О филогенетическом положении ельца Данилевского Leuciscus danilewskii (Cyprinidae) по данным мтДНК Текст научной статьи по специальности «Биологические науки»

Труды ИБВВ РАН, вып. 73(76), 2016

УДК 597.5

О ФИЛОГЕНЕТИЧЕСКОМ ПОЛОЖЕНИИ ЕЛЬЦА ДАНИЛЕВСКОГО LEUCISCUS DANILEWSKII (CYPRINIDAE) ПО ДАННЫМ мтДНК

Б. А. Лёвин

Институт биологии внутренних вод им. И.Д. Папанина РАН 152742 пос. Борок, Ярославская обл., Некоузский р-н, e-mail: [email protected]

Впервые выполнена оценка филогенетического положения ельца Данилевского Leuciscus danilewskii, эндемика Дона, с применением молекулярно-генетических методов. Согласно филогенетическому анализу последовательностей гена цитохрома б (1089 п.н.), елец Данилевского является хорошо дивергиро-вавшим видом, сестринским по отношению к ельцу обыкновенному Leuciscus leuciscus (»-дистанция = 8.40±1.80%). В Верхнем Дону отмечен случай гибридизации между этими видами.

Ключевые слова: цитохром б, ельцы Leuciscus, филогенетический анализ, MrBayes, Cyprinidae, Понто-Каспийский бассейн.

ВВЕДЕНИЕ

Ельцы рода Leuciscus считались обширной группой карповых рыб, насчитывающей порядка 90 видов. Молекулярные филогенетические исследования последних двух десятилетий показали, что данная группа полифилетична. Значительная часть видов была отнесена к родам Squal-ius и Telestes, в то же время некоторые другие рода (например, Aspius) было предложено сино-нимизировать с родом Leuciscus (Perea et al., 2010). Несмотря на довольно интенсивные исследования европейских карповых (Briolay et al., 1998; Zardoya, Doadrio, 1999; Ketmaier et al., 2004; Perea et al., 2010), включая программу генетического штрихкодирования рыб Европы (Geiger et al., 2014), значительная часть видов, обитающих в Восточной Европе, оказалась генетически все еще не изученной. Хотя в данном регионе имеется достаточно много ситуаций, которые можно прояснить с применением инструментария молекулярной генетики.

Елец Данилевского Leuciscus danilewskii (Kessler) — эндемик Донского бассейна. Данный вид считается близким видом обыкновенному ельцу Leuciscus leuciscus (L), ареал которого фактически окружает ареал донского эндемика (Атлас рыб ..., 2003). Мнения о таксономическом статусе ельца Данилевского различны. Его рассматривали в качестве подвида ельца обыкновенного (Дрягин и др., 1954; Мов-чан, Смiрнов, 1981; Васильева и др., 1993; Лё-вин, 2002), считали экологической формой данного вида или вообще считали младшим синонимом ельца обыкновенного (Щербуха, 1972). Богуцкая (1987), изучив строение нейро-и спланхнокраниума ельцов, пришла к выводу о видовой самостоятельности ельца Данилевского. В Атласе рыб России (2003) таксономический ранг ельца Данилевского — видовой.

Нужно отметить, что в верховьях Дона отмечено обитание обоих видов (Атлас рыб ., 2003; Иванчев и др., 2013), и если между ними есть гибридизация, то это может в еще большей

степени затруднять оценку отношении этих видов, особенно по признакам фенотипа.

Для уточнения филогенетического положения ельца Данилевского и прояснения его отношении с обыкновенным ельцом нами впервые привлечены молекулярно-генетические данные. Анализ филогенетических отношении ельцов выполнен с применением последова-тельностеИ гена мтДНК цитохрома б, активно используемого для целеи филогении, в том числе, в семеИстве карповых (Zardoya, Doadrio, 1999; Costedoat et al., 2006; Levin et al., 2012).

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Генетические образцы L. danilewskii и L. leuciscus были собраны в ходе полевых выездов в период 2011-2013 гг. (таблица). Данные образцы хранятся в настоящее время в генети-ческои коллекции Института биологии внутренних вод им. И.Д. Папанина РАН (ИБВВ РАН). Помимо собственных сборов, использовали последовательности гена цитохрома б представителей родов Leuciscus, Squalius, Aspius, Ballerus и Telestes из генбанка (http://www.ncbi.nlm.nih.gov).

ДНК выделяли из плавников рыб, фиксированных в 96% этаноле, по стандартному солевому методу (Aljanabi, Martinez, 1997). Условия ПЦР: 35 циклов 94°C (20 с), 52°C (30 с), 72°C (1 мин), финальный цикл достройки цепей 72°C (10 мин). Амплификацию гена цитохрома б производили с использованием праймеров GluDg 5 '-TGACTTGAARAACCAYCGTTG-3' и H16460 5 '-CGAYCTTCGGATTACAAGACCG-3' (Palumbi, 1991; Perdices, Doadrio, 2001). Полученные ПЦР-продукты визуализировали в 1.5%-ном агарозном геле, а затем очищали ПЦР-продукт с использованием этанола 96% и ацетата натрия (3M). Последовательности нук-леотидов считывали на автоматическом секве-наторе ABI3500 в ИБВВ РАН в соответствии с инструкцией производителя.

Гомологичные участки последовательностей были проверены на ошибки в программе

FinchTV 1.4.0 (Rothganger et al., 2006) и выровнены c использованием пакета программ MEGA6 (Tamura et al., 2013) в соответствии с опубликованными в генбанке

(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/) последовательностями цитохрома б.

Для проведения филогенетического анализа использовали фрагменты гена цитохрома б (cytb) длиной 1089 п.н. Частота встречаемости нуклеотидов была следующей: A = 0.247, C = 0.285, G = 0.172, T = 0.296. Количество вариабельных сайтов составило 446 (40.96%), парси-мони-информативных сайтов — 349 (32.05%). С помощью информационного критерий Акаике (AIC), внедренного в программу jModelTest 2.1.5 (Posada, 2008), определяли оптимальную модель эволюции (GTR+G+I), параметры которой была

Таблица. Исследованный материал

использована для последующего анализа. Байе-зовские заключения (Bayesian inferences - BI) получены при использовании программы MrBayes v3.2 (Ronquist, Huelsenbeck, 2003) симуляцией двух одновременных MCMC-цепей в 5000000 генераций каждая для определения распределения апостериорной вероятности (posterior probabilities). Топологию деревьев собирали каждые 100 генераций. Первые 25% деревьев были удалены (burn-in). Анализ проводили на удаленном кластере суперкомпьютера филогенетического ресурса CIPRES (Miller et al., 2010). В качестве аутгруппы выбрана последовательность обыкновенного гольяна Phoxinus phoxinus (L) EF094550 из генбанка NCBI. P-дистанции рассчитаны в программе MEGA6 (Tamura et al., 2013).

№ Места сбора материала Бассейн Число последовательностей Географические координаты или номер из генбанка NCBI

Leuciscus danilewskii

1* р. Дон у заповедника «Галичья гора», Липецкая обл. Азовское море 4 52°36' с.ш. 38°56' в.д.

2* р. Дон у с. Ступино, Воронежская обл. Азовское море 1 50°37' с.ш. 39°55' в.д.

Leuciscus leuciscus

3* р. Непрядва, приток Дона, Тульская обл. Азовское море 4 53°39' с.ш. 38°32' в.д.

4* р. Ветлуга, приток Волги, Респ. Марий-Эл Каспийское море 1 56°19' с.ш. 46°22' в.д.

5* р. Кадада, Волжский бассейн, Пензенская обл. Каспийское море 1 52°55' с.ш. 46°16' в.д.

6* р. Ус, бас. Печоры, Респ. Коми Баренцево море 1 63°24' с.ш. 48°42' в.д.

7 р. Либечовка, приток р. Эльбы, Чехия Северное море 1 HM560101

8 р. Морава, приток Дуная Черное море 1 DQ664410

9 р. Висла Балтийское море 1 DQ664443

10 р. Трент, Великобритания Северное море 1 AY509823

11 оз. Боденское, Германия Северное море 1 AJ555553

12 р. Сазава, приток Эльбы Северное море 1 HM560100

13 р. Бланице, бас. Эльбы Северное море 1 DQ664446

14 р. Нив, Франция Атлантический Океан 1 DQ664306

15 р. Айн, приток Роны, Франция Средиземное море 1 DQ664302

Leuciscus baicalensis

16 р. Иртыш, приток Оби, Китай Карское море 1 NC 024528

17* р. Челек, приток оз. Балхаш, Казахстан Бессточный бас. 1 43°46' с.ш. 78°11' в.д.

18 Китай НД 1 KF552099

Leuciscus idus

19 р. Либечовка, приток р. Эльбы, Чехия Северное море 1 HM560099

20 р. Дунай, Словакия Черное море 1 AY026397

Leuciscus schmidti

21 оз. Иссык-Куль, Киргизия Бессточный бас. 65 1 AY026396

Таблица. (окончание)

Число Географические

№ Места сбора материала Бассейн последова- координаты или номер

тельностей из генбанка NCBI

Leuciscus waleckii

22 оз. Дали, бас. Меконга, Китай

Южно-Китайское море

KF312806

Ballerus ballerus

23 р. Дунай, Словакия

Черное море

AY026409

Petroleuciscus borysthenicus

24 оз. Комана, Румыния

Черное море

AJ252815

Petroleuciscus smyrnaeus

25 р. Буюк-Мендерез, Турция

Эгейское море

AJ252813

Squalius aradensis

26 бассейн р. Араде, Португалия

Атлантический Океан

AF421825

Squalius carolitertii

27 бассейн р. Дуэро

Атлантический Океан

AF421799

Squalius cephalus

28 нд НД 1 AJ252807

29 р. Дрин, Италия Адриатическое море 1 AJ252798

Squalius illiricus

30 р. Цетина, Хорватия Адриатическое море 1 AJ251094

Squalius keadicus

31 р. Евротас, Греция Средиземное море 1 AJ252820

Squalius lepidus

32 оз. Бейсехир, Турция Бессточный бас. 1 AJ252812

Squalius lucumonis

33 р. Тибр, Италия Средиземное море 1 AJ252819

Squalius peloponnensis moreoticus

34 бассейн оз. Стимфалия, Греция Бессточный бассейн? 1 AF090758

Squalius pyrenaicus

35 р. Эбро, Испания Средиземное море 1 AJ252821

Squalius zrmanjae

36 р. Зрмания, Хорватия Адриатическое море 1 AJ251093

Telestes muticellus

37 р. Омброне, Италия Тирренское море 1 AY838934

Telestes polylepis

38 ручей у Жоспидола, Хорватия Адриатическое море 1 AY509824

Telestes souffia

39 оз. Боденское, Германия Северное море 1 AJ555549

* — наши данные; НД — нет данных.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ Елец Данилевского L. danilewskii образует отдельный кластер с высоким уровнем поддержки (поддержка апостериорной вероятности, post. prob. = 1) и является сестринским видом ельцу обыкновенному L. leuciscus, в дерево которого встраивается так же и язь L. idus (рис.). Случаи гибридизации между обыкновенным ельцом и язем задокументированы молекулярными методами ^ostedoat et al., 2006). Использованные нами последовательности из генбанка NCBI относятся как раз к гибридным особям. Обсуждение филогенетического положения язя и его гибридизационных связей с ельцом не является предметом настоящей статьи.

Уровень генетической дивергенции между ельцом обыкновенным и ельцом Данилев-

ского весьма велик (р-дистанция = 8.40±1.80%), что свидетельствует о давней дивергенции ельца Данилевского от общей с обыкновенным ельцом предковой формы.

Будучи объединены в одну кладу, оба вида ельца являются сестринской группой сибирскому ельцу L. baicalensis и иссык-кульскому чебаку L. schmidti (post. prob. = 0.99).

Одна особь из бассейна Верхнего Дона, фенотипически более сходная с обыкновенным ельцом, в частности по числу чешуй в боковой линии (ll = 48, счет производили до конца че-шуйного покрова), имела гаплотип ельца Данилевского (подчеркнута красной прерывистой линией на рисунке). Это, по всей видимости, говорит о гибридизации между видами - недавней или отдаленной. Поскольку обыкновенный елец весьма распространен на Верхнем

Дону (Иванчев и др., 2013), гибридизация двух видов ельцов может оказаться довольно частым явлением. Гибридизация в группе ельцовых рыб весьма обычна (Бигапё Й а1., 2000; Со81е-^а! е! а1., 2006) и вносит существенный вклад в эволюционную историю данной группы. Из-

вестны случаи полной интрогресии мтДНК отдельных видов. Например, все 28 изученных особей голавля Squalius lepidus (Турция) обладали последовательностью фрагмента цито-хрома б обыкновенного голавля Squalius cepha-(Бйгапс! й а1., 2000).

-РЬох'тия рЪохтш

иеисеа15_НМ56<)Ш1 иеиа5еи5_[>06«443_Ув38_Н1г& 1._1еиак115_НМ5601.00 1-_1е1гак115_[Х36 64446 .л иеис15еи5_00664410.1_Могауа10_Н11& -да 1еискси5_Ииз_АТ3052_НМ5600Э9 мела 5со5_О0бб430б_н I ? ю__2

иеис)ки5_Еиг14Лер«уасЬ'а иеи05си5_Еиг] ?_№р«уае«*э *1-_(еис1я:1в_Ёиг22_гоер<уас»га 1__1еис1я:и5_геЗ_\/ейи«]а Ц_(еис15си5_Еиг1б_№ргуас1уа 1_1еий5си5_И_107_Ка(Лайа_5ига 1_1еис15ае_1Х2664302_А1пг

L JeubscusJW 509823 Ueud50JS_AJ555553

L. leuciscus

— L_danilewskii_Eur30_Don L_danitewskii_Eur72_Oon i_EUR68_Don L_darillewskli_LDl_Doo_Sftjpino I

L. danilewskii

L. baicalensis +

L_baicaiensis_KFSS209<" Leuciscus_baiealensis_NC_02452Ô Ujaicalensis_K99_BaiWwsh

L_walediii_KF312806_GG12

L. schmidti

Aspius_aspius_AT3056_HM560075

SJceadfcusJU252820 S_zrmanjae_AJ251093 S_i ly nc KS_A)2 510M_Li 1 S_pyrenalais_AJ25282 L_Ebra S_carolitertil_AF421799_MNCN_CAR503ES S_aratieiSl£_AH2 L825_MMCN_LEU 11 5JuajmonlS_AJ252819_Tib2 Sq_cephaius_AJ252798_0ri Sj«topoflnensii_moreo6ais_AF09075i s_<epidus_«252il2_Beys 5cLcepbaius_W252eo7_East

Petroleuciscus

Squalius

Рис. В1-дерево филогенетических отношений ельца Данилевского L. dаnilewskii по последовательностям цито-хрома б (1089 п.н.). Числа в узлах отражают апостериорную вероятность Байезовских заключений. Шкала масштаба отражает 6% оцененной дивергенции последовательностей.

Васильевой с соавторами (1993) при анализе фенетического разнообразия ельцов установлено, что популяции ельца Данилевского из Верхнего Дона в большей степени сходны с обыкновенным ельцом из бассейна Оки, нежели ельцы из других участков бассейна Дона. Вероятно, эту близость можно объяснить гибридизацией этих видов в верховьях Дона. Верхний Дон имел недавнюю связь с верховьями притоков Волги (Берг, 1949), что было подтверждено недавно молекулярными методами на примере

проникновения украинской миноги Eudontomy-zon mariae из бассейна Дона в бассейн Волги (Ермаков и др., 2013; Levin et al., 2016).

Таким образом, елец Данилевского — генетически хорошо дивергировавшая линия, безусловно, являющаяся самостоятельным видом. В Верхнем Дону отмечен случай гибридизации обыкновенного ельца и ельца Данилевского. Насколько частой является гибридизация между этими видами, еще предстоит оценить.

Благодарности. Я выражаю глубокую признательность всем участникам полевых выездов, совместно с которыми были добыты пробы — А.А. Болотовскому, Н.Ш. Мамилову, В.С. Сарычеву, В.К. Фарсенину, а также А. А. Боброву за генетический образец ельца из бассейна р. Печоры и О. А. Ермакову за образец ельца из бассейна р. Суры. Весьма признателен М. А. Лёвиной за помощь с выделением ДНК и постановкой ПЦР. Выражаю благодарность также рецензенту за ценные замечания по рукописи. Исследование поддержано грантом Российского научного фонда 15-14-10020.

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ Атлас пресноводных рыб России: В 2 т. Т. 1. Ю.С. Решетников, О Л. Попова, Л.И. Соколов и др. М.: Наука, 2002. 379 с. Atlas presnovodnykh ryb Rossii: V 2 t. T. 1. - Yu.S. Reshetnikov, O.L. Popova, L.I. Sokolov i dr. M.: Nauka, 2002. 379 p. [Atlas of Russian Freshwater Fishes: Vol. 1. Yu.S. Reshetnikov, O L. Popova, L.I. Sokolov et al. M: Science, 2002. 379 p.] In Russian Богуцкая Н.Г. О таксономическом статусе ельца Данилевского (Cyprinidae) // Фауна, морфология и экология рыб // Труды Зоол. Ин-та АН СССР. 1987. Т. 162. Л: Зоол. Ин-т АН СССР. С. 73-80. Bogutskaya N.G. O tak-

sonomicheskom statuse el'tsa Danilewskogo (Cyprinidae) // Fauna, morphologija I ecologiya ryb. 1987. Trudy Zool. In-ta AN SSSR. T. 162. L: Zool. In-t AN SSSR. S. 73-80. [Bogutskaya N.G. To taxonomical status of the Danilewskiy dace (Cyprinidae) // Fauna, morphology, and ecology of fishes. 1987. Proceedings of Zoological Institute of Academy of Sciences of USSR. V. 162. Leningrad: Zoological Institute of Academy of Sciences of USSR. P. 73-80] In Russian

Васильева Е.Д., Мина М.В., Павлинов И.Я. К анализу фенетического разнообразия ельцов (подрод Leuciscus, Cyprinidae). Положение Leuciscus danilewskii // Вопросы ихтиологии. 1993. Т. 33. № 4. С. 475-485. Vassilieva E.D., Mina M.V., Pavlinov I.Ya. K analizu feneticheskogo raznoobraziya el'tsov (podrod Leuciscus, Cyprinidae). Polozhenie Leuciscus danilewskii // Voprosy Ikhthiologii. 1993. T. 33. № 4. S. 475-485. [Vassilieva E.D., Mina M.V., Pavlinov I.Ya. To analysis of phenetic diversity of daces (subgenus Leuciscus, Cyprinidae). Position of Leuciscus danilewskii // Journal of Ichthyology. 1993. V. 33. № 4. P. 475-485] In Russian Берг Л. С. Рыбы пресных вод СССР и сопредельных стран: в 2 частях. Часть 2. АН СССР Ленинград. 1949. 927 с. Berg L. S. Ryby presnyh vod SSSR i sopredel'nyh stran: v 2 chastjah. Chast' 2. AN SSSR Leningrad. 1949. 927 s. [Berg L. S. Fishes of fresh waters of the USSR and adjacent countries: in 2 parts. Part 2. Academy of Sciences of the USSR. Leningrad. 1949, 927 p.] In Russian Дрягин П. А., Галкин Г.Г., Сорокин С.М. Условия размножения и рост рыб в Цимлянском водохранилище в первый год его существования // Изв. ВНИОРХ. 1954. Т. 34. С. 134-155. Dryagin P.A., Galkin G.G., Sorokin S.M. Usloviya razmnozheniya i rost ryb v Tsimlyanskom vodokhranilishche v pervyi god ego sushchestvovaniya // Izv. VNIORKH. 1954. T. 34. S. 134-155. [Dryagin P.A., Galkin G.G., Sorokin S.M. Conditions of reproduction and growth of fishes in Tsimlyanskoe Reservoir during first year of its existence // Transactions of VNIORKH. 1954. V. 34. P. 134-155] In Russian Ермаков А.С., Лёвин Б.А., Ермаков О.А. Генетическая изменчивость украинской миноги Eudontomyzon mariae на северо-восточной границе ареала по данным секвенирования контрольного региона мтДНК // XXI век: Итоги прошлого и проблемы настоящего плюс. 2013. № 17 (1). С. 17 In Russian 21. Ermakov A.S., Levin B.A., Ermakov O.A. Genetichestaja izmenchivost' ukrainskoi minogi Eudontomyzon mariae na severo-vostochnoi granice areala po dannym sekvenirovaniya kontrol'nogo regiona mtDNK // XXI vek: Itogi proshlogo i problem nastoyashchego plyus. 2013.№17 (1). S. 17 In Russian 21. [Ermakov A.S., Levin B.A., Ermakov O.A. Genetic diversity of Ukrainian brook lamprey Eudontomyzon mariae on north-eastern border of range inferred from mtDNA control region // XXI century: Resumes of the Past and Challenges of the Present plus. V. 17 (1). P. 17 In Russian 21] In Russian Иванчев В.П., Сарычев В.С., Иванчева Е.Ю. Миноги и рыбы бассейна Верхнего Дона // Труды Окского государственного природного биосферного заповедника. 2013. Вып. 28. Рязань, «Голос губернии», 275 с. Iv-anchev V.P., Sarychev V.S., Ivancheva E.Yu. Minogi i ryby basseina Verkhnego Dona // Trudy Okskogo gosu-darstvennogo prirodnogo biosphernogo zapovednika. 2013.Vyp. 28. Ryazan', "Golos gubernii", 275 s. [Ivanchev V.P., Sarychev V.S., Ivancheva E.Yu. Lampreys and fishes of the Upper Don basin // Proceedings of Okskiy State Natural Biospheric Reserve. 2013. No. 13. Ryazan', 'Golos gubernii', 275 p.] In Russian Лёвин Б.А. Елец Данилевского (Leuciscus: Cyprinidae) в верховьях реки Хопер // Фауна и экология животных. 2002. Вып. 3. Пенза. Пензенский государственный педагогический университет им. В.Г. Белинского. С. 5254. Levin B.A. Elets Danilewskogo (Leuciscus: Cyprinidae) v verkhoviyakh reki Khoper // Fauna i ecologiya zhi-votnykh. 2002. Vyp. 3. Penza. Penzenskiy gosudarstvennyi universitet im. V.G. Belinskogo. S. 52-54. [Levin B.A. Danilewskiy dace (Leuciscus: Cyprinidae) in the upper reach of the Khoper River // Fauna and ecology of animals. 2002. No. 3. Penza. Penza State Pedagogical University named after V.G. Belinskiy. P. 52-54] Мовчан Ю.В., Смiрнов А1. Короповi // Фауна Украши. 1981. Т. 8. Риби. Ви. 2. Ч. 1. 424 с. Movchan Yu.V., Smir-nov A.I. Koropovi // Fauna Ukraini. 1981. T. 8. Ribi. Vi. 2. Ch. 1. 424 s. [Movchan Yu.V., Smirnov A.I. Koropovi // Fauna of Ukraine. 1981. V. 8. Fishes. No. 2. Pt. 1. 424 p.] In Ukrainian Щербуха А.Я. К систематике ельцов подрода Leuciscus из Сев. Донца и Днепра // Гидробиол. Журн. 1972. Т. 8. № 3. С. 69-75. Shcherbukha A.Ya. K sistematike el'tsov podroda Leuciscus iz Sev. Dontsa i Dnepra // Gidrobiol. Zhurn. 1972. T. 8. № 3. S. 69-75. [Shcherbukha A.Ya. To systematics of daces of subgenus Leuciscus from the Sev. Donets and Dnieper // Hydrobiological Journal. 1972. V. 8. No. 3. P. 69-75] In Russian Aljanabi S.M., Martinez I. Universal and rapid salt-extraction of high genomic DNA for PCR-based techniques // Nucleic Acids Research. 1997. Vol. 25. P. 4692-4693. Briolay J., Galtier N., Brito R.M., Bouvet Y. Molecular phylogeny of Cyprinidae inferred from cytochrome b DNA

sequences // Molecular phylogenetics and evolution. 1998. Vol. 9. P. 100-108. Costedoat C., Chappaz R., Barascud B., Guillard O., Gilles A. Heterogeneous colonization pattern of European Cypri-nids, as highlighted by the dace complex (Teleostei: Cyprinidae) // Molecular Phylogenetics and Evolution. 2006. Vol. 41. P. 127-148.

Durand J.D., Erhan U., Doadrio I., Pipoyan S., Templeton A.R. Origin, radiation, dispersion and allopatric hybridization in the chub Leuciscus cephalus // Proceedings of the Royal Society of London B: Biological Sciences. 2000. Vol. 267. P. 1687-1697.

Geiger M.F., Herder F., Monaghan M.T., Almada V., Barbieri R., Bariche M., ... & Denys G.P. Spatial heterogeneity in the Mediterranean Biodiversity Hotspot affects barcoding accuracy of its freshwater fishes // Molecular ecology resources. 2014. Vol. 14. P. 1210-1221.

Ketmaier V., Bianco P.G., Cobolli M., Krivokapic M., Caniglia R., De Matthaeis E. Molecular phylogeny of two lineages of Leuciscinae cyprinids (Telestes and Scardinius) from the peri-Mediterranean area based on cytochrome b data // Molecular Phylogenetics and Evolution. 2004. Vol. 32. P. 1061-1071. Levin B., Ermakov A., Ermakov O., Levina M., Sarycheva O., Sarychev V. 2016. Ukrainian Brook Lamprey Eudontomyzon mariae (Berg): Phylogenetic Position, Genetic Diversity, Distribution, and Some Data on Biology. In Orlov A. and Beamish R. (eds.) Jawless Fishes of the World. Vol. 1. Cambridge Scholars Publishing. P. 58-82. Levin B.A., Freyhof J., Lajbner Z., Perea S., Abdoli A., Gaffaroglu M., Özulug M., Rubenyan H.R., Salnikov V.B., Doadrio I. Phylogenetic relationships of the algae scraping cyprinid genus Capoeta (Teleostei: Cyprinidae). Molecular Phylogenetics and Evolution. 2012. Vol. 62. P. 542-549. Miller M.A., Pfeiffer W., Schwartz T. Creating the CIPRES Science Gateway for inference of large phylogenetic trees //

Proceedings of the Gateway Computing Environments Workshop (GCE). 14 Nov. 2010, New Orleans, LA. P. 1-8. Palumbi S. 1991. Simple fool's guide to PCR.

Perea S., Böhme M., Zupancic P., Freyhof J., Sanda R., Özulug M., ... & Doadrio I. Phylogenetic relationships and bio-geographical patterns in Circum-Mediterranean subfamily Leuciscinae (Teleostei, Cyprinidae) inferred from both mitochondrial and nuclear data // BMC Evolutionary Biology. 2010. Vol. 10. 1. Perdices A., Doadrio I. The molecular systematics and biogeography of the European cobitids based on mitochondrial

DNA sequences // Molecular Phylogenetics and Evolution. Vol. 19. P. 468-478. Posada D. jModelTest: phylogenetic model averaging // Molecular biology and evolution. 2008. Vol. 25. P. 1253-1256. Ronquist F., Huelsenbeck J.P. MrBayes3: Bayesian phylogenetic inference under mixed models // Bioinformatics. 2003. Vol. 19. P. 1572-1574.

Rothgänger J., Weniger M., Weniger T., Mellmann A., Harmsen D. Ridom TraceEdit: a DNA trace editor and viewer

// Bioinformatics. 2006. Vol. 22. P. 493-494. Tamura K., Stecher G., Peterson D., Filipski A., Kumar S. MEGA6: molecular evolutionary genetics analysis version

6.0 // Molecular biology and evolution. 2013. mst197. Zardoya R., Doadrio I. Molecular evidence on the evolutionary and biogeographical patterns of European cyprinids

// Journal of Molecular Evolution. 1999. Vol. 49. P. 227-237. http://www.ncbi.nlm.nih.gov/

PHYLOGENY OF LEUCISCUS DANILEWSKII (CYPRINIDAE) AS INFERRED

FROM mtDNA ANALYSIS

B. A. Levin

Papanin Institute of Biology of Inland Waters, IBIW RAS 152742 Borok, Nekouz distr., Yaroslavl Prov., Russia. E-mail: [email protected]

Phylogeny of endemic dace from the Don riverine system, Leuciscus danilewskii was reconstructed using cytochrome b sequences (1089 bp). Our results confirmed taxonomic status of that endemic form as separated species and revealed its sister position to Leuciscus leuciscus. The high genetic distance between two sister species (p-distance = 8.40±1.80%) suggests old divergence event from common ancestor. Despite high divergence between species, the hybridization has been detected in the Upper Don, where both species co-occur.

Keywords: cytochrome b, dace Leuciscus, phylogenetic analyses, MrBayes, Cyprinidae, Ponto-Caspian basin.