CC BY
50
В лаборатории экспериментальной фармакологии ного сбора на моделях язвенной болезни желудка и две-ИОЭБ СО РАН доказана эффективность разработан- надцатиперстной кишки.
THE METHOD OF STANDARTIZATION OF THE ANTIULCEROGENIC PLANT DRUG MIXTURE
P.B. Lubsandorjieva, T.A. Azunova, L.N. Shantanova, L.Ch. Muchanova, A.A. Unagaeva, S.M. Nicolaev (The institute of the General and Experimental Biology, Siberian Department of the Russian Academy of
Sciences, Ulan-Uda)
The standartization metod of 9- component drug plant mixture based on a quantative content of hydrofiUic biological active compounds data in decoction were proposed. The choice of the standard compound and flavonoid extraction optimal conditions for their analysis were based.
ЛИТЕРАТУРА
1. Давыдова ВА., Балтина Л.А., Сердюк Н.Г. и др. Противовоспалительные и противоязвенные свойства новыгх эфиров глицирризиновой кислоты. // Химико- фарма-цевтич. журнал. — 1997. — № 8. — С.23-25.
2. Евдокимова О.В., Самылина И.А., Нестерова О.В. Определение содержания суммы фосфолипидов и кароти-ноидов в плодах некоторый видов боярышника. // Фармация. — 1992. — №9 6. — С.70-72.
3. Крутикова ТА. Количественное определение оксико-ричных кислот в листьях кукурузы. // Растит. ресурсы.
— 1971. — Т. 7, Выш. 3. — С.449-453.
4. Левашова И.Г., Комиссаренко В.П., Жданова В.П., Шатунов Л.В. Гиперозид — как стандарт для контроля качества лекарственных средств и средств медицинского микроанализа. // Проблемы стандартизации и контроля качества лекарственных средств. — М.,1991. - Т. 2, Ч.
2. — С.37-38.
5. Лукьянчикое М. С. Количественное определение флаво-ноидов в некоторых представителях семейства БаЬасеае. //Химия природн. соединений. — 1984. — №°
1. — С.43.
6. Матасова С.А., Митина НА, Рыжова Г.Л. и др. Получение сухого экстракта из корней девясила высокого и изучение его химического состава. // Химия растит. сырья. — 1999. — №9 2. — С.119.
7. Машковский М.Д. Лекарственные средства. — М., 2000.
— Т.1. — 540 с.; — Т. 2. — 608 с.
8. Муравьев ИА, Шатило В.В., Семенченко В. Ф. Спектро-
фотометрический метод количественного определения урсоловой кислоты. // Химия природн. соедин. — 1972.
- № 6. — С.738.
9. Покровский АГ., Ильичева Т.Н., Проняева Т.Р. и др. Иммуномодулирующая активность производныгх урсоловой кислоты. // Доклады Академии наук. — 1999. — Т. 369, №9 3. — С.414-415.
10. Приступа ЕА, Попов Д.М. Совершенствование технологии приготовления и контроля качества витамин-ныгх чаев. // Акт. проблемы фармацевтической технологии: Научн.труды ВНИИФ. — Т. XXXII. — М., 1994. — С.151-159.
11. Соколов С.Я., Замотаев И.П. Справочник по лекарственным растениям (Фитотерапия). — М., 1990. — 428 с.
12. Чемесова И.И., Чубарова С.Л., Саканян Е.И. и др. Спектрофотометрический метод количественной оценки содержания полифенолов в сухом экстракте из надземной части Melilotus officinalis (L.) Pall. и в его лекарственной форме (таблетках). // Растит. ресурсы. — 2000.
— Т. 36, Выш. 1. — С.86-91.
13. Якубова М.Р., Генкина Г.Л., Шакиров Г.Г. УФ спектрофотометрическое определение глицирризиновой кислоты в Glycyrrhiza glabra. // Химия природн. соедин. — 1977. — №9 6. — С.802-806.
14. Brasseur Т. Medikaments renfermant des flavonoids. // J. Pharm. Belg. — 1989. — Vol. 44, №9 6. — P.403-410.
15. Elliott Middleton Jr. The flavonoids. // Trends in Pharmac. Sci. — 1984. — Vol. 5, №9 8. — P.335-338.
16. Wagner H., Bladt S. Plant drug analysis — athin layer chromatography atlas. — Berlin, 1995. — 384 p.
© РАЗУВАЕВА Я.Г., УБАШЕЕВ И.О., ЛОНШАКОВА К.С., ЖАПОВА В.В. -
НЕЙРОПРОТЕКТОРНОЕ ДЕЙСТВИЕ КОМПЛЕКСНОГО РАСТИТЕЛЬНОГО СРЕДСТВА НООФИТ ПРИ АЛКОГОЛЬНОЙ ИНТОКСИКАЦИИ У БЕЛЫХ КРЫС
Я.Г. Разуваева, И. О. Убашеев, К. С. Лоншакова, В.В. Жапова
(Институт общей и эксперименталыной биологии СО РАН, г. Улан-Удэ, директор — чл.-корр. РАН, д.б.н., проф.
В.М.Корсунов)
Резюме. Установлено, что комплексное растителыное средство Ноофит обладает выраженным нейропротектор-ным действием в условиях эксперименталыной алкоголыной интоксикации. Базисным механизмом нейропротек-торного действия Ноофита является способносты его ингибироваты процессы перекисного окисления липидов, и стимулироваты антиоксидантную систему.
Ключевые слова. Фитосбор Ноофит, этанол, условный рефлекс пассивного избегания, гиппокамп.
Формирование алкоголыной зависимости обуслов- говых структур и негативно сказывается на познавателы-
лено нарушением функционирования различных био- ных функциях мозга. В клинике алкоголизма приме-
химических и физиологических процессов, что приво- няется широкий набор лекарственных средств, влияние
дит к морфологическим изменениям болышинства моз- которых направлено на нормализацию структурно-
функционального состояния головного мозга и высших интегративных процессов — памяти, внимания, мышления: ноотропы, антидепрессанты, адаптогены и другие. Однако эти средства не всегда могут обеспечить достаточный терапевтический эффект, и их применение нередко приводит к нежелательным, часто токсическим проявлениям, что резко снижает качество лечения [4,7,10].
На сегодняшний день пристальное внимание исследователей привлекают лекарственные средства растительного происхождения, издавна применяющиеся в народной и традиционной медицине при заболеваниях нервной системы, и широко изучающиеся в последние десятилетия при различных нарушениях центральной нервной системы, вызванных интоксикацией, травмой головы, гипоксией, алкоголизмом и другими патологическими состояниями [5,9].
Особый интерес представляет разработанное новое растительное средство, условно названное «Ноофит», в составе которого: шлемник байкальский (Scutellaria baicalensis Georgi), левзея сафлоровидная (Rhaponticum carthamoides WILLD), мята перечная (Mentha piperita L.), крапива двудомная (Urtica dioica L.) и другие виды растений.
Целью настоящей работы явилось определение ней-ропротекторной активности Ноофита при алкогольной интоксикации.
Материалы и методы
Исследования выполнены на 80 белых крысах линии Wistar обоего пола с исходной массой 160-170 г. Алкогольную интоксикацию у белых крыс вызывали введением животным внутрижелудочно 40 % раствора этанола ежедневно в течение 45 дней. Исследуемый фитосбор Ноофит в форме отвара, приготовленного по ГФ XI издания (1990), в объеме 1,0 мл/100г массы и препарат сравнения — пирацетам в дозе 200 мг/кг вводили белым крысам внутрижелудочно ежедневно через 6-8 ча-
сов после каждого введения раствора этанола. Выбор данного препарата сравнения обусловлен тем, что в последние годы широкое применение в клинике алкоголизма получили лекарственные средства с ноотропным типом действия [7]. Животным контрольной группы на фоне алкогольной интоксикации вводили в эквивалентном объеме дистиллированную воду по аналогичной схеме. Крысам интактной группы раствор этанола не вводили.
На 45 день введения 40 % раствора этанола животные в каждой группе были хаотично разделены на 2 равные части. В первой серии эксперимента по сохранности условного рефлекса пассивного избегания (УРПИ) исследовали влияние Ноофита на процессы обучения и памяти у белых крыс в условиях алкогольной интоксикации. Регистрировали латентное время первого захода животных в темный — «опасный» отсек камеры и время, проведенное в темном и светлом отсеках за 200 секунд наблюдения. Проверку сохранности рефлекса проводили через 1 час, 24 часа и 7 суток [7].
Во второй серии эксперимента животных декапи-тировали под эфирным наркозом. Головной мозг извлекали для проведения гистологических и биохимических исследований. Для гистологических исследований головной мозг крыс фиксировали в 10% нейтральном формалине, заливали в целлоидин-парафин. Срезы окрашивали крезилвиолетом по Нисслю. Для определения степени тяжести повреждений, на микроскопе МБИ-10 при увеличении 7х40, проводили морфо метрический анализ клеток гиппокампа по степени окраски крезилвиолетом. Клетки были разделены на 2 группы: темные с резкой степенью гиперхромии и светлые, имеющие светлое ядро и разное содержание тигроид-ного вещества в цитоплазме. Определялось количество (в %) темных и светлых клеток по отношению к общей сумме клеток [1].
Для оценки состояния процессов перекисного окисления липидов в гомогенатах ткани головного мозга
21111,
1 "ill
латентный Щи
пери о д^ сек "ill
и А
.1
до обучения: 2 - через 1 час: - через 2-\
часа:-1 - через 7 суток
Интакіная (дист.вода) Опытная (этанол + Ноофит)
□ Контрольная (этанол+ДИСТ.В од а) ЕЗ Опытная (этанол+ пирацетам)
Примечание. Здесь и далее: * - значения достоверны по сравнению с данными у животных контрольной группы при Р<0,05;** - значения достоверны по сравнению с данными у животных интактной группы при Р<0,05.
Рис. 1. Влияние Ноофита и пирацетама на сохранение условного рефлекса пассивного избегания у белых крыс на
фоне введения этанола.
лабораторных животных определяли содержание конечного продукта распада малонового диальдегида (МДА) [2] и уровень активности каталазы [8].
Достоверность различий между экспериментальными группами по изученным параметрам оценивали с помощью и критерия Манна-Уитни.
Результаты и обсуждение
Результаты исследований показали, что введение белым крысам 40 % раствора этанола в течение 45 дней не влияет на выработку условного рефлекса у животных, однако приводит к стойким нарушениям мнести-ческих функций. Так, при проверке выработки УРПИ через 1 час у крыс контрольной и опытных групп на фоне алкоголизации латентный период захода в темный отсек равен 200,0 с (рис. 1), а через 24 часа и через 7 суток этот показатель у животных в контрольной группе снижается на 52,6 и 65,6 % соответственно по сравнению с таковым у крыс интактной группы. Эти данные согласуются с результатами исследований других авторов [10], показавших, что этанол нарушает выработку условного рефлекса только после 4 месяцев введения, однако даже однократное его введение приводит к нарушениям процессов памяти.
В экспериментах на животных установлена способность ноотропов ослаблять общую интоксикацию, нарушения обучения и памяти, вызванные приемом этанола [4, 7]. Способность влиять на условно-рефлектор-
ную деятельность крыс, нарушенную алкогольной интоксикацией, характерна и для растительным средств с ноотропным типом действия [5].
Полученные нами данные показали, что введение белым крысам на фоне алкогольной интоксикации Ноофита в исследуемом обьеме и пирацетама вызывает у животным сохранность памятного следа. Так, время захода в темный отсек (латентный период) у животных в этих группах выше такового у крыс контрольной группы через 24 часа на 56,8 и 56,6 % соответственно, на 7 сутки исследования — на 63,0 и 70,3 % соответственно (рис. 1).
По данныым литературы [12,15], амнестический эффект алкоголя связан прежде всего с его преимущественным повреждающим воздействием на структуры гиппокампа. Нами проведен морфометрический анализ клеток гиппокампа по степени окраски его крезил-виолетом. Нервные клетки гиппокампа у интактных животных светлые и однородные по форме, содержат большое округлое ядро и узкий ободок цитоплазмы. Согласно усредненным количественным данным [1], такие клетки доминируют в гиппокампе, и составляют в среднем 95% от общего числа нейронов. Остальные 5% клеток в данных структурах составляют темные, ги-перхромные клетки. При 45-дневной алкогольной интоксикации у животных количество гиперхромных клеток увеличивается на 72,8% по сравнению с таковым у животных интактной группы.
Рис. 2. Влияние Ноофита и пирацетама на количество гиперхромных клеток в гиппокампе при алкогольной интоксикации у
бе лых крыс.
При введении животным Ноофита на микропрепаратах обнаружены отдельные гиперхромные клетки, которые не образовывают очаговых скоплений, и их количество снижается на 43,8 % по сравнению с таковым у животных контрольной группы.
По мнению некоторым авторов [6], ключевым звеном в гибели нейронов является активация перекис-ного окисления липидов. В литературе имеются сведения, что введение этанола [10,14] выхзышает активацию перекисного окисления липидов в мембранах клеток печени, мозга и сердца, что приводит к накоплению
содержания первичным и вторичным продуктов ПОЛ в тканях и повышению их концентрации в биологических жидкостях. В наших исследованиях введение этанола выхзышает повышение содержания МДА в гомогенатах мозга на 67,1% (табл.) по сравнению с таковыым у животным интактной группы.
Как известно, активация ПОЛ обычно протекает на фоне снижения активности антиоксидантной системы мозга [8]. Полученные данные показывают (табл.), что введение этанола, снижает активность антиоксидантного фермента — каталазы на 70,8% по сравнению с таковой у животным интактной группы.
Таблица
Влияние «Ноофита» и пирацетама на уровень содержания МДА и активность каталазы в гомогенатах ткани головного мозга белых крыс при алкогольной интоксикации (М±т)
/п № п/ Группы животных Средние величины показателей в группах
MJA, моль/г ткани Активность каталазы, мкат/г кани
1. Интактная (H2O), n=8 2,4±0,19 11,3±0,82
2. Контрольная (этанол +H2O), n=7 7,3±0,43** 3,3±0,23**
3. Oпытнaя (этанол + ^офит), n=7 3,9±0,21* 5,3±0,49*
4. Oпытнaя (этанол + пирацетам), n=7 3,1±0,24* 6,9±0,43*
тивности исследуемого фитосбора обусловлено, главным образом, комплексом фенольных соединений, содержащихся в его компонентах. Известно, что растительные полифенолы являются ловушками свободных радикалов, защищают организм от оксидантного стресса, блокируют процессы ПОЛ, меняют структурные характеристики биологических мембран [9,11,13]. К природным антиоксидантам относят также витамины Е, А, К [11,13], содержащиеся в большом количестве в компонентах исследуемого сбора.
Результаты наших исследований позволяют предположить, что улучшение гистологической картины головного мозга у крыс, получавших Ноофит, и восстановление у них когнитивных функций, вероятно, обусловлены антиоксидантным действием исследуемого фитосбора. Так, введение Ноофита на фоне алкогольной интоксикации вызывает (табл.) понижение содержания МДА (на 46,6%) и повышение активности каталазы (на 37,7%) в гомогенатах головного мозга крыс по сравнению с таковыми у животных контрольной группы. Наличие антиоксидантной ак-Таким образом, полученные данные свидетельствуют о том, что курсовое введение Ноофита на фоне алкогольной интоксикации оказывает выраженное ней-ропротекторное действие, которое характеризуется нормализацией когнитивным функций и морфофункционального состояния гиппокампа у белых крыгс. Установлено, что одним из базисных механизмов нейропротек-торного действия «Ноофита» является его антиоксидантная активность.
THE NEIROPROTECTIVE ACTION OF PLANT COLLECTION NOOPHYT AT THE ALCOHOLIC INTOXICATION IN WHITE RATS
Ya.G. Razuvaeva, I.O. Ubasheyev, K.S. Lonshakova, V.V. Zhapova (Institute of the General and Experimental biology, Siberian Branch, Russian Academy of Science, Ulan-Ude)
It is established, that plant collection Noophyt possesses expressed neiroprotective action in conditions of an experimental alcoholic intoxication. The basic mechanism of neiroprotective action of Noophyt is it's ability to inhibit processes of lipid peroxidations, and to activate antioxidation system.
ЛИТЕРАТУРА
1. Артюхина Н.И., Русинова Е.В. Асимметрия структурных изменений в гиппокампе кролика при состоянии «животного гипноза». // Доклады Академии наук. — 2002. — Т. 385, № 6. — С.830-832.
2. Владимиров Ю.В., Арчаков А.И. Перекисное окисление липидов в биологических мембранах. — М., 1972. — 252с.
3. Государственная фармакопея XI издание. — М., 1990.
— В 2 томах. — Т.1. — 360 с.
4. Гофман А.Г., Музыченко АП., Энтин Т.Н., Крылов Е.Н. Лекарственные средства в клинике алкоголизма и наркоманий. — М., 1999. — 121 с.
5. Дамдинова Г.Х. Ноотропное действие экстракта
шлемника байкальского: Автореф. дисс_____________
канд.мед.наук. — Улан-Удэ, 2001. — 20 с.
6. Завалишин ПА., Захарова М.Н. Оксидантныгй стресс — общий механизм повреждения при заболеваниях нервной системы. // Журн. неврологиии и психиатрии им С.С. Корсокова. — 1996. — Т. 96, №9 2. — С.111-114.
7. Ковалев Г.В. Ноотропные средства. — Волгоград, 1990.
— 368 с.
8. Королюк М.А., Иванова Л.И., Майорова И.Г. и др. Методы определения активности каталазы. // Лабор. дело. — 1988. — №9 6. — С.16-19.
9. Хазанов В.А., Смирнов Н.Б., Сайфутдинов P.P.
Церебропротекторные свойства
флавоноидсодержащих препаратов растительного происхождения. // Акт. проблемы фармакологии и поиск новых лекарственных препаратов. — Томск, 1999.
— Т. 10. - С.77-83.
10. Шабанов П.Д., Калишевич С.Ю. Биология алкоголизма.
— СПб., 1998. — 272 с.
11. CookN.C., Jamman S. Flavonoids: chemistry, metabolism, cardioprotective, effects and dietary sources. // J. Natur. Biochem. — 1996. — Vol. 7. — P.66-76.
12. De Beilis M.D, ClarkD.B., Beers S.R et.al. Hippocampal volume in adolescent-onset alcohol use disorders. // Amer. J. Psechiat. — 2000. — Vol. 157, № 5. — P.737-744.
13. Packer L., Rimbach G., Virgili F. Antioxydant activity and biologic properties of a procyanidin — rich extract from pine (Pinus maritime) bark, pycnogenol. // Free. Radic biol. Med. — 1999. — Vol. 27. — P.704-724.
14. Salonen J., Kauhanen J., Yla-Herttulla S. Alcohol, lipid peroxidation and athersclerosis. // Alcohol and Alcohol. — 1997.
— Vol. 32, №9 3. — P.334.
15. White A.M., Best P.J. Effects of ethanol on hippocampal place-cell and in-terneuron activity. // Brain Res. — 2000.
— Vol. 876, №9 1-2. — P.154-165.
