CC BY
156
ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ДНК ИЗ ФИКСИРОВАННЫХ ЛИМФОЦИТОВ ДЛЯ ПЦР-ДИАГНОСТИКИ AZF-МИКРОДЕЛЕЦИЙ У ЧЕЛОВЕКА
Кроме того, в пробе отсутствуют ингибиторы ПЦР или их содержание не достаточно для существенного ухудшения качества ПЦР.
По результатам генотипирования удалось сделать заключение о присутствии всех изучаемых STS-маркеров в Y-хромосоме пациента П, что свидетельствует об отсутствии у него AZF-микроделеций. Ранее установленная формула кариотипа может быть сохранена, а морфологические изменения хромосомы Y в данном случае могут считаться вариантом нормы.
Завершая описание случая, мы заключаем, что в ходе выяснения причин мужского бесплодия целесообразно предусмотреть возможность проведения различных генетических исследований и единовременно осуществить забор подходящих образцов биоматериалов. Лимфоциты периферической крови, подготовленные для цитогенетического исследования в этанолуксусном фиксаторе, могут быть использованы как источник ДНК для последующей ПЦР-диагностики. Эффективным способом выделения ДНК из фиксированных лимфоцитов является сорбентный метод.
ЛИТЕРАТУРА / REFERENCES:_________________________________________________________________________________
1. Foresta C, Ferlin A, Gianaroli L et al. Guidelines for the appropriate use of genetic tests in infertile couples. European Journal of Human Genetics. 2002;
10: 303-312.
2. Chernykh VB, Kurilo LF, Shileiko LV et al. Microdeletion analysis of AZF locus in infertile males: cooperative experience of research work. Medical genetics. 2003; 2(8): 367-379. Russian (Черных В.Б., Курило Л.Ф., Шилейко Л.В. и др. Анализ микроделеций в локусе AZF у мужчин с бесплодием: совместный опыт исследований //Медицинская генетика. 2003. Т.2., №8. С. 367-379.)
3. Longepied G, Saut N, Aknin-Seifer I et al. Complete deletion of the AZFb interval from the Y chromosome in an oligozoospermic man. Human Reproduction. 2010; 25(10): 2655-2663.
4. Baranov VS, Kuznetsova TV. Cytogenetics of human embryonic development. St. Petersburg., «Publisher N-L», 2007. 640 p. Russian (Баранов В.С., Кузнецова Т.В. Цитогенетика эмбрионального развития человека СПб.: «Издательство Н-Л», 2007. 640 c.).
5. Shaffer LJ, McGowan-Jordan J, Schmid M. ISCN 2013. An International System for Human Cytogenetic Nomenclature (2013). Karger, 2013. 140 p.
6. Tsvetkova TG Polymorphism of human chromosomes: methodical aspects and interpretation of findings. Medical genetics. 2007; 6(10): 32-36. Russian (Цветкова Т.Г. Полиморфизм хромосом в цитогенетической диагностике при медико-генетическом консультировании: методические аспекты и интерпретация результатов //Медицинская генетика. 2007. Т. 6., № 10. С. 32-36.).
7. Vogt PH, Edelmann A, Kirsch S et al. Human Y chromosome azoospermia factor (AZF) mapped to different subregions in Yqll. Hum. Mol. Genet. 1996;
5(7): 933-943.
8. Dong Y, Jiang Y, Du R et al. Impact of chromosomal heteromorphisms on reproductive failure and analysis of 38 heteromorphic pedigrees in Northeast China. J Assist Reprod Genet. 2013; 30: 275-281.
9. Krausz C, Hoefsloot L, Simoni M et al. EAA/EMQN best practice guidelines for molecular diagnosis of Y-chromosomal microdeletions: state-of-the-art 2013. Andrology. 2014; 2: 5-19.
a
Статья поступила в редакцию 21.05.2015 г.
Субботин А.В., Семенов В.А., Смирнов В.Д., Мошнегуц С.В., Зуева С.А.
Кемеровская государственная медицинская академия, Кемеровская областная клиническая больница,
г. Кемерово
НЕИРОВИЗУАЛИЗАЦИЯ (МРТ-ИССЛЕДОВАНИЕ)
ХРОНИЧЕСКОГО КЛЕЩЕВОГО ЭНЦЕФАЛИТА
Предмет наблюдения. Представлена магнитно-резонансная картина начальных проявлений хронического клещевого энцефалита с судорожно-гиперкинетическим синдромом у вакцинированного пациента.
Цель исследования - новые представления МР-картины при ХКЭ.
Методы исследования. МРТ, ЭЭГ, иммунологические исследования.
Основные результаты. Мелкие периваскулярные очаги глиоза и нейродегенерации, соответствующие васкулиту при ХКЭ. Область их применения. Лучевая диагностика, неврология, инфекционные болезни.
Выводы. При ХКЭ выявляются нейродистрофические изменения, соответствующие периваскулярному домену. Ключевые слова: хронический клещевой энцефалит; МРТ.
66
T. 14 № 3 2015
Medicine
in Kuzbass
в Кузбассе
СЛУЧАИ ИЗ ПРАКТИКИ
Subbotin A.V., Semernov V.A., Smirnov V.D., Moshneguts S.V., Zueva S.A.
Kemerovo State Medical Academy,
Kemerovo Regional Clinical Hospital, Kemerovo
NEUROVISUALIZATION (MRI-RESEARCH) OF CHRONIC TICK BORNE ENCEPHALITIS Objective. The MRI findings of the early onset of chronic tick borne encephalitis with convulsion-hyperkinetic syndrome in a vaccinated patient are presented.
Purpose. New knowledge about MR-image of chronic tick borne encephalitis.
Methods: MRI, EEG, immunological researches.
Results: Small perivascular foci of gliosis and neurodegeneration are results of chronic tick borne encephalitis.
Application area. Radio diagnostics, neurology, infection diseases.
Conclusions: Neurodegenerative foci in the perivascular domain are typical for chronic tick borne encephalitis.
Key words: chronic tick borne encephalitis; MRI.
Хронический клещевой энцефалит (ХКЭ) остается в настоящее время недостаточно изученным. Практически отсутствуют нейрови-зуализационные сведения о начальных проявлениях этой патологии. Современные представления о нейровизуализации магнитно-резонансной томографией (МРТ) ХКЭ основываются на единичных работах, указывающих на наличие очагов поражения белого вещества головного мозга среднего размера (до 1,3 см). Однако работы не содержат результатов МРТ исследований начального периода заболевания, что значительно затрудняет этиологическую верификацию хронического клещевого энцефалита [1, 2]. Такой уровень научной разработки данного вопроса в настоящее время вызывает большие трудности при дифференциальной диагностике ХКЭ и демиелинизиру-ющих заболеваний и, в частности, рассеянного склероза. Анализ результатов морфологических исследований при клещевом энцефалите [3] свидетельствует о наличии типичной картины воспалительного процесса с микроциркуляторными нарушениями, явлениями васкулита и возникновением в исходе мелкоочаговых глиозных изменений в подкорковых образованиях центральной нервной системы.
Учитывая вышеизложенное, целесообразно дальнейшее исследование хронического клещевого энцефалита методами нейровизуализации.
ОПИСАНИЕ СЛУЧАЯ
Представляем редкий случай заболевания хроническим клещевым энцефалитом у привитого лица и результаты проведения нейровизуализационного исследования на ранней стадии заболевания. Пациент N, 1961 г. рождения, привит от клещевого энцефалита вакциной ФСМЕ серии АВ в дозе 0,5 дважды: 01.10.2009 и 25.02.2010. Заболел остро: 25.07.2010 развился инфекционный синдром; находился на стационарном лечении с 27.07.2010 по 10.09.2010; амбулаторное наблюдение проводится до настоящего времени. В острой стадии заболевания в неврологическом статусе выявлялся периферический парез прок-
Корреспонденцию адресовать:
СУББОТИН Анатолий Васильевич,
650000, г. Кемерово, пр. Советский, д. 71, кв. 66. Тел.: 8 (3842) 39-64-30; +7-903-909-57-68. E-mail: neurokemsma@yandex.ru
симального отдела левой верхней конечности до 2 баллов, тремор верхних конечностей. Диагноз при выписке: Клещевой энцефалит, энцефало-полиомиели-тическая форма, подкорково-мозжечковый синдром. Состояние больного удовлетворительное.
При амбулаторном наблюдении на протяжении 2010-2014 гг. у пациента отмечается тремор верхних конечностей, сохраняется высокий титр специфических иммуноглобулинов класса G к вирусу клещевого энцефалита.
На ЭЭГ от 06.09.2013 выявлены кратковременные апериодические колебания в виде острых высокоамплитудных форм патологической активности с медленными деформированными тета и дельта-волнами в лобной, височной и теменных областях правого полушария головного мозга. По клиническим данным (появление судорог в конечностях) установлен диагноз хронического клещевого энцефалита в виде формирования судорожно-гиперкинетического синдрома [4]; 03.02.2015 при ритмической фотостимуляции зарегистрированы единичные генерализованные острые медленные волны и единичные острые медленные волны, локализующиеся в правой височной области.
Магнитно-резонансная томография (МРТ) головного мозга выполнена на аппаратах Siemens HARMONY 1,0T (23.08.2010), Philips Achieva Nova 1,5T (02.11.2013), GE Brivo MR355 1,5T (03.12.2013) стандартным протоколом, включающим в себя Т1- и Т2-взвешенные импульсные последовательности, а также восстановление инверсии (TIR).
Биоэлектрическая активность головного мозга изучалась методом электроэнцефалографии (ЭЭГ). Использована международная система расположения электродов ЭЭГ «10 — 20»; биполярный и монополярный методы отведения электродов. Запись ЭЭГ проводилась на 17-канальном электроэнцефалографе «Nihon Konden» с применением программно-аппаратного комплекса «Нейротест, позволяющем производить расчет спектра сигналов с применением алгоритма быстрого преобразования Фурье по эпохам от 1 до 16 секунд с цифровой полосовой фильтрацией, выделением эффективной амплитуды и выраженности в 4-х частотных полосах (дельта, тета, альфа, бета).
Верификация возбудителя заболевания в 20102013 гг. проведена методом иммуноферментного анализа (ИФА) в иммунологической лаборатории Кемеровской областной клинической больницы. Исполь-
I
еЖбЯщш MediciinnKL=ss T. 14 № 3 2015
1
67
НЕЙРОВИЗУАЛИЗАЦИЯ (МРТ-ИССЛЕДОВАНИЕ) ХРОНИЧЕСКОГО КЛЕЩЕВОГО ЭНЦЕФАЛИТА
зовались тест-системы Векто Вирус Клещевого Энцефалита (ВКЭ) IgM и Векто ВКЭ IgG. Результаты приведены и обсуждены в предыдущих публикациях [5]. В 2014 году исследование проведено в лаборатории клещевого энцефалита и других вирусных энцефалитов ФГБНУ ИПВЭ им. М.П. Чумакова. Применялся набор реагентов для ИФА «ВектоВКЭ-^М», серия 153; «ВектоВКЭ-Аг», серия 142, срок годности до 02.04.15; «ВектоВКЭ-IgG», серия 142, «ВектоВКЭ-^М», серия 162. В результате в сыворотке крови пациента обнаружены антитела ^М в титре 1 : 200 и антитела IgG в титре 1 : 12800. Нали-
чие IgM в сочетании с IgG и антигемагглютинирующими антителами может свидетельствовать об обострении ХКЭ и об активации персистирующего ВКЭ.
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
На МРТ, выполненной в подострой стадии клещевого энцефалита (23.08.10), отмечается асимметричное, преимущественно левостороннее, поражение белого вещества головного мозга в виде немногочисленных (до 5) очагов, имеющих гиперинтенсивный
Рисунок 1
Аксиальные Т2-взвешенные срезы, толщина 5 мм (23.08.2010). Мелкие точечные гиперинтенсивные очаги в зонах заднего водораздела отмечены стрелками
Figure 1
Axial T2-weighted slices, slice thickness 5 mm (23.08.2010). Small point-like hyperintensive foci found in posterior watershed zones - marked with arrows
Сведения об авторах:
СУББОТИН Анатолий Васильевич, доктор мед. наук, профессор, зав. кафедрой неврологии, нейрохирургии и медицинской генетики, ГБОУ ВПО КемГМА России, г. Кемерово, Россия. E-mail: neurokemsma@yandex.ru
СЕМЕНОВ Владимир Александрович, доктор мед. наук, профессор, кафедра неврологии, нейрохирургии и медицинской генетики, ГБОУ ВПО КемГМА России, г. Кемерово, Россия.
МОШНЕГУЦ Сергей Валерьевич, канд. мед. наук, врач, отделение лучевой диагностики, ГАУЗ «КОКБ», г. Кемерово, Россия. СМИРНОВ Вадим Дмитриевич, канд. мед. наук, врач, отделение функциональной диагностики, ГАУЗ «КОКБ», г. Кемерово, Россия. ЗУЕВА Светлана Алексеевна, зав. отделением неврологии, ГАУЗ «КОКБ», г. Кемерово, Россия.
Information about authors:
SUBBOTIN Anatoly Vasiljevich, MD., doctor of medical sciences, professor, the Head of the Neurology, Neurosurgery and Medical Genetics Department at the FSBEI HPE Kemerovo State Medical Academy, Kemerovo, Russia. E-mail: neurokemsma@yandex.ru SEMENOV Vladimir Alexandrovich, doctor of medical sciences, professor, Kemerovo State Medical Academy, Kemerovo, Russia. MOSHNEGUTS Sergey Valerjevich, candidate of biological sciences, physician, department of radio-diagnosis, Kemerovo Regional Clinical Hospital, Kemerovo, Russia.
SMIRNOV Vadim Dmitrievich, candidate of biological sciences, physician, department of electrophysiological diagnosis, Kemerovo Regional Clinical Hospital, Kemerovo, Russia.
ZUEVA Svetlana Alexeevich, the head of the neurological department, Kemerovo Regional Clinical Hospital, Kemerovo, Russia.
68
T. 14 № 3 2015 Ме^с1П^
СЛУЧАИ ИЗ ПРАКТИКИ
МР сигнал по T2WI и TIRM, изо-гипоинтенсивных по T1WI, локализованных преимущественно пери-вентрикулярно задним рогам боковых желудочков. Размеры очагов колеблются от 0,5 см до 1,0 см с небольшим перифокальным отеком. В базальных структурах (бледный шар, нижнелатеральные волокна внутренней сумки), в меньшей степени паравазально, в белом веществе обоих полушарий обнаружены признаки микроциркуляторных нарушений по типу расширения пространств Вирхова-Робина. Отмечается формирование небольших участков глиоза. На DWI (b = 500, b = 1000), ADC картировании очаговых изменений не выявлено.
При динамическом наблюдении пациента (2013 г.) на МР-томограммах не отмечается атрофии вещества мозга; имеются косвенные признаки внутричерепной гипертензии: некоторое расширение периоп-тических субарахноидальных пространств без расширения полостной системы головного мозга. В пределах белого вещества головного мозга (зоны заднего водораздела сосудистых бассейнов) как справа, так и слева (рис. 1-6) отмечены Т2/FLAIR-ги-перинтенсивные мелкие точечные очаги, расположенные юкстакортикально, субкортикально и в глубоких отделах белого вещества (пограничная зона); подобный очаг визуализирован юкстакортикально в передней инсулярной зоне слева. Форма очагов округлая, либо веретеновидная, расположение по радиальному типу перпендикулярно границам боковых желудочков. После введения гадолиний-содержаще-го контрастного вещества признаков патологического накопления не обнаружено. Количество, размеры и форма очагов не претерпевают существенной трансформации. Указанные очаги по совокупнос-
Рисунок 2
Сагиттальные Т2 TIRM-взвешенные срезы, толщина 5 мм (11.08.2011) Figure 2
Sagittal T2 FLAIR-weighted slices, slice thickness 5 mm (11.08.2011)
ти признаков вероятнее принадлежат к периваску-лярному домену, что, в свою очередь, предполагает инфекционный, воспалительный характер поражения [6].
Полученные результаты нейровизуализации отражают современные представления МР картины ХКЭ
Рисунок 3
Аксиальные Т2-взвешенные срезы, толщина 5 мм (3.12.2013)
Figure 3
Axial T2-weighted slices, slice thickness 5 mm (3.12.2013)
О'Йййя#та
в Кузбассе
Medicine
in Kuzbass
T. 14 № 3 2015
69
НЕЙРОВИЗУАЛИЗАЦИЯ (МРТ-ИССЛЕДОВАНИЕ) ХРОНИЧЕСКОГО КЛЕЩЕВОГО ЭНЦЕФАЛИТА
Рисунок 4
Аксиальные Т2 FLAIR - взвешенные срезы, толщина 5 мм (3.12.2013)
Figure 4
Axial T2 FLAIR-weighted slices, slice thickness 5 mm (3.12.2013)
Рисунок 5
Аксиальные T2 irFSE-взвешенные срезы, толщина 4 мм (3.12.2013)
Figure 5
Axial T2 irFSE-weighted slices slice thickness 4 mm (3.12.2013)
с выявлением очагов воспалительной деградации нейронов центральной нервной системы с признаками нейронофагии и реактивного астроцитоза [7, 8]. МР-данные соответствуют патоморфологическим изменениям, описанным ранее в неврологических исследованиях. Так, А.Н. Шаповал указывает на наличие при клещевом энцефалите типичных периваскуляр-
ных инфильтратов с очагами нейродегенерации и гли-оза [3].
Представленную МР картину периваскулярных мелких очагов глиоза, соответствующих периваску-лярному домену у рассматриваемого пациента, следует расценивать как проявление хронического клещевого энцефалита.
70
T. 14 № 3 2015 MediciinnLass
СЛУЧАИ ИЗ ПРАКТИКИ
Рисунок 6
Аксиальные Т1 3D FSPGR-взвешенные срезы, толщина 5 мм, с контрастированием (3.12.2013)
Figure 6
Axial Т1 3D FSPGR-weighted slices, slice thickness 5 mm, contrast-enhanced (3.12.2013)
ЛИТЕРАТУРА / REFERENCES:_____________________________________________________________________________________________
1. Khafizova IF, Fazylov VKh, Yakupov EZ, Matveeva TV, Khakimov AR, Malanova RF. The chronic form of tick-borne encephalitis: clinical features and diagnosis (literature review). Vestn. of modern clinical medicine. 2013. 3: 78-84. Russian (Хафизова И.Ф., Фазылов В.Х., Якупов Э.З., Матвеева Т.В., Хакимова А.Р., Муллаянова Р.Ф. Хроническая форма клещевого энцефалита: особенности клиники и диагностики (обзор литературы) //Вестник современной клинической медицины. 2013. № 3. С. 78-84).
2. Khafizova IF, Yakupov EZ, Matveeva TV et al. The chronic form of tick-borne encephalitis with painting disseminated encephalomyelitis (a clinical case). J. of Neurology and psychiatry. 2012; 9, Issue.2: 48-51. Russian (Хафизова И.Ф., Якупов Э.З., Матвеева Т.В.и др. Хроническая форма клещевого энцефалита с картиной рассеянного энцефаломиелита (описание клинического случая). //Журнал неврологии и психиатрии. 2012. № 9 (Вып. 2). С. 48-51.).
3. Shapoval AN. Tick-borne encephalomyelitis. M., Med. 1980. 255 p. Russian (Шаповал А.Н. Клещевой энцефаломиелит. М., Мед. 1980. 255 с.).
4. Patent SU 1806599 A. A method for predicting chronic tick-borne encephalitis syndrome Kozhevnikov epilepsy. Posted: 07.04.1993. Author: AV Sub-botin. Russian (Патент SU 1806599 A. Способ прогнозирования хронического клещевого энцефалита с синдромом эпилепсии Кожевникова. Опубликовано: 07.04.1993. Автор: Субботин А.В.).
5. Subbotin VA, Semenov VA, Smirnov VD. Case of chronic tick-borne encephalitis in vaccinated patient. J. epidemiology and prevention. 2014; 3: 104-109. Russian (Субботин А.В., Семенов В.А., Смирнов В.Д. Случай развития хронического клещевого энцефалита у вакцинированного пациента //Журнал эпидемиология и вакцинопрофилактика. 2014. № 3. С. 104-109.).
6. S. Medrano Martorell, M. Cuadrado Blazquez, D. Garcia Figueredo, S. Gonzalez Ortiz, J. Capellades Font. Hyperintense punctiform images in the white matter: A diagnostic approach. Radiologya. 2012; 54(4): 321-335.
7. Alkadhi H, Kollias SS. MRI in tick-borne encephalitis. Еuroradiology. 2000. Oct; 42(10): 753-755.
8. Marjelund S, Tikkakoski T, Tuisku S, Rдisдnen S. Magnetic resonance imaging findings and outcome in severe tick-borne encephalitis. Report of four cases and review of the literature. Acta Radiol. 2004. Feb; 45(1): 88-94.
в Кузбассе
Medicine
in Kuzbass
T. 14 № 3 2015
71
