CC BY
57
Медицинская иммунология 1999. Т. 1. № 1 - 2, С. 141 146
© 1999, СПб РО РАЛ К И
НОВЫЕ ПОДХОДЫ К КЛИНИЧЕСКОМУ ПРИМЕНЕНИЮ РЕКОМБИНАНТНОГО ИНТЕРЛЕЙКИНА-1|3 ЧЕЛОВЕКА
Симбирцев АХ.
Государственный Научный Центр Государственный НИИ особо чистых биопрепаратов,
Санкт- Петербург
Интерлейкин-10 (1L-1). представитель семейства цнтокииов, является эндогенным медиатором защитных реакций организма. Он синтезируется различными типами клеток в ответ на проникновение инфекционных агентов и повреждение тканей. Одно из главных свойств IL-1 заключается в способности стимулировать функциональную активность многих типов лейкоцитов и лимфоцитов в ходе развития воспаления н иммунного ответа. Крометого, JL-1 активирует нейроэндокринную систему, стимулирует костномозговое кроветворение, воздействует на функции фибробластов и эндотелиальных клеток, обладает ранозаживляющим действием.
Широкий спектр биологической активности JL-1 открываетболъпшс перспективы клинического применения препаратов на его основе для лечения различных заболеваний и патологических состояний у человека. Получение генноннженерных белков ци-токинов, в том числе IL-1 человека, современными биотехнологическими методами дает неограниченные возможности для создания медицинских препаратов нового поколения с использованием биологического потенциала, накопленного природой в ходс-
Лдрес для переписки:
Симбирцев Андрей Семенович -
д. м. п.. руководитель лаборатории
иммупофармакологии
ГосИИИ особо чистых биопрепаратов.
197110, Санкт-Петербург, Пудожская ул., 7.
ГосИИИ особо чистых биопрепаратов.
лаборатория иммунофармакологии
Трл.: (812) 230-48-88
Факс: (812) 230-49-48
e-mail: sim@inshpbspbsa
эволюции. Сегодня ключевым вопросом изучения биологии IЬ-1 является использование его уникальных свойств для иммунотерапии в клинической практике.
Лекарственные препараты па основе рекомбинантного 1Ь-1 человека постепенно входят в повседневную клиническую практику. В России клиническое применение П--1 стало возможным благодаря клонированию генов 11.-1 141 и созданию медицинского препарата под названием «Бетадейкин». Препарат Беталейкин, являющийся лекарственной формой рекомбинантного 11,-1 бе га человека, разрешен приказом Минздрава РО) № 51 от 18.02.1997 г. к клиническому применению в качестве иммуностимулятора и как средство восстановления кос тномозгового кроветворения у раковых больных после интенсивных курсов химмо- и радиотерапии (регистрационный номер 97/51/6).
В настоящее время для П.-1 сложилось совершенно определенное направление использования, спя занное с его способностью стимулировать костномозговое кроветворение. С згой целью 1Ь-1 применяется у онкологических больных для восстановления подавленного лейконоэза в результате высокодозной химиотерапии либо комбинированной химио-и радиотерапии [2, 3]. Применение 11.-1 у данной категории больных ведет к значительному сокращению сроков нейтропении после химиотерапии различных типов солвдйыхопухолей, снижению частоты суперинфекций и увеличению выживаемости по сравнению с «историческим контролем» 12,
3, 8, 12, 16]. Крометого, 11.-1 используется как темостимулирующее средство при пересадках костного мозга [14. 18]. Смысл применения 1Ь-1 у боль-пых раком заключается в его способности быстро
восстановить кроветворение, подавленное вследствие применения цнтостатиков или лучевой терапии, и проводить курсы химиотерапии в нужном режиме и дозировках, обеспечивающих достижение желаемого про тивоопухолевого эффекта.
В качестве гемостимулирующего средства 1Б-1 стоит в одном ряду с известными препаратами ко-лониестимулирующихфакторов (СЭР), а в ряде случаев п превосходит их по терапевтической эффективности. Принципиальные различия между 1Б-1 и препаратами СБГ заключаются в механизмах их действия п сводятся к трем основным пунктам. Во-первых, это связано с различиями и клетках-мишенях для действия С8Г- и 11.-1. Препараты СБР стимулируют пролиферацию поздних предшественников кроветворных клеток гранулоцитарпого ростка кроветворения пли более ранних предшественников транулоцитов и макрофагов, вызывая за счет этого увеличение числа лейкоцитов периферической кро в и. Гемостимулирующий эффект 1Б-1 обусловлен индукцией выработки нескольких эндогенных колониестимулирующих факторов и синергичным с ними усилением пролиферации и дифферепциров-кп клеток различных ростков кроветворения ЦО, II). 1Ь-1 действует на кроветворные клетки на разных этапах их созревания, включая стадию полипотент-ных стволовых клеток. Поэтому применение 1Б-1 приводит к возрастанию не только количества гра-ыулоцитов, по также тромбоцитов и лимфоцитов. Действие. 11.-1 охватывает более широкий круг кле-ток-предшественников, ч то позволяет ему более эффективно восстанавливать нормальное кроветворение, а не действовать узко направленно только на граиулоциты. В этой связи особенно важна стимуляция мегакарноцнтарпого ростка кроветворения и быстрое увеличение числа зрелых тромбоцитов, так как это позволяет избежать геморрагических осложнении после химиотерапии.
Во-вторых, проведенные клинические испытания показали, что важной особенностью применения Бе-галейкина является возможность его использования одновременно с курсом химиотерапии. Препараты С51- не могут быть использованы до окончания химиотерапии и их применение ограничено только восстановлением подавленного лепкопоэза. Новый способ применения препарата !Б-1 на фоне продолжающейся химиотерапии позволяет не допустить падения числа лейкоцитов до критического уровня [2\. Таким образом Беталейкин может быть использован и как средство лечения, и как средство профилактики токсической лейкопении, вызванной применением различных схем химиотерапии.
В-третьих, действие Бетаденкнна заключается не только в увеличении количества лейкоцитов, но и приводит к усилению их функциональной активности. Активация хемотаксиса, продукции кислородных радикалов и фагоцитоза нейтрофильных граиу-
лоцитов является составной частью иммуностимулирующего действия 11-1. Подобные эффекты очень важны у больных с подавленным лейкопоэзом для борьбы с инфекционными осложнениями, которые нередко встречаются после высокодозпой химиотерапии.
Особо следует отметить, что в ходе клинических испытаний при лечебном применении у бол ьных, подучавших радиотерапию по поводу основного заболевания. подтвердился ярко выраженный радио-защитиый эффект 1Б-1, связанный, согласно экспериментам на животных, главным образом со стимуляцией костномозгового кроветворения [15]. Это дает основание считать препарат Беталейкин перспективным радиопротектором при возникновении чрезвычайных ситуаций там, где имеет место использование ядерной энергии.
Блестящие результаты клинического использования препарата IЬ-1 в качест ве стимулятора гемо-поэза отражают лишь одну, хотя и очень важную, сторону участия этого плейот ропного медиатора в острофазовом ответе. 11.-1 стимулирует гемопоэз для восстановления числа лейкоцитов, расходуемых при борьбе с инфекцией, и это служит важной составной частью его биологическою действия в организме. Но І Б-1 не менее эффективно ст имудирует и дру те с тороны развития защитных реакций, в частности оказывает ярко выраженное иммуностимулирующее действие. Следовательно, в клинике могут быт ь использованы и другие варианты его лечебного применения. В экспериментах.на животных продемонстрировано. что иммуностимулирующее действие I Б-1 затрагивает различные стороны специфических н неспецифнчестшх защитных реакций и связано с повышением функциональной активности нейтрофильных гранулоцнтов, о чем уже было сказано выше, индукцией днфференцировки предшественников иммунекомпетентных клеток, усилением пролиферации лимфоцитов, активацией продукции цп-токинов и увеличением аитителообразовапия [6, 7, 13). Поэтому нетрудно предположить высокую клиническую эффективность его применения в качестве иммуностимулятора.
Иммуностимулирующее действие препарата находит клиническое применение для лечения широко распространившихся в последние годы иммуно-дефицитных состояний, вызывающих порой серьезные осложнения, требующие безотлагательных мер эффективной иммунозаместительноЙ терапии. Основным показанием к применению Беталей-кииа в качестве иммуностимулятора являются вторич ные имму н од еф и н ит и ые состояния, развивающиеся после тяжелых травм, в результате гнойно-септических и гнойнодеструктивных процессов, после обширных хирургических вмешательств, а также при хронических септических состояниях с явлениями анергии. Препарат назначается курсом в
виде 5 ежедневных внутривенных капельных инфу-зий.
Клинические испытания продемонстрировали высокую эффективность применения препарата Бе-талейкин и качестве иммуностимулятора для коррекции вторичных иммунодефицнтных состояний у больных с гнойно-септическими процессами. Препарат применялся у больных с генерализован и ыми формами хирургической инфекции (генерализованный сепсис, перитонит, абсцессы и инфильтраты брюшной полости, гнойно-воспалительные процессы п малом тазу, абсцесс легкого, сепсис, развившийся на фоне тяжелой механической и боевой травмы, а также после длительных п обширных хирургических вмешательств). Всего терапию препаратом Бе-талейкин получили 120 больных с указанными диагнозами, при этом, изучение клинической эффективности проводилось двойным слепым методом с использованием плацебо в Воснно-медицинской академии (Санкт-Петербург) и московских городских клинических больницах №№ 24 и 83.
При оценке эффективности лечения по пятибалльной системе «отличный* и «хороший!» результат терапии отмечен у 75 % больных. После курса лечения наблюдалось улучшение общего состояния, нормализация температуры, уменьшение частоты сердечных сокращений, снижение летальности и уменьшение коIIко-дня по сравнению с контрольной группой в среднем с 39,7 до 28,1 дней. При анализе воздействия Беталейкииа на течение раневого процесса обращала на себя внимание эффективность препарата в Отношении стимуляции процессов очищения гнойных ран и ускорения роста грануляип оннон ткани. На фоне применения Беталейкииа на 3-4 суток раньше появлялась возможность наложения вторичных швов. Ввиду быстрого улучшения общего состояния больных и заживления ран удавалось сократить продолжительность и дозы антибактериальной терапии и применения иммуноааме-стительных препаратов.
Клинические результаты испытаний указывают на высокую эффективность применения препарата у данной группы больных, а лабораторные данные свидетельствуют о системной активации иммунитета в результате прнмепения 11,-1. Оценка иммунного статуса пациентов, получавшихтерашш Беталей-киыом, проведенная после окончания курса лечения, показала, что препарат вызывал возрастание относительного содержания Т-лнмфоцитов периферической крови, экспрессирующих поверхностные маркеры СОЗ, В-лимфоцитов (С020), а также увеличивал число клеток, несущих мембранные рецепторы к 1Ь-2 (С025).
Наиболее существенные изменения под влиянием терапии Беталейкнном наблюдались при анализе бластной трансформации лимфоцитов в культуре под влиянием ФГА. Препарат в несколько раз
усиливал пролиферативный ответ лимфоцитов. По-видимому, эти результаты могут быть связаны с усилением под влиянием Беталейхина продукции ци-токинов, особенно 11.-2, синтез которого был существенно снижен до начала лечения по сравнению с нормальными показателями. Бетапейкин вызывал также увеличение функциональной активности нейтрофильных гранулоцитов периферической крови пациентов, а именно миграции, бактершшд-ности и фагоцитоза клеток.
Использование Беталейкииа для иммуностиму ляции при вторичных иммунодефицнтных состояниях практически связано с реализацией главного биологического действия 1Ь- 1,для чего он, собственно, и синтезируется клетками нашего организма -борьбы с внедряющимися инфекционными агента мн. 11о-видимому, это свойство I Г.-1 может быть применено в клинической практике более широко - лля лечения вирусных и бактериальных инфекции.
В настоящее время лечение инфекционныхзабо мевашхй главным образом сводится к применению антибиотиков, которые во многих случаях оказываются неэффективными. Данный подход не учитывает состояние организма, наличие возможного иммунодефицита, особенности протекания защитных реакций на каждый конкретный патоген. Иммунная система организма всегда реагирует на внедрение микроорганизмов развитием местной воспалительной реакции, а при ее неэффективности - развитием системного острофазового ответа. Одпако многие патогены, в особенности вызывающие инфекции, относящиеся к разряду особо опасных, способны ускользать от губительного влияния иммунной системы макроорганизма Это происходит в результате очень быстрого размножения па тогена и особых спо пифических механизмов противодействия эффективному развитию протиноинфекционпого иммуни тета.
Тем не менее, в опытах на животных продемонстрировано, что в большинстве случаев защитные реакции против ряда вирусных и бактериальных патогенов могут быть усилены путем активации иммунитета. При этом активирующий сигнал может носить неспецнфичесюш характер, будучи направленным не избирате льно против вызвавшего инфекцию патогена, а стимулирующим общую иммуноло гйческую реактивность. Такой подход позволяет создать универсальные средства защиты против многих инфекционных агентов, которые могут быть применены до выяснения природы возбудителя инфекции.
Наиболее перспективными кандидатами на роль подобных стимуляторов иммунитета являются ци-токины, представляющие собой новый класс эндогенных имму и ом одул иру ю щи х веществ, Цитокины обладают способностью эффективно активировать различные стороны протекания защитных реакций
и п эксперименте защищают от целого ряда инфекций. В первую очередь это относится к IL-1, который синтезируется клетками организма в ответ на внедрение любого инфекционного агента на местном или системном уровне.
Важнейшая функция IL-1 в противоиифекпнон-ном иммунитете подтверждена литературными данными и результатами собственных экспериментальных исследований. Показано, что 1L-1 альфа или IL-1 бета защищают мышей от различных экспериментальных инфекций [ 17J. Введен ие низких доз LL-1 снижает летальность при заражении животных различными штаммами патогенных микроорганизмов, таких как P. aeroginosa, Klebsiella pneumoniae,
S. typhimurium, E.coli, Staphylococcus aureus, Streptococcus pneumoniae и Listeria monocytogenes. Механизм защитного действия IL-1 окончательно не выяснен. Известно, чт о он не обладает прямой антимикробной активностью и не усиливает действие ан-тиинфекционпых лекарственных препаратов in vitro. Вероятно, IL-1 действует путем активации естественных защитных реакций организма, стимулируя вначале неспепифическне механизмы резистентности, а затем и специфический ігротпвоинфекционньні иммунитет. Ключевая роль IL-1 впротішоиифекнион-ной защите бы. а а продемонстрирована в опытах, когда введение животным блокирующих антител к рецептору IL-t 1 типа увеличивала летальность при экспериментальном заражении monocytogenes.
К сожалению, во многих случаях продукция эндогенного [L-1 недостаточна для зашиты организма от инфекции, либо он синтезируется недостаточно быстро для обеспечении развития защитных реакций, н микроорганизм успевает ускользать от иммунного ответа. Некоторые микроорганизмы обладают способностью специфически влиять на систему ци і окинов, снижая их иммуностимулирующую активность. Введение IL-1 па ранних стадиях инфекции может быть весьма эффективно за счет активации общих механизмов резистентности. Пока природа вызвавшего инфекционный процесс пат огена еще не установлена. При этом введение в организм готового рекомбинантного IL-1 может дать существенный выигрыш во времени, необходимом для запуска синтеза эндогенного медиатора.
В настоящее время существует такая точка зрения, что продукция 1L-1 в ответ па инфекцию приносит вред организму за счет обшей токсичности, и уровень IL-1 должен быть искусственно снижен путем использования разных методов антицитокпио-»ойтерапии [9]. Однако проведенные клинические испытания антшштокпновой терапии с применением различных блокаторов 1L-1, включая рекомбинантный рецепторный антагонист JL-1, не принесли хороших результатов. По-видимому, это объясняется тем, что IL-1 является важнейшим медиатором защиты организма п служит фактором,
созданным природой для регуляции защитных реакции против патогенов. Роль IL-1 в иммунитете подтверждается и тем. что его строение сохранилось в течение эволюции, начиная от примитивных организмов. Важно отмети ть, что в настоящее время принцип аитицитокииовон терапии нашел свое клиническое применение в случае блокирования TNF. Казалось бы, IL-1 и TNF имеют очень похожий спектр биологической активности, однако все больше экспериментальных данных указывают на принципиальные различия в их роли в регуляции иммунитета. Это подтвердилось и в клинике: блокирование TNF дает положительные результаты при сепсисе и некоторых других состояниях, а блокирование IL-1 неэффективно.
Преимущества использования JL-I для иммуно-стимуляции при инфекционных заболеваниях и вторичных иммунодефицитах заключаются в том, что он активирует различные стороны защитных реакций, участвующих в элиминации патогена. Недостатки применения ILT, как ни странно, связаны с тем же. Действительно, при системном введении проявляются все стороны многогранного биологического действия IL-1, включая активацию нейроэндокринной системы. Как правило, это приводит к повышению температуры тела больного и нежелательным побочным эффектам терапии, связанным с неприятными субъективными ощущениями из-за развития гриппоподобного комплекса. Однако данные явления служат защитными реакциями организма и свидетельствуют о том, что побочные эффекты лечения препаратами JL-1 нельзя считать побочными в полном смысле слова, скорее они - суть разно стороннего биологического действия 1L-1. При апа-лизе механизма действия IL-1 оказывается, что этп реакции связаны с активацией продукции ПГЕ2.
Экспериментальное введение 1L-1 вме'сте с ингибиторами цшслооксигеиазы, такими, гак известный противовоспалительный препарат реопирин, приводит к отсутствию температурной реакции и снижению продукции кортикостерона, хотя при э том полностью сохраняется индуцированное IL-! увеличение пролиферации лимфоци тов и продукции ими 1L-2 [5]. Следовательно можно фармакологически расчленить разные стороны биологического действия IL-1 и избирательно снизить его влияние па отдельные проявления активации острофазового ответа, сохранив требуемый терапевтический эффект. Видимо будущее цитокииовой терапии какрнз связано с таким комбинированным подходом к использованию препаратов цитокниов вместе с другими фармакологическими средствами.
Системное введение JL-1 оправдывает себя в тех случаях, когда нужно обеспечить действие препарата в нескольких органах для более эффективной активации иммунитета, либо активировать клетки-мишени, расположенные в разных частях организма,
как и при стимуляции костномозгового кроветворе-ния. В других случаях, вероя тно, более целесообразно использовать местное применение 1Ь-1. Местное применение препаратов [Ь-1 1шеет целый ряд преимуществ, так как оно позволяет достигать высокой локальной концентрации действующего начала, целенаправленно воздействовать на инфекционный очаг и избежать системных нежелательных проявлений его действия.
Одна из новых перспективных областей местного применения 1Ь-1 — лечение бактериальных инфекции. ведущих к развитию гнойных осложнений и абсцессов. На кафедре торакальной хирургии Военно-медицинской академии (зав. кафедрой проф. Л.И.Бисеиков) препарат рекомбинантного 1Ь-1Р человека применяли для местного лечения больных с острыми и хроническими абсцессами легких и эмпиемами плевры, которые были резистентны к обычной терапии антибиотиками. Во всех случаях препарат вводили местно непосредственно в полость деструкции. При данном методе терапии Н_-| вызывал быстрое угасание воспалительных проявлений, образование «сухой» полости, снижение перифо-кальнон лейкоцитарной инфильтрации. Рентгенологический контроль через месяц после лечения показал уменьшение размеров полости и отсутствие признаков воспаления. Высокая клиническая эф-фекгивность подтверждена лабораторными данными по усилению показателей функциональной ак тивности лейкоцитов, выделенных из полостей абсцессов, и активации синтеза цитокинов [ 1 ]. Местное применение препарата не вызывало никаких побочных системных эффектов.
Другим направлением местного применения 11.-1 является лечение поражении кожи и слизистых при ожогах различного происхождения, трофических язвах, пролежнях, хирургических вялотекущих инфицированных ранах. В данном случае 1Ь-1 может применяться в виде раствора либо в виде мазевой формы Д11Я нанесения на раневую поверхность. Последнее более предпочтительно, так как мазевая форма препарата обеспечивает длительный контакт с областью поражения и медленный дозированный выход препарата. Первый клинический опыт применения мазевой формы 11-1 свидетельствует о ее высокой эффективности для лечения названных патологий, особенно в случае присоединения инфекции. В данном случае используются два основных свойства Т1_-1: активация неспецифического звена местного иммунитета и ранозаживляющее действие за счет а к тиващш пролиферации фибробластов и метаболизма соединительной ткаии.
Таким образом, препараты на основе рекомбинантного 1Ь-1р человека находят нее более широкое клиническое применение в разных областях медицины. В настоящее время они используются последующим основным направлениям;
1. В онкологии — для лечения нарушений костномозгового кроветворения, инфекционных и геморрагических осложнений у раковых больных после проведения курсов хнмио- и радиотерапии, в перспективе — для лечения отдельных видов опухолей (меланома, рак почки, рак мочевого пузыря).
2. В клинике внутренних болезней — для лечения инфекционных, в том числе вирусных заболеваний, нммунодефицитиых состояний, хропиосеп-сиса.
3. В хирургии — для лечения больных с травма ми. ожогами, трофическими язвами, абсцессами, пос-леоперационными септическими осложнениями.
4. В экстренной и военной медицине при возникновении чрезвычайных ситуаций — как средство защиты от радиационного, химического и бак териологического поражения.
Как местное, так и системное лечение препаратами 1Т-! связано с введением в организм больного ее тествепвого защитного медиатора. Иммунозамести тельная терапия цитокинами является новым шагом па пути развития иммунофармакологии, так как применение генно-инженерного эндогенного пммупо-модулятора выгодно отличается от использования индукторов цитокинов и интерферона. Их эффективность часто невысока из-за сниженной способности клеток орпншзма ответить на внешнюю стимуляцию при иммунодефицптных СОСТОЯНИЯХ. Иммуноэаместительная терапия 11.-1, напротив, особенно эффективна при иммуподефицнтныХ состоя -пнях, которые сопровождают многие инфекционные заболевания, или когда локальная инфекция развивается на фоне уже имеющегося иммунодефицита. IЬ-1 одним из первых цитокинов продуцируется клетками при внедрении патогенов, однако, несмот ря на синтез эндогенного П. 1, в ряде случаев этого оказывается недостаточно для эффективной борьбы с инфекцией. На этом фоне дополнительное введение Г [.-1 извне может оказать решающее воздействие на адекватное протекание защитных реакции и эли-мннацию патогена.
Список литературы
1. Варюшипа М.Л. Анализ иммуиоїл нму.тирующеі и действия интерлейкина-1 бета при местном применении у человека. // Автореферат дисс.... канд. биол. наук. — Санкт-Петербург. — 1998.
2. Гершаиович М.Л., Кетлинский С.А., Филатова Л. В. и др. // Вопросы онкологии. 1996. — №6.-С. 13 - 18.
3. Гершаиович М.Л., Филатова Л.В., Кетлин-
ский С.А., Симбирцев А.С. // Вопросы онкологии. - 1998. — № 2, — С. 181 186.
4. Котеико С.В., Булепков М.Т., Вейко В.П. и др. // Доклады АН СССР. - 1989. - Т. 309. -С. 1005 - 1008.
5. Симбирцев А.С., Котов А.Ю., Плгарева I I.В. и др. // Бголл. экспер. биол. мед. — 1993. — № 2. — С. 183 - 185.
6. Симбирцев А.С., Пи гарева П.В.. Кетлинский С.А. и др. // Иммунология. — 1990. — № 6. — С. 39 -42.
7. Симбирцев А.С., Пигарева Н.В.. Конусова В. Г. и др. // Вестник РАМН. - 1993. - № 2. — С. 18 -22.
8. Crown J.. Jakubowsky A.t Kemeuv N. et al // Blood. - 1991. - Vol. 78. - P. 1420 - 1425.
9. Dinarello C.A. // Blood. - 1991. - V.77. -P. 1627 - 1652.
10. Fibbe W.E., Van Damme J.. Billiau A. et al. // Blood. - 1988. - Vol. 72. - P. 860 - 866.
11. Hoang T., Hainan A., Gonsalves O. et al. // J. Exp.Med. - 1988. - Vol. 168. - P. 463 - 474.
!2. lizumi T.. Sato S., Iiyama T. et al. // Cancer. — 1991. - Vol. 68. - P." 1520 - 1528.
13. Ketlinsky S.A., Simbirtscv A.S., Poltorack A.N. et al. // Eur.Cytokine Netw. — 1991. - Vol. 2.
P. 17-26.
14. Nemunaitis J„ Appelbaum F.R., Lilleby K. et al. // Blood. - 1994. - Vol. 83. - P. 3473 - 3478.
15. Neta R., Douches S., OppenheimJ.//J. Immunol. 1986. - Vol. 136. - P. 2483 - 2485."
16. Tanaka S., Tabuchi S., Watanabe K. et al. // J. Neurooncol. — 1992. - Vol. 14. — P. 159 - 166.
17. Van der MeerJ., Vogels M., Kullberg B.-J. // Biotlierapy. - 1994. - V. 7. - P. 161 - 167.
18. Weisdorf D., Katsanis E„ Verfaillie C. et al. // Blood. - 1994. - Vol. 84. - P. 2044 - 2048.
