CC BY
59
УДК 619:317-619:616.982.2
новый перспективный аллерген (нрА) для диагностики туберкулеза у животных
В.г. ОЩЕПКОВ1, доктор ветеринарных наук, профессор
Н.Н. Кощеев2, кандидат ветеринарных наук, старший научный сотрудник
Омский институт (филиал) Российского экономического университета им. г.В Плеханова, ул. 10 лет Октября, 195, корп. 18, Омск, 644009, Российская Федерация
2Всероссийский научно-исследовательский институт бруцеллеза и туберкулеза животных, ул. Лермонтова, 93, Oмск, 644001, Российская Федерация
E-mail: vniibtg@mail.ru
Резюме. В последние годы обострилась проблема дифференциации специфических и неспецифических (пара- и псевдоаллергических) кожных реакций на диагностический ППД-туберкулин. Для определения их этиологии применяют несколько методов (внутривенная, симультанная, пальпе-бральная пробы и др.), которые довольно трудоемки и не во всех случаях дают однозначные, достоверные результаты. Мы изучили возможность использования для дифференциальной диагностики туберкулеза крупного рогатого скота внутрикожной пробы с рекомбинантным аллергеном, изготовленным по принципиально отличающейся современной генно-инженерной технологии (патент РФ 2360926). Первоначально в двух опытах на 26 морских свинках было выяснено, что на ППД-туберкулин могут реагировать (100%) животные, привитые противотуберкулезной вакциной БЦЖ, а также зараженные (60%) различными видами атипичных нетуберкулезных микобактерий (M.xenopi, M.intractllulare, M.scrofulaceum, M.smegmatis). Тогда как на испытуемый аллерген они не реагируют. В производственных опытах на крупном рогатом скоте, находящемся в 12 различных благополучных по туберкулезу хозяйствах трех регионов РФ (Омская, Тюменская области, Республика Татарстан), было также подтверждено, что новый рекомбинантный алерген (НРА) значительно превосходит по специфичности ППД-туберкулин: из 22913 гол. исследованныхвнутрикожной пробой с ППД-туберкулином на этот аллерген реагировало 416 (1,7%) животных, но ни одна из этих 416 гол. не дала положительной реакции на нра. Из 3 испытанных на крупном рогатом скоте доз (0,2, 1170-180, 8590 мкг/гол.) лучшие результаты обеспечила доза 85-90 мкг/ гол., которая была иммунологически специфичной и более экономичной. У крупного рогатого скота, находящегося в благополучных по туберкулезу хозяйствах, возникающие кожные аллергические реакции на ППД-туберкулин, можно надежно дифференцировать новым рекомбинантным аллергеном, используя его также во внутрикожной пробе в дозе 85-90 мкг/ гол. и с учетом реакции через 48-72 ч.
Ключевые слова: туберкулез крупного рогатого скота, неспецифические аллергические реакции, дифференциальная диагностика.
Для цитирования: Ощепков В.г., Кощеев Н.Н. Новый перспективный аллерген (нра) для диагностики туберкулеза у животных // Достижения науки и техники АПК. 2015. Т.29. №10. С. 91-94.
Туберкулез животных, используемых в сельскохозяйственном производстве, к сожалению, продолжает оставаться одной из наиболее распространенных инфекционных болезней, представляющих серьезную угрозу здоровью людей и препятствующих развитию животноводства, хотя следует заметить, что в борьбе с этой инфекцией во многих регионах достигнуты неплохие результаты.
При этом важно отметить, что в последние два десятилетия значимость основного метода массовой его
диагностики - аллергической кожной пробы - несколько понизилась, так как особо остро обозначилась проблема неспецифических аллергических реакций, обусловленных циркуляцией в стадах крупного рогатого скота и других видов сельскохозяйственных животных, так называемых, атипичных микобактерий и других патогенов, которые могут индуцировать у постоянного или временного хозяина пара- и псевдоаллергические реакции на диагностический аллерген (ППД-туберкулин). Эти реакции очень затрудняют оценку инфекционного статуса исследуемых животных, что во многих случаях приводит к преждевременному убою здорового продуктивного скота, нанося тем самым огромный экономический ущерб, который связан с потерями от недополучения приплода, молока, мяса и другой продукции, а также от вынужденного выполнения ряда дополнительных диагностических исследований.
Причинами неспецифических(пара- и псевдоаллергических) реакций могут быть атипичные (МБ-микобактерии) нетуберкулезного комплекса, нокардии, родококки, бактерии паратуберкулеза, патогенные актиномицеты, грибы, эхинококки и другие патогены биотической и абиотической природы.
Неспецифические парааллергические реакции, вызываемые чаще атипичными микобактериями, имеющими сходную морфологию и близкое антигенное родство с возбудителями туберкулеза, могут наблюдаться у значительной части исследуемого поголовья (до 5-10% и более), причем в одном и том же стаде (хозяйстве) несколько лет (до 2-3 лет и более) [1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8].
В нашей стране за последние 15 лет (1999-2013 гг.) проведено более 150 млн аллергических исследований крупного рогатого скота на туберкулез, причем в благополучных по этой болезни хозяйствах в некоторые годы (2002, 2006, 2007 гг. и др.) выявлялось в несколько раз больше реагирующих на ППД туберкулин животных, чем в неблагополучных.
Так, в целом по Российской Федерации с 2001 по 2008 гг. было выявлено 587075 гол. крупного рогатого скота, реагирующих на этот аллерген, из них в неблагополучных хозяйствах только 62778 гол., а в благополучных - 525297 гол., то есть в 8 раз больше [4].
В последующие годы (2009-2013 гг.) выраженная тенденция значительного преобладания числа реагирующих на применяемый диагностикум (ППД-туберкулин) в благополучных по туберкулезу хозяйствах продолжала сохраняться.
Сегодня для дифференциации неспецифических реакций предлагают разнообразные методы и приемы, среди которых можно назвать повторное исследование полной (10000 МЕ) или уменьшенной (5000 МЕ) дозой ППД-туберкулина, ИФА с моноклональными антителами, использование элективных питательных сред со стимуляторами роста МБ, определение в крови реагирующих животных у-интерферона в «сэндвич» -ИФА, клеточно-иммунологические методы РБТЛ, РТМЛ, серологические реакции - РСК, РНГА и др. Однако результаты их производственных испытаний пока не дают оснований для широкого практического применения.
В то же время используемые в ветеринарной практике официально утвержденные прижизненные методы и способы дифференциации истинных (специфических) и неспецифических (параспецифи-ческих) реакций на ППД-туберкулин (симультанная с комплексным аллергеном из атипичных микобакте-рий - КАМ, пальпебральная, глазная и внутривенная пробы с ППД-туберкулином), а также сопряженные со специальным диагностическим убоем и последующим исследованием органов, подозреваемых в заболевании туберкулезом животных (патологоанатомический, гистологический, бактериологический, биопроба на лабораторных животных, молекулярно-генетический -ПЦР и др.) далеко не всегда дают однозначный и надежный результат. Более того, основные из них (бактериологический, биопроба) очень затратны, трудоемки и длительны в исполнении (1-3 мес.) [1, 2, 7].
Такая ситуация, сложившаяся в диагностике туберкулеза крупного рогатого скота, обязывает ученых и специалистов-ветеринаров вести оперативный поиск, испытание и внедрение в производственную сферу новых экспресс-методов и диагностикумов дифференциации неспецифических аллергических реакций и быстрой постановки точного диагноза.
За последние 5 лет мы в содружестве с другими учеными Всероссийского НИИ бруцеллеза и туберкулеза животных (Л.А. Таллер, Г.М. Дюсенова, Е.Ю. Секин и др.) разработали три таких экспресс-метода, два из которых предназначены для прижизненной диагностики туберкулеза (хемилюминесцентный и кожно-аллергический дифференциальный) и один (комбинированный молекулярно-генетический) - для послеубойной диагностики (применяется после диагностического убоя животных). Все они быстро исполнимы (в течение 3-4 ч или 3-5 сут.) и сегодня находятся в стадии научно-производственной апробации [11, 12].
В представленной работе мы приводим материалы по испытанию одного из них - кожной аллергической пробы с новым рекомбинантным аллергеном, изготовленным по современной генно-инженерной технологии.
Цель исследований - дать сравнительную оценку специфичности и чувствительности нового рекомби-нантного аллергена и традиционного ППД-туберкулина в условиях благополучных и неблагополучных по туберкулезу стад крупного рогатого скота.
Условия, материалы и методы. Исследования проводили в лабораторных и производственных условиях.
Экспериментальные серии нового рекомбинантного аллергена (НРА) для ветеринарии изготовлены в 2009 г. фармацевтической фирмой «ЛЕККО» по оригинальной технологии авторов изобретения [8], но по рекомендованным нами диагностическим параметрам (различные концентрации специфического белка в диагностической дозе). В целом НРА готовили по генно-инженерной технологии аналогичной, использовавшейся при производстве аллергена для Диаскинтеста, применяемого в медицинской практике для диагностики туберкулеза и оценки его активности, а также для дифференциальной диагностики инфекционной и поствакцинальной (в том числе и вакцины БЦЖ) ал-
лергии [8]. НРА также как и аллерген для Диаскинтеста содержит специфический рекомбинантный белок CFP10-ESAT6, выделенный из патогенных микобакте-рий - возбудителей туберкулеза. Его в необходимых количествах синтезируют кишечные бактерии (Е.соН), в геном которых предварительно встраивается плазмида (рЕТ22Ь) с геном ^р^а^.
В наших исследованиях использованы три диагностические дозы НРА: 0,2 мкг в опытах на лабораторных животных (морские свинки); 90 и 180 мкг - в производственных условиях на крупном рогатом скоте. Две последние дозы были взяты с учетом содержания специфического белка в ППД-туберкулине. При этом мы исходили из того, что одна туберкулиновая единица (ТЕ или международная единица - МЕ) содержит 0,2 мкг белка (ГОСТ 32306-2013 «Туберкулины очищенные (ППД) для животных»), то есть она практически равна дозе аллергена из Диаскинтеста, используемого для людей. В стандартном туберкулине (ППД-туберкулин), применяемом в ветеринарии, содержится 850-900 мкг белка в 1 мл, следовательно, одна диагностическая доза содержит 170-180 мкг белка в 0,2 мл (такой объем ППД-туберкулина на одно животное используется в диагностических целях для крупного рогатого скота) - это соответствует содержанию 10000 ТЕ (МЕ) в таком диагностикуме.
В лабораторных условиях специфичность и чувствительность НРА и ППД-туберкулина была предварительно сопоставлена в трех экспериментах, проведенных совместно с М.А. Бажиным, Л.А. Таллер, Г.М. Дюсено-вой и Т. Янченко на 110 морских свинках.
В первом эксперименте на 15 морских свинках была дана сравнительная оценка специфичности НРА и ППД-туберкулина при исследовании животных, зараженных вирулентным возбудителем туберкулеза и привитых вакциной БЦЖ.
Во втором и третьем - на 95 морских свинках определяли специфичность показаний НРА и ППД-туберкулина при исследовании животных, зараженных разными видами атипичных микобактерий не туберкулезного комплекса (M.xenopi, М^п^асе11и1аге, М^сго^1асеит, M.smegmatis), выделенных от крупного рогатого скота из благополучных по туберкулезу хозяйств.
В производственных условиях апробацию нового аллергена проводили на 22913 гол. крупного рогатого скота (коровы, нетели, телки старше года), содержащихся в 14 хозяйствах четырех регионов Российской Федерации: Омская, Новосибирская, Тюменская области и Республика Татарстан. Все научно-производственные опыты осуществляли также с использованием НРА и ППД-туберкулина.
Первоначально животных исследовали традиционным аллергеном (ППД-туберкулином) в соответствии с наставлением по диагностике туберкулеза животных [7], а затем реагирующих на него особей через 2 сут. исследовали НРА. Испытываемый аллерген (НРА) вводили также как и ППД-туберкулин - внутрикожно, в среднюю треть шеи, в объеме 0,2 мл. НРА инъецировали шприцом,
Таблица 1. результаты исследования морских свинок, подвергавшихся вакцинации БцЖ и затем заражению патогенными микобактериями (п=5)
Группа Реагировали на аллерген Патологические изменения в органах Наличие в организме патогенных МБ*
после вакцинации после заражения
ППД I НРА ППД I НРА
* * 1 1 5 1 1 1 1 5 5 1 5 i О 5 i О 5 i
* не вакцинированные БЦЖ
** контроль (интактные), не вакцинировали и не заражали
Таблица 2. диагностическая значимость нрА и ППд туберкулина в благо-
получных по туберкулезу хозяйствах (гол. )*
Регион Хозяйство Исследовано Реагировало на
ППД-туберкулин НРА
Омская область ОПХ «Боевое» 3572 26 0
ЗАО «Солнцево» 1670 22 0
1676 16 0
СПК «Лесное» 2091 7 0
ЗАО «Ясно-Полянское» 1091 55 0
СПК «Большевик» 1110 98 0
1671 78 0
СПК «Сибиряк» 2937 45 0
АК «Ударный» 518 39 0
Республика ООО А/Ф «Золотой Колос» 856 5 0
Татарстан ООО «Зай» 1522 6 0
ООО «Союз Агро»
703 5 0
Тюменская СПК «Таволжан» 1768 46 0
область СПК «Сибэталон» 1728 18 0
Всего 22913 416 0
* в результате бактериологического исследования во всех хозяйствах выделены атипичные МБ
а ППД-туберкулин - безигольным инъектором БИ-7. Учет и оценку аллергической реакции осуществляли через 72 ч по бинарной схеме: положительная или отрицательная. Положительной считали реакцию, если увеличение толщины кожной складки при измерении кутиметром составляло 3 мм и более. Отрицательной - если в месте введения аллергенов изменения, которые можно было заметить визуально или при измерении кожной складки, отсутствовали или не превышали 3 мм.
результаты и обсуждение. Лабораторные эксперименты показали, что НРА вызывает кожные аллергические реакции у морских свинок, зараженных только патогенными микобактериями - возбудителями туберкулеза (M.tuberculosis, M.bovis). В то же время при использовании ППД-туберкулина отмечали аналогичную реакцию как у животных, инфицированных патогенными микобактериями, так и у части зараженных атипичными, особенно в тех случаях, когда морских свинок инфицировали трехкратно атипичными микобактериями видов M.intracellulare, M.xenopi, M.scrofulaceum, M.smegmatis.
Важно также отметить, что морские свинки, вакцинированные противотуберкулезной вакциной БЦЖ, на НРА не реагировали (табл. 1). Положительную реакцию у них наблюдали лишь в том случае, когда после вакцинации развивался слабый иммунитет, и в организме начинали приживаться микобактерии из вирулентной культуры M.bovis, введенные экспериментально на фоне ослабленного иммунитета. То есть положительные аллергические реакции на НРА сигнализируют об изменении у некоторых морских свинок иммунного статуса на инфекционный.
Так, в одном из лабораторных экспериментов появление положительной аллергической реакции на НРА засвидетельствовало наличие у одной из пяти вакцинированных морских свинок патогенных микобактерий (M.bovis, шт.8), в органах (легкие, печень) которой произошли патологоана-томические изменения, характерные для туберкулеза. При этом положительные аллергические реакции на ППД-туберкулин были отме-
чены у всех морских свинок после вакцинации, что не давало никакой возможности объективно судить о статусе животных.
Производственные испытания НРА,проведенные на крупном рогатом скоте, также показали, что аллерген выявляет особей,зараженных только патогенными микобактериями, в частности, M.bovis (основной возбудитель туберкулеза у этого вида животных).
Во всех 12 благополучных по туберкулезу хозяйствах, где у крупного рогатого скота отсутствовал возбудитель туберкулеза (M.bovis или M.tuberculosis), но присутствовали атипичные мико-бактерии различных видов (M.scrofulaceum, M.smegmatis, M.gordone и др.) на НРА не реагировало ни одно животное, тогда как при использовании ППД-туберкулин отмечена положительная реакция у 5-98 гол. в основном лактирую-щих коров. Следует отметить, что реакции отсутствовали на все три испытуемые дозы НРА: 0,4 мкг, 85-90 мкг и 170-180 мкг, инъецированные в кожу в объеме 0,2 мл диагностического раствора, хотя две последние дозы по расчетным данным соответствовали 5 и 10 тыс. туберку-лоединиц (МЕ), содержащихся в ППД-туберкулине.
Совершенно другими оказались результаты в неблагополучных стадах, где предварительно туберкулез установили производственные ветеринарные лаборатории (табл. 3). В таких стадах часть животных (от 2 до 10 гол.) довольно активно реагировала на внутри-кожную пробу с НРА. Причем выраженность реакций на дозы 90 и 180 мкг была практически одинаковой. На дозу 0,4 мкг (двойная медицинская) у большинства животных видимая аллергическая реакция отсутствовала и только у 3 отмечено утолщение кожной складки в месте ее введения на 1-2 мм.
У животных с выраженными кожными реакциями на НРА туберкулезная инфекция была подтверждена и другими методами (патологоанатомическими, бактериологическими).
Значительно меньшее число коров, реагирующих на НРА, чем на ППД-туберкулин, в неблагополучных стадах мы объясняем двумя наиболее вероятными обстоятельствами:
во-первых, наличием значительного числа животных с неспецифическими реакциями на ППД-туберкулин (о такой возможности свидетельствуют результаты его применения в благополучных стадах);
во-вторых, некоторыми различиями в антигенном спектре специфического белка, находящегося в НРА,
Таблица 3. диагностическая значимость нрА и ППд туберкулина в неблагополучных по туберкулезу хозяйствах (гол.)*
Регион Хозяйство Исследовано Реагировало на
ППД | НРА
Новосибирская ООО «Маяк» 207 27 4
область 234 18 10
Республика Татарстан ООО «Золотая Нива» 349 33 2
Всего 790 78 16
* в результате бактериологического исследования во всех хозяйствах выделены возбудители туберкулеза
и у отдельных штаммов возбудителей (M.bov/s), циркулирующих в стадах крупного рогатого скота.
При этом более вероятно первое предположение, особенно с учетом того, что второе обстоятельство, если и соответствует в определенной мере действительности, не может служить большим препятствием для применения НРА в качестве группового теста, дифференцирующего специфические для возбудителя туберкулеза реакции и неспецифические, вызванные атипичными микобактериями и другими патогенами инфекционной, паразитарной или неинфекционной природы (стресс, аутоиммунные парадоксы и др.), поскольку наиболее актуальная, требующая незамедлительного решения, проблема - не просто диагностика туберкулеза, а его дифференциальная диагностика на фоне неспецифических реакций на ППД туберкулин.
выводы. Проведенные исследования в лабораторных и производственных условиях показали, что новый рекомбинантный аллерген (НРА), полученный по современной генно-инженерной технологии и примененный в кожно-аллергической пробе, обладает необходимой чувствительностью и более высокой специфичностью,
чем традиционный ППД-туберкулин, и поэтому подлежит дальнейшему более широкому испытанию в разных регионах Российской Федерации в качестве диагностикума в кожно-аллергическом дифференциальном тесте (КАД-тесте). Этот тест особенно актуален для тех регионов и хозяйств, где неспецифические реакции у крупного рогатого скота на ППД туберкулин имеют значительное рапространение и препятствуют интенсивному ведению животноводства.
Из испытанных доз НРА наиболее приемлемой для групповой оценки состояния стад крупного рогатого скота по туберкулезу оказалась 85-90 мкг, вводимая внутрикожно в объеме 0,2 мл диагностического раствора.
В процессе дальнейших испытаний НРА особое внимание следует уделить индивидуальной оценке инфекционного состояния животных, реагирующих на аллерген, особенно в благополучных по туберкулезу стадах, а также изысканию возможности снижения себестоимости аллергена (в том числе путем оптимизации диагностической дозы) и экономическому обоснованию его массового применения.
Литература.
1. Донченко А.С., Овдиенко Н.П., Донченко Н.А. Диагностика туберкулеза крупного рогатого скота. Новосибирск, 2004. 309 с.
2. Новый способ определения сенсибилизирующих свойств атипичных микобактерий / Н.Н. Кощеев, В.Ф. Бордюг,
B.Г. Ощепков, А.Д. Панкратова, А.Д. Слепченко //Инфекционная патология животных: Мат. Международ. конф. Омск: Амфора, 2011. С. 102-105
3. Кощеев Н.Н., Бажин М.А., Бордюг В.Ф. Способ профилактики парааллергических реакций у крупного рогатого скота: Рекомендации. Омск: РАСХН. Сиб. отд-е, ВНИИБТЖ. 8 с.
4. Найманов А.Х., Толстенко Н.Г., Ткач Н.М. Эпизоотологическая ситуация по туберкулезу крупного рогатого скота в Российской Федерации// Современные проблемы диагностики и профилактики хронических зооантропонозных инфекций. Омск: ВНИИБТЖ, 2009. С.140-142.
5. Yanfen Du, Yingfang Qi, Lu Yu, Jingkai Lin, Siguo Liu, Hongbo Ni, Hai Pang, Huifang Liu, Wei Si, Hailing Zhao, Chunlai Wang. Molecular characterization of Mycobacterium tuberculosis complex (MTBC) isolated from cattle in northeast and northwest // China Research in Veterinary Science. 2011. Vol. 90. Issue 3. P. 385-391.
6. Franck Biet, Maria Laura Boschiroli. Non-tuberculous mycobacterial infections of veterinary relevance // Research in Veterinary Science. 2014. Vol. 97. P. S69-S77
7. Наставление по диагностике туберкулеза животных. М., 2002. 64 с.
8. Описание к изобретению к патенту РФ №2360926 с коррекцией от 10.09.2009. - Авторы В.И. Киселев, М.А. Пальцев. -М., 2009. Бюл. № 25.
9. Ощепков В. Г., Таллер Л.А., Дюсеннова Г.М. Динамика проявления неспецифических реакций на туберкулин у крупного рогатого скота в хозяйствах, благополучных по туберкулезу // Инфекционная патология животных: Сб.науч.тр. Омск, 2001.
C. 211-215.
10. О значении симультанной аллергической пробы с КАМ при диагностических исследованиях крупного рогатого скота на туберкулез/В.Г. Ощепков, Л.А. Таллер, Н.И. Овсянов, Г.М. Дюсенова//Эпизоотология, диагностика и профилактика хронических инфекционных болезней животных: Сб.тр.междунар. конф. ВНИИБТЖ. Омск. 2003. С. 20-29.
11. Дифференциациальная диагностика туберкулеза с применением хемилюминесцентного метода /В.Г. Ощепков, Л.А. Таллер, Г.М. Дюсенова, Е.Ю. Секин, Т.А. Вассимирская//Достижения науки и техники АПК. 2009. № 12. С.41-44.
12. Культурально-генетический метод диагностики туберкулеза крупного рогатого скота / В.Г. Ощепков, Л.А. Таллер, Е.Ю. Секин, Т.А. Вассимирская, А.Д. Слепченко //Достижения науки и техники АПК. 2010. № 5. С. 64-66.
new promising allergen (nra) for the diagnosis of tuberculosis in animals
1V.G. Oschepkov, 2N.N. Koshcheev
'Omsk Institute (branch) of the Russian Economic University by G.V. Plekhanov, ul. 10 Let Oktyabrya, 195, corp. 18, Omsk, 644009, Russian Federation
2All-Russian research institute of brucellosis and tuberculosis of animals, ul. Lermontovа, 93, Omsk, 644001, Russian Federation Summary. In recent years the problem aggravated of the differentiation of specific and unspecific (para- and pseudoallergic) skin reactions to the diagnostic PPD-tuberculin. There are used several methods (intravenous, simultaneous, palpebral tests, etc.) for differentiate the etiology of these reactions. However, the used methods are rather labor-intensive and do not yielded unambiguous, reliable results in all cases. We studied the possibility to use the intradermal test with recombinant allergens for the differential diagnosis of tuberculosis in cattle. This allergen is made according to fundamentally different modern genetic-engineering technology (the patent of the Russian Federation 2360926). Initially in two experiments with 26 guinea pigs it was revealed, that animals (100%), inoculated with antitubercular BCG vaccine, as well as animals (60%), infected with different types of atypical non-tuberculous mycobacteria (M. xenopi, M. intractllulare, M. scrofulaceum, M. smegmatis), can react to the PPD-tuberculin. And these animals do not react on the new test allergen. In the industrial experiments with cattle from 12 different farms from three region of Russia (Omsk, Tyumen regions, the Republic of Tatarstan), which are safe in tuberculosis, it was confirmed, that the new recombinant allergen (NRA) significantly exceeds PPD-tuberculin on the specificity. 22913 animals were studied by the intradermal test with PPD-tuberculin, and 416 animals (1.7 %) reacted on this allergen. At that no animals reacted to the NRA. We tested three doses on cattle (0.2, 1170-180 and 85-90 microgram/head), and the best results were provided by the dose of 85-90 microgram/head, which was immunologically more specific more economical. In cattle from farms, safe in tuberculosis, the appearing skin allergic reactions to PPD-tuberculin can be reliably differentiated by the new recombinant allergen, using it also in the intradermal test at the dose of 85-90 microgram/head and taking into account, that the reaction appears in 48- 72 hours. Keywords: bovine tuberculosis, non-specific allergic reactions, differential diagnosis.
Author Details: V.G. Oschepkov, D. Sc. (Vet.), prof., N.N. Koshcheev, Cand. Sc. (Vet.), senior researcher fellow (E-mail: vniibtg@mail.ru) For citation: Oschepkov V.G., Koshcheev N.N. New Promising Allergen (NRA) for the Diagnosis of Tuberculosis in Animals. Dostizheniya naukii tekhnikiAPK. 2015. V.29. No10. pp. 91-94 (In Russ).
