CC BY
36
УДК 575.17: 582.632.2
О ЛЕСОВОССТАНОВИТЕЛЬНЫХ ПРОЦЕССАХ В ДУБРАВАХ ЮЖНОГО УРАЛА ПО ДАННЫМ ISSR-АНАЛИЗА
© Р. Ю. Янбаев
Башкирский государственный аграрный университет Россия, Республика Башкортостан, г. Уфа, ул. 50-летия Октября, 34.
Тел.: +7 (347) 228 91 77.
ЕтаИ: yanbaev_ua@mail.ru
Целью исследования является сравнительное изучение формирования генетического разнообразия популяции дуба черешчатого (Quercus гоЬиг L., Fagaceae) на Южном Урале при искусственном и естественном возобновлении леса. Для выявления полиморфизма ДНК выбран ISSR-анализ и использованы пять праймеров. Установлено, что генетическое разнообразие популяции горно-лесной зоны Республики Башкортостан (ожидаемая гетерозиготность HE = 0.220±0.015, число аллелей na = 1.76±0.43, эффективное число аллелей - пе=1.35±0.31) эффективно воспроизводится в искусственном лесонасаждении, у подроста естественного насаждения и лесных культур (HE = 0.202±0.016-0.249±0.015, па =1.75±0.43-1.86±0.35, пе =1.31±0.31-1.40±0.31). Новое поколение дуба в пределах популяции дифференцировано в пространстве слабо (показатель межвыборочной подразделенности Обт =0.067±0.006) - намного меньше, чем природные популяции Южного Урала (Обт =0.530 ± 0.032). В статье обсуждаются возможные причины выявленных закономерностей. Полученные результаты могут быть полезными для разработки мероприятий по естественному и искусственному восстановлению лесов дуба черешчатого в регионе, существенно деградировавших в последние десятилетия из-за неблагоприятного воздействия ряда климатических и антропогенных факторов.
Ключевые слова: дуб черешчатый, Южный лесные культуры, ISSR-маркеры.
Для лесного хозяйства Республики Башкортостан является актуальным решение проблемы восстановления дубрав, существенно деградировавших в последние десятилетия вследствие неблагоприятного воздействия ряда климатических и антропогенных факторов [11]. С применением современных информативных молекулярно-биологических методов показано, что популяции дуба черешчатого региона, несмотря на ухудшения состояния дубовых лесов, сохранили богатство генетическое разнообразие и, соответственно, потенциал для приспособления вида к меняющейся окружающей среде [7-9]. Но остается неизвестным - как выявленный сравнительно высокий полиморфизм ДНК материнских насаждений воспроизводится в последующих поколениях?
Целью настоящего исследования является сравнительный анализ воспроизводства генетического разнообразия популяции дуба черешчатого при искусственном и естественном возобновлении.
Анализируемые выборки представляют лесные культуры и подрост в дубравах стыка горно-лесной (низко- и среднегорья южно-уральских хребтов) зоны Южного Урала и широколиственно-лесной зоны Башкортостана с подзоной широколиственно-хвойных лесов [11] на территории Архангельского лесничества Республики.
Пробная площадь, названная ARun (координаты 54.4220/56.8004, указаны градусы северной широты и восточной долготы, соответственно) заложена в чистом насаждении дуба. Вторая выборка
Урал, популяция, полиморфизм ДНК, подрост,
(ARse, координаты 54.5333/56.8035) взята вблизи с. Архангельское на удалении 3 км по прямой линии от ARun на выделе смешанных средневозрастных лесных культур дуба. Результаты ее исследования важны для ответа на вопрос - насколько отличается генетическое разнообразие при искусственном воспроизводстве и естественном возникновении дубрав? По сведениям из лесничества, семенной материал для создания этих лесных культур был собран в ранее изученном [8] насаждении ARst. Третья пробная площадь ARse заложена для отбора подроста, образованного путем самосева под лесными культурами ARse. Она использована для выяснения особенностей формирования полиморфизма потомства лесных культур от естественного опыления.
Для характеристики полиморфизма выборок дуба черешчатого нами использован метод ISSR-анализа (Inter Simple Sequence Repeats) [27]. Метод показал свою эффективность при изучении генофондов ресурсных видов растений именно на попу-ляционном уровне [1-5, 22].
Выделение ДНК проводили по методике С. Роджерса [21] из зимних почек деревьев лесных культур и подроста дуба (с 32 экземпляров на одну выборку). Концентрация ДНК после выделения измерялась Spectrofotometr™ NanoDrop 2000 («THERMO SCIENTIFIC», USA) и далее она разводилась до 10 ng/^l. Для проведения ISSR-анализа полиморфизма ДНК использованы эффективные для дуба черешчатого ISSR-праймеры [7]: М1 с нуклео-тидной последовательностью 5'^ 3' (AC)8 CG, с использованием которого амплифицируются ISSR-
маркеры длиной в 200-1800 пн; М3 ((AC)sCT, 901000), М27 ((GA)sC, 100-1000), Х1 ((CA)eG,) 1201800), и Х11 ((AGC)eG, 120-2200). Амплификацию проводили в термоциклере GeneAmp PCR System 9700 (Applied Biosystems, USA) по стандартной для ISSR-метода программе [10]. В зависимости от G/C состава праймеров температура отжига изменялась в пределах 56-64°С. В качестве отрицательного контроля в реакционной смеси с целью проверки чистоты реактивов вместо ДНК использовались 5 д1 деионизированной воды. Проверка спектров ДНК осуществлялась трехкратным повтором каждого опыта. Электрофорез в 1.7%-ном агарозном геле использовался для разделения продуктов амплификации (в 1х ТВЕ буфере). Окрашивание осуществлялось в растворе с бромистым этидием, фотографирование - в проходящем ультрафиолетовом свете. Определение длины фрагментов ДНК выполнялось с использованием маркеров молекулярной массы «ООО-СибЭнзим-М».
Для статистического анализа экспериментальных данных использовались компьютерная программа POPGENE 1.31 [26] и специализированный макрос для MS-Excel GenA1Ex6 [20]. Определялись следующие показатели: доля межпопуляционной составляющей молекулярного разнообразия или показатель подразделенности популяций Gst [17], генетическое расстояние между популяциями D [16, 19], доля полиморфных локусов Р95 [25] с использованием 5%-ного критерия полиморфности, среднее число аллелей na, эффективное число аллелей ne [14], частота аллелей (при этом из-за доминантного характера ISSR-маркеров использованы рекомендации [12]), ожидаемая гетерозиготность HE [18]. С использованием матриц бинарных признаков и матриц генетических различий [16, 19] невзвешенным парно-групповым методом UPGMA с применением компьютерной программы Treecon 1.3b и POPGENE 1.31.построена дендрограмма, показывающая степень сходства выборок по ISSR-спектрам.
Анализ фрагментов ДНК, амплифицированных в ходе полимеразной цепной реакции, позволил выявить в изученных выборках наличие 108 IssR-маркеров, из которых 83 (76.9%) были полиморфными (табл. 1). Доля полиморфных локусов в выборке, в зависимости от ISSR-праймера, изменялась от 69.1 до 84.8% и в среднем составила 79.5%, показывая свою информативность.
В выборках ARun, ARse и ARse2 получены следующие показатели полиморфизма ДНК: He = (0.202±0.016)-(0.249±0.015) (в среднем 0.227±0.001), среднее число аллелей (1.75±0.43)-(1.86±0.35) (1.94±0.23), эффективное число аллелей ne = (1.31±0.31)-(1.40±0.31) (1.38±0.31). Эти пределы изменения (а также небольшие размеры ошибки средних величин) показывают, что использованные ISSR-праймеры позволили получить близкие значения изменчивости всех трех выборок (табл. 2).
Подсчет показателя показал, что лишь 6.7±0.6% генетической изменчивости приходится на долю ее межвыборочной составляющей. Другими словами, более 93% изменчивости находятся внутри выборок. Данный параметр, выявленный при использовании в ПЦР отдельных праймеров, изменяется незначительно (коэффициент вариации 20.4%): 8.9% (М1), 5.2% (М3), 6.5% (М27), 6,.9% (Х11) и 6,.1% (Х1). Несмотря на то, появление подроста дуба черешчатого выборки АЯ5е2 обусловлено в результате обсеменения от материнских деревьев лесных культур (AR.se) и они находятся в одном и том же выделе, генетическое расстояние между этими выборками выражено больше (Б = 0.052), чем между АН^е2 и выборкой подроста АЯип под пологом естественного древостоя (Б = 0.028). Наглядная демонстрация этого феномена приведена на рис.
Таблица 1
Характеристика фрагментов ДНК, амплифицированных при ISSR-анализе
Прай-меры Число и доля (в скобках ISSR-маркер полиморфных эов
В отдельных выборках На общую выборку
ARse ARun ARse2 Всего В т.ч. полиморфных
M1
M3
M27
X11
X1
Всего
14 (0.778)
17 (0.895)
17 (0.895)
21 (0.808)
15 (0.882)
84 (0.848)
11
(0.550) 18 (0.900) 16 (0.800)
23 (0.852)
14 (0.700) 82 (0.766)
10 (0.500)
19 (0.905)
14 (0.824) 12 (0.522) 12 (0.750)
67 (0.691)
20
21
20
27
20
108
14 (0.700)
19 (0.905)
15 (0.750)
21 (0.778)
14 (0.700)
83 (0.769)
Выявленный уровень подразделенности трех изученных выборок с ОяТ =0.067 оказался на порядок меньше, чем различия популяций дуба черешчатого на всем Южном Урале [7] - у них межпопуляционная дифференциация составила 53.0% (08т = 0.530± 0.032). Эти результаты доказывают, что деревья группы выборок АЯип AR.se и АЯБе2 обладают близким и специфичным генофондом. Подтверждением этому являются данные [8] по уровню полиморфизма ДНК материнского насаждения (табл. 2): в среднем число полиморфных 188Я-маркеров - 74.3, ожидада-емая гетерозиготность - Ив = 0.220±0.015, число аллелей - па = 1.76±0.43, эффективное число аллелей -Пе = 1.35±0.31. В популяции представлены 82.1% регионального полиморфизма вида, а в других насаждениях - 43.3-68.7% от общего числа полиморфных 188Я-маркеров. В Арханельской популяции нами были обнаружены 25 аллелей изоферментных локусов - 92.6% всего аллельного разнообразия дубрав
популяций Южного Урала (в других выборках выявлены 37-70.3% аллелей насаждений дуба). Таким образом, результаты настоящего исследования дали возможность показать, что уникальный богатый генофонд Архангельской популяции дуба черешчатого воспроизводится и в новом поколении - как при естественном возобновлении, так и в лесных культурах.
Таблица 2
Показатели изменчивости и полиморфизма выборок
| Популяция | Не \ Па \ Пе |
AR.se 0.249 (0.015) 1.86 (0.35) 1.40 (0.31) ARse2 0.231 (0.017) 1.82 (0.38) 1.37 (0.33) ARun 0.202 (0.016) 1.75 (0.43) 1.31 (0.30)
Генетическое расстояние [19] 0.3 0.2 ARse2 (подрост под лесными
' культурами) 100|- ARun (подрост под естествен'- ным древостоем)
- ARse (лесные культуры)
Рис. Дендрограмма, показывающая степень сходства выборок.
Выше отмечалось, что наибольшее генетическое расстояние установлено между деревьевьями лесных культур и их семенным потомством (ARse и ARse2), а между удаленными друг от друга выборкой ARse2 и подростом под пологом естественного древостоя ARun оно меньше почти в два раза. Причиной может быть нарушение хода естественного семенного возобновления у вида при искусственном выращивании леса. Известно [15], что из-за гравитационного механизма распространения семян и небольшого радиуса падения сравнительно тяжелых желудей большая часть аллелей дуба концентрируются вблизи материнского дерева, вследствие чего в древостоях дуба формируется кластерная структура генотипов. Этот феномен имеет важное эволюционное значение из-за формирования в пространстве неоднородного аллельного фонда, позволяющего поставлять генетически разнокачественные особи в качестве материала для естественного отбора. А для создания лесных культур при выращивании в лесных питомниках используется смесь желудей. Эта мера должна элиминировать всякую закономерную структурированность генотипов в пространстве и повышать уровень локального полиморфизма, по сравнению с генетически более близким подростом отдельных кластеров. Видимо, в этом причина определенных различий выборки ARse от групп подроста ARse2 и ARun. В противоположность этому явлению в первом поколении лесных культур в двумерном пространстве вновь должны возникать структурированные кластеры за счет локальной концентрации материнских аллелей из-за гравитационного распространения желудей. Повышению сходства потомства искусственно посаженных деревьев
(ARse) и подроста от естественного возобновления (ARun) может способствовать существование интенсивного генетически реализованного потока пыльцы дуба черешчатого на обширных пространствах [6, 13], приводящим к выравниванию аллель-ного состава популяции.
Насколько выявленные закономерности являются общими при лесовосстановительных процессах дуба черешчатого? Ответ на этот вопрос и подтверждение полученных результатов можно дать в ходе проведения аналогичных исследований подроста от естественного возобновления и лесных культур в дубравах из других частей Южного Урала и различающихся лесорастительных условиях, в том числе с применением маркеров полиморфизма ДНК новых поколений [9, 24].
ЛИТЕРАТУРА
1. Боронникова С. В. Молекулярно-генетический анализ и оценка состояния генофондов ресурсных видов растений Пермского края: монография. Перм. гос. нац. исслед. ун-т. Пермь, 2013. 223 с.
2. Боронникова С. В. Молекулярное маркирование и генетическая паспортизация сохранения их генофондов // Аграрный вестник Урала. 2009. №2 (56). С. 57-59.
3. Боронникова С. В. Популяционно-генетический мониторинг генофондов редких ресурсных видов растений Пермского края // Флора Урала в пределах бывшей Пермской губернии и ее охрана: материалы межрегиональной конференции, посвященной 140-летию со дня рождения П. В.Сю-зева / под ред. Е. И.Демьяновой / С. А.Овеснова / Л. Г.Пе-реведенцевой. Пермь, 2007. С. 37- 43.
4. Боронникова С. В., Тихомирова Н. Н. Анализ генетической изменчивости популяций двух редких лекарственных видов рода Adonis с использованием ISSR-маркеров // Известия Тимирязевской сельскохозяйственной академии. 2008. №1. С. 86-94.
5. Боронникова С. В., Тихомирова Н. Н., Кравченко О. А. Характеристика генофондов редкого лекарственного вида Adonis vernalis L. с использованием ISSR-маркеров // Аграрный вестник Урала. 2009. №5 (59). С. 67-70.
6. Бушбом Ю., Янбаев Ю. А., Деген Б. и др. Динамика генетического разнообразия во времени в изолированной популяции дуба черешчатого Quercus robur L. (Fagaceae) // Генетика. 2012. Т. 48. №1. С. 135-137.
7. Габитова А. А. Дуб черешчатый (Quercus robur L.) на Южном Урале: эколого-генетический анализ популяционной структуры: автореферат дис. ... кандидата биологических наук. Уфа, 2012. 18 с.
8. Габитова А. А, Редькина Н. Н., Янбаев Р. Ю. О высоком генетическом полиморфизме популяции дуба черешчатого на западном макросклоне Южного Урала / // Вестник Башкирского университета. 2015. Т. 20. №3. С. 854-856.
9. Деген Б., Янбаев Р. Ю., Муллагулов Р. Ю. и др. Полиморфизм микросателлитных локусов у дуба черешчатого // Вестник Башкирского университета. 2013. Т. 18. №4. С. 1037-1038.
10. Молекулярная генетика: учеб.-метод. пособие / под ред С. В. Боронниковой; Перм. ун-т. Пермь, 2007. - 150 с.
11. Попов Г. В. Леса Башкирии. Уфа, Башк. кн. изд-во, 1980. 144 с.
12. Хедрик Ф. Мир биологии: генетика популяций. М.: Техносфера, 2003. 592 с.
13. Bushbom J., Yanbaev Y., Degen B. Efficient long-distance gene flow into an isolated relict oak stand // Journal of Heredity. 2011. V. 102. №4. Pp. 464-472.
14. Kimura M., Crow J. F. The number of alleles that can be maintained in a finite population // Genetics (US). 1964. V. 49. Pp. 725-738.
15. Moran E. V., Clark J. S. Between-site differences in the scale of dispersal and gene flow in red oak // PLoS one. 2012. V. 7. E36492.
16. Nei M. Genetic distance between populations // Amer. Naturalist. 1972. V. 106. Pp. 283-292.
17. Nei M. Molecular population genetics and evolution. Amsterdam, 1975. 278 p.
18. Nei M. Molecular Evolutionary Genetics. New York: Columbia University Press, 1987. 512 p.
19. Nei M., Li W.-H. Mathematical model for studying genetic variation in terms of restriction endonucleases // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1979. V. 76. Pp. 5269-5273.
20. Peakall R., Smouse P. E. GenAlEx6: Genetic analysis in Excel. Population genetic software for teaching and research // Mol. Ecol. Not. 2006. V. 6. Pp. 288-295.
21. Rogers S. O., Bendich A. J. Extraction of DNA from milligram amounts of fresh, herbarium and mummified plant tissues // Plant Molecular Biology. 1985. Vol. l. No. 19. Pp. 69-76.
22. Svetlakova T. N., Boronnikova S. V., Yanbaev Y. A. Genetic diversity and differentiation in Ural populations of the aspen,
Populus tremula L., as revealed by inter-simply sequence repeat (ISSR) markers // Silvae Genetica. 2014. No. 1. Pp. 39-41.
23. Torres A. M. Linkage among isozyme, RFLP and RAPD markers in Vicia faba // Theor. Appl. Genet. 1993. V. 5. Pp. 937945.
24. Schroeder H., Cronn R., Yanbaev Y. et. al. Development of molecular markers for detrmining continental origin of wood from white oaks (Quercus l. Sect. Quercus). PLoS One. 2016. V. 11. No. 6. E0158221.
25. Williams J. G. K., Kubelik A. R., Livak K. J. et al. DNA polymorphisms amplified by arbitrary primers are useful as genetic markers // Nucl. Acids Res. 1990. V. 18. Pp. 6531-6535.
26. Yeh F. C., Young R. C., Mao J. POPGENE, the Microsoft Windows-based user-friendly software for population genetic analysis of co-dominant and dominant markers and quantitative traits. Department of Renewable Resources, Univ. of Alberta, Edmonton. 1999. 238 p.
27. Zietkiewicz E., Rafalski A., Labuda D. Genome fingerprinting by simple sequence repeat (SSR)-anchored polymerase chain reaction amplification // Genomics. 1994. V. 20. Pp. 176-183.
Поступила в редакцию 01.11.2016 г.
ISSN 1998-4812
BeciHHK EamKHpcKoro yHHBepcHTeTa. 2016. T. 21. №4
947
ON REFORESTATION PROCESSES OF OAK WOODS IN THE SOUTHERN URALS: RESULTS OF ISSR-ANALYSIS
© R. Y. Yanbaev
Bashkir State Agrarian University 34 50-letiya Oktyabrya St., 450000 Ufa, Republic of Bashkortostan, Russia.
Phone: +7 (347) 228 91 77.
Еmail: yanbaev_ua@mail. ru
The article is devoted to comparative study of formation of genetic diversity of the pedunculate oak (Quercus robur L., Fagaceae) at the processes of the artificial and natural reforestations in the Southern Urals. To detect DNA polymorphism, ISSR-analysis was applied and five primers were used. It is found that the oak population genetic diversity from mountain-forest area of the Republic of Bashkortostan (expected heterozygosity He = 0.220±0.015, average number of alleles per locus ne = 1.76±0.43, average number of effective alleles per locus ne = 1.35±0.31) is effectively reproduced in man-made oak forests, in undergrowth of natural and man-made oak grooves (He = 0.202±0.016 - 0.249±0.015, na = 1.75±0.43 - 1.86±0.35, ne =1.31±0.31 - 1.40±0.31). The new generation of the oak within the population is differentiated to a much smaller degree (coefficient of differentiation among samples Gst = 0.067±0.006) than the natural populations of the Southern Urals (Gst = 0.530±0.032). The author of the article considers possible causes of the revealed trends and patterns. The results of the study can be useful in development of steps aimed at restoration of natural and man-made pedunculate oak forests in the region that significantly degraded in recent decades due to a variety of adverse consequences of climatic and anthropogenic factors.
Keywords: pedunculate oak, Southern Urals, population, polymorphism, DNA, undergrowth, artificial forest stands, ISSR-markers.
ublished in Russian. Do not hesitate to contact us at bulletin_bsu@mail.ru if you need translation of the article.
REFERENCES
1. Boronnikova S. V. Molekulyarno-geneticheskii analiz i otsenka sostoyaniya genofondov resursnykh vidov rastenii Permskogo kraya: monografiya [Molecular-genetic analysis and evaluation of gene pools of resource plants of the Perm region: monograph]. Perm. gos. nats. issled. un-t. Perm', 2013.
2. Boronnikova S. V. Agrarnyi vestnik Urala. 2009. No. 2 (56). Pp. 57-59.
3. Boronnikova S. V. Flora Urala v predelakh byvshei Permskoi gubernii i ee okhrana: materialy mezhregional'noi konferentsii, posvyash-chennoi 140-letiyu so dnya rozhdeniya P. V.Syuzeva. Ed. E. I.Dem'yanovoi / S. A.Ovesnova / L. G.Perevedentsevoi. Perm', 2007. Pp. 37- 43.
4. Boronnikova S. V., Tikhomirova N. N. Izvestiya Timiryazevskoi sel'skokhozyaistvennoi akademii. 2008. No. 1. Pp. 86-94.
5. Boronnikova S. V., Tikhomirova N. N., Kravchenko O. A. Agrarnyi vestnik Urala. 2009. No. 5 (59). Pp. 67-70.
6. Bushbom Yu., Yanbaev Yu. A., Degen B. i dr. Dinamika geneticheskogo raznoobraziya vo vremeni v izolirovannoi populyatsii duba chereshchatogo Quercus robur L. (Fagaceae). Genetika. 2012. Vol. 48. No. 1. Pp. 135-137.
7. Gabitova A. A. Dub chereshchatyi (Quercus robur L.) na Yuzhnom Urale: ekologo-geneticheskii analiz populyatsionnoi struktury: avtoreferat dis. ... kandidata biologicheskikh nauk. Ufa, 2012.
8. Gabitova A. A, Red'kina N. N., Yanbaev R. Yu. Vestnik Bashkirskogo universiteta. 2015. Vol. 20. No. 3. Pp. 854-856.
9. Degen B., Yanbaev R. Yu., Mullagulov R. Yu. i dr. Polimorfizm mikrosatellitnykh lokusov u duba chereshchatogo. Vestnik Bashkirskogo universiteta. 2013. Vol. 18. No. 4. Pp. 1037-1038.
10. Molekulyarnaya genetika: ucheb.-metod. Posobie [Molecular genetics: methodical guidebook] / pod red S. V. Boronnikovoi; Perm. un-t. Perm', 2007. -
11. Popov G. V. Lesa Bashkirii [Forests of Bashkiria]. Ufa, Bashk. kn. izd-vo, 1980.
12. Khedrik F. Mir biologii: genetika populyatsii [The world of biology: population genetics]. Moscow: Tekhnosfera, 2003.
13. Bushbom J., Yanbaev Y., Degen B. Journal of Heredity. 2011. Vol. 102. No. 4. Pp. 464-472.
14. Kimura M., Crow J. F. Genetics (US). 1964. Vol. 49. Pp. 725-738.
15. Moran E. V., Clark J. S. PLoS one. 2012. Vol. 7. E36492.
16. Nei M. Amer. Naturalist. 1972. Vol. 106. Pp. 283-292.
17. Nei M. Molecular population genetics and evolution. Amsterdam, 1975.
18. Nei M. Molecular Evolutionary Genetics. New York: Columbia University Press, 1987.
19. Nei M., Li W.-H. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1979. Vol. 76. Pp. 5269-5273.
20. Peakall R., Smouse P. E. Mol. Ecol. Not. 2006. Vol. 6. Pp. 288-295.
21. Rogers S. O., Bendich A. J. Plant Molecular Biology. 1985. Vol. l. No. 19. Pp. 69-76.
22. Svetlakova T. N., Boronnikova S. V., Yanbaev Y. A. Silvae Genetica. 2014. No. 1. Pp. 39-41.
23. Torres A. M. Theor. Appl. Genet. 1993. Vol. 5. Rp. 937-945.
24. Schroeder H., Cronn R., Yanbaev Y. et. al. Development of molecular markers for detrmining continental origin of wood from white oaks (Quercus l. Sect. Quercus). PLoS One. 2016. Vol. 11. No. 6. E0158221.
25. Williams J. G. K., Kubelik A. R., Livak K. J. et al. DNA polymorphisms amplified by arbitrary primers are useful as genetic markers. Nucl. Acids Res. 1990. Vol. 18. Pp. 6531-6535.
26. Yeh F. C., Young R. C., Mao J. POPGENE, the Microsoft Windows-based user-friendly software for population genetic analysis of co-dominant and dominant markers and quantitative traits. Department of Renewable Resources, Univ. of Alberta, Edmonton. 1999.
27. Zietkiewicz E., Rafalski A., Labuda D. Genomics. 1994. Vol. 20. Pp. 176-183.
Received 01.11.2016.
