CC BY
8УДК 619: 616. 98: 579. 873.21
Новая питательная среда для выделения и выращивания микобактерий
И.О. Шандиева, Р.А. Нуратинов
В связи с ухудшением эпидемической ситуации по туберкулезу остро стоит проблема своевременной диагностики этой болезни. Так как диагноз на туберкулез считается установленным только при выделении возбудителя из биоматериала, не теряет своей актуальности проблема разработки новых и усовершенствование существующих питательных сред для выращивания и выделения микобактерий.
Используемые для бактериологической диагностики туберкулеза питательные среды - Левенштейна - Иенсена, Петраньяни, Финн II и другие - мало отличаются друг от друга и состоят из солевой основы с добавлением куриных яиц. Они не отвечают запросам практической лаборатории, поскольку рост первой генерации происходит медленно (порой до 3 мес.) и наблюдается низкая частота индикации.
Целью данного исследования явилась разработка усовершенствованной питательной среды на основе среды Финн II.
Модификация заключалась: а) в замене глутамата натрия дешевым дрожжевым аутолизатом, цитрата аммония - аммонием щавелевокислым [2]; б) в дополнительном внесении смеси н-алканов в качестве источника углерода. Состав модифицированной среды: куриные яйца - 12 штук дрожжевой аутомизат - 30 мл магний сернокислый - 0.15 г натрий лимоннокислый - 0.3 г железоаммиачные квасцы - 0.015 г калий фосфорнокислый однозамещенный - 6.0 г щавелевокислый аммоний - 1.5 г глицерин - 6 мл
дистиллированная вода - 300 мл
н-алканы (С12 - С17) - 4 - 5 капель на поверхность среды в пробирке.
Материалы и методы. Объектами исследования служили лабораторные штаммы M. bovis, M. avium, M. БЦЖ, M. tuberculosis, M. scrofulaceum, патматери-ал от животных (лимфатические узлы) и мокрота больных туберкулезом людей.
Исследования проводили в пробирках, посевы культур производили из одной и той же взвеси микобактерий одного вида на все сравниваемые варианты сред.
Среды Левенштейна - Йенсена и Финн II готовили по прописи авторов [1]. Для экспериментальной проверки модифицированной среды подготовили 8 серий в различных вариантах, отличающихся количественным содержанием добавляемых компонентов.
Как видно из таблицы 1, модифицированные варианты среды Финн II привели к определению оптимального варианта питательной среды (№№ 8), на котором первичный рост микобактерий наблюдался на 15 - 20 суток раньше, чем на среде Левенштейна - Йенсена, и на 1 - 2 суток, чем на среде Финн II. Рост во всех пробирках на модифицированной среде наблюдали на 3 - 4 суток раньше, чем на сре-
де Финн II. Значительные изменения наблюдали в качестве роста. Обильный рост бактериальной массы обнаруживали на 15 - 20 сутки.
Данную среду испытали на высеваемость микобактерий из патматериала и мокроты больных туберкулезом людей.
Таблица 2. Высеваемость микобактерий из патматериала и мокроты людей
№ Количество Выделено культур на средах
исследуемого материала Финн II Левенштейна -Иенсена Модиф. вар. № 3 Модиф. вар. № 8
1 42 патматериал от животных 16 (38.1 %) - 15 (35.7 %) 20 47.6
М + т(в сутки) 28.5 ± 3.5 29.7±3.04 25,05 ± 2,84
2 80 пробы мокроты от больных туберкулезом людей - 13 (16.3 %) - 22 27.5
М + т - 29.7±3.3 25.05+2.8
Примечание: 1) М + т указывает скорость роста выделенных культур независимо от вида микобактерий; 2) определение высеваемости мокроты на предлагаемой среде в сравнении со средой Левенштейн - Иенсена проводили в лаборатории туберкулезной больницы.
Данные таблицы показывают эффективность модифицированного варианта № 8. Высеваемость микобактерий из патматериала от животных повышается на 16 - 19 % и почти в 2 раза из мокроты больных людей.
Предлагаемая питательная среда, в которой в качестве азотистого источника берется дешевый и доступный дрожжевой аутолизат, а в качестве источника углерода - смесь н-алканов, превосходит по результативности среду Финн II и другие модификации, встречающиеся в литературе, что делает эту среду более предпочтительной для практического применения.
Вероятно, стимулирующее рост и размножение микобактерий действие дрожжевого аутолизата связано с входящими в его состав заменимыми и незаменимыми аминокислотами в легко усвояемой форме, которые играют важную роль в структурной организации клеток микобактерий. Вместе с тем аутолизат содержит макро- и микроэлементы ростового вещества.
Действие смеси н-алканов связано с одновременным покрытием поверхности среды слоем жидкого парафина, вследствие чего длительно сохраняется влажность среды в процессе термостатирования.
Таким образом, стимулирующее действие н-алканов и дрожжевого автолизата на рост и развитие микобактерий при их добавлении к яичным питательным средам дает возможность сократить сроки культивирования, повысить частоту индикации микобактерий и увеличить выход биомассы более чем в 2 раза.
Литература
1. Василев В.Н. Микобактериозы и микозы легких. - София: Медицина и физкультура, 1971. - 383 с.
2. Самилло Г.К., Ромашева Е.Н. Пути повышения высеваемости и ускорения роста микобактерий на модифицированной среде Финн II // Проблемы туберкулеза. 1988. № 12. - С. 62 - 63.
