CC BY
23
культивирование мышиных тимоцитов и макрофагов in vitro\ изучение фагоцитарной активности макрофагов in vitro\ определение активности аденилатцик-лазы.
Основные результаты. Установлено, что иммуно-кортин в концентрациях 10'" - 10'7 М ингибирует рост клеток человеческой лимфобластной линии МТ-4. С помощью |251-мечсного “адресного” фрагмента АКТГ -[|2,1]АКТГ( 13-24) показано, что клетки МТ-4 экспрессируют специфические рецепторы к АКТГ {Kd = 97 пМ). Иммунокортин и АКТГ человека, в отличие от тяжелой цепи IgGl, конкурентно ингибировали связывание [п,1] АКТГ( 13-24) с этими рецепторами = 0.38 нМ и
К , = 0.34 нМ соответственно). Изучение влияния имму-нокортина на активность иммунокомпетентных клеток мышн показало, что он подавляет бластную трансформацию тимоцитов, снижает спонтанную подвижность перитонеальных макрофагов и их бактерицидность по отношению к бактериям вирулентного штамма Salmonella typhimurium 415. С помощью [|251]АКТГ(13-24) натимоцитах мыши обнаружены и охарактеризованы специфические рецепторы к АКТГ (Kt¡ = 5.8 нМ). Показано, что немеченный иммунокортин конкурируете меченым АКТГ( 13-24) за связывание с этими рецепторами (К1 = 1.8 нМ). Установлено, что связывание им-мунокортина с рецепторами на тимоцитах приводит к активации аденилатциклазы этих клеток и к увеличению внутриклеточного содержания цАМФ. Аналогичные результаты были получены для перитонеальных макрофагов.
Заключение: синтезирован АКТГ-подобный декапептид H-VKKPGSS VKV-OH, соответствующий аминокислотной последовательности 11-20 вариабельной части тяжелой цепи IgG 1 человека, обладающий антиросто-вой и иммуносупрессорной активностью in vitro.
Атеросклероз: реакганты острой фазы воспаления в патогенезе заболевания
Назаров П.Г., Косицкая JI.C., Полевщнков A.B., Галкина Е.В., Петров И.В., Денисенко А.Д.,
Нагорнев В.А., Рабинович B.C., Васильева JT.E.
Институт экспериментальной медицины РАМН Санкт-Петербург, Россия
Известно, что инфекционные заболевания и воспалительные процессы являются фактором риска развития атеросклероза, а факторы “иммунного воспаления” принимают участие в его патогенезе. Наше внимание привлекли белки острой фазы воспаления семейства пентраксинов: они имеют сродство к фосфорилхолину и способствуют депозиции липопротеинов в стенках сосудов. Была изучена роль одного из них - С-реактив-ного белка (СРБ) в механизме возникновения аутоиммунного ответа на атерогенные липопротеины плазмы. Установлено, что СРБ индуцирует у животных продукцию аутоантител к апо В-содержащим липопротеи-
нам (ЛПНГ1 и ЛПОНП) и продукцию антиидиотипичес-ких антител (анти-анти-апо-В). Кроме того, показано, что содержание кроликов на диете, богатой холестерином, в отсутствие каких-либо других воздействий, способных вызвать воспалительную реакцию, приводит к повышению в крови уровня СРБ и другого пентракси-на, сывороточного амилоида Р, и к развитию иммуно-морфологических изменений в печени, характерных для начальных этапов атеросклероза. Полученные данные позволяют заключить, что если у низших животных пен-траксины играют исключительно протективную роль, то у млекопитающих и у человека, где эти белки действуют в эволюционно усложнившемся иммунологическом окружении, платой за их участие в ранних событиях защиты становятся отдаленные негативные последствия, одним из которых является атеросклероз. Работа поддержана грантами РФФИ 98-04-49695 и 97-04-48012.
О влиянии перфторорганических соединений, применяемых в офтальмологии, на жизнеспособность фибробластоподобных клеток in vitro
Никитина ЕЛО.Соколов Д.И.Голубев С.Ю.2, Шишкин М.М.2,Фрейдлин И.С.1
'Институт экспериментальной медицины РАМН, отдел иммунологии;
2Военно-медицинская академия, кафедра офтальмологии
Одним из осложнений травм глаза является отслойка сетчатки, возникающая вследствие пролиферативной витреоретинопатии. Её признаками являются поегтрав-матическая пролиферация фибробластов и повышенный синтез коллагена, причины которых не до конца изучены. Нельзя исключить, что применяемые в офтальмологии перфтороорганические соединения могут вызывать ретино- или нейропатии. В связи с этим представляет интерес влияние на жизнеспособность и пролиферацию клеток отдельных препаратов, вводимых в глаз в ходе оперативного вмешательства.
Мышиные фибробластоподобные клетки линии L929 инкубировали в присутствии препаратов, содержащих перфторовые соединения (“Перфтордекалин”, “6 МФ-130”, “6 МФ-240”, “Перфтороктилбромид”, “Перфтор-N-октан”), взятых в различных (от 1% до 100%) объёмных соотношениях с привычной для этих клеток средой, в течение 24 часов. Жизнеспособные клетки окрашивали кристаллическим фиолетовым. На основании оптических плотностей рассчитывали индекс цитотоксичности (ИЦ). Учитывая изменения ИЦ под влиянием акти-номицина Д (5 мкг/мл), вызывающего остановку пролиферации, в его отсутствие снижение числа жизнеспособных клеток на 10-40% расценивали как возможный цитотоксический эффект; более, чем на 40% — как несомненный.
Таблица
Название препарата ИЦ (%) при объёмном содержании препарата в среде
20% 30% 50% 60% 100%
Перфтордекалин 22 19 36
6 МФ-130 8 12 12 15 53
6 МФ-240 9 17 16 17 49
Перфтороктилбромид 8 19 19 36
Перфтор-N-OKraH 4 24 20 24 40
При увеличении концентрации препаратов в культуральной среде от 20% до 50% уровень цитотоксичности изменялся незначительно. При этом “Перфтордекалин” оказывал более выраженное цитотоксическое действие, “Перфтороктилбромид” и “Перфтор-Ы-октан” занимали промежуточное положение. При 100% замещении препаратами культуральной среды ИЦ оказывались существенно более высокими у препаратов “б МФ-130” и “6 МФ-240” по сравнению с остальными.
Таким образом, препараты, содержащие перф-торорганические соединения, оказались нетоксичны или низкотоксичны в отношении фибробластоподоб-ных клеток линии Ь929. Из изученных наилучшие показатели имели “Перфтороктилбромид” и “Перфтор-Ы-октан”. Высокая клеточная гибель (более 40%) наблюдалась лишь в случае 100% замещения препаратами (“6 МФ-130” или “6 МФ-240”) культуральной среды и могла быть связана с дефицитом веществ, необходимых для поддержания жизнеспособности клеток. Ни в одном из случаев ИЦ не принимали отрицательных значений, что, возможно, свидетельствует против усиления пролиферации клеток в присутствии изученных препаратов.
Работа выполнена при поддержке гранта РФФИ№97-04-48889.
Изучение связывания 1_-глутамата с Т-лимфоцитами человека и перитонеальными макрофагами мыши и его влияние на активность этих клеток
Нуриева Р.И., Наволоцкая Е.В., Костанян И. А., Малкова Н.В.,ЛипкинВ.М.
Филиал Института биоорганической химии им. М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН Пущино, Россия
Известно, что Ь-глутаминовая кислота (Ь-б1и) выполняет ряд важнейших функций в центральной нервной системе: она является основным медиатором возбуждения, участвует в формировании памяти, регулирует рост и развитие нейронов. Действие Ю1и в центральной нервной системе опосредовано глутаматными рецепторами различных типов, которые принято подразделять на ионотропные и метаботропные.
Исследования последних лет свидетельствуют о прямом участии L-Glu и глутаматных рецепторов в функционировании эндокринной и иммунной систем. Так, недавно была обнаружена способность L-Glu и ряда ее структурных аналогов стимулировать секрецию инсулина Р-клетками поджелудочной железы крысы. Одновременно было показано существование на поверхности этих клеток специфических глутаматных рецепторов, близких по своим характеристикам к ионотроп-ным глутаматным рецепторам в центральной нервной системе.
Несколько лет назад было показано, что возрастающие концентрации внеклеточной L-GIu подавляют синтез ДНК в культуре митоген-стимулированных лимфоцитов. Среди изученных в этом тесте агонистов глутаматных рецепторов наиболее сильное ингибирование пролиферации вызывала квискалиновая кислота (квискалат). Было высказано предположение, что антипролиферативное действие L-Glu на лимфоциты может быть опосредовано через глутаматные рецепторы, подобные глутаматным рецепторам центральной нервной системы.
Цель данной работы: изучение связывания L-Glu с Т-лимфоцитами человека и перитонеальными макрофагами мыши и ее влияние на активность этих клеток.
Задача исследования: 1) изучение связывания [!H]L-Glu с Т-лимфоцитами; 2) изучение связывания ['H]L-Glu с макрофагами; 2) изучение влияния L-Glu на адгезию, распластывание макрофагов; 3) влияния L-Glu на фаг оцитоз макрофагами бактерий авирулентното штамма Salmonella typhimurium В 416/71.
Методы исследования: радиолигандный анализ; выделение и культивирование 'Г-лимфоцитов человека in vitro; выделение, культивирование и оценка функциональной активности макрофагов in vitro (жизнеспособность, распластывание и адгезия); изучение фагоцитарной активности макрофагов in vitro.
Основные результаты. Обнаружены и охарактеризованы специфические рецепторы к L-Glu на Т-лимфоци-тах, выделенных из крови здоровых доноров. Установлено, что немеченый агонист глутаматных рецепторов мозга квискалат и немеченые дипегтгиды Ala-G lu, Glu-Ala, Glu-Glu конкурентно ингибируют специфическое связывание [!H]L-Glu с Т-лимфоцитами. С помощью коньюгатов меченой и немеченой L-Glu с декстраном показано, что рецепторы L-Glu локализованы на внешней стороне плазматической мембраны 'Г-лимфоцитов. Таким образом, максимальным сродством к рецепторам обладали L-Glu и квискалат. L-Glu в составе пептидов частично или полностью теряла способность к специфическому связыванию с рецепторами Т-клеток. Для ответа на вопрос о природе выявленных рецепторов Т-лимфоцитов, клетки обрабатывали трипсином до проведения реакции связывания. В результате они теряли способность специфически связывать L-Glu, что свидетельствует в пользу белковой природы участков, связывающих L-Glu.
Установлено, что специфические рецепторы к L-Glu у перитонеальных макрофагов отсутствуют. Показано,
