, S.epidermidis, S.pyogenes, P.aeruginosae, выделенные из верхних дыхательных путей в диагностически значимом количестве (10-5 и 10-6 ) от больных фарингитом, тонзиллитом и фолликулярной ангиной.
Апоптогенную активность исследованных штаммов микроорганизмов определяли на белых беспородных мышах (18-20 г) из питомника ФГУЗ «Ростовский-на-Дону научно-исследовательский противочумный институт» Роспотребнадзора. Умерщвление животных осуществляли методом цервикальной дислокации после предварительной наркотизации с помощью тио-пентала натрия в дозе 5 мг/кг. Объектом исследования служили перитонеальные макрофаги беспородных белых мышей. Клетки получали после создания асептического воспаления через 4 суток после внутрибрюшин-ного введения 1 % пептонной воды. Макрофаги собирали путем промывания брюшной полости мышей средой 199 (2 мл), содержащей гепарин 5 ед/мл, 20 %-ную ин-активированную сыворотку и пенициллин - 100 ед/мл. Далее в заданных объемах перитонеальный экссудат соединяли с микробными взвесями и выдерживали 1 и 3 часа, после чего покровные стекла с адгезированны-ми на них клетками промывали в физиологическом растворе, высушивали на воздухе. Мазки фиксировали 96 %-ным раствором этилового спирта и окрашивали азур-эозином по Романовскому-Гимзе. Стекла просматривали в микроскопе при увеличении 90x7. В мазках подсчитывали процент клеток с апоптозом. Средний показатель вычисляли по трем экспериментам.
Статистическую обработку результатов проводили с использованием статистических пакетов «Microsoft Office 2007» и «Statistica 6.0» для Windows XP. Достоверность полученных данных оценивали при уровне значимости t>2 (P>95 %).
Результаты исследования показали, что токсиген-ные штаммы коринебактерий, обладая широким спектром патогенных свойств, способны вызывать апоптоз перитонеальных макрофагов мышей. При исследовании апоптогенного действия штаммов Cdiphtheriae gravis tox + № 665 и Cdiphtheriae gravis tox+, выделенного от больного дифтерией, были обнаружены изменения в макрофагах, характерные для апоптоза: ядерное и цитоплазматическое уплотнение, сниженный тур-гор мембраны и формирование «апоптических тел», то есть фрагментация ядра.
Причем апоптогенная активность штамма Cdiphtheriae gravis tox+, выделенного от больного дифтерией (52,8±6,4 %), достоверно не отличалась от таковой штамма Cdiphtheriae gravis tox + № 665 (41,4±6,0 %) при культивировании их на плотной питательной среде - сывороточном агаре. Учитывая, что основным фактором вирулентности возбудителя дифтерии является экзотоксин, представляло интерес исследовать его воздействие на макрофаги. Для этого штаммы дифтерийных микробов культивировали на жидкой питательной среде - сывороточном бульоне и исследовали апопто-генное действие экзотоксина, содержащегося в над-осадочной жидкости. Результаты исследования показали, что показатели апоптоза макрофагов, индуцированные штаммом Cdiphtheriae gravis tox+, выделенным от больного дифтерией, (84,0±2,9 %), были достоверно (t>2) выше, чем у штамма Cdiphtheriae gravis tox + № 665 (55,4±3,9 %). Следует отметить, что апоптоген-ная активность двух исследованных штаммов возбудителя дифтерии была выше (t>2) при культивировании их в жидкой питательной среде, чем на плотной.
