CC BY
24
Оригинальные статьи
Об итогах и перспективах развития патоморфологии инфекционных заболеваний
К 80-ти летию института
Р. А. Насыров, М. В. Маньков
ФГУ Научно-исследовательский институт детских инфекций Росздрава, Санкт-Петербург
Представлены результаты и опыт работы патоморфологической лаборатории ФГУ НИИДИ Росздрава по изучению пато-морфогенеза инфекционных заболеваний. Показаны возможности и перспективы использования иммуногистохимии в проведении специфической диагностики инфекций, изучении значимости факторов межклеточного взаимодействия в инфекционном процессе.
Ключевые слова: патоморфогенез, иммуногистохимия, антиген, цитокины, апоптоз
About Results and Prospects of Infectious Disease Pathomorphology To 80-th Birthday of Institute
Nasirov R. A. and Mankov M. V.
Research Institute of Infantile Infections Russian Federation Ministry of Public Health, St. Petersburc
The researchers have shared data and experience gained in pathomorphologic laboratory studies on pathomorphogenesis of infectious diseases and offered new possibilities and prospects of using novel methods of immuno-histochemistry in specifically diagnosing infective ailments and determining the significance of intracellular factors interaction during the infection process. Key words: pathomorphogenesis, immuno-histochemistry, antigen, cytocines and apоptosis
В настоящее время патоморфология решает широкий круг вопросов, как теории патологии человека, так и практики с оценкой диагноза эффективности лечения, прогноза заболевания [1]. Актуальным направлением патологической анатомии является изучение патоморфогенеза инфекционных заболеваний. Несмотря на чрезвычайное разнообразие методик, которые используются в патологической анатомии, рутинная светооптическая микроскопия остается одним из основных и едва ли не единственным методом в деятельности патологоанатома. В оценке патогистологических изменений при инфекционных заболеваниях морфологи пытались придать специфичность отдельным структурным изменениям: «темные», «светлые» клетки, характеру и выраженности экссудативной, пролиферативной реакций для суждения об этиологии процесса. В последние два десятилетия положение с выявлением этиологических и патогенетических факторов коренным образом изменилось благодаря внедрению в патологическую анатомию иммуногистохимии (ИГХ). С появлением данного метода новое осмысление получила классическая па-томорфология.
Одним из основных направлений работы нашей лаборатории является выявление и определение локализации антигенов инфекционных агентов, экспрессии цитокинов и маркеров апоптоза в клетках пораженных органов, изучение особенностей патоморфогенеза различных инфекционных нозоформ.
Так, изучение структурных, энзиматических изменений с использованием ИГХ—методов при герпетической инфекции мозга в эксперименте и на секционном материале позволило сформулировать понятие о структурном компоненте иммунного ответа головного мозга. Были выявлены особенности экспрессии антигена вируса простого герпеса (ВПГ) в каждом из структурных элементов, составляющих систему «со-суд-глия-нейрон», показана взаимосвязь локализации антигена с характером морфологических изменений в
течении инфекционного процесса. Впервые было обосновано положение о сосудистом генезе некрозов в веществе головного мозга при герпетической нейроин-фекции [2].
С помощью разработанных в лаборатории ИГХ— методик выявлена характерная локализация дифтерийного токсина в лимфатических узлах сердца и легких, что подтвердило положение о преимущественно лим-фогенном его распространении. Было показано, что нарушение лимфооттока от сердца является одним из важных факторов морфогенеза поражений сердца при этом заболевании, а именно: отека миокарда, миоли-за кардиомиоцитов, поражения проводящей системы, кардиосклероза. Эти данные легли в основу разработки новых методов лечения дифтерии у детей [3].
Одним из важных разделов работы лаборатории являлось патоморфологическое и иммуногистохимиче-ское изучение бактериальных инфекций головного мозга. Разработанные и активно применяемые методы исследования дали возможность обосновать положение о ведущей роли микрососудов в патогенезе бактериальной (пневмококковой, гемофильной) инфекций головного мозга. Был доказан сосудистый генез деструктивных изменений в веществе головного мозга в исходе бактериальных нейроинфекции. Определена локализация возбудителя и экспрессия провоспали-тельных цитокинов в том или ином звене микроцирку-ляторного русла головного мозга [4, 5]. На основании установленных механизмов развития нейроинфекцион-ного процесса были предложены новые подходы к лечению больных с бактериальной нейроинфекцией.
Проводится изучение экспрессии маркеров апопто-за в головном мозге при нейроинфекциях, что позволяет судить о различных путях формирования деструктивных изменений в зависимости от инфекционного агента и стадии заболевания [6].
В широком объеме на базе нашей лаборатории было проведено иммуногистохимическое исследование криптококковой нейроинфекции. В качестве специ-
фического и надежного способа прижизненной и постмортальной диагностики криптококкоза был использован ИГХ—метод выявления его капсульного полисахарида. Так, в ходе исследований в эксперименте и на аутопсийном материале выявлена наибольшая плотность антигена криптококка в эндотелии микрососудов и периваскулярной зоне мягкой мозговой оболочки, вещества головного мозга, независимо от вирулентности штамма. При этом в нервных клетках антиген не обнаруживался [7]. Результаты патоморфо-логического исследования криптококкоза головного мозга у людей [8] с учетом данных экспериментальных исследований показали, что и при данной инфекции эндотелий микрососудов является наиболее ранней мишенью патогенного воздействия, определяя тем самым характер и исход заболевания.
Во всех случаях исследования патологии головного мозга с помощью ИГХ—метода пристально изучалась реакция астроцитарной глии. Это позволило доказать фагоцитарную функцию этих клеток и определить варианты их реакций в разные сроки патологического процесса при инфекционных заболеваниях различной этиологии.
Наиболее важным результатом изучения инфекций вирусной, бактериальной, грибковой этиологии по данным патогистологии, выявления экспрессии антигенов возбудителей, цитокинов и маркеров апоптоза явилось подтверждение выдвинутого нами ранее положения о сосудистом генезе инфекционного процесса.
В последние годы акценты нашей работы сместились в сторону изучения вопросов прижизненной патологической анатомии — клинической патологии (морфологии). Так, был разработан и внедрен в практику иммунопероксидазный метод выявления антигена вируса папилломы человека в слизистой гортани при респираторном папилломатозе. Результаты иммуноцито-химического выявления антигена, подтвержденные данными клинических наблюдений, позволили использовать разработанный метод не только в качестве экспресс диагностики респираторного папилломатоза, но и рекомендовать его для контроля за проводимым лечением [9, 10].
Отдельного внимания заслуживают данные исследования биоптатов слизистой пищевода при гастроэзо-фагальном рефлюксе у 100 детей. Была выявлена большая (62,2%) частота инфицирования слизистой пищевода вирусами ВПГ I и II типов, цитомегаловиру-сом (ЦМВ), что сочеталось с клиническими проявлениями и частотой ее полиповидных изменений [11].
Иммуногистохимические исследования пункцион-ных биоптатов печени при хронических гепатититах В и С показали широкие возможности применения разработанных методов для повышения качества морфологической и этиологической диагностики этих заболеваний. В 9 случаях при отрицательных серологических тестах была получена положительная экспрессия антигенов возбудителей в ткани печени. Дальнейшие исследования показали, что низкое содержание в крови противовирусных антител связано с иммуносупресси-ей. В 12 случаях были получены данные о внепеченоч-ной локализации вируса гепатита С. Кроме того, использование ИГХ—методик позволило более часто ди-
агностировать сочетанную вирусную инфекцию: НВУ + + НСУ, а также НВУ + ВПГ, НВУ + ЦМВ [12].
В связи с увеличением числа случаев ВИЧ-инфекции с перинатальным инфицированием в лаборатории проводилось изучение патоморфологии этой инфекции у детей [13]. Были выявлены характерные морфологические изменения, обусловленные непосредственным воздействием ВИЧ: развитие эмбриофетопатии и лим-фомоноцитарной инфильтрации в различных органах. У всех умерших при исследовании были выявлены пороки развития головного мозга (микроцефалия различной степени выраженности), незрелость кардиомиоци-тов, лимфо-интерстициальная пневмония, тяжелое поражение печени.
Другим перспективным направлением является разработка методов выявления антигенов в мазках крови (лимфоцитарной взвеси). На основе современных данных об этиопатогенезе разработаны и защищены патентами уникальные методы выявления антигенов вируса гепатита С, простого герпеса, цитомегаловируса в мононуклеарах крови.
Выявление антигена вируса Эпштейна-Барр в лимфоцитах крови 103 больных, помимо установления этиологического фактора, позволило определять тяжесть острого периода инфекционного мононуклеоза и использовать тест в качестве прогностического критерия рецидивирующего течения, выбора тактики терапии [14, 15].
С помощью разработанного иммуноцитохимиче-ского способа получены данные о прогностическом значении уровня экспрессии цитокинов в мононукле-арах крови и ликворе при бактериальных менингитах. При гемофильных менингитах у детей установлен более высокий уровень экспрессии тканевого фактора некроза-а (ТЫР-а) и И-6 в мононуклеарах крови, по сравнению с экспрессией этих цитокинов при менингитах пневмококковой (р < 0,05) и менингококковой (р < 0,01) этиологии. Обнаруженная зависимость уровня экспрессии цитокинов от этиологии и характера течения заболевания определяет возможность использования разработанного иммуногистохимическо-го метода для изучения этиопатогенеза инфекционных заболеваний [16].
Разработан оригинальный метод прижизненной экспресс диагностики острых бактериальных кишечных инфекций, основанный на выявлении антигенов инфекционных агентов в крови (лимфоцитарной взвеси) и в кале [17].
Определение антигенов вирусов папилломы человека (16 и 18 типов), вируса простого герпеса, рецепторов к эстрогенам и прогестерону в ткани опухолей яичников являлось предметом наших совместных исследований с НИИ онкологии имени проф. Н. Н. Петрова [17].
Не менее важной была разработка неинвазивных методов диагностики. Так, в широкую практику были внедрены методы выявления антигенов вирусов и бактерий в мазках со слизистых оболочек ротоглотки, уро-генитального тракта и конъюнктивы, что значительно улучшило качество диагностики и лечения как стационарных, так и амбулаторных больных.
Как видно из представленных материалов, разработка и использование различных модификаций ИГХ—метода позволили резко расширить рамки научных исследований. Благодаря этому методу пато-морфологи имеют возможность проведения специфической объективной диагностики вирусных и бактериальных инфекций, микозов, сочетая таковую с оценкой характера патогистологических, цитологических изменений. Дальнейшее расширение спектра иммуногистоцитохимической диагностики является одним из перспективных направлений развития пато-морфологии инфекционных заболеваний. Другим актуальным направлением является дальнейшее изучение сосудистого генеза инфекционных заболеваний, оценка значимости ангиогенных факторов для разработки новых терапевтических подходов.
Особую значимость приобрело в настоящее время изучение межклеточных взаимодействий [18], исследование которых в инфекционном процессе является, возможно, ключом к пониманию патогенеза заболеваний.
Использование иммуноморфологических методов в прижизненных исследованиях является современным компонентом клинической патологии.
Литература:
1. Серов В. В. О перспективах развития патологической анатомии // Архив патологии. — 1998. — № 4. — С. 3—4.
2. Насыров Р. А. Патоморфология и вопросы патогенеза герпетической инфекции головного мозга: Атореф. дисс. ... д.м.н. — М., 1995.
3. Забежинский М. М. Патоморфологические аспекты участия регионарных лимфатических узлов в развитии поражений сердца при дифтерии у детей: Атореф. дисс. ... к.м.н. — СПб., 1998.
4. Маньков М. В. Патоморфогенез гемофильной инфекции головного мозга у детей: Атореф. дисс. ... к.м.н. — СПб., 2003.
5. Насыров Р. А. Способ диагностики гемофильной инфекции / Р. А. Насыров, А. С. Кветная, М. В. Маньков // Патент изобретения № 2193204. — 2002.
6. Насыров Р. А. Иммуногистохимическое исследование апоп-тоза в головном мозге при герпетической инфекции / Р. А. Насыров, М. В. Маньков // В сб. тезисов Всероссий-
ской конференции «Современные проблемы клинической патоморфологии». — СПб., 2005. — С. 172—173.
7. Майская М. Ю. Патоморфогенез экспериментального крип-тококкоза головного мозга: Атореф. дисс. ... к.м.н. — СПб., 2007.
8. Патоморфология криптококкоза головного мозга при имму-нодефицитных состояниях различного генеза / О. К. Хмельницкий, Р. А. Насыров, Н. В. Васильева, М. Ю. Майская // Архив патологии. — 2005. — Т. 67, № 2. — С. 10 — 12.
9. Чмырева Н. Н. Комплексное лечение респираторного па-пилломатоза у детей с применением Циклоферона и ре-комбинантного интерферона — Виферона: Атореф. дисс. ... к.м.н. — СПб., 2002.
10. Способ выявления антигена вируса папилломы человека / Р. А. Насыров, Э. А. Цветков, Н. Н. Чмырева, Н. Н. На-уменко // Патент изобретения № 2225614. — 2002.
11. Думова Н. Б. Клинико-морфологические сопоставления при гастроэзофагеальном рефлюксе у детей школьного возраста: Атореф. дисс. ... к.м.н. — СПб., 2003.
12. О возможностях комплексной этиологической диагностики хронического вирусного гепатита В и С / О. А. Смирнов и др. // Архив патологии. — 2002. — Т. 64, № 3. — С. 3—6.
13. Морфологические особенности ВИЧ-инфекции у детей с перинатальным инфицированием. В кн.: Терапия инфекционных заболеваний у детей: современные представления и нерешенные вопросы / Р. А. Насыров, Н. А. Байбурина, М. В. Маньков, И. Г. Караськова. — СПб., 2005. — С. 90.
14. Способ диагностики инфекции, вызванной вирусом Эпштей-на-Барр / Н. В. Александрова, Р. А. Насыров, В. В. Иванова, О. В. Родионова // Патент изобретения № 2247390. — 2002.
15. Н. В. Александрова. Иммунопатогенетические аспекты ВЭБ инфекции у детей: Атореф. дисс. ... к.м.н. — СПб., 2003.
16. Насыров Р. А. Способ выявления цитокинов / Р. А. Насыров, М. В. Маньков // Патент изобретения № 2180120. — 2002.
17. Насыров Р. А. Способ экспресс диагностики острых бактериальных кишечных инфекций / Р. А. Насыров, М. В. Маньков, О. В. Тихомирова // Приоритетная справка № 2007100832. — 2007.
18. Антонеева И. И. Экспрессия антигенов вирусов папилломы человека, простого герпеса и фенотип рецепторов эстрогенов и прогестерона в малигнизированных эпителиальных опухолях яичников: Атореф. дисс. ... к.м.н. — СПб., 2003.
19. Пальцев М. А. Межклеточные взаимодействия / М. А. Пальцев, А. А. Иванов, С. Е. Северин. — М.: Медицина, 2003. — 288 с.
Клинико-лабораторные особенности вирусных микст гепатитов у детей
М. А. Пономарева, Н. В. Рогозина, А. К. Васильева, А. Л. Мукомолова, Л. Г. Горячева
ФГУ Научно-исследовательский институт детских инфекций Росздрава, Санкт-Петербург
Представлены результаты изучения клинико-эпидемиологических и серологических особенностей вирусных микст гепатитов у 62 детей в возрасте от 1 года жизни до 18 лет, больных разными формами микст гепатитов (у 10 детей — ГА + + ХГС; у 6 — ГА + ХГВ; у 3 — ГВ + ХГС; у 2 — ГО + ХГВ + ХГС; у 36 — ХГВ + ХГС; у 5 — ХГВ + ХГО). В 23% случаев имел место острый, а в 77% — первично-хронический гепатит. Определены пути инфицирования вирусами гепатитов у детей разного возраста. Установлены особенности течения различных микст гепатитов. Представлены результаты анализа серологического и молекулярно-биологического исследований при разных гепатитах. Доказано взаимное подавление активности вирусов гепатита В и С у больных микст гепатитами. Обоснована необходимость терапии с учетом доминирующей роли определенного вируса.
Ключевые слова: дети, острый вирусный гепатит, хронический вирусный гепатит, микст гепатит
