CC BY
42
DOI: 10.24411/0235-2451-2018-10109 УДК 619:616.981.42:616-07:591.111
НОВЫЕ СХЕМЫ ПОЛУЧЕНИЯ БРУЦЕЛЛЕЗНЫХ АНТИВИДОВЫХ МОНОСПЕЦИФИЧЕСКИХ СЫВОРОТОК ANTI-ABORTUS И ANTI-MELITENSIS
П.К. АРАКЕЛЯН1, доктор ветеринарных наук, зав. лабораторией (e-mail: vniibtg@rambler.ru)
Т.А. ЯНЧЕНКО1, кандидат биологических наук, старший научный сотрудник
Г.В. РАЗНИЦЫНА1,научный сотрудник А.С. ДИМОВА2, кандидат ветеринарных наук, зав. лабораторией
С.К.ДИМОВ2, доктор ветеринарных наук, ведущий научный сотрудник
всероссийский научно-исследовательский институт бруцеллеза и туберкулеза животных, ул. Лермонтова, 93, Омск, 644001, Российская Федерация 2Сибирский федеральный научный центр агро-биотехнологий РАН, пос. Краснообск, Новосибирский р-н, Новосибирская обл., 630501, Российская Федерация
Резюме. Изучали различные схемы получения антивидовых моноспецифических сывороток на основе убитых культур бруцелл в сочетании с масляным адъювантом MONTANIDETMISA 61 VG («SEPPIC», Франция), необходимых для бактериологической диагностики бруцеллеза. Исследования проводили в 2015-2016 гг. на базе Всероссийского научно-исследовательского института бруцелеза и туберкулеза животных. Для получения сыворотки anti-melitensis из здоровых кроликов сформировали две группы по 3 особи. Животным I группы вводили однократно внутривенно 1 мл живой культуры B. melitensis 16М (200 млн КОЕ/мл); II -однократно подкожно 1 мл инактивированной культуры B. melitensis 16М (200 млн КОЕ/мл) в смеси с адъювантом (40 и 60 % соответственно). Для получения сыворотки anti-abortus сформировали 4 группы по 3 кролика. Особям I группы вводили однократно внутривенно 1 мл смеси из взвеси инактиви-рованной и живой культур В. abortus 19 концентрацией 4109 КОЕ/мл (1:1); II, III и IVгрупп - однократно подкожно в область подгрудка 1 мл инактивированной культуры В. abortus 19 (200, 100 и 300 млн КОЕ/мл соответственно) в смеси с адъювантом. Сыворотки anti-melitensis и anti-abortus получали при адсорбции взвесью бруцелл гетерологичных видов. Оптимальными были схемы, испытанные на животных II-х групп. При этом сыворотки сохраняли свою активность (реакция агглютинации в разведении не ниже 1:160) в течение не менее 6 месяцев после получения из крови, взятой через 21, 28, 35 и 60 дней после гипериммунизации. Сыворотки, полученные от кроликов I-х групп при их обескровливании через 5-7 дней после иммунизации, теряли диагностическую активность в течение 28-35 дней. Использование адъюванта повышает противоэпидемическую безопасность процесса. Ключевые слова: бруцеллы, антивидовые моноспецифические сыворотки anti-abortus и anti-melitensis, схемы получения, гипериммунизация, инактивированные культуры, адъювант MONTANIDETMISA 61 VG.
Для цитирования: Схемы получения бруцеллезных антивидовых моноспецифических сывороток anti-abortus и anti-melitensis / П.К. Аракелян, Т.А. Янченко, Г.В. Разницына и др.// Достижения науки и техники АПК. 2018. Т. 32. № 1. С. 43-46.
Бруцеллез - зооантропоноз, представляющий большую опасность, как для животных, так и для людей. Существуют различные виды возбудителей этого заболевания. Среди сельскохозяйственных животных наиболее распространены Brucella abortus и B. melitensis. В случае возникновения вспышки бруцеллеза принципиально важно объективно уста-
новить вид возбудителя, так как от этого зависит выбор оптимальной схемы противобруцеллезных мероприятий.
Для дифференциации возбудителей этой инфекции в бактериологической диагностике в качестве одного из основных методов используют антивидовые моноспецифические бруцеллезные сыворотки. Принцип их получения заключается в достижении высокого уровня антител благодаря гипериммунизации животных-продуцентов (кроликов) культурами возбудителя с последующей адсорбцией полученных сывороток взвесью бруцелл гетерологичного вида для удаления общих для них антител [1, 2, 3].
Сегодня наиболее известны два способа получения антивидовых моноспецифических бруцеллезных сывороток - anti-melitensis [4] и anti-abortus [5], суть которых заключается в однократном получении гипериммунной сыворотки при обескровливании животных-продуцентов через 5-7 дней после их внутривенной иммунизации живыми культурами бруцелл соответствующего вида.
К принципиальным недостаткам обоих способов относят трудоемкость, эпидемическую опасность, связанную с использованием живых культур B. melitensis и B. abortus, небольшой выход конечных продуктов и высокую себестоимость из-за возможности только однократного получения сывороток с необходимым титром антител от животных-продуцентов при обескровливании.
Живые культуры бруцелл для гипериммунизации животных-продуцентов всегда использовали вынужденно, так как получить гипериммунную сыворотку с высоким титром антител с помощью убитой культуры было невозможно из-за отсутствия эффективных безвредных адъювантов, способных компенсировать и даже усилить гуморальный ответ.
Французский препарат MONTANIDE™ISA 61 VG (производитель - фирма «SEPPIC») - готовый к использованию масляный адъювант для вакцин, способный создавать эмульсии «вода в масле». Он включает особое обогащенное светлое минеральное масло и высокоочищенное ПАВ, полученное из маннитола и очищенной олеиновой кислоты растительного происхождения. Препарат не содержит компонентов животного происхождения. Рецептуры вакцин с MONTANIDE™ISA 61 VG вызывают сильный и продолжительный иммунный ответ. По сравнению с традиционными масляными эмульсиями, суспензия с ним устойчива, стабильна и легко вводима. Для приготовления 100 г вакцины обычно необходимо 60 г MONTANIDE™ISA 61 VG и 40 г водной антигенной среды. Стабильные эмульсии получают при интенсивном перемешивании антигенной среды и адъюванта MONTANIDE™ISA 61 VG при комнатной температуре или ниже [6].
Цель исследований - разработка новых схем получения малотрудоемких, эпидемически безопасных, экономически выгодных и высокоэффективных
бруцеллезных антивидовых моноспецифических сывороток anti-abortus и anti-melitensis на основе убитых культур бруцелл в сочетании с современным адъювантом MONTANIDE™ISA 61 VG.
Условия, материалы и методы. Работу проводили в 2015-2016 гг. на базе лаборатории специфической профилактики бруцеллеза ФГБНУ ВНИИБТЖ. Штаммы бруцелл из «Биоресурсной коллекции» ВНИИБТЖ, отвечающие паспортным данным, высевали на эритрит агар или мясо-пептонный печеночный глюкозо-глицериновый агар (МППГГА). После 2-3-суточного роста бактериальную массу смывали с поверхности питательной среды физиологическим раствором с добавлением 0,5 % фенола. Полученную взвесь бруцелл сливали через двойной марлевый фильтр в колбы и инактивировали прогреванием на водяной бане при температуре 80 0С в течение 60 мин., периодически помешивая. Проверяли на чистоту и стерильность путем засева на питательные среды (мясо-пептонный агар, мясо-пептонный бульон и среду Сабуро).
Взвесь убитой культуры штамма B. melitensis 16М с добавлением адъюванта MONTANIDE™ISA 61 VG при комнатной температуре интенсивно перемешивали на магнитной мешалке или шуттель-аппарате. Для приготовления 10 мл суспензии брали 4 мл взвеси и 6 мл адъюванта.
В качестве животных-продуцентов использовали кроликов. Кровь от животных опытных групп в целях получения сывороток брали на 7, 14, 21, 28, 45, 60 и 90 дни после введения антигенов. Исследование полученных сывороток проводили в реакции агглютинации (РА) с антигенами, приготовленными из B. abortus 544 и B. melitensis 565 до и после адсорбции, согласно общепринятой методике [4]. Перед адсорбцией сыворотки инактивировали при 60-65 °С в течение 1-1,5 ч и обезвреживали мертиолатом натрия до конечной концентрации 1:10000. В дальнейшем проводили адсорбцию полученных сывороток anti-melitensis бактериальной массой штамма В. abortus 544, anti-abortus - бактериальной массой B. melitensis 565 в дозе 3,5-3,7х109К0Е/мл на 10 мл сыворотки. В последующем смесь инкубировали при 37 °С в течение 2-х часов и восстанавливали путем центрифугирования в течение 30 мин. при 5000 об./мин.
В эксперименте по получению бруцеллезной моноспецифической сыворотки anti-melitensis из здоровых кроликов, предварительно проверенных на бруцеллез серологическими методами, сформировали две группы по 3 головы в каждой. Животным I группы вводили однократно внутривенно живую культуру B. melitensis 16М в дозе 200 млн КОЕ/мл в объеме 1 мл. Кроликам II группы вводили однократно подкожно инактивированную культуру B. melitensis 16М в дозе 200 млн КОЕ/мл в смеси с адъювантом в объеме 1 мл.
В опыте получению бруцеллезной моноспецифической сыворотки anti-abortus изучали сравнительную эффективность четырех схем получения бруцеллезной моноспецифической сыворотки anti-abortus, для чего из здоровых кроликов, предварительно проверенных на бруцеллез серологическими методами, сформировали 4 группы по 3 кролика в каждой. Животным I группы вводили однократно внутривенно смесь из инактивированной взвеси вакцинного штамма В. abortus 19 и взвеси живой культуры того же
штамма концентрацией 4х109 КОЕ/мл (1:1) в объеме 1 мл. Кроликам II группы ввели однократно подкожно в область подгрудка инактивированную культуру В. abortus 19 в дозе 200 млн КОЕ/мл в смеси с адъювантом MONTANIDE™ISA 61 VG в общем объеме 1 мл. Кроликам III группы вводили однократно подкожно в область подгрудка инактивированную культуру В. abortus 19 в дозе 100 млн КОЕ/мл в смеси с адъювантом MONTANIDE™ISA 61 VG в общем объеме 1 мл. Животным IV группы вводили однократно подкожно в область подгрудка инактивированную культуру В. abortus 19 в дозе 300 млн КОЕ/мл в смеси с адъювантом MONTANIDE™ISA 61 VG в общем объеме 1 мл.
Результаты и обсуждение. В опыте по получению бруцелезной сыворотки anti-melitensis РА с сыворотками крови от кроликов на 7 день после их сенсибилизации в I группе была положительной с антигенами инактивированных культур B. abortus и B. melitensis до адсорбции в разведении 1:401:80 и 1:80-1:160, после адсорбции - в разведении 1:20 и 1:160-1:320 соответственно; во II группе до адсорбции - 1:80 и 1:40, после - 0-1:10 и 1:40-1:80 соответственно.
РА с сыворотками крови от кроликов на 14 день после их сенсибилизации в I группе до адсорбции была положительной с антигенами инактивированных культур B. abortus и B melitensis в разведении 1:1601:2560 и 1:80-1:1280, после адсорбции - 1:10-1:20 и 1:160- 1:320 соответственно; во II группе до адсорбции - 1:160-1:1280 и 1:160-1:1280, после - 0-1:20 и 1:80-1:160 соответственно.
РА с сыворотками крови от кроликов на 21 день после их сенсибилизации, в I группе до адсорбции была положительной с антигенами инактивированных культур B. abortus и B. melitensis в разведении 1:160-1:320 и 1:80-1:640, после - 1:10 и 1:320 соответственно; во II группе до адсорбции - 1:40-1:160 и 1:80-1:640, после - 1:10 и 1:320-1:640 соответственно.
РА с сыворотками крови от кроликов на 28 день после их сенсибилизации, в I группе до адсорбции была положительной с антигенами инактивированных культур B. abortus и B. melitensis в разведении 1:160 и 1:1280-1:2560, после адсорбции - 1:10 и 1:160-1:320 соответственно; во II группе до адсорбции - 1:6401:1280 и 1:640-1:2560, после - 1:10-1:20 и 1:320 соответственно.
РА с сыворотками крови от кроликов на 35 день после их сенсибилизации, в I группе до адсорбции была положительной с антигенами инактивированных культур B. abortus и B. melitensis в разведении 1:1601:320 и 1:1280-1:2560, после адсорбции - 1:40-1:160 и 1:80-1:320 соответственно; во II группе до адсорбции 1:640-1:1280 и 1:640-1:2560, после - 1:10 и 1:320 соответственно.
РА с сыворотками крови от кроликов на 60 день после их сенсибилизации в I группе до адсорбции была положительной с антигенами инактивированных культур B. abortus и B. melitensisв разведении 1:1601:320 и 1:1280-1:2560, после адсорбции - 1:40-1:160 и 1:80-1:320 соответственно; во II группе до адсорбции 1:640-1:1280 и 1:640-1:2560, после - 1:10 и 1:320 соответственно.
РА с сыворотками крови от кроликов на 90 день после их сенсибилизации в I группе до адсорбции была положительной с антигенами инактивированных культур B. abortus и B. melitensis в разведении 1:160-1:320 и 1:160-1:640, после адсорбции - 1:40
Таблица 1. Результат исследования anti-melitensis-моноспецифических сывороток на 28 день после сенсибилизации (адсорбция сывороток 3,5 млрд. КОЕ/мл на 10 мл сыворотки) и через 6 месяцев после хранения
Группа (штамм, доза и метод сенсибилизации)
№ кролика
через 28 дней после первого введения антигена
Сроки сследования
РА с B. abortus 544
РА сВ. melitensis 16М
через 6 месяцев хранения сыворотки
РА с В. abortus 544
РА с В. melitensis 16М
I группа B. melitensis 16М 1 10++++ (живая) 200 млн КОЕ/мл, вну- 2 10+++ тривенно 3 10++++
II группа B. melitensis 16М, 4 20++++ (инактивированная)200 млн 5 10+++ КОЕ/мл + адъювант, подкожно 6_10+++
320++ 160++ 320++ 320+++ 320++ 320++
10++++ 10+++ 10++++ 10++++ 10+++ 10+++
160++ 160++ 320++ 320+++ 160++ 320++
и 1:80-1:160 соответственно; во II группе до адсорбции - 1:320 и 1:640, после - 1:20 и 1:80-1:160 соответственно.
Очевидно, что оптимальной была схема получения бруцеллезной моноспецифической сыворотки anti-melitensis, испытанная на животных II группы, в которой использовали однократную подкожную гипериммунизацию в область подгрудка суспензией инактивированной культуры B. melitensis в смеси с масляным адъювантом MONTANIDE™ISA 61 VG.
Через 6 месяцев после хранения бруцеллезных моноспецифических сывороток anti-melitensis, полученных от кроликов, гипериммунизированных по разным схемам, проверили их диагностическую активность (табл.1).
Установлено, что сыворотка, полученная по схеме, предусматривающей однократную подкожную гипериммунизацию 61 VG, сохранила свою активность (РА в разведении не ниже 1:160) в течение не менее 6 месяцев после ее получения из крови, взятой через 21, 28, 35 и 60 дней после гипериммунизации, в отличие от сыворотки, полученной при однократной внутривенной гипериммунизации живой культурой B. melitensis без адъюванта, потерявшей активность на 28-35 день.
В опыте по получению сыворотки anti-abortus РА с сыворотками крови от кроликов на 7 день после их сенсибилизации в I группе была положительной до адсорбции с антигенами убитых культур B. abortus и B. melitensis в разведении 1:80-1:160 и 1:80, после адсорбции - 1:320 и 0-1:10 соответственно; во II группе до адсорбции -1:40-1:80 и 0-1:80, после -1:20-1:40 и 0-1:10; в III группе до адсорбции - 1:401:80 и 0-1:80, после - 1:20-1:40 и 0-1:10; в IV группе до адсорбции -1:40-1:80 и 0-1:80, после - 1:20-1:40 и 0-1:10 соответственно.
РА с сыворотками крови от кроликов на 14 день после их сенсибилизации в I группе была положительной до адсорбции с антигенами убитых культур B. abortus и B. melitensis в разведении 1:640-1:2560
и 1:1280-1:2560, после адсорбции - 1:160 и 1:10-20 соответственно. Во II группе до адсорбции -1:3201:1280 и 1:80-1:1280, после - 1:160- 1:320 и 0-1:10 соответственно; в III группе до адсорбции -1:80-1:320 и 1:80-1:320, после - 1:20-1:160 и 0-1:10; в IV группе до адсорбции -1:320-1:1280 и 1:160-1:1280, после -1:160-1:320 и 0-1:10 соответственно.
РА с сыворотками крови от кроликов на 21 день после их сенсибилизации в I группе была положительной до адсорбции с антигенами убитых культур B. abortus и B. melitensis в разведении 1:160-1:320 и 1:640-1:1280, после адсорбции - 1:160 - 1:1280 и 1:20 соответственно. Во II группе до адсорбции -1:1601:1280 и 1:80-1:1280, после - 1:160 и 0-1:20 соответственно; в III группе до адсорбции - 1:80-1:160 и 0-1:80, после - 1:80 и 0-1:10; в IV группе до адсорбции -1:320-1:1280 и 1:160-1:1280, после -1:160-1:320 и 0-1:20 соответственно.
РА с сыворотками крови от кроликов на 28 день после их сенсибилизации в I группе была положительной до адсорбции с антигенами убитых культур B. abortus и B. melitensis в разведении 1:160 и 1:6401:1280, после адсорбции - 1:160-1:320 и 1:20-1:40 соответственно. Во II группе до адсорбции -1:3201:640 и 1:640-1:1280, после - 1:320 и 0-1:10 соответственно; в III группе до адсорбции -1:80-1:320 и 0-1:80,после - 1:20-1:160 и 0-1:10; в IV группе до адсорбции -1:640 и 1:640-1:1280, после -1:320 и 0-1:10 соответственно.
РА с сыворотками крови от кроликов на 35 день после их сенсибилизации в I группе была положительной до адсорбции с антигенами убитых культур B. abortus и B. melitensis в разведении 1:160 и 1:640-1:1280, после адсорбции - 1:80-1:160 и 1:10 соответственно. Во II группе до адсорбции - 1:320-1:640 и 1:320-1:1280, после - 1:320 и 0-1:10 соответственно; в III группе до адсорбции - 1:160 и 1:80-1:320, после - 1:80 и 0-1:10; в IV группе до адсорбции -1:640 и 1:320-1:1280, после - 1:320 и 0-1:10 соответственно.
Таблица 2. Результат исследования anti-abortus-моноспецифических сывороток на 28 день после сенсибилизации (адсорбция сывороток 3,5 млрд КОЕ/мл на 10 мл сыворотки) и через 6 месяцев хранения
Группа (штамм, доза и метод сенсибилизации) № кролика Срок исследования
через 28 дней после первого введения антигена через 6 месяцев хранения сыворотки
РА с В. abortus 544 РА с В. melitensis 565 РА с В. abortus 544 РА с B. melitensis 565
I группа B.abortus 19 живая + 1 160МЕ+++ 640МЕ++++ 160МЕ+++ 20МЕ++++
инактивированная (1:1), 4 2 160МЕ+++ 1280МЕ++++ 320МЕ++ 40МЕ++
млрд КОЕ /мл, внутривенно 3 160МЕ+++ 1280МЕ++++ 320МЕ++ 40МЕ++
II группа B.abortus 19 4 320МЕ+++ 640МЕ++++ 320МЕ++++ 10МЕ++++
инактивированная+адъювант 5 640МЕ++ 1280МЕ+++ 320МЕ+++ —
200 млн КОЕ/мл, подкожно 6 640МЕ++ 1280МЕ+++ 320МЕ+++ —
РА с сыворотками крови от кроликов на 60 день после их сенсибилизации в I группе была положительной до адсорбции с антигенами убитых культур B. abortus и B. melitensis в разведении 1:160 и 1:640-1:1280, после адсорбции - 1:80-1:160 и 1:10 соответственно. Во II группе до адсорбции -1:3201:640 и 1:320-1:1280, после - 1:320 и 0-1:10 соответственно; в III группе до адсорбции - 1:80-1:160 и 0-1:160, после - 1:80 и 0-1:10; в IV группе до адсорбции -1:640 и 1:160-1:1280, после -1:320 и 0-1:10 соответственно.
РА с сыворотками крови от кроликов на 90 день после их сенсибилизации в I группе была положительной до адсорбции с антигенами убитых культур B. abortus и B. melitensis в разведении 1:160-1:320 и 1:80, после адсорбции - 1:80 и 1:40 соответственно. Во II группе до адсорбции -1:160 и 1:320, после - 1:320 и 0-1:10 соответственно; в III группе до адсорбции -1:80 и 0-1:80, после - 1:20-1:40 и 0-1:10; в IV группе до адсорбции -1:160 1:320 и 1:320-1:640, после -1:320 и 0-1:10 соответственно.
Таким образом, оптимальной была схема получения бруцеллезной моноспецифической сыворотки anti-abortus, испытанная на животных II группы, в которой использовали однократную подкожную гипериммунизацию в область подгрудка суспензией инактивированной культуры бруцелл вида B. abortus в смеси с масляным адъювантом MONTANIDE™ISA 61 VG.
Диагностическую активность бруцеллезных моноспецифических сывороток anti-abortus, полученных от кроликов, гипериммунизированных по разным схемам, проверили через 6 месяцев хранения (табл. 2).
Установлено, что сыворотка, полученная по схеме, предусматривающей однократную подкожную гипериммунизацию в область подгрудка обеззараженной культурой бруцелл вида B. abortus в смеси с масляным адъювантом MONTANIDE™ISA 61 VG, сохраняла свою активность (РА в разведении не ниже 1:160) в течение не менее 6 месяцев после получения.
Выводы. Оптимальными были схемы, испытанные на животных II-х групп. При этом сыворотки сохраняли свою активность (реакция агглютинации в разведении не ниже 1:160) в течение не менее 6 месяцев после получения из крови, взятой через 21, 28, 35 и 60 дней после гипериммунизации. Сыворотки от кроликов I-х групп при их обескровливании через 5-7 дней после иммунизации, теряли диагностическую активность в течение 28-35 дней. Получение бруцеллезных антивидовых моноспецифических диагностических сывороток anti-melitensis и anti-abortus на основе однократной подкожной гипериммунизации кроликов инактивированными культурами бруцелл соответствующих видов в смеси с новым масляным адъювантом MONTANIDE™ISA 61 VG позволяет повысить противоэпидемическую безопасность процесса.
Литература.
1. Вершилова П.А. Биохимическая и серологическая дифференциация группы Brucella и ее значение в эпидемиологии // Архив биологических наук наук. М.: Медгиз, 1934. Т. 35. № 2. С.513-542.
2. Иванов Н.П. Бруцеллез животных и меры борьбы с ним. Алматы, 2007. 433 с.
3. Кириллов Л.В. Получение монорецепторных сывороток//Биологические ихимиотерапевтические ветеринарные препараты. 3-е изд., перераб. и доп. М.: Сельхозиздат, 1963. С. 366-371.
4. Наставление по диагностике бруцеллеза животных. М., 2003. 63 с.
5. Способ получения моноспецифических сывороток для дифференциации возбудителей бруцеллеза / В.Г. Дальвадянц, Г.И. Лямкин, Л.В. Ляпустина и др.// Патент РФ № 2104031: МПК6 А61К39/10/. 10.02.1998.
6. Способ получения бруцеллезной моноспецифической сыворотки anti-abortus/С.В. Вилинская, Г.И. Лямкин, Л.В. Ляпустина, Д.В. Русанова//Патент РФ № 2375074: МПК А61К39/00. 10.12.2009.
7. MONTANIDE™4SA 61 VG. Технический бюллетень. Великобритания, 2010. 8 с.
NEW SCHEMES OF PRODUCTION OF BRUCELLA ANTI-SPECIES MONOSPECIFIC ANTI-ABORTUS AND ANTI-MELITENSIS SERUMS
P.K. Arakelyan1, T.A. Yanchenko1, G.V. Rasnitsyna1, A.S. Dimova2, S.K. Dimov2
'All-Russian Scientific Research Institute of Brucellosis and Tuberculosis of Animals, ul. Lermontova, 93, Omsk, 644001, Russian Federation
2Siberian Federal Research Center of Agricultural Biotechnology of the RAS, pos. Krasnoobsk, Novosibirskii r-n, Novosibirskaya obl., 630501, Russian Federation
Abstract. We studied various schemes of obtaining anti-species monospecific serums based on the use of killed Brucella cultures in combination with an oil adjuvant MONTANIDE(TM) ISA 61 VG (SEPPIS, France), required for the bacteriological diagnosis of brucellosis. The investigations were carried out at the premises of the All-Russian Research Institute of Brucellosis and Tuberculosis of Animals in 2015-2016. For the production of anti-melitensis serum two groups of rabbits were formed from healthy animals, three heads in each group. Animals from the group I were administered once intravenously by 1ml of a live culture of B. melitensis 16M (200 million CFU/ ml). Animals from the group II were administered once subcutaneously by 1ml of the inactivated culture of B. melitensis 16M (200 million CFU/ml) in a mixture with adjuvant (40 and 60%, respectively). To produce anti-abortus serum, four groups in three rabbits were formed. Group I rabbits were injected intravenously with 1 ml of the mixture from a suspension of inactivated and live B. abortus 19 cultures with a concentration of 4*10E9 CFU/ml (1: 1); II, III and IV groups - once subcutaneously into the throatiness area of 1 ml of inactivated B. abortus 19 culture (200, 100 and 300 million CFU/ml, respectively) in admixture with the adjuvant. Anti-melitensis and anti-abortus serums were obtained by adsorption of the Brucella suspension of heterologous species. Optimal schemes were tested on animals of the second groups. In this case, the serums retained their activity (the agglutination reaction at a dilution of not less than 1: 160) for at least 6 months after receiving from the blood taken in 21, 28, 35 and 60 days after hyperimmunization. Serums obtained from rabbits from the first groups with their bleeding in 5-7 days after immunization lost diagnostic activity during 28-35 days. The use of the adjuvant reduces the labor intensity of the process, increases its anti-epidemic safety, as well as the volume of serum with high activity, due to the possibility of taking blood at least 4 times from one animal.
Keywords: brucellas; anti-species monospecific anti-abortus and anti-melitensis serums; obtaining schemes; hyperimmunization; inactivated cultures; adjuvant MONTANIDE(TM) ISA 61 VG.
Author Details: P.K. Arakelyan, D. Sc. (Vet.), head of laboratory (e-mail: vniibtg@rambler.ru); T.A. Yanchenko, Cand. Sc. (Biol.), senior research fellow; G.V. Rasnitsyna, research fellow; A.S. Dimova, Cand. Sc. (Vet.), head of laboratory; S.K. Dimov, D. Sc. (Vet.), leading research fellow.
For citation: Arakelyan P.K.,Yanchenko T.A., Rasnitsyna G.V., Dimova A.S., Dimov S.K. New Schemes of Production of Brucella Anti-Species Monospecific Anti-Abortus and Anti-Melitensis Serums. Dostizheniya naukii tekhnikiAPK. 2018. Vol. 32. No. 1. Pp. 43-46 (in Russ.).
