CC BY
34
the group of indirect deaths the situation was similar, except of opiates, higher prevalence was of the substances from the group of amphetamines/methamphetamines and cannabinoids. Fatal poisonings number related to illicit drugs varied from 4 to 6 per million inhabitants aged 15-64 years per year.
CONCLUSIONS
The results of our study showed high participation rate of psychoactive medicaments on fatal cases related to psychoactive substances abuse. This fact highlights the need to pay more attention to the indication of the treatment and to control of prescription in treated psychiatric patients especially those at risk of suicide. As to fatal overdosing with illicit drugs, low mortality rate found out in the period of years 2004-2014, ranks Slovakia among countries with the lowest death rate from these causes in Europe.
■ N-METHYLAMPHETAMIN - RETURN OF THE LEGEND
Klotzbach Heike
• MDK Thüringen (German Health Insurance Medical Service)
N-Methylamphetamin (Crystal Meth) is a centrally effective sympathomimetic stimulant which was already used by soldiers in World War II. Desirable effects lie in increase of physical and mental capacity, reduce of fatigue and counteracting feelings of fear, pain and hunger. Under the trade name «Pervitin» the substance was used and abused in Germany not least in competitive sports until 1988 and made its return as an illicit drug during the recent years.
Whereas consumption of heroin and cocaine in Germany is decreasing, cases of amphetamine usage, Crystal Meth in particular are getting more and more popular. This refers to ascertained police cases as well as to persons seeking for help from drug counseling facilities. Desired effects as increased psychomotor drive and self confidence lead to continuous application resulting in substance habituation and dose increase with side effects of psychotic episodes of paranoia mainly in combination with sleep deprivation. Beside medical and economic consequences also social and legal aspects referring to experiences in Thuringia, such as roadworthiness and culpability are introduced. Moreover the role of this drug as a low cost alternative of cocaine matching with the requirements of meritocracy, high speed and continuous maximum power is discussed.
■ ОБНАРУЖЕНИЕ МЕТАБОЛИТОВ НОВОГО СИНТЕТИЧЕСКОГО КАННАБИНОИОА: ЭКСПЕРТИЗА ГРУППОВОГО ОТРАВЛЕНИЯ
А.М. Григорьев1, А.П. Солошенко1, Т.Е. Саулина1, Н.А. Крупина1,2
• 1Бюро судебно-медицинской экспертизы Московской области (нач. - д.м.н., проф. В. А. Клевно)
• 2Кафедра судебной медицины (зав. -д.м.н., проф. В. А. Клевно) ФУВ ГБУЗ МОНИКИ им. М. Ф. Владимирского
• Аннотация: Экспертиза группового отравления, произошедшего в Московской области, привела к заключению о том, что его причиной послужило употребление нового синтетического каннабиноида, идентифицированного как ^(1-амино-3,3-диметил-1-оксобутан-2-ил)-1-(4-фторбензил)-1Н-индазол-3-карбоксамид («ADB-FUBINACA»). Это соединение является амидной формой найденного ранее каннаби-
миметика - метил 2-(1-(4-фторбензил)-1Н-ин-дазол-З-карбоксамид^З-диметилбутаноата, считающегося причинои групповых отравлений в ряде городов России в 2015 г. Новое соединение обнаружили в изъятом порошке и в трупной крови умершего в результате отравления. Методом жидкостной хромато-масс-спектрометрии, включающей применение двух масс-спектрометров (QTOF и ионная ловушка) в моче восьми лиц, находившихся в коматозном состоянии, предположительно идентифицировали ряд метаболитов, представляющих собой продукты моно- и ди-гидроксилирования, глюкуронидирования моногидроксильных производных, гидролиза терминальной амидной группы с последующим глюкуронидировани-ем или моногидроксилированием, гидролиза амидной связи в боковой цепи с последующим глюкуронидированием карбоксигруппы. • Ключевые слова: ГХ-МС, ЖХ-МС, синтетические каннабиноиды, метаболиты, моча, кровь
ВВЕДЕНИЕ
Синтетические каннабимиметики (каннабиноиды, СК) - группа соединений, объединенная по признаку подобия их фармакологического действия, обязательно включающего значительную аффинность к каннабиноид-ным рецепторам млекопитающих. Малая структурная селективность этих рецепторов объясняет широкое структурное разнообразие соединений, входящих в группу СК. Данная особенность вместе с простотой синтеза субстанций и изготовления готовых форм (курительных смесей, «спайсов») приводит к значительной популярности СК. Вариабельность структур СК, а также их быстрый и практически полный метаболизм крайне осложняет проведение химико-токсикологических и судебно-химических экспертиз. Несмотря на значительный объем информации о метаболизме СК, появление каждого нового соединения требует проведения работ по поиску и структурной идентификации метаболитов.
В данном докладе приведены результаты работ, выполненных при экспертизе группового отравления, вызванного употреблением нового СК и произошедшего в Московской области.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Исследование проводили с помощью газовой и двух жидкостных хромато-масс-спектрометрических систем.
Предварительный скрининг всех образцов осуществляли на хромато-масс-спектрометре Agilent Technologies с хроматографом 7890B и масс-спектрометром 5977A, настроенным на работу при положительной электронной ионизации в режиме сканирования, диапазон 40-550 Да. Разделение выполняли на колонках HP-5ms (30 м х 0,25 мм х 0.25 мкм) в градиентных условиях. Ввод проб без сброса (splitless). Объем вводимой пробы 1 мкл. Поиск соединений проводили с помощью библиотек NIST11, MPW2011, а также внутрилабораторной библиотеки.
Жидкостные системы, настроенные на ионизацию в режиме электрораспыления, применяли для поиска и идентификации метаболитов.
Первая состояла из хроматографа 1260 Infinity с колонкой Zorbax Eclipse Plus C18 (2,1x100 мм, 3,5 мкм) и масс-спектрометра 6520 (QTOF, Agilent Technologies). Разделение выполняли при градиентном элюировании и регистрации спектров МС и МС2 (Target MSMS).
Вторая состояла из хроматографа UltiMate 3000 с колонкой Acclaim RSLC 120 C18 (2,1x100 мм, 2,2 мкм)
(Thermo Fisher Scientific) и масс-спектрометра AmaZon Speed (ITrap, ионная ловушка, Bruker Daltonic). Разделение выполняли при градиентном элюировании. Масс-спектрометр использовали в режиме UltraScan с изменением полярности; регистрация спектров МС-МС3 (Target MSMS). Режим фрагментации standard, амплитуда фрагментации 0,8 В, модуляция 40-250 %, время 40 мс.
Объектами для исследования были образцы мочи и крови, полученные для проведения экспертизы группового отравления неизвестным соединением, а также порошок белого цвета, изъятый с места происшествия. При анализе порошка его растворяли в метаноле; раствор разводили далее метанолом (для ГХ-МС) или смесью аце-тонитрила и воды (50 % об., для ЖХ-МС).
Пробоподготовку образцов для ЖХ-МС проводили безгидролизными методами, разработанными и принятыми в практике судебно-химического отдела для исследования биологических жидкостей на наличие лекарственных и наркотических веществ.
1. Для ЖХ-МС (кровь, с концентрированием). Последовательная жидкостно-жидкостная экстракция из крови (1 мл) в присутствии избытка гидрокарбоната натрия:
а) смесью 1-хлорбутана и изоамилового спирта (99:1),
б) этилацетатом. Пробу (5 мкл) вводили в хроматограф в виде раствора в смеси ацетонитрила и воды (100 мкл, 50 % об.). Степень концентрирования 10.
2. Для ЖХ-МС (моча, с концентрированием). Жид-костно-жидкостная экстракция из мочи (1 мл) при подкислении (pH 2-2,5) этилацетатом. Пробу (5 мкл) вводили в хроматограф в виде раствора в смеси ацето-нитрила и воды (100 мкл, 50 % об.). Степень концентрирования 10.
Рис. 1. Предполагаемая структурная формула основного компонента изъятого порошка
Основной компонент изъятого порошка предположительно идентифицировали как М-(1-амино-3,3-диметил-1-оксобутан-2-ил)-1-(4-фторбензил)-1Н-индазол-3-карбоксамид (рис. 1). Это же соединение обнаружили в одном из образцов посмертной крови.
В образцах мочи обнаружили и предположительно идентифицировали метаболиты соединения, являющегося основным компонентом порошка. Найденные метаболиты образованы в результате процессов: моно-и дигидроксилирования, глюкуронидирования моно-гидроксильных производных, гидролиза терминальной амидной группы с последующим глюкуронидировани-ем или моногидроксилированием, гидролиза амидной связи в боковой цепи с последующим глюкуронидиро-ванием карбоксигруппы. Пики моногидроксилирован-ных и моногидроксилированных глюкуронидирован-ных метаболитов (рис. 2) были наиболее интенсивны для всех образцов мочи (8 шт). Основным направлением гидроксилирования является, по-видимому, остаток индазола.
Рис. 2. Метаболиты изъятого соединения в образце мочи (QTOF, m/z ±5 мДа) (А) Моногидроксилиро-ванные метаболиты (Б) Моногидроксилированные глюкуронидиро ванные метаболиты
ВЫВОДЫ
Признаками приема нового соединения можно считать факты его обнаружения в крови в неизмененной форме, а также его метаболитов - в моче. Предпочтительным методом анализа является жидкостная хрома-то-масс-спектрометрия при условии отказа от стадии деконъюгирования при подготовке проб. Наиболее удобными для обнаружения являются моногидроксилирован-ные и моногидроксилированные глюкуронидированные метаболиты.
ГАММА-ОКСИБУТИРАТ И ПРОИЗВОДНЫЕ ФЕНТАНИЛА: ХИМИКО-ТОКСИКОЛОГИЧЕСКОЕ ПОДТВЕРЖДЕНИЕ ОТРАВЛЕНИЙ
О.Л. Заикина1,2, А.Н. Лодягин3, В.В. Шилов4
• 1ГКУЗ «Ленинградский областной наркологический диспансер»
• 2ФБУН «СЗНЦ гигиены и общественного здоровья»
• 3ГБУ «Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт скорой помощи им. И. И. Джанелидзе»
• 4Северо-Западный государственный медицинский университет
им. И. И. Мечникова
• Аннотация: В последнее время в Санкт-Петербурге и Ленинградской области участились случаи отравления, связанные с приемом Y-оксибутирата, а также производных фента-нила (карфентанил, 3-метилфентанил, аце-тилфентанил). Аналитическое подтверждение приема данных соединений лицами, доставляемыми в наркологический диспансер с симптомами наркотического опьянения, вызывает определенные методические осложнения. Они вызваны либо низкими концентрациями анали-тов в крови и моче и ограниченностью сведений о метаболизме (производные фентанила), либо малым молекулярным весом, высокой гидрофильностью и значительными матричными влияниями ^-оксибутират). Методами жидкостной и газовой хромато-масс-спектрометрии (ГХ-МС и ЖХ-МС/МС) мы идентифицировали некоторые мочевые метаболиты производных фентанила. Предложены методы подготовки проб, основанные на жидкостно-жидкостной или твердофазной экстракции. Для обнаружения метаболитов и неизмененных форм производных фентанила в моче и крови обследуемых лиц рекомендуется применение метода ЖХ-МС/МС; для обнаружения неизмененного Y-оксибутирата - ГХ-МС. Приведены результаты практического применения разработанных методов.
• Ключевые слова: производные фентанила, карфентанил, 3-метилфентанил, ацетилфен-танил, гамма-оксибутират, ГХ-МС, ЖХ-МС/МС, кровь, моча, метаболиты
ВВЕДЕНИЕ
Фентанил и его производные - синтетические анальгетики, производные фенилпиперидина, оказывающие сильное, но кратковременное анальгезирующее действие. По анальгетической активности фентанил превышает морфин в 100 раз, ацетилфентанил - в 10 раз, 3-метил-фентанил - в б0о раз, а карфентанил - в 10 000 раз. Впер-
