CC BY
57
Новые моноклональные антитела для диагностики гриппа и других ОРВИ
А.А. Соминина (anna@influenza.spb.ru), Е.В. Сорокин, Т.Р. Царева ФГБУ «Научно-исследовательский институт гриппа» Минздрава России, Санкт-Петербург
Резюме
В информационной статье представлены итоги выполненных в лаборатории биотехнологии НИИ гриппа оригинальных, перспективных разработок препаратов моноклональных антител, которые являются основой точных диагностических тест-систем, могут использоваться для контроля процесса эволюции возбудителей гриппа и ОРВИ, а также для создания прогностических моделей их изменчивости.
В работе приводится перечень разработанных в НИИ гриппа моноклональных антител и некоторые примеры их использования. Ключевые слова: моноклональные антитела, грипп, диагностика
New Monoclonal Antibodies for the Diagnosis of Influenza and other Acute Respiratory Viral Infections
A.A. Sominina (anna@influenza.spb.ru), E.V. Sorokin, T.R. Tsarevа
Federal Budgetary State Institution «Research Institute of Influenza» of the Ministry of Healthcare of the Russian Federation,
Sanct Petersburg
Abstract
The informational article presents the results carried out in the Laboratory of Biotechnology Research Institute of Influenza original, promising development of drugs monoclonal antibodies, which are the basis of accurate diagnostic test systems, can be used to control the process of the evolution of pathogens flu and acute viral respiratory infections, as well as to create predictive models of their variability.
The paper provides a list developed by the Research Institute of Influenza monoclonal antibodies and some examples of their use. Key words: monoclonal antibodies, influenza, diagnosis
Благодаря серьезным достижениям в области клеточной инженерии стало возможным синтезировать высокоспецифичные моноклональные антитела (МКА), произошел прорыв в современной медицине в области диагностики и терапии инфекционных и онкологических заболеваний. МКА заданного спектра реагирования уже применяются при изготовлении препаратов для лечения ряда злокачественных новообразований, бактериальных и вирусных инфекций, хронических соматических заболеваний и др).
Все шире МКА используются при создании высокоточных средств диагностики.
В последние годы в лаборатории биотехнологии НИИ гриппа выполнен цикл приоритетных исследований по разработке гибридом - продуцентов моноклональных антител, направленных к изменчивым и консервативным сайтам молекул гемагглютинина и нуклеопротеина вирусов гриппа. МКА являются основой для перспективных разработок высокоточных чувствительных диагностических тест-систем, в том числе «у постели больного». Они используются для отслеживания возможных путей эволюции возбудителей гриппа, а также для создания прогностических моделей их изменчивости в лабораторных условиях.
На основе МКА уже разработаны системы для идентификации субтипов вируса гриппа А, включая
сезонные (Н1, Н3) и потенциально пандемические штаммы (субтипов H2, H5, Н7 и H9), вирусов гриппа типа В (Викторианской и Ямагатской эволюционных ветвей), а также других возбудителей ОРВИ (аденовирусов, РСВ и парагриппозных вирусов). МКА могут быть использованы в различных вариантах иммуноферментного, флюорометрического, хемилюминесцентного и иммунофлуоресцентного анализов, в РТГА, в реакции микронейтрализации при решении различных задач научного и прикладного характера.
Так, использование МКА с выраженной вирус-нейтрализующей активностью обеспечило возможность идентификации иммунодоминантных эпито-пов в составе молекулы гемагглютинина вирусов гриппа типов А и В [1, 2].
Созданные в лаборатории иммунофер-ментные тест-системы используются в научно-исследовательских целях для определения активности новых противовирусных препаратов в условиях in vitro (по ингибиции синтеза определенных вирусных белков в клеточных культурах), а также для титрования вируснейтрализующих антител.
ФИТЦ-конъюгаты МКА и система «Инфлю-скрин» для непрямого ИФА прекрасно зарекомендовали себя при проведении ранней диагностики гриппа и других ОРВИ [3, 4].
Рисунок 1.
Клонирование гибридом in vitro и накопление антител
Препараты МКА НИИ гриппа предназначены для научных исследований, а в практическом здравоохранении - для быстрой (30 минут - 1 час) диа-
гностики вирусных инфекций. Могут храниться при 4 °С в течение 1 года или при 80 °С в течение пяти лет и более.
Рисунок 2.
Картирование иммунодоминантных сайтов в НА1-молекуле вируса гриппа В с использованием вирус-нейтрализующих МКА.
А и В - вид сбоку и сверху молекулы гемагглютинина с соответствующими аминокислотными заменами в составе escape-мутантов вируса гриппа
Рисунок 3.
Иммунофлюоресцентная детекция нуклеопротеина вируса гриппа A(H5N1) в клетках MDCK через 24 часа п/з. Окраска ФИТЦ-конъюгатом МКА 4Н1. Ув. х 630.
Таблица 1
Перечень моноклональных антител, разработанных в НИИ гриппа
наименование мКА к вирусам направленность Штамм-иммуноген к: Спектр реагирования в ифа Применение (метод)
Гриппу А:
А/NP^DH Нуклеопротеин A/Vietnam/1194/04(H5N1)х A/PR/8/34 (реассортант) Вирусы гриппа А субтипов Н1, Н2, Н3, Н5, Н6, Н7, Н8, Н9, Н11, Н12, Н14, Н15 ИФА ИФЛ МН
А/NP/1E7 Нуклеопротеин A/Texas/50/12 (H3N2)
Гриппу А(H1N1)pdm09:
А/H1/6H11 Гемагглютинин A/California/07/09 (H1N1)pdm09 А(H1N1)pdm09 ИФА РТГА ИФЛ
A/H1/1D11
Гриппу А(H2N2):
А/Н2/2B12 Гемагглютинин A/Singapore/1/57 (H2N2) ^H2N2) ИФА РТГА ИФЛ
A/H2/5H4
A/H2/6H3
Гриппу А^5Ш):
A/H5/1G2 Гемагглютинин A/Vietnam/1194/04 (H5N1) A(H5N1) A(H5N2) A(H5N3) ИФА РТГА ИФЛ
A/H5/3C5
A/H5/3H9
Гриппу А(H7N3):
A/H7/7D11 Гемагглютинин А/mallard/Netherlands/12/2000 (H7N3) A(H7N3) A(H7N9) ИФА РТГА ИФЛ
A/H7/7H9
A/H7/9B2
Гриппу А(H9N2):
A/H9/1H2 Гемагглютинин A/Hong Kong/1073/99 (H9N2) A(H9N2) ИФА РТГА, ИФЛ
A/H9/6F11
Гриппу В:
В^/2/3 Нуклеопротеин В Штаммы обеих эволюционных линий ИФА ИФЛ
B/1F2 Нуклеопротеин B/Massachusetts/2/12 Штаммы обеих эволюционных линий ИФА
B/НAV/4H1 Гемагглютинин B/Shandong/7/97 Штаммы Викторианской линии ИФА РТГА, ИФЛ
B/НAV/5B7
B/НAY/4H7 Гемагглютинин B/Panama/45/90 Штаммы Ямагатской линии ИФА РТГА ИФЛ
B/4AY/1G4 Гемагглютинин B/Massachusetts/2/12
B/НAY/1G9
B/НAY/3B12
B/НAY/3C2
B/НAY/4E11
B/4AY/5B11
B/НAY/5F11
наименование мКА к вирусам направленность Штамм-иммуноген к: Спектр реагирования в ифа Применение (метод)
Аденовирусам:
AV/Hex/6/1 Аденовирусы подгрупп В, С, Д, Е
AV/Hex/2С3 Гексон Гексонный антиген аденовируса 6 типа (штамм Tonsill-99) ИФА ИФЛ
AV/Hex/4В7 Аденовирусы подгруппы С
AV/Hex^^
РС-вирусу:
RS/F/1H3
RS/F/4F2 F-белок RSV вирусу (штамм Long) РС-вирус ИФА
RS/F/5F3 ИФЛ
RS/F/5H8
Парагриппу 2-го типа:
PIV/II/4А7 Вирусу парагриппа 2-го типа штамм ALTBcc2056 Парагрипп 2-го типа ИФА ИФЛ
Парагриппу 3-го типа:
PIV/Ш/3Н8 ИФА РТГА ИФЛ
PIV/III/4d2 Нейраминидаза/ гемагглютинин Вирусу парагриппа 3-го типа штамм III-v-2932 Парагрипп 3-го типа
PIV/III/5D4 (NH)
Литература
1. Сорокин Е.В., Царева Т.Р., Соминина А.А., Писарева М.М., Комиссаров А.Б., Кошелева А.А. и др. Эпитопный анализ молекулы гемагглютинина вирусов гриппа в викторианской линии. Вопросы вирусологии. 2014; 59 (6): 27 - 31.
2. Сорокин Е.В., Царева Т.Р, Соминина А.А., Писарева М.М., Комиссаров А.Б., Кошелева А.А. Эпитопное картирование молекулы гемагглютинина вирусов гриппа в линии Ямагата с использованием моноклональных антител. Фундаментальные исследования. 2014; 9 (1): 100 - 104.
3. Суховецкая В.Ф., Дондурей Е.А., Дриневский В.П., Соминина А.А., Майорова В.Г., Писарева М.М. и др. Лабораторная диагностика острых респираторных вирусных инфекций в условиях эволюционной изменчивости вирусов гриппа. Журнал инфектологии. 2012. 4 (1): 36 - 41.
4. Амосова И.В., Соминина А.А., Смирнова Т.Д., Суховецкая В.Ф., Бузицкая Ж.В., Войцеховская Е.М. и др. Новые моноклональные тест-системы для диагностики аденовирусной инфекции. Вопросы вирусологии. 2014. 59 (5): 43 - 46.
References
1. Sorokin E.V., Tsareva T.R., Sominina A.A., Pisareva M.M., Komissarov A.B., Kosheleva A.A. et al. Epitope analysis of the influenza virus hemagglutinin molecule in the Victorian line. Voprosi (Questions) of Virology. 2014; 59 (6): 27 - 31 (in Russian).
2. Sorokin E.V., Tsareva T.R., Sominina A.A., Pisareva M.M., Komissarov A.B., Kosheleva A.A. Epitope mapping of haemagglutinin molecule of influenza viruses in Yamagata lineage using monoclonal antibodies. Basic research. 2014; 9 (1): 100 - 104 (in Russian).
3. Sukhovetskaya V.F., Dondurei E.A., Drinevsky V.P, Sominina A.A., Mayorova V.G., Pisareva M.M. et al. Laboratory diagnosis of acute respiratory viral infections in circumstances of evolutionary variability of influenza viruses. Infectology Journal. 2012. 4 (1): 36 - 41 (in Russian).
4. Amosova I.V., Sominina A.A., Smirnova T.D., Sukhovetskaya V.F., Buzitskaya J.V., Vojciechovskaya E.M. et al. New monoclonal test systems for the diagnosis of infection of adenovirus. Voprosy (Questions) of Virology. 2014. 59 (5): 43 - 46 (in Russian).
