CC BY
16ОЦСИЛЛАРНИ МЩДОРИЙ АНЩЛАШ УСУЛЛАРИ
АМИРОВА Тойирахон Шералиевна
Фаргона давлат университети Кимё кафедраси катта уцитувчиси (PhD) ЮРСУНБОЕВА Мафтуна Илхомжон цизи Фаргона давлат университети Кимё кафедраси магистранти НИШОНОВА Робияхон Му^аммадзо^ир цизи Фаргона давлат университети Кимё кафедраси магистранти ХОЛИ^ОВА Маликахон Рузибойевна Фаргона давлат университети Кимё кафедраси магистранти
d https://doi.org/10.24412/2181-2993-2022-2-34-38
Экстракция 0.2 н натрий гидроксиди билан магнит аралаштиргичда 1:10 нисбатда амалга оширилди. Хужайра цолдицлари РС-6 рефрижатор центрифугада 30 дацица ичида 6000 АННОТАЦИЯ айланиш тезлигида центрифугалаш йули билан олиб ташланди.
Олинган шаффоф супернатант (чукма усти эритма) магнит аралаштиргичда аралаштириб турган %олда, аммоний сульфат билан чуктириш амалга оширилди. Олинган экстракт музлатгичда оцсил шаклланиши учун 16 соатга цолдирилди.
Калит сузлар: ФЭК, натрий гидроксид, сегнет тузи, Несслер реактиви, дистилланган сув, концентрланган сулфат кислота, электрофотоколориметр.
Экстракцию проводили 0,2 н. раствором гидроксида натрия в соотношении 1:10 на магнитной мешалке. Клеточный дебрис удаляли центрифугированием при 6000 об/мин в течение 30 мин на
АННОТАЦИЯ охлаждаемой центрифуге РС-6. Полученный прозрачный супернатант (осажденный раствор) осаждали сульфатом аммония при перемешивании на магнитной мешалке. Полученный экстракт оставляли в холодильнике на 16 часов для образования белка.
Ключевые слова: ФЭК, гидроксид натрия, соль сегнита, реактив Несслера, вода дистиллированная, серная кислота концентрированная, электрофотоколориметр.
КИРИШ (Introduction)
Ипак тукималарида оксид таркибини аниклаш стандарт усул билан амалга оширилди [1]. Биз лаборатория кайчиси, аналитик тарози (0.0001), фильтр
34
www.birunijournal.uz
Г
14ж|
\ 1,1 ¡I /
KOF03H, конуссимон воронка, ФЭК, натрий гидроксид, сегнет тузи, Несслер реактиви, дистилланган сув, концентрланган сулфат кислота, концентрланган водород пероксиддан фойдаландик. Оксил моддаларини урганиш турли усуллар билан олиб борилди. Шу билан бирга, оксилларни урганишнинг барча усуллари куйидагича амалга оширилди. Оксилларни ажратиш учун биологик материал хужайра деворлари вайрон булгунча эзилди ва гомогенат олинди. Кейин оксилларни ажратиб олиш амалга оширилди. Ажратилган фракциялардаги оксил таркибини аниклаш учун уларнинг аликвот кисми иссикка чидамли колбага (5 дан 10 мл гача) олинди. Концентрланган сульфат кислота H2SO4 (р=1,84 г / см3) иссикликка бардошли колбаларга, танланган намунага ёки фракциянинг аликвот кисмига куйилди. Колбалар кум хаммомига жойлаштирилиб, харорат 400 °C га етказилди. Шу билан бирга, колбаларни кучли кайнаб кетишдан сакланиш керак. Дистилланган сув эхтиёткорлик билан деворлар буйлаб совутилган колбаларга куйилди ва 50 мл хажмли колбага утказилди. Совутгандан сунг, колбалардаги хажм белгига кадар етказилди ва яхшилаб аралаштирилади. Улчов колбадан, минералланишдан сунг, азот буйича оксил таркибини аниклаш учун, кутилаётган оксил таркибига караб, аликвот олинди. Намуналарда азот микдори юкори булганида, суюлтириш амалга оширилди. Олинган аликвот кисмга хажмининг ярмигача дистилланган сув кушилди. Кейин эритма нейтралланди ва 1 мл Несслер реактиви кушилди. Колбалардаги эритмаларга белгига кадар сув билан тулдирилди ва яхшилаб аралаштирилди. Бундай холда, эритмалар тулик шаффоф булиши керак. Буялиш бошлангандан сунг 15 минут утгач, эритмалар КФК-3 электрофотоколориметрда колориметрланди [2].
МУ^ОКАМА ВА НАТИЖАЛАР (Discussion and results)
Экстракция. Экстракция 0.2 н натрий гидроксиди билан магнит аралаштиргичда 1:10 нисбатда амалга оширилди. Хужайра колдиклари РС-6 рефрижатор центрифугада 30 дакика ичида 6000 айланиш тезлигида центрифугалаш йули билан олиб ташланди. Олинган шаффоф супернатант (чукма усти эритма) магнит аралаштиргичда аралаштириб турган холда, аммоний сульфат билан чуктириш амалга оширилди. Олинган экстракт музлатгичда оксил шаклланиши учун 16 соатга колдирилди. Кейин экстракт совутилган центрифугада 30 минут давомида 6000 айланиш тезлигида центрифуга килинди. Олинган чукма йотилиб, 0.2 н натрий гидроксидининг минимал хажмида эритилди [3-4].
Олинган оцсил эритмаларини диализ цилиш. Олинган оксил эритмаларини диализ (тузсизлантириш) окимли сувда 24 соат давомида
35
www.birunijournal.uz
целлофан копчаларда шиша идишлар ичида утказилди. Диализ учун целлофан копларнинг хусусияти шундаки, икки соат давомида сувда намланган целлофан пакетлар молекуляр OFирлиги 10 000 Да дан кам булган моддаларни утказувчи хусусиятга эга [5-6].
Оксил эритмаларини лиофил куритиш. Диализдан кейин тузсизланган оксил эритмалари -350C хдроратда ва вакуумли насос ёрдамида х,осил килинган юкори вакуумда лиофилланди. Туби юмалок колбаларда (0,5 мл) колорокриостатда (этил спирти -350C гача совутилган музлатгичда гача) оксил эритмалари текис катламда музлатилди, сунгра лиофил куритишга жойлаштрилди. Куритиш 6-8 соат ичида амалга оширилди [7-8].
Ипак матоси таркибидаги аминокислоталар мицдорий анализини утказилиши.
Ипак таркибидан ажратиб олинган эркин аминокислоталарнинг ФТК (фенилтиокарбомаил) хосилаларини синтези Steven A., Cohen Daviel усули буйича амалга оширилди [9-10].
ФТК-аминокислоталарини идентификацияси Agilent Technologies 1200 хроматографи 75х4.6 мм Discovery HS C18 колонкада амалга оширилди. А эритма: 0.14М CftCOONa + 0.05% ТЭА рН 6; В эритма: CH3CN. Оким тезлиги 1.2 мл/мин, ютилиш 269 нм. Градиент %В/мин: 1-6%/0-2.5мин; 6-30%/2.51-40мин; 30-60%/40.1 -45мин; 60-60%/45.1-50мин; 60-0%/50.1-55мин [11-12]. Куйидаги натижалар олинди (1-расм).
DAD1 A. Sig=269.4 Ref=360.100 (DEFLC 2021-07-01 03-15-02ВД13-Ш01 .DJ
1 1 ' ' ' I 1 ' ' 1 I ' ' ' ' I ' ' ' ' I ' 1 ' ' I ' 1 ' '
5_10_15_20_25_30_mir
1-расм. Ипак намунасининг аминокислоталари хромато-масс-спектри.
36
www.birunijournal.uz
REFERENCES
1. Ермаков А.И., Арасимович В.В. 1982. В кн.: Методы биохимического исследования растений М. С.430.
2. Девени Т., Гергей Я. 1976. В кн.: Аминокислоты, пептиды и белки.С. 355
3. Steven A.C. Amino Acid analisis Utilizing Phenylisothiocyanate Derivatives/ D.J. Strydom// Anal., Biochem.- 1988.-174.P.1-16.
4. Назаров, О. М., & Амирова, Т. Ш. (2022). ОПРЕДЕЛЕНИЕ СОДЕРЖАНИЯ МАКРО-И МИКРОЭЛЕМЕНТОВ В РАЗЛИЧНЫХ ВИДАХ КОЖИ МЕТОДОМ МАСС-СПЕКТРОМЕТРИИ С ИНДУКТИВНО-СВЯЗАННОЙ ПЛАЗМОЙ. Главный редактор, 18.
5. Амирова, Т. Ш. (2022, June). Химический состав шелковых и шерстяных тканей. In Conference Zone (pp. 79-80).
6. Ибрагимов, А. А., Амирова, Т. Ш., & Иброхимов, А. (2020). СЕРТИФИКАЦИЯ И КЛАССИФИКАЦИЯ ТКАНЕЙ НА ОСНОВЕ ИХ БИОЛОГИЧЕСКИХ СВОЙСТВ И ХИМИЧЕСКОГО СОСТАВА. Universum: химия и биология, (10-1 (76)), 10-13.
7. Амирова, Т. Ш. (2022, April). ХИМИЧЕСКАЯ ПОДГОТОВКА ТКАНЕЙ ИЗ НАТУРАЛЬНОГО ШЁЛКА. In Conference Zone (pp. 137-138).
8. Ибрагимов, А. А., Амирова, Т. Ш., & Иброхимов, А. А. (2021). ХИМИЧЕСКИЙ СОСТАВ МАРГИЛАНСКОГО ШЁЛКА. Deutsche Internationale Zeitschrift für zeitgenössische Wissenschaft, (14), 12-15.
9. Ibragimov, A. A., Amirova, T. S., & Ibrokhimov, A. A. (2020). Certification and classification of tissues based on their biological properties and chemical composition. Universum: Chemistry and biology: Sci. Jorn, (10 (76)), 10.
10. Карабаева, Р. Б., Ибрагимов, А. А., & Назаров, О. М. (2020). КОМПОНЕНТНЫЙ СОСТАВ ЭФИРНОГО МАСЛА PRUNUS PERSICA VAR. NECTARINA, ПРОИЗРАСТАЮЩЕГО В УЗБЕКИСТАНЕ. Химия растительного сырья, (4), 165-170.
11. Карабаева, Р. Б., Ибрагимов, А. А., & Назаров, О. М. (2020). ОПРЕДЕЛЕНИЕ СОДЕРЖАНИЯ ЛИПИДОВ И КИСЛОТ В МАСЛЕ ЯДЕР КОСТОЧЕК ДВУХ ОБРАЗЦОВ PRUNUS PERSICA VAR. NECTARINA. Universum: химия и биология, (12-1 (78)), 51-55.
12. Карабаева, Р. Б., Ибрагимов, А. А., & Назаров, О. М. (2020). Определение содержания химических элементов и аминокислот в Prunus persica var. Nectarina. Universum: химия и биология, (9 (75)), 15-18.
13. Карабаева, Р. Б., Ханабатова, М. Т. К., & Абдуллаева, М. К. (2022). ОПРЕДЕЛЕНИЕ ЖИРНОКИСЛОТНОГО СОСТАВА МАСЛА ЯДЕР СЕМЯН
37
www.birunijournal.uz
PRUNUS DULCIS VAR. AMARA. Universum: химия и биология, (6-2 (96)), 3032.
14. Mamatqulova, S. A., Dexqanov, R. S., & Abdullayev, S. V. (2021). DESIGNATING SOME FRUITS AND VEGETABLES ACCORDING TO FEAN NG. Scientific Bulletin of Namangan State University, 2(2), 94-101.
15. Mamatqulova, S. A., Dexqanov, R. S., & Abdullayev, S. V. (2021). DESIGNATING SOME FRUITS AND VEGETABLES ACCORDING TO FEAN NG. Scientific Bulletin of Namangan State University, 2(2), 94-101.
16. Mamatqulova, S. A., Dexqanov, R. S., & Abdullayev, S. V. (2021). CLASSIFICATION AND CERTIFICATION OF BIOLOGICALLY ACTIVE SUBSTANCES BY THE CHEMICAL COMPOSITION Isolated from HELIANTHUS TUBEROSUS PLANT BY TIFN TN. Scientific Bulletin of Namangan State University, 2(2), 70-77.
38
-\
www.birunijournal.uz
