CC BY
37
S.V.Demyanenko, L.V.Romanova, B.N.Mishan'kin,
A. S. Vodopyanov
A PCR Study of Permeability of the Blood-Cerebral Barrier under the Plague Infection
Laboratory of Microbial Biochemistry; Anti-Plague Research Institute, Rostov-on Don
PCR assaying revealed no Yersinia pestis DNA in the liquor of plague challenged rats. Twenty per cent specimens of non-perfused brain tissue gave positive results by the PCR analysis in contrast to blood samples show-
ing the presence of the plague pathogen DNA in 100 per cent cases. Hence, the functional disorders in the nervous system observed in the case of plague infection due to impermeability of the blood-cerebral barrier, seem to be associated with the development of the endogenous intoxication syndrome rather than with immediate effects of Y. pestis toxic substances on the brain tissues.
Key words: PCR, nervous system, Yersinia pestis EV, endogenous intoxication.
Поступила 05.07.05.
УДК б 16.981.51:615.371/.372
И.В.Касина1, Л.В.Саяпина1, Т.И.Анисимова1, А.Н.Шевцов2, В.С.Лобастов2, А.А.Бывалов2,
И.С.Барулина2
ИЗУЧЕНИЕ НОВОГО ОТРАСЛЕВОГО СТАНДАРТНОГО ОБРАЗЦА ВАКЦИНЫ
СИБИРЕЯЗВЕННОЙ ЖИВОЙ СУХОЙ
'ГИСК им. Л.А. Тарасевича, Москва;
2Научно-исследовательский институт микробиологии МО РФ, Киров
Разработан новый ОСО вакцины сибиреязвенной живой сухой. Изучение его по аттестуемым значениям -общей концентрации спор, проценту живых спор, наличию посторонней микрофлоры, средней массе содержимого в ампуле, потере в массе при высушивании, стабильности и однородности, индексу иммунитета, специфической безвредности - показало, что он соответствует требованиям, предъявляемым к ОСО.
Ключевые слова: сибиреязвенная вакцина, отраслевой стандартный образец, индекс иммунитета, общая концентрация спор, стабильность.
Возбудитель сибирской язвы способен больше 100 лет сохраняться в почве в виде спор и образовывать стойкие очаги инфекции. Эта болезнь, поражающая сельскохозяйственных животных, является постоянной угрозой для здоровья человека и приносит большой экономический ущерб [2]. По данным ВОЗ, в мире ежегодно заболевают около 20 тыс. человек. В 2004 г. в нашей стране зарегистрировано 16 случаев заболевания, в том числе у 1 ребенка [4]. Не исключается возможность биотерроризма и использования возбудителя сибирской язвы как биологического оружия [3]. Поэтому плановая и экстренная профилактика сибирской язвы актуальна и в настоящее время, так как является одним из основных этапов противоэпидемических мероприятий.
Для профилактики сибирской язвы используется вакцина сибиреязвенная живая. Одной из задач стандартизации оценки методов контроля качества медицинских иммунобиологических препаратов (МИБП) является использование отраслевых стандартных образцов (ОСО), предназначенных для воспроизведения показателей, характеризующих свойства препарата и его компонентов, значение которых предварительно установлены в результате метрологической аттестации [1, 5]. В связи с этим целью настоящего исследования явилось изучение отраслевого стандартного образца вакцины сибиреязвенной живой сухой, который используется для оценки правильности результатов определения им-муногенности производственных серий вакцин по индексу иммунитета в тесте активной защиты мор-
ских свинок против летального действия тест-заражающего штамма В. апхкгас1$ 71/12.
Основные требования к стандартным образцам МИБП изложены в СП 3.3.2.128-03 «Надлежащая практика производства медицинских иммунобиологических препаратов» [1]. Областью применения стандартных образцов является контроль качества МИБП. Различают 3 вида стандартных образцов: международные, национальные и стандартные образцы организации. Порядок разработки национального стандартного образца и стандартного образца организации предусматривает следующее: составление программы разработки ОСО, изготовление ОСО, выполнение научно-исследовательских работ, разработку проекта нормативных документов.
Материалы и методы
В соответствии с действующей НД (РП 1503-04 и ФСП 42-0095-1376-01) в НИИМ МО РФ (г. Киров) была приготовлена испытуемая серия вакцины сибиреязвенной живой сухой, предлагаемая в качестве кандидата в ОСО. Вакцина сибиреязвенная живая сухая была изучена по следующим аттестуемым значениям: общая концентрация спор, которую определяли методом подсчета в камере Горяева в 20 ампулах вакцины; процент живых спор, определение посторонней микрофлоры. Стандартность препарата определяли по средней массе и потере в массе при высушивании ОСО вакцины в 15 ампулах, а также по стабильности и однородности. Специфическую безопасность определяли на двух кроликах,
і Результаты оценки качества ОСО вакцины сибиреязвенной живой сухой
Таблица 1
Оценка иммуногенности ОСО вакцины сибиреязвенной живой сухой
Таблица 2
Показатель
Описание
Подлинность (окрашивание по Цилю-Нильсену) Растворимость
Прозрачность и цветность
Требования НД
рн
Потеря в массе при высушивании
Средняя масса и однородность по массе
Герметизация Отсутствие посторонней микрофлоры и грибов Специфическая безопасность Общая концентрация спор
Концентрация живых спор
Пористая масса серовато-белого цвета с коричневатым оттенком Овальные споры розового цвета с красным ободком по периферии Содержимое ампулы должно растворяться в течение 5 мин
После растворения гомогенная взвесь серовато-белого или желтовато-белого цвета без неразбивающихся хлопьев, посторонних механических включений и осадка
От 6,8 до 8,3
Не более 5 %
Не более 5 %
Должны быть герметичны
Не должна содержать посторонней микрофлоры и грибов Препарат должен быть безопасен от 4 до 6 млрд
Не менее 40 % от общей концентрации
Результаты |
Соответствует Соответствует 2 мин
Гомогенная взвесь серовато-белого цвета без неразбивающихся хлопьев, посторонних механических включений и осадка
7,75±0,3
1,8%
0,8%
Герметична
Чистая культура вакцинного штамма
В. аміїгасій СТИ-1 Специфически безопасна (5,0+0,07) млрд спор
(70±5) %
которым подкожно вводили вакцину в количестве 250 млн спор. Одним из важных и основных показателей ОСО вакцины является иммуногенность, которую определяли в тесте активной защиты морских свинок от заражения тест-штаммом В. апЛга-га 71/12 и выражали индексом иммунитета, равным отношению иЭ50 для иммунизированных морских свинок к ЬДзд для контрольных морских свинок.:
Результаты и обсуждение
Вакцина представляет собой взвесь живых спор вакцинного штамма В. ашкгаш СТИ-1. Физикохимические свойства ОСО вакцины (консистенция, цвет, растворимость, прозрачность и цветность после растворения, pH, герметичность) были аттестованы в соответствии с принципами приготовления и характеристиками отечественных стандартов и ¡ методами, изложенными в МУК 4.1/4.2.588-96. Среднее значение общей концентрации спор составило (5,0+0,07) млрд спор, что соответствует показателям, предусмотренным нормативными документами. Процент живых спор ОСО вакцины составил 70,
Серия ОСО Доза вакцинации, млн спор Доза заражения В. antracis 71/12 сер. 35, кол-во спор Отношение павших к общему числу зараженных животных Величина LD50, спор Индекс иммунитета, уел. ед.
4 50 106 0/5 1,210s 6,3-105
107 1/5
10* 2/5
109 4/5 '
Контроль - 102 2/5 199
103 4/5
104 5/5
105 5/5
что намного превышает предел допустимого значения (40 %). ОСО вакцины не содержит посторонней микрофлоры и грибов и представляет собой чистую культуру сибиреязвенного вакцинного штамма В. амИгаая СТИ-1. ОСО вакцины сибиреязвенной живой сухой специфически безопасен. За время наблюдения не вызывал гибели кроликов и на месте введения не развивался абсцесс и инфильтрат (табл. 1). Величина индекса иммунитета ОСО вакцины сибиреязвенной живой сухой составила 63000, что в 6,3 раза превышает предел допустимого и является хорошим показателем (табл. 2).
Достаточно высокая точность розлива подтверждается сравнительно небольшим отклонением от средней величины массы содержимого в ампуле - 0,8 %. Потеря в массе при высушивании -1,8 %. Аттестуемые значения установлены для доверительной вероятности 95 %. Данные значения соответствовали требованиям, предъявляемым к лиофи-лизированным МИБП.
Изучение стабильности ОСО вакцины показало, что препарат сохраняет свои свойства и активность при нагревании при температуре 56 °С в течение 3 и 6 ч, через 1 и 3 мес. хранения при температуре 37 °С, через 6 мес. хранения при температуре 22 °С и через 12 и 24 мес. хранения при температуре 6 °С (табл. 3).
В результате проведенных исследований установлено, что вакцина соответствовала требованиям, предъявляемым к отраслевым стандартным образцам. ОСО вакцины сибиреязвенной живой сухой представляет собой аналогичную, широко апробированную серию вакцины, высокое качество которой установлено с помощью существующих стандартов и подтверждено результатами наших исследований. На ОСО вакцины разработаны и утверждены свидетельство' и стандартная операционная процедура (СОП), инструкция по применению.
Изучение стабильности ОСО вакцины сибиреязвенной живой сухой
Таблица 3
Показатели Исходные (6±1)°С (22±1) °С (37+1) °С (56+1) °С
данные 12 мес. 24 мес. . 6 мес. 1 мес. 3 мес. 3 ч 6 ч
Концентрация 5,0+0,07 5,0+0,07 5,0±0,07 4,9+0,08 4,9+0,08 4,9+0,09 5,0+ 0,07 4,9±0,07
спор, млрд Живые споры,1
70±5
70+2
70+3
65+5
65+2
40+1
55+3
45+4
Примечание. В каждый срок проверено по 5 образцов.
ОСО вакцины сибиреязвенной живой сухой внесен в Реестр отраслевых стандартных образцов, допущенных к применению в системе Министерства здравоохранения и социального развития РФ и предприятиях других ведомств, выпускающих медицинские иммунобиологические препараты, и предназначен для стандартизации и оценки качества препарата для профилактики сибирской язвы.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1.СП 3.3.2.128-03 Надлежащая практика производства медицинских иммунобиологических препаратов. - 2. Пименов Е.В., Кожухов В.В., Строчков Ю.И. // Фармвести. -2002. -№ 4. - С. 27-29. - 3. Черкасский Б. Л. Сибирская язва как биологическое оружие. - М., 2002. - 40 с. - 4. Ясинский A.A., Котова Е.А., Перевощикова А.Л. и др.//Эпиде-миол. и вакцинопрофилакт. - 2005. - № 2. - С. 6-14. -5. Принципы приготовления, характеристики и утверждения международных и других стандартов и эталонных реагентов для биологических препаратов // Сер. техн. докл. ВОЗ. - 1992. -Т. 800. - С. 171-203. - 6. Петухов В.Г. // Биопрепараты.
Профилактика. Диагностика. Лечение. - 2004. - № 1 (13). -
С. 19-23.
I.V.Kasina, L.V.Sayapina, V.G.Petukhov, T.I.Anisimova, A.N.Shevtsov, A.A.Byvalov
Elaboration and studying of a novel branch-wise standard specimen of dry live anthrax vaccine
LA.Tarasevich Slate Institute of Standardization and Control;
Microbiology Research Institute, RF MD, Kirov
A new branch-wise standard specimen (BSS) of dry live anthrax vaccine was elaborated and considered to satisfy the requirements, set forth for BSS, after its properties had been studied as recommended: total spore concentration, percentage of living spores, presence of foreign microflora, mean mass contained in an ampoule, weight loss after drying, stability and homogeneity, immunity index, specific safety.
Key words', anthrax vaccine, branch-wise standard specimen, immunity index, total spore concentration, stability.
Поступила 30.06.05.
УДК 616.94:001.5
М.А.Ободова, Н.П.Храпова, Е.А.Снатенков, Л.В.Ломова, Н.И.Нарбутович СЕРОПРОФИЛАКТИКА СИНЕГНОЙНОГО СЕПСИСА В ЭКСПЕРИМЕНТЕ
Волгоградский научно-исследовательский противочумный институт
Проведена оценка протективных свойств моноклональных антител (МКА) против различных антигенов Pseudomonas aeruginosa при их парентеральном введении в организм инфицированных биопробных животных в режимах серопрофилактики и серотерапии на модели мышиного синегнойного сепсиса. Эффективность защиты биомоделей от инфекции в результате введения МКА оценена по показателю средней продолжительности жизни (СПЖ). Помимо основной схемы, применяли сочетание МКА и антибиотика (гентамицина) как в офици-нальной, так и в липосомальной формах. Использование МКА в качестве средств защиты приводило к удлинению сроков СПЖ животных на 35-50 % в отдельных экспериментальных группах, а также к появлению в них выживших особей. Сочетанное применение МКА и антибиотика также оказалось эффективным - в данных экспериментальных группах отмечалось удлинение СПЖ животных на 40 %.
Ключевые слова: Pseudomonas aeruginosa, моноклональные антитела, протективный эффект.
филактических и иммунотерапевтических средств. За рубежом исследования по оценке протективных свойств моноклональных антител (МКА) к различным антигенам P. aeruginosa проводят с середины 80-х годов. Протективная активность выявлена у ряда мышиных МКА к белку F наружной мембраны P. aeruginosa [4] и человеческих МКА к липополи-сахариду (ЛПС) и экзотоксину А P. aeruginosa [3]. Хотя моделирование на животных может лишь частично воспроизвести ситуацию клинического заболевания, настоящие эксперименты дают возможность уверенно говорить о целесообразности применения МКА в качестве дополнительного терапевтического средства у иммунокомпрометированных пациентов с риском инфицирования P. aeruginosa [7].
В нашей стране подобные исследования не проводят ввиду отсутствия отечественных коллекций гибридом-продуцентов МКА против антигенов P. aeruginosa. В настоящее время в Волгоградском НИПЧИ создан набор гибридных клонов, продуци-
Госпитальные инфекции остаются одной из наиболее сложных проблем в стационарах во всех странах мира, несмотря на проведение регламентированных санитарно-эпидемиологических мероприятий и успехи в антимикробной терапии.
Синегнойная палочка - одна из основных причин госпитальной инфекции с высоким уровнем заболеваемости и смертности среди пациентов с нарушениями иммунного статуса на фоне болезни, стресса или иммуносупрессивной терапии. У вышеперечисленных категорий больных антибактериальная терапия чаще всего недостаточно эффективна вследствие увеличения числа антибиотикорезистентных штаммов P. aeruginosa, что делает очевидной необходимость изменения тактики борьбы с синегнойной инфекцией и разработки новых средств профилактики и лечения [6].
В связи с этим в последнее время обсуждается вопрос целесообразности возврата к идее применения специфических антител в качестве иммунопро-
