CC BY
18
МАТЕРИАЛЫ КОНФЕРЕНЦИИ «ОТЕЧЕСТВЕННЫЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫЕ ПРЕПАРАТЫ» s
Материалы и методы. Субстанция ЛХС-1208, синтези- Н.В. Андронова, Е.М. Трещалина, Ю.А. Борисова, рованная в лаборатории химического синтеза ФГБУ Г.Б. Смирнова, И.Н. Михайлова, С.М. Ситдикова, «РОHЦ им. H.H. Блохина» Минздрава России. Компонен- Н. Т. Райхлин, Е.А. Смирнова, A.A. Лушникова, ты липосомальной мембраны: яичный фосфатидилхолин Д.А. Понкратова Е РС S (лецитин) (Lipoid, Германия), холестерин (Sigma, НОВЫЕ МОДЕЛИ ПИГМЕНТИРОВАННОЙ Германия), PEG-2000-DSPE 18:0 (Lipoid, Германия); кри- И БЕСПИГМЕНТНОЙ МЕЛАНОМЫ КОЖИ опротектор — сахароза ГОСТ 5833-75 (Химмед, Россия). ЧЕЛОВЕКА С МУТАЦИЯМИ BRAF V600E И NRAS Для оценки влияния концентрации криопротектора в ли- ДЛЯ ДОКЛИНИЧЕСКОГО ИЗУЧЕНИЯ ТАРГЕТНЫХ посомальной дисперсии на качество лиофилизированной ПРОТИВОМЕЛАНОМНЫХ СРЕДСТВ ЛЛФ ЛХС-1208 в воду для инъекций, предназначенную И КОМБИНАЦИЙ НА ИХ ОСНОВЕ для гидратации липидной пленки, добавляли навески са- ФГБУ«РОНЦ им. Н.Н. Блохина» Минздрава России, харозы в молярных соотношениях лецитин: сахароза — Москва, Россия 1/2, 1/3, 1/5, 1/7,5 и 1/10. Полученными водными раство- Введение. Разработка новых моделей диссеминирован-рами сахарозы гидратировали липидные пленки на 4 ной меланомы кожи человека с молекулярно-генетической разных колбах; образовавшиеся липосомальные дисперсии мишенью (мутации V600E BRAF и NRAS) для таргетной последовательно пропускали через нейлоновые мембран- терапии повышает результативность доклинических иссле-ные фильтры «Pall» N66 с размером пор 1,2, 0,45 и 0,22 мкм дований in vivo новых антимеланомных средств и их ком-(ООО «Палл Евразия», Россия) на экструдере LipexTM бинаций. Такая возможность реализована благодаря нали-Thermobarrel Extruder 10 мл, дозировали во флаконы чию в банке ФГБУ «РОHЦ им. H.H. Блохина» Минздрава по 6 мл и лиофилизировали в камере сублимационной России оригинальных линий клеток пигментированной сушки «Edwards Minifast DO. 2» (Ero Electronic S. p. A., Ита- меланомы кожи человека mel Cher с мутацией BRAF V600E лия). Для ЛЛФ ЛХС-1208 применяли следующий режим и беспигментной mel Rac c мутацией NRAS, адекватных лиофилизации липосомальных препаратов: быстрое замо- для получения подкожных (п/к) ксенографтов под контр-раживание на полках сублимационной сушки до темпера- олем трансплантационных, морфологических, молекуляр-туры -45 °С с последующей подачей вакуума и постепен- но-генетических и химиотерапевтических (чувствительным нагревом полок до температуры +20 °С и 3-часовым ность к вемурафенибу и траметинибу) характеристик. досушиванием после достижения препаратом температуры Цель исследования — получить чувствительные к спе-+20 °С. После лиофилизации содержимое флаконов реги- цифической таргетной терапии п/к ксенографтов мелано-дратировали очищенной водой, проводили количественное мы кожи человека с терапевтически значимыми мутация-определение содержания препарата на спектрофотометре ми из линий клеток mel Cher и mel Rac. Cary 100 (Agilent Technologies, Австралия) при длине волны Материалы и методы. Линии клеток меланомы кожи 320 ± 2 нм, анализ среднего диаметра везикул — на прибо- человека mel Cher и беспигментной меланомы mel Rac поре Submicron Particle Sizer Nicomp-380 (Particle Sizing Sys- лучены из коллекции ФГБУ «РОHЦ им. H.H. Блохина» tems, США) и pH дисперсии — на pH-метре HANNA HI Минздрава России, иммунодефицитные мыши-самки 2211 (Hanna Instruments, Румыния). Balb/c nude — из банка ФГБУ «РОHЦ им. H.H. Блохина» Результаты. Проведенные исследования показали, Минздрава России. Искомые характеристики моделей что по внешнему виду лиофилизаты ЛЛФ ЛХС-1208 с раз- in vivo определены с помощью методов трансплантацион-личным содержанием сахарозы отличались друг от друга. ной биологии, световой микроскопии, молекулярной ге-После регидратации лиофилизатов с содержанием крио- нетики и экспериментальной химиотерапии. Чувствитель-протектора в соотношениях лецитин: сахароза 1/3 и 1/5 ность к ингибитору BRAF-киназы вемурафенибу образовалась светло-желтая гомогенная липосомальная и к ингибитору NRAS траметинибу оценена под контролем дисперсия, без осадка и признаков расслоения, с прием- скорости роста опухоли (V;/ V0) по значимым для клиники лемым размером везикул (185 ± 10 нм), pH 7,0±0,5 и со- показателям: наличие полной ремиссии (ПР) под контрхранением после лиофилизации исходного количествен- олем рецидивирования. ного содержания ЛХС-1208 в ЛЛФ. При добавлении воды Результаты. При п/к трансплантации 1,0 х 107 клеток к образцам лиофилизатов ЛЛФ ЛХС-1208, содержащих получены цитологически идентичные с устойчивой кине-криопротектор в соотношениях лецитин: сахароза 1/2, тикой роста в течение 4-9-го пассажей п/к ксенографты 1/7,5 и 1/10, отмечалось нарушение процесса регидрата- пигментированной меланомы mel Cher и беспигментной ции с образованием густой вязкой массы. mel Rac. Латентная фаза составила для mel Cher 8 дней, Заключение. Таким образом, для лиофилизации ЛЛФ для mel Rac — 11 дней, экспоненциальная фаза обоих мо-ЛХС-1208 эффективным криопротектором является саха- делей — 14 дней, стационарная — 24 дня. Чувствительность роза, вводимая на стадии гидратации липидной пленки mel Cher к вемурафенибу в разовой дозе 75 мг/кг 15-днев-в молярных соотношениях лецитин: сахароза 1/3. ным курсом доказана короткой ПР с развитием рецидива через 7 дней после отмены. Чувствительность к трамети-нибу в разовой дозе 0,3 мг/кг 14-кратным курсом доказана длительной ПР в течение 28 дней без развития рецидива. Заключение. Подкожные ксенографты меланомы кожи человека, полученные из линий клеток пигментированной меланомы кожи человека mel Cher с мутацией V600E BRAF
Спецвыпуск/ том 16 / 2017 РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ
6
МАТЕРИАЛЫ КОНФЕРЕНЦИИ «ОТЕЧЕСТВЕННЫЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫЕ ПРЕПАРАТЫ»
и беспигментной меланомы mel Rac с мутацией NRAS, чувствительные к специфической таргетной терапии, адекватны для доклинического изучения направленных на эти мишени новых противомеланомных средств.
Т.Н. Апрышко
РАЗВИТИЕ БАЗЫ ДАННЫХ «ПРОТИВООПУХОЛЕВЫЕ ОТЕЧЕСТВЕННЫЕ ВЕЩЕСТВА, ИЗУЧЕННЫЕ В РОНЦ ИМ. Н.Н. БЛОХИНА»
ФГБУ«РОНЦ им. Н.Н. Блохина» Минздрава России, Москва, Россия
В середине 80 гг. прошлого столетия в Институте экспериментальной и клинической онкологии АМН СССР была начата работа по созданию банка данных по веществам, изучавшимся с целью разработки на их основе новых противоопухолевых лекарств. Результатом этой работы стала компьютерная база данных (БД) «Противоопухолевые отечественные вещества, изученные в РОНЦ им. Н.Н. Блохина», зарегистрированная в 2013 г. в Федеральной службе по интеллектуальной собственности Российской Федерации.
Данная БД непрерывно развивается как информационный ресурс экспериментальной химиотерапии опухолей. Структура БД дополнена новыми полями, содержащими данные, для которых вновь возникла необходимость ввода в БД. Постоянно актуализируется система лингвистического обеспечения БД. Дополнительно к основной программе ISISBASE для обработки данных, в том числе для получения по химической структуре соединений ряда расчетных характеристик, используются отечественный программный комплекс CheD (любезно предоставленный сотрудникам ФГБУ «РОНЦ им. Н.Н. Блохина» Минздрава России разработчиками в лице С.В. Трепалина, ИОХ РАН), лицензионная система ACDLab, свободно доступный online программный комплекс ALOGPS.
Компьютерная БД систематически дополняется новыми данными. В настоящее время в ней содержатся записи о 12300 веществах отечественного происхождения, изучавшихся в качестве потенциальных противоопухолевых препаратов, из них непосредственно в ФГБУ «РОНЦ им. Н.Н. Блохина» Минздрава России изучались 7860 веществ.
Расширяется использование БД в доэксперименталь-ном скрининге потенциальных противоопухолевых химических соединений. Первое направление этого использования — создание на основе содержащейся в БД информации обучающих массивов для системы компьютерного прогноза биологической активности PASS, созданной в ИБОХ РАН, и для разработки новых моделей, способных прогнозировать биологическую активность неизученных соединений по их структуре, совместно с механико-математическим факультетом МГУ.
Средства БД используются при прогнозировании различных биологических свойств по химическим формулам новых реальных и виртуальных соединений как для контроля корректности химических структур перед прогнозированием, так и для представления результатов прогноза. Для 3300 соединений разных химических классов прогно-
зировали противоопухолевую активность и другие фармакологические эффекты, молекулярные механизмы действия. По результатам прогнозирования в качестве перспективных для экспериментального изучения отобраны 178 соединений. Сформированы файлы, в которых содержатся структурные формулы и результаты прогноза в форме, удобной для просмотра и анализа. Результаты передавали авторам для решения вопросов организации синтеза и экспериментального изучения перспективных соединений.
Г.Н. Апрышко, Р. Б. Пугачева, О.В. Горюнова КОМПЬЮТЕРНОЕ ПРОГНОЗИРОВАНИЕ БИОЛОГИЧЕСКИХ СВОЙСТВ НОВЫХ ПРОИЗВОДНЫХ ИНДОЛОКАРБАЗОЛА
ФГБУ«РОНЦ им. Н.Н. Блохина» Минздрава России, Москва, Россия
Введение. Использование информационно-компьютерных технологий позволяет до начала экспериментального исследования противоопухолевой активности новых химических соединений получить с определенной степенью вероятности прогноз их возможных фармакологических эффектов и механизмов действия.
Цель исследования — провести компьютерное прогнозирование биологической активности новых соединений класса индолокарбазолов.
Материалы и методы. Объектом исследования служили структурные формулы синтезированных в лаборатории химического синтеза НИИ ЭДиТО ФГБУ «РОНЦ им. Н.Н. Блохина» Минздрава России 43 производных индо-локарбазола, содержащих различные сахарные или аминокислотные остатки. Для прогнозирования биологической активности использована компьютерная система PASS, прогнозирующая 6400 различных видов биологической активности по структурной формуле соединения. Структурные формулы в электронном виде извлекали из регистрационной базы данных ФГБУ «РОНЦ им. Н.Н. Блохина» Минздрава России и вводили в систему PASS в виде файлов формата.MOL anH.SDF. Результаты прогноза проявления той или иной активности выражаются в виде значений вероятности Pa.
Результаты. Для всех протестированных индолокарба-золов получены высокие (Pa > 0,535) значения вероятности проявления противоопухолевой активности, достигавшие в основном 0,7— 0,8. Вероятность проявления цитотокси-ческой активности при этом была низкой. На значимом уровне для большинства соединений прогнозировались иммуномодулирующая и иммуностимулирующая активности. В качестве молекулярных механизмов действия прогнозировалось в основном ингибирование киназ, в частности циклин-зависимой киназы 3.
Заключение. Результаты компьютерного прогнозирования спектра активности индолокарбазолов свидетельствуют о перспективности протестированных соединений как потенциальных противоопухолевых средств нецито-токсического действия. Соединения с высокой вероятностью проявления противоопухолевой активности рекомендованы для дальнейшего экспериментального изучения.
Спецвыпуск / том 16 / 2017
РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ
