CC BY
11
© Коллектив авторов, 2021
Рыбкина В.Л., Синельщикова О.А., Ослина Д.С., Кириллова Е.Н., Азизова Т.В., Адамова Г.В., Жунтова Г.В.
Некоторые субпопуляции лимфоцитов у лиц, подвергшихся внутриутробному облучению
Федеральное государственное унитарное предприятие Южно-Уральский институт биофизики Федерального медико-биологического агентства, 456780, г. Озерск, Российская Федерация
Резюме
Введение. Известно, что в период внутриутробного развития формирующийся организм особенно чувствителен к неблагоприятным воздействиям. Радиационно-опосредо-ванные иммунологические нарушения играют важную роль в формировании не только ранних, но и отдаленных последствий облучения. В структуре синдромов иммунной недостаточности преобладали аллергический и аутоиммунный синдромы. Наиболее полно изучено состояние иммунитета у лиц, проживавших в бассейне реки Теча и подвергшихся хроническому радиационному воздействию в результате сбросов жидких радиоактивных отходов ПО «Маяк». В отдаленном периоде наблюдения в этой группе лиц зарегистрированы различные нарушения врожденного и адаптивного иммунитета.
Цель настоящего исследования - оценка субпопуляционного состава лимфоцитов у лиц, подвергшихся внутриутробному облучению, в отдаленном периоде после облучения.
Материал и методы. В исследовании проанализированы основные субпопуляции лимфоцитов у 56 человек: 29 лиц, подвергшихся внутриутробному облучению (23 женщины и 6 мужчин), и 27 лиц группы сравнения (25 женщин, 2 мужчин). Возраст обследованных - от 52 до 72 лет. Содержание основных субпопуляций лимфоцитов определяли с помощью проточной цитофлуориметрии.
Результаты. Не выявлено отклонений в абсолютном и относительном содержании субпопуляций лимфоцитов. Установлена тенденция к снижению количества лимфоцитов, экспрессирующих маркер ранней активации CD25 с увеличением суммарной дозы внешнего у-облучения матери в период беременности.
Обсуждение. Полученные данные о субпопуляционном составе лимфоцитов согласуются с результатами обследования лиц, проживавших в бассейне реки Теча и подвергшихся внутриутробному облучению в результате сбросов жидких радиоактивных отходов ПО «Маяк», в ходе которого также не выявлено изменений субпопуляционного состава лимфоцитов у внутриутробно облученных лиц. Выявленная тенденция к снижению относительного количества лимфоцитов, экспрессирующих маркер ранней активации CD25, у лиц, подвергшихся внутриутробному облучению, с увеличением суммарной поглощенной в костном мозге дозы внешнего у-излучения в период беременности матери согласуется с результатами экспериментальных исследований.
Заключение. В результате исследования лиц, подвергшихся внутриутробному облучению, не выявлено отклонений в основных субпопуляциях лимфоцитов. Обнаружена тенденция к снижению относительного количества лимфоцитов, экспрессирующих маркер ранней активации CD25 у лиц, подвергшихся внутриутробному облучению, с увеличением суммарной поглощенной в костном мозге дозы внешнего у-излучения в период беременности матери.
Ключевые слова: субпопуляции лимфоцитов; внутриутробное облучение; радиочувствительность клеток; иммунитет
Статья получена 29.01.2021. Принята в печать 16.03.2021.
Для цитирования: Рыбкина В.Л., Синельщикова О.А., Ослина Д.С., Кириллова Е.Н., Азизова Т.В., Адамова Г.В., Жунтова Г.В. Некоторые субпопуляции лимфоцитов у лиц, подвергшихся внутриутробному облучению. Иммунология. 2021; 42 (3): 261-269. DOI: https://doi.org/10.33029/0206-4952-2021-42-3-261-269
Финансирование. Настоящее исследование выполнено в рамках Государственного контракта от 15 июля 2019 г. № 11.313.19.2 с Федеральным медико-биологическим агентством «Медико-биологические последствия воздействия хронического облучения на иммуногемопоэз» (шифр «Иммуногемопоэз-19»).
Конфликт интересов. Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.
Для корреспонденции
Рыбкина Валентина Львовна -доктор медицинских наук, заведующая лабораторией радиационной биологии клинического отдела ФГУП ЮУрИБФ ФМБА России, Озерск, Российская Федерация E-mail: clinic@subi.su https://orcid.org/0000-0001-5096-9774
Rybkina V.L., Sinel'shchikova O.A., Oslina D.S., Kirillova E.N., Azizova T.V., Adamova G.V., Zhuntova G.V.
Some subpopulations of lymphocytes in individuals exposed to ionizing radiation in utero
Southern Urals Biophysics Institute of the Federal Medical-Biological Agency, 456780, Ozyorsk, Russian Federation
Abstract
Introduction. It is known that during the period of intrauterine development, the developing organism is especially sensitive to adverse influences. Radiation-mediated immunological disorders play an important role in the formation of not only the early, but also the long-term consequences of radiation. Allergic and autoimmune syndromes predominated in the structure of immune deficiency syndromes. The state of immunity has been studied most fully in persons living in the Techa river basin and exposed to chronic radiation exposure as a result of discharges of liquid radioactive waste from the Mayak Production Association. In the long-term follow-up period, various disorders of innate and adaptive immunity were recorded in this group of individuals.
The aim of this study is to assess the subpopulation composition of lymphocytes in individuals exposed to intrauterine irradiation in the long term after irradiation.
Material and methods. In this work, the main subpopulations of lymphocytes were analyzed. The number of examined individuals was 56: 29 individuals in utero exposed to ionizing radiation (23 women and 6 men) and controls (25 women and 2 men). The age of the surveyed was from 52 to 72 years. Main lymphocyte subpopulations were measured using flow cytofluorimetry.
Results. There were no deviations in the absolute and relative content of lymphocyte subpopulations. There was a tendency towards a decrease in the number of lymphocytes expressing the marker of early activation CD25 with an increase in the total dose of external y-irradiation of the mother during pregnancy.
Discussion. The obtained data on the subpopulation composition of lymphocytes are consistent with the results of a survey of persons living in the Techa river basin and exposed to intrauterine irradiation because of discharges of liquid radioactive waste from the Mayak Production Association, during which no changes in the subpopulation composition of lymphocytes were detected in prenatally irradiated persons. The revealed tendency towards a decrease in the relative number of lymphocytes expressing the marker of early activation of CD25 in persons exposed to intrauterine irradiation with an increase in the total absorbed dose of external y-radiation in the bone marrow during the mother's pregnancy is consistent with the results of experimental studies.
Conclusion. As a result of the study of persons exposed to intrauterine irradiation, no abnormalities were found in the main subpopulations of lymphocytes. A tendency towards a decrease in the relative number of lymphocytes expressing the marker of early activation of CD25 in persons exposed to intrauterine irradiation with an increase in the total absorbed dose of external y-radiation during the mother's pregnancy was found.
Keywords: lymphocyte subpopulations; in utero radiation exposure; cell radiosensitivity; immunity
Received 29.01.2021. Accepted 16.03.2021.
For citation: Rybkina V.L., Sinel'shchikova O.A., Oslina D.S., Kirillova E.N., Azizova T.V., Adamova G.V., Zhuntova G.V. Some subpopulations of lymphocytes in individuals exposed to ionizing radiation in utero. Immunologiya. 2021; 42 (3): 261-9. DOI: https://doi.org/10.33029/0206-4952-2021-42-3-261-269 (in Russian).
Funding. This study was carried out under the State Contract No. 11.313.19.2 of July 15, 2019 with the Federal Medical-Biological Agency «Medical-Biological consequences of the effects of chronic exposure on immunohemopoiesis» (code «Immunohemopoiesis-19»).
For correspondence
Valentina L. Rybkina - MD, PhD, Head of the Laboratory of Radiation Biology of the Clinical Department at the SUBI of the FMBA of Russia, Ozersk, Russian Federation E-mail: clinic@subi.su https://orcid.org/0000-0001-5096-9774
Conflict of interests. The authors declare no conflict of interests.
Введение
Известно, что в период внутриутробного развития формирующийся организм особенно чувствителен к неблагоприятным воздействиям [1]. В это время радиочувствительность клеток зародыша, эмбриона и плода велика ввиду их более высокой пролиферативной активности [2, 3].
Радиационно-опосредованные иммунологические нарушения играют важную роль в формировании не только ранних, но и отдаленных последствий облучения [4, 5]. Так, у подростков, подвергшихся облучению в период внутриутробного развития после аварии на Чернобыльской атомной электростанции (ЧАЭС), отмечалась тенденция к лимфопении: увеличение числа лимфоцитов, экспрессирующих молекулы адгезии, снижение содержания в сыворотке крови [6, 7]. Результаты наблюдений за лицами, пережившими атомную бомбардировку в Хиросиме и Нагасаки, свидетельствуют об изменении состояния иммунитета у лиц, подвергшихся внутриутробному облучению: через 20 лет обнаружено нарушение выработки антител и пролиферативной активности Т-лимфоцитов [8]. При обследовании потомков работников предприятия атомной промышленности, подвергавшихся антенатальному облучению, зарегистрированы некоторые сдвиги в иммунном статусе, характеризующиеся снижением активности системы комплемента, увеличением содержания ]£0, интерлейкинов(ИЛ)-1а, ИЛ-4, интерферона-у и фактора некроза опухолей а в сыворотке крови и количества фагоцитирующих нейтрофилов через 40-45 лет после облучения [9, 10]. В структуре синдромов иммунной недостаточности преобладали аллергический и аутоиммунный [9, 10]. Наиболее полно изучено состояние иммунитета у лиц, проживавших в бассейне реки Теча и подвергшихся хроническому радиационному воздействию в результате сбросов жидких радиоактивных отходов производственного объединения (ПО) «Маяк». В отдаленном периоде наблюдения в этой группе лиц зарегистрированы различные нарушения врожденного и адаптивного иммунитета [11-15].
Сведения о влиянии внутриутробного облучения на состояние иммунитета немногочисленны, причем не все исследования содержат комплексную оценку иммунного статуса. Практически отсутствуют данные о характере зависимости изменений от дозы внутриутробного облучения при различных видах излучения.
В первые годы деятельности первого в Российской Федерации предприятия атомной промышленности ПО «Маяк» вследствие несовершенства технологий некоторые работницы подверглись облучению в период беременности и, как следствие, их потомки подверглись внутриутробному облучению.
Цель настоящего исследования - оценка субпопу-ляционного состава лимфоцитов у лиц, подвергшихся внутриутробному облучению, в отдаленном периоде после облучения.
Материал и методы
Участники исследования. Для исследования были сформированы 2 группы: основная и группа сравнения.
Критерии отбора в основную группу:
• установленный факт внутриутробного облучения на основании профессионального маршрута матери и данных о ее репродуктивном здоровье;
• известные индивидуальные измеренные годовые дозы внешнего у-облучения матери в период беременности;
• год рождения потомков 1948-1968;
• известный жизненный статус и статус проживания потомка;
• проживание в г. Озерске на момент привлечения к исследованию;
• наличие в медико-дозиметрической базе данных «Клиника» [16] полной медицинской информации и сведений о нерадиационных факторах риска за весь период наблюдения матери и потомка;
• отсутствие профессионального и терапевтического облучения, проживания на загрязненных радионуклидами территориях, участия в ликвидации последствий радиационных аварий у потомков;
• отсутствие установленного диагноза злокачественного новообразования (ЗНО), аллергического и аутоиммунного заболевания, острого или обострения хронического инфекционного заболевания, хронического алкоголизма и злоупотребления алкоголем на момент обследования.
Критерии включения в группу сравнения:
• отсутствие факта внутриутробного, профессионального и терапевтического облучения, проживания на загрязненных радионуклидами территориях, участия в ликвидации последствий радиационных аварий;
• место рождения - г. Озерск (город расположен в непосредственной близости к ПО «Маяк»);
• год рождения лиц группы сравнения 1948-1968;
• возраст лиц группы сравнения соответствует возрасту лиц основной группы (± 1 год) на момент обследования;
• проживание в г. Озерске на момент привлечения к исследованию;
• наличие в медико-дозиметрической базе данных «Клиника» медицинской информации и данных о нерадиационных факторах риска за весь период наблюдения матери и потомка;
• отсутствие установленного диагноза ЗНО, аллергического и аутоиммунного заболевания, острого или обострения хронического инфекционного заболевания, хронического алкоголизма и злоупотребления алкоголем на момент обследования.
Субъекты привлекались к биомедицинским исследованиям только после получения письменного согласия индивидуума на добровольное участие в исследовании в виде подписанного информированного согласия [17]. Одновременно участники исследования подписывали согласие на обработку персональных данных [18]. Ис-
Таблица 1. Характеристика исследованных групп
Показатель Основная группа (n = 29) Группа сравнения (n = 27)
Пол Женский 23 (79,3 %) 25 (92,6 %)
Мужской 6 (20,7 %) 2 (7,4 %)
Возраст, годы М; Ме ¿1; Q3) [ДИ 95,0%] 66,9; 67 (66; 68) [66; 68] 65,2; 67 (62; 69) [62; 69]
Суммарная доза внешнего у-облучения за период беременности, Гр М; Ме (¿1; ¿3) [ДИ 95,0%] 0,23; 0,12 (0,15; 0,27) [0,16; 0,26]
Возраст беременности матери, годы М; Ме (¿1; ¿3) [ДИ 95,0%] 24,93; 24 (22; 28) [23; 26] 26,93 26 (25; 29) [25; 29]
Курящие: количество, % 8; 27,59 10; 37,04
Примечание. М- среднее; Ме - медиана: (¿1; ¿3) - 25-й и 75-й перцентили (первый и третий квартиль); ДИ - доверительные интервалы для медианы.
следование одобрено локальным комитетом по этике ЮУрИБФ ФМБА России в соответствии с Хельсинкской декларацией Всемирной медицинской ассоциации «Этические принципы проведения научных медицинских исследований с участием человека» с поправками 2008 г., протокола Конвенции Совета Европы о правах человека и биомедицине 1999 г. и в соответствии со статьями 20, 22, 23 Федерального закона «Об основах охраны здоровья граждан в Российской Федерации» от 21 ноября 2011 г. № 323-ф3 (ред. от 21.07.2014).
16
14
£ 12
!¡S Я
S 10
§ 6 а
о &
С 4
I II III IV V VI VII VIII IX X XI XII XIIIXIV XV XVI Классы заболеваемости по МКБ-9
Основная группа
I Группа сравнения
Рис. 1. Структура хронических заболеваний в изученных группах
I - Инфекционные и паразитарные болезни; II - Новообразования; III - Болезни эндокринной системы, расстройства питания, нарушения обмена и иммунитета; IV - Болезни крови; V -Психические расстройства; VI - Болезни нервной системы; VII - Болезни системы кровообращения; VIII - Болезни органов дыхания; IX - Болезни органов пищеварения; X - Болезни мочеполовой системы; XI - Осложнения беременности; XII - Болезни кожи и подкожной клетчатки; XIII - Болезни костно-мышечной системы и соединительной ткани; XIV -Врожденные аномалии; XV - Отдельные состояния, возникшие в перинатальном периоде; XVI - Симптомы, признаки и неточно обозначенные состояния.
Основную группу составили 29 человек: 23 (79,3 %) женщины, 6 (20,7 %) мужчин, подвергшихся внутриутробному облучению; в группу сравнения включены 27 человек: 25 (92,6 %) женщин, 2 (7,4 %) мужчин (в соответствии с описанными выше критериями).
Средний возраст на момент обследования - 66,9 (SD - 1,8) года в основной группе и 65,2 (SD - 5,2) года в группе сравнения.
В исследовании использованы поглощенные в костном мозге (КМ) дозы внешнего у-излучения дозиметрической системы работников ПО «Маяк» [19]. Средняя суммарная поглощенная в КМ доза внешнего у-излучения матери за период беременности составила 0,24 (SD - 0,11) Гр.
Цитофлуориметрический анализ. Содержание основных субпопуляций лимфоцитов определяли с помощью проточной цитофлуориметрии. Определялись следующие субпопуляции лимфоцитов: CD3+CD45+ (Т-лимфоциты), CD3+CD4+CD45+ (Т-хелперы-индукторы), CD3+CD8+CD45+ (цитотоксические Т-лимфоциты), CD3-CD16+CD45+CD56+ (натуральные киллеры - НК-клетки), CD3+CD16+CD45+CD56+ (НКТ-клетки) CD45+CD3CD19+CD5+ (В-лимфоциты), CD3+CD4+CD25+CD45+ (активированные Т-хелперы -ранняя активация лимфоцитов), CD3+CD45+HLA-DR+ (активированные Т-лимфоциты - поздняя активация лимфоцитов). Иммунный статус оценивали методом проточной цитометрии на цитофлуориметре «Navios» (BeckmanCoulter, США) по стандартизованной технологии оценки лимфоцитарного звена иммунитета [20, 21]. Для проведения анализа у индивидуумов отбирали образцы крови объемом 2 мл в пробирки c литий-гепарином. В исследовании использовали следующие конъюгаты моноклональных антител с флуорохромами (BeckmanCoulter, США): CD HLA-DR с PE; CD3/CD16+56 с FITC/PE; CD3-FITC/CD16+CD56-PCD19 с FITC; CD25 с PE, CD4-ECD, CD5 с PC7, CD3 c APC, CD8 с ECD.
Подготовку образцов для цитофлуориметрического анализа проводили следующим образом:
1. Помещали раствор моно- или поликлональных антител, меченных флуорохромом, в количестве 5 мкл в пробирку для цитофлуориметрического анализа (12 х 75 мм).
8
2
0
Таблица 2. Распространенность хронических заболеваний в изученных группах (на 1000 человек)
Класс Заболевания Основная группа Группа сравнения
МКБ-9 (n = 29) (n = 27)
случаи распространенность случаи распространенность
I Инфекционные и паразитарные болезни 4 138 4 148
II Новообразования 16 552 9 333
III Болезни эндокринной системы, расстройства питания, нарушения обмена и иммунитета 23 793 17 586
IV Болезни крови и кроветворных органов 4 138 2 74
V Психические расстройства 1 34 0 0
VI Болезни нервной системы и органов чувств 25 862 18 667
VII Болезни системы кровообращения 25 862 20 741
VIII Болезни органов дыхания 20 690 16 592
IX Болезни органов пищеварения 22 759 14 518
X Болезни мочеполовой системы 20 690 12 444
XI Осложнения беременности, родов и послеродового 0 0 0 0
периода
XII Болезни кожи и подкожной клетчатки 19 655 11 379
XIII Болезни костно-мышечной системы и соединительной 25 862* 15 555
ткани
XIV Врожденные аномалии (пороки развития) 3 103 0 0
XV Отдельные состояния, возникшие в перинатальном 0 0 0 0
периоде
XVI Симптомы, признаки и неточно обозначенные состояния 12 414* 1 37
Примечание. * - статистически значимые различия (р < 0,05) с группой сравнения.
2. Добавляли в пробирку для цитофлуориметрического анализа (12 х 75 мм) 100 мкл периферической крови.
3. Аккуратно перемешивали при помощи вихревого встряхивателя «BioSan Type Vortex V-1 plus» (Латвия) в течение 1-3 с и инкубировали в защищенном от света месте в течение 40 мин.
4. Проводили лизис эритроцитов при помощи лизирующих растворов VersaLyse Lysing Solution (BeckmanCoulter, США) согласно инструкции фирмы-производителя.
5. Проводили анализ окрашенного образца на проточном цитофлуориметре с использованием ранее подготовленных протоколов.
Статистическая обработка. Статистическую обработку данных проводили с использованием пакета прикладных программ Statistica 10. Для оценки характера распределения параметров использовали метод Колмогорова-Смирнова. Для оценки верности нулевой гипотезы при исследовании субпопуляционного состава лимфоцитов использовали непараметрический критерий Манна-Уитни, при оценке распространенности хронических заболеваний - критерий х2. Для оценки корреляционной зависимости использовали непараметрический ранговый коэффициент корреляции Спирмена.
Результаты
В табл. 1 представлена характеристика исследованных групп. Статистически значимых различий по полу, возрасту, возрасту беременности матерей, проценту курящих не выявлено.
Анализ структуры хронических заболеваний в изучаемых группах на момент взятия крови показал, что первое место занимают болезни системы кровообращения, второе и третье - болезни нервной системы и органов чувств и болезни эндокринной системы, расстройства питания, нарушения обмена и иммунитета; четвертое - болезни костно-мышечной системы и соединительной ткани (рис. 1).
Следует отметить, что среди лиц обеих изучаемых групп во II классе болезней (новообразования) зарегистрированы только доброкачественные новообразования, так как лиц со злокачественными заболеваниями в исследуемые группы не включали.
Распространенность хронических заболеваний различных классов статистически значимо не отличалась в исследованных группах, за исключением болезней костно-мышечной системы и соединительной ткани (класс XIII) и симптомов, признаков и неточно обозначенных состояний (класс XVI) (табл. 2).
Результаты анализа субпопуляционного состава лимфоцитов в изучаемых группах представлены в табл. 3.
В результате исследования установлено, что содержание основных субпопуляций лимфоцитов статистически значимо не различалось между группами. Относительное количество лимфоцитов, экспрессирующих маркер ранней активации СБ25, в основной группе имело тенденцию к снижению (р = 0,054) по отношению к группе сравнения. Корреляционный анализ позволил установить тенденцию к снижению этого по-
Таблица 3. Субпопуляции лимфоцитов у лиц основной группы и группы сравнения
Показатель Основная группа (п = 29) М; Ме (27; 23) [ДИ 95,0%] Группа сравнения (п = 27) М; Ме (27; 23) [ДИ 95,0%]
Т- лимфоциты (СБ3+СБ19-), % 74,8; 73,9 (71; 78,2) [71; 77,9] 72; 72,8 (65,4; 78,6) [66,2; 78,3]
Т-лимфоциты (СБ3+СБ19-), -106/л 1653,7; 1770 (1361; 1967) [1389; 1960] 1740,2; 1567 (1389; 1969) [1429,9; 1934]
ТЬ - хелперы (СБ3+СБ4+), % 49,9; 50,3 (44,7; 55,2) [46,8; 52,7] 49,2; 46,9 (41,4; 57,5) [42,7; 57,3]
ТЬ - хелперы (СБ3+СБ4+), -106/л 1113,3; 1051 (771; 1347) [782; 1281] 1192,9; 1107,8 (880,9; 1431) [900,2; 1415]
Тс - цитотоксические (СБ3+СБ8+), % 23; 22,7 (17,8; 27,1) [18,1; 27,1] 22,1; 22 (18,6; 27,5) [18,9; 26,6]
Тс - цитотоксические (СБ3+СБ8+), -106/л 505,8; 500 (314; 620) [360; 579] 528,3; 492 (410,4; 623) [420,2; 621]
Иммунологический индекс СБ4+/СБ8+) 2,8; 2,2 (1,7; 2,7) [1,7; 2,7] 2,6; 2,2 (1,6; 2,7) [1,6; 2,6]
НКТ (СБ3 +СБ16+СБ56+), % 15,5; 14,7 (9,3; 20,1) [10,3; 19,9] 12,5; 11,6 (6,7; 16,9) [7,1; 15,5]
НКТ (СБ3 +СБ16+СБ56+), -106/л 334,1; 324 (196; 458) [199; 427] 289,1; 232 (153; 415,3) [155,3; 412]
НК (СВ3-СБ16+СБ56+), % 14,3; 14,6 (9,7; 17) [9,8; 17] 16,7; 17,4 (11; 23,3) [12,5; 21,7]
НК (СВ3-СБ16+СБ56+), -106/л 321,3; 298 (179; 444) [182; 418] 406,1; 387 (246,4; 579,6) [247,5; 536]
В-лимфоциты (СБ3-СБ19+), % 10,5; 9,8 (7,8; 12) [8,1; 11,4] 10,8; 10,1 (7,5; 12,3) [7,9; 11,7]
В-лимфоциты (СБ3-СБ19+), -106/л 228,6; 207 (149; 305) [166; 263] 261,9; 216 (167; 297,7) [178; 287,2]
Т- клетки ранней активации (СВ3+СБ4+СВ25+СБ45+), % 8,7*; 8,6 (8,2; 9,1) [8,2; 9] 9,3; 9,1 (8,6; 9,8) [8,6; 9,6]
Т- клетки ранней активации (СВ3+СБ4+СВ25+СБ45+), -106/л 192,4; 193 (156; 224) [177; 222] 223,4; 203,9 (173; 262,2) [173,8; 262]
Т- клетки поздней активации (СБ3+НЬЛ-БЯ+), % 2,9; 2,7 (2,2; 3,3) [2,3; 3,3] 3,1; 3,3 (2,1; 3,6) [2,1; 3,6]
Т-клетки поздней активации (СБ3+НЬЛ-БЯ+), -106/л 64,3; 61 (42; 83) [43; 69] 71,5; 63 (46; 98,3) [51; 83]
Примечание. * -р = 0,054 (по критерию Манна-Уитни); М- среднее; Ме - медиана: (¿1; ¿3) - 25-й и 75-й перцентили (первый и третий квартиль); ДИ - доверительные интервалы для медианы.
кой заболеваемости в Российской Федерации [22]. Для подтверждения факта повышенной распространенности болезней костно-мышечной системы и соединительной ткани необходимы дальнейшие исследования с большей статистической мощностью.
Полученные нами результаты согласуются с данными исследования субпопуляционного состава лимфоцитов у внутриутробно облученных лиц, проживавших в бассейне реки Теча и подвергшихся хроническому радиационному воздействию во внутриутробном и пост-натальном периоде в результате сбросов жидких радиоактивных отходов ПО «Маяк» [15].
Известно, что активация Т-лимфоцитов и клеточный иммунный ответ модулируется ИЛ-2 посредством связывания с соответствующим поверхностным клеточным рецептором. Высокоаффинные рецепторы представляют собой гетеродимеры, состоящие из полипептидных а-, в- и у-цепей. Цепь с молекулярной массой 55 кДа, также известная как активирующий Т-клетки антиген или СБ25 - это уникальная субъединица высокоаффинного рецептора ИЛ-2. Покоящиеся Т-клетки экспрессируют небольшое количество рецепторов к ИЛ-2, однако при активации их экспрессия быстро возрастает. Часть СБ25+-Т-клеток -это СБ25+СБ4+Рохр3+-Т-регуляторные клетки, которые активно поддерживают аутотолерантность [23, 24]. Снижение числа этих клеток может наблюдаться при врожденных иммунодефицитах [23], аутоиммунных процессах [25, 26], аллергических
казателя с увеличением суммарной поглощенной в КМ дозы внешнего у-излучения матери в период беременности (рис. 2).
Обсуждение
Структура хронической заболеваемости в исследованных группах соответствовала структуре хроничес-
10,4 .................................................
- о ■ 10,2 - ----■ о — 1-------------------:-------------г------г------;------
10,0 1 - — ]--- — ■;-------I-------I-------;-------^------------1.------;------
. о .
7,6 ..................................................
0,05 0,10 0,15 0,20 0,25 0,30 0,35 0,40 0,45 0,50 0,55
Доза внешнего у-излучения, Гр
г = -0,3583; р = 0,0563
Рис. 2. Корреляционная зависимость относительного содержания Т-клеток, экспрессирующих маркер ранней активации СБ25, в % от суммарной поглощенной в костном мозге (КМ) дозы внешнего у-излучения матери в период беременности, Гр
заболеваниях [27], атеросклерозе и артериальной ги-пертензии [28], лечении иммунодепрессантами [29, 30]. В эксперименте на животных показана радиочувствительность этих клеток к внешнему у-облучению [31, 32].
Данные о влиянии облучения на СВ3+СБ4+СБ25+-лимфоциты, полученные в настоящей работе, согласуются с результатами экспериментальных исследований [31, 32], но пока их следует интерпретировать с осторожностью. Требуются дальнейшие исследования содержания СБ4+СБ25+Рохр3+- и других субпопуляций лимфоцитов, входящих в состав исследованной субпопуляции СВ3+СВ4+СБ25+-Т-клеток, с расширением групп и увеличением статистической мощности исследования.
Заключение
В результате обследования лиц, подвергшихся внутриутробному облучению, не выявлено отклонений в основных субпопуляциях лимфоцитов. Обнаружена тенденция к снижению относительного количества лимфоцитов, экспрессирующих маркер ранней активации CD25, у лиц, подвергшихся внутриутробному облучению, с увеличением суммарной поглощенной в КМ дозы внешнего у-излучения в период беременности матери.
Вклад авторов
Концепция и дизайн исследования - Рыбкина В. Л., Кириллова Е.Н., Жунтова Г.В.; сбор и обработка материала - Синельщикова О. А., Адамова Г.В.; статистическая обработка - Ослина Д.С.; написание текста - Рыбкина В.Л.; редактирование - Азизова Т.В., Жунтова Г.В.
■ Литература
1. ICRP publication 84. International Commission on Radiological Protection. Pregnancy and medical radiation. Ann. ICRP. 2000; 30 (1): 1-43.
2. Ярилин А.А. Радиация и иммунитет. Радиационная биология. Радиоэкология. 1997; 37 (4): 597-603.
3. Ильин Л. А. Радиационная медицина. Москва : АТ; 2004. 992 с.
4. ICRP publication 118. ICRP on tissue reactions /early and late effects of radiation in normal tissues and organs-threshold doses for tissue reactions in a radiation protection context. Ann. ICRP. 2012; 41 (1/2): 1-332. DOI: https://www.doi.org10.1016/j.icrp.2012.02.001.
5. UNSCEAR 2006 Report. Effects of ionizing radiation. New York: United Nations. 2009; 2: 1-334.
6. Пальоха Е.А., Саенко А.С., Леках И.В., Леонова О. Показатели иммунного статуса у лиц, облученных внутриутробно и в раннем детском возрасте в результате аварии на ЧАЭС. Радиационная биология. Радиоэкология. 2010; 50 (2): 165-170.
7. Балева Л.С., Яковлева И.Н., Сипягина А.Е., Карахан Н.М., Карпеева Е.Е., Буянкин Е.Е., Сускова В.С. Клинико-иммунологи-ческие нарушения у детей различных когорт наблюдения, подвергшихся действию радиационного фактора на различных этапах онтогенеза. Радиационная биология. Радиоэкология. 2011; 51 (1): 7-19.
8. Finch S.C. A review of immunological and infectious disease studies at ABCC-RERF. Hiroshima: Radiation Effects Research Foundation. 1981.
9. Вологодская И.А., Окладникова Н.Д. Оценка иммунного статуса персонала ПО «Маяка» и их потомков (F1 и F2 поколение). Гигиенические, дозиметрические и медико-биологические аспекты отдаленных эффектов хронического облучения. Труды и материалы Юбилейной научной конференции. Озерск. 2003: 82-83.
10. Рыбкина В.Л., Жунтова Г.В., Азизова Т.В. Компоненты системы комплемента, иммуноглобулины и цитокины у внутриутробно облученных лиц. Иммунология. 2016; 37 (3): 162169.
11. Шубик В.М., Кирюшкин В.Н., Косенко М.М. Состояние иммунологической реактивности у подростков в отдаленный период после радиационного воздействия. Бюллетень Радиационной Медицины. 1971; 2: 49-54.
12. Аклеев А.В., Киселева М.Ф. Медико-биологические и экологические последствия радиоактивного загрязнения реки Теча. Москва : ФУ Медбиоэкстрем при Минздраве РФ. 2001.
13. Аклеев А.В., Дегтева М.О. Состояние иммунной системы в отдаленные сроки у людей, подвергшихся воздействию продуктов деления урана в антенатальном и раннем постнатальном периодах. Изменения основных иммунологических параметров. Бюллетень Радиационной Медицины. 1985; 3: 96.
14. Шведов В. Л., Аклеев А. В. Состояние иммунитета при хроническом поступлении в организм 90Sr. В кн. Радиобиология стронция-90. Челябинск. 2001.
15. Аклеев А.А. Особенности функционального состояния иммунной системы в отдаленном периоде у лиц, подвергшихся хроническому облучению in utero. Российский иммунологический журнал. 2017; 2 (20): 93-96.
16. Azizova T.V., Day R.D., Wald N., Muirhead C.R., O'Hagan J.A., Sumina M.V., Belyaeva Z.D., Druzhinina M.B., Teplyakov I.I., Se-menikhina N.G., Stetsenko L.A., Grigoryeva E.S., Krupenina L.N., Vlasenko E.V. The «clinic» medical-dosimetric database of Mayak production association workers: structure, characteristics and prospects of utilization. Health Physics. 2008; 94 (5): 449-58. DOI: https:// www.doi.org/10.1097/01.HP.0000300757.00912.a2.
17. Федеральный закон от 21 ноября 2011 № 323-ФЗ «Об основах охраны здоровья граждан в Российской Федерации».
18. Федеральный закон от 27 июля 2006 № 152-ФЗ «О персональных данных».
19. Vasilenko E.K. , Scherpelz R.I., Gorelov M.V., Strom D.J., Smetanin M.Y. External dosimetry reconstruction for Mayak workers. In: AAHP Special Session Health Physics Society Annual Meeting. Salt Lake City. 2010. Available at: http://www.hps1.org/aahp/public/ AAHP_Special_Sessions/2010_Salt_Lake_City/pm-1.pdf (Accessed 20 March 2018).
20. Хайдуков С.В., Байдун Л.А., Зурочка А.В., Тотолян А.А. Стандартизованная технология «Исследование субпопуляцион-ного состава лимфоцитов периферической крови с применением проточных цитофлюориметров-анализаторов»// Российский иммунологический журнал. 2014; 8 (17) (4): 974-92.
21. Зурочка А.В. Хайдуков С.В., Кудрявцев И.В., Череш-нев В.А. Проточная цитометрия в биомедицинских исследованиях. Екатеринбург: РИО УрО РАН. 2018. 720 с.
22. Здравоохранение в России. 2019: Стат. сб. Москва : Рос-стат. 2019. 170 с.
23. Caudy A.A.,Reddy S.T., Chatila T., Atkinson J.P., Verbsky J.W. CD25 deficiency causes an immune dysregulation, polyendocrinopa-thy, enteropathy, X-linked-like syndrome, and defective IL-10 expression from CD4 lymphocytes. Journal of allergy and clinical immunology. 2007; 119: 482-7. DOI: https://www.doi.org/10.1016/j. jaci.2006.10.007.
24. Morris J.C., Waldmann T.A. Advances in interleukin 2 receptor targeted treatment. Ann rheum dis. 2000; 59 (Suppl 1): 109-114. DOI: https://www.doi.org/10.1136/ard.59.suppl_1.i109.
25. Liang M., Liwen Z., Yun Z., Yanbo D., Jianping C. The imbalance between Foxp3+Tregs and Th1/Th17/Th22 Cells in Patients with Newly Diagnosed Autoimmune Hepatitis. Journal of Immunology Research. 2018; 2018: 3753081. DOI: https://www.doi. org/10.1155/2018/3753081.
26. Yu Q., Xu M., Yu F., Jin Y. CD4 + CD25 + regulatory T cells as a therapeutic target in rheumatoid arthritis. Central-European Journal of Immunology. 2014; 39 (1): 100-3. DOI: https://www.doi. org/10.5114/ceji.2014.42133.
27. Machura E., Mazur B., Pieni^zek W., Karczewska K. Expression of naive/memory (CD45RA/CD45RO) markers by peripheral
blood CD4+ and CD8+ T cells in children with asthma. Archivum Im-munologiae et Therapiae Experimentalis. 2008; 56 (1): 55-62. DOI: https://www.doi.org/10.1007/s00005-008-0005-6.
28. Kasal D.A., Barhoumi T., Li M.W., Yamamoto N., Zdano-vich E., Rehman A. et al. T regulatory lymphocytes prevent aldoste-rone-induced vascular injury. Hypertension. 2012; 59: 324-30. DOI: https://www.doi.org/10.1161/HYPERTENSI0NAHA.111.181123.
29. Secor E.R. Jr., Singha A., Guernseya L.A., McNamaraa J.T., Zhanb L., Maulik N., Thrall R.S. Bromelain treatment reduces CD25 expression on activated CD4+ T cells in vitro. Int. Immunopharma-cology. 2009; 9 (3): 340-346. DOI: https://www.doi.org/10.1016/j. intimp.2008.12.012.
30. Zhang Y., McClellan M., Efros L., Shi D., Bielekova B. Da-clizumab reduces CD25 levels on T cells through monocyte-mediated trogocytosis. Multiple Sclerosis Journal. 2014; 20 (2): 156-164. DOI: https://www.doi.org/10.1177/1352458513494488.
31. Caoa M., Cabrera R., Xua Y., Liub C., Nelson D. Gamma irradiation alters the phenotype and function of CD4+ CD25+ regulatory T cells. Cell Biol Int. 2009; 33 (5): 565-71. DOI: https://www.doi. org/10.1016/j.cellbi.2009.02.007.
32. Caoa M., Cabrera R., Xu Y., Liu C., Nelson D. Different radiosensitivity of CD4+ CD25+ regulatory T cells and effector T cells to low dose gamma irradiation in vitro. Int. J. Radiat Biol. 2011; 87 (1): 71-80. DOI: https://www.doi.org/10.3109/09553002.2010.518208.
■ References
1. ICRP publication 84. International Commission on Radiological Protection. Pregnancy and medical radiation. Ann. ICRP. 2000; 30 (1): 1-43.
2. Yarilin A.A. Radiation and immunity. Radiation biology. Radioecology. 1997; 37 (4): 597-603. (in Russian)
3. Il'in L.A. Radiation medicine. Moscow: AT; 2004. (in Russian)
4. ICRP publication 118. ICRP on tissue reactions/early and late effects of radiation in normal tissues and organs-threshold doses for tissue reactions in a radiation protection context. Ann. ICRP. 2012; 41 (1/2): 1-332. DOI: https://www.doi.org 10.1016/j.icrp.2012. 02.001.
5. UNSCEAR 2006 Report. Effects of ionizing radiation. New York: United Nations. 2009; 2: 1-334.
6. Pal'oha E.A., Saenko A.S., Lekah I.V., Leonova O. Indicators of immune status in individuals irradiated in utero in early childhood as a result of the Chernobyl accident. Radiation biology. Radioecology. 2010; 50 (2): 165-70. (in Russian)
7. Baleva L.S., Jakovleva I.N., Sipjagina A.E., Karahan N.M., Karpeeva E.E., Bujankin E.E., Suskova V.S. Clinic-immunological disorders in children of various observation cohorts exposed to the radiati on factor at various stages of ontogenesis. Radiation biology. Radioecology. 2011; 51 (1): 7-19. (in Russian)
8. Finch S.C. A review of immunological and infectious disease studies at ABCC-RERF. Hiroshima: Radiation Effects Research Foundation. 1981.
9. Vologodskaja I.A., Okladnikova N.D. Assessment of the immune status of the personnel of the Mayak production association and their descendants (F1 and F2 generation). Hygienic, dosimetric and biomedical aspects of the long-term effects of chronic exposure. Proceedings and materials of the Anniversary Scientific Conference. Ozersk. 2003: 82-3. (in Russian)
10. Rybkina V.L., Zhuntova G.V., Azizova T.V. Components of the complement system, immunoglobulins and cytokines in prenatally irradiated individuals. Immunologiya. 2016; 37 (3): 162-9. (in Russian)
11. Shubik V.M., Kirjushkin V.N., Kosenko M.M. The state of immunological reactivity in adolescents in the long term after radiation exposure. Bulletin of Radiation Medicine. 1971; 2: 49-54. (in Russian)
12. Akleev A. V., Kiseleva M. F. Biomedical and environmental effects of radioactive contamination of the Techa River. Moscow: FU Medbioekstrem pri Minzdrave RF. 2001. (in Russian)
13. Akleev A.V., Degteva M.O. The state of the immune system in the long term in people exposed to uranium decay products in the antenatal and early postnatal periods. Change in basic immunological parameters. Bulletin of Radiation Medicine. 1985; 3: 96. (in Russian)
14. Shvedov V.L., Akleev A.V. The state of immunity in chronic intake 90Sr. In: Radiobiology of strontium-90. Chelyabinsk. 2001. (in Russian)
15. Akleev A.V. Features of the functional state of the immune system in the long term in persons exposed to chronic radiation in utero. Russian Immunological Journal. 2017; 2 (20): 93-6. (in Russian)
16. Azizova T.V., Day R.D., Wald N., Muirhead C.R., O'Hagan J.A., Sumina M.V., Belyaeva Z.D., Druzhinina M.B., Teplyakov I.I., Semenikhina N.G., Stetsenko L.A., Grigoryeva E.S., Krupenina L.N., Vlasenko E.V. The «clinic» medical-dosimetric database of Mayak production association workers: structure, characteristics and
prospects of utilization. Health Physics. 2008; 94 (5): 449-58. DOI: https://www.doi.org/10.1097/01.HR0000300757.00912.a2.
17. Federal Law of November 21, 2011 No. 323-FZ «On the Fundamentals of Health Protection of Citizens in the Russian Federation» (as amended on December 22, 2020) (as of January 1, 2021). (in Russian)
18. Federal Law of July 27, 2006 No. 152-FZ «On Personal Data» (with amendments and additions coming into force on March 1, 2021, July 1, 2021). (in Russian)
19. Vasilenko E.K. , Scherpelz R.I., Gorelov M.V., Strom D.J., Smetanin M.Y. External dosimetry reconstruction for Mayak workers. In: AAHP Special Session Health Physics Society Annual Meeting. Salt Lake City. 2010. Available at: http://www.hps1.org/aahp/public/ AAHP_Special_Sessions/2010_Salt_Lake_City/pm-1.pdf (Accessed 20 March 2018).
20. Khaidukov S.V., Baidun L.A., Zurochka A.V., Totolyan A.A. Standardized technology «Study of the subpopulation composition of peripheral blood lymphocytes using flow cytofluorimeters-analyzers». Russian Journal of Immunology. 2014; 8 (17) (4): 974-2. (in Russian)
21. Zurochka A.V. Khaidukov S.V., Kudryavtsev I.V., Cheresh-nev V.A. Flow cytometry in biomedical research. Yekaterinburg: RIO UB RAS. 2018. 720 p. (in Russian)
22. Healthcare in Russia. 2019: Statistical collection. Rosstat. Moscow: 2019. 170 p. (in Russian)
23. Caudy A.A., Reddy S.T., Chatila T., Atkinson J.P., Verbsky J.W. CD25 deficiency causes an immune dysregulation, polyendocrinopa-thy, enteropathy, X-linked-like syndrome, and defective IL-10 expression from CD4 lymphocytes. Journal of allergy and clinical immunology. 2007; 119: 482-7. DOI: https://www.doi.org/10.1016/]. jaci.2006.10.007.
24. Morris J.C., Waldmann T.A. Advances in interleukin 2 receptor targeted treatment. Ann rheum dis. 2000; 59 (Suppl 1): 109-114. DOI: https://www.doi.org/10.1136/ard.59.suppl_1.i109.
25. Liang M., Liwen Z., Yun Z., Yanbo D., Jianping C. The imbalance between Foxp3+Tregs and Th1/Th17/Th22 Cells in Patients with Newly Diagnosed Autoimmune Hepatitis. Journal of Immunology Research. 2018; 2018: 3753081. DOI: https://www.doi. org/10.1155/2018/3753081.
26. Yu Q., Xu M., Yu F., Jin Y. CD4 + CD25 + regulatory T cells as a therapeutic target in rheumatoid arthritis. Central-European Journal of Immunology. 2014; 39 (1): 100-3. DOI: https://www.doi. org/10.5114/ceji.2014.42133.
27. Machura E., Mazur B., Pieni^zek W., Karczewska K. Expression of naive/memory (CD45RA/CD45RO) markers by peripheral blood CD4+ and CD8+ T cells in children with asthma. Archivum Im-munologiae et Therapiae Experimentalis. 2008; 56 (1): 55-62. DOI: https://www.doi.org/10.1007/s00005-008-0005-6.
28. Kasal D.A., Barhoumi T., Li M.W.,Yamamoto N., Zdanovich E., Rehman A. et al. T regulatory lymphocytes prevent aldosterone-in-duced vascular injury. Hypertension. 2012; 59: 324-30. DOI: https:// www.doi.org/10.1161/HYPERTENSIONAHA.111.181123.
29. Secor E.R.Jr., Singha A., Guernseya L.A., McNamaraa J.T., Zhanb L., Maulik N., Thrall R.S. Bromelain treatment reduces CD25 expression on activated CD4+ T cells in vitro. Int. Immunopharma-cology. 2009; 9 (3): 340-6. DOI: https://www.doi.org/10.1016/j.in-timp.2008.12.012.
30. Zhang Y., McClellan M., Efros L., Shi D., Bielekova B. Da-clizumab reduces CD25 levels on T cells through monocyte-mediated trogocytosis. Multiple Sclerosis Journal. 2014; 20 (2): 156-64. DOI: https://www.doi.org/10.1177/1352458513494488.
31. Caoa M., Cabrera R., Xua Y., Liub C., Nelson D. Gamma irradiation alters the phenotype and function of CD4+ CD25+ regulatory T cells. Cell. Biol. Int. 2009; 33 (5): 565-71. DOI: https://www.doi. org/10.1016/j.cellbi.2009.02.007.
32. Caoa M., Cabrera R., Xu Y., Liu C., Nelson D. Different ra-diosensitivity of CD4+ CD25+ regulatory T cells and effector T cells to low dose gamma irradiation in vitro. Int. J. Radiat. Biol. 2011; 87 (1): 71-80. DOI: https://www.doi.org/10.3109/09553002.2010.518208.
Сведения об авторах
Рыбкина Валентина Львовна - д-р мед. наук, зав. лаб. радиационной биологии клинического отдела ФГУП ЮУрИБФ ФМБА России, Озерск, Российская Федерация E-mail: clinic@subi.su https://orcid.org/0000-0001-5096-9774
Синельщикова Ольга Александровна - мл. науч. сотр. лаб. радиационной биологии клинического отдела ФГУП ЮУрИБФ ФМБА России, Озерск, Российская Федерация E-mail: clinic@subi.su https://orcid.org/0000-0001-6635-1717
Ослина Дарья Сергеевна - мл. науч. сотр. лаб. радиационной биологии клинического отдела ФГУП ЮУрИБФ ФМБА России, Озерск, Российская Федерация E-mail: clinic@subi.su https://orcid.org/0000-0003-4757-7969
Кириллова Евгения Никитовна - канд. мед. наук, вед. науч. сотр. клинического отдела ФГУП ЮУрИБФ ФМБА России, Озерск, Российская Федерация E-mail: clinic@subi.su https://orcid.org/0000-0001-7849-6622
Азизова Тамара Васильевна - канд. мед. наук, зам. директора по науке, зав. клиническим отделом ФГУП ЮУрИБФ ФМБА России, Озерск, Российская Федерация E-mail: clinic@subi.su https://orcid.org/0000-0001-6954-2674
Адамова Галина Владимировна - науч. сотр. лаб. радиационной биологии клинического отдела ФГУП ЮУрИБФ ФМБА России, Озерск, Российская Федерация E-mail: clinic@subi.su https://orcid.org/0000-0002-8776-4104
Жунтова Галина Вадимовна - канд. мед. наук, вед. науч. сотр. клинического отдела ФГУП ЮУрИБФ ФМБА России, Озерск, Российская Федерация E-mail: clinic@subi.su https://orcid.org/0000-0003-4407-3749
Authors' information
Valentina L. Rybkina - MD, PhD, Head of the Lab. of Radiation Biology of the Clinical Department at the SUBI of the FMBA of Russia, Ozersk, Russian Federation E-mail: clinic@subi.su https://orcid.org/0000-0001-5096-9774
Olga A. Sinel'shchikova - Junior Researcher of the Lab. of Radiation Biology of the Clinical Department at the SUBI of the FMBA of Russia, Ozersk, Russian Federation E-mail: clinic@subi.su https://orcid.org/0000-0001-6635-1717
Dar'ya S. Oslina - Junior Researcher of the Lab. of Radiation Biology of the Clinical Department at the SUBI of the FMBA of Russia, Ozersk, Russian Federation E-mail: clinic@subi.su https://orcid.org/0000-0003-4757-7969
Evgeniya N. Kirillova - PhD, Leader Researcher of the Clinical Department at the SUBI of the FMBA of Russia, Ozersk, Russian Federation
E-mail: clinic@subi.su https://orcid.org/0000-0001-7849-6622
Tamara V. Azizova - PhD, Deputy Director for Science, Head of the Clinical Department of the SUBI of the FMBA of Russia, Ozersk, Russian Federation E-mail: clinic@subi.su https://orcid.org/0000-0001-6954-2674
Galina V. Adamova - Researcher of the Lab. of Radiation Biology of the Clinical Department at the SUBI of the FMBA of Russia, Ozersk, Russian Federation E-mail: clinic@subi.su https://orcid.org/0000-0002-8776-4104
Galina V. Zhuntova - PhD, Leader Researcher of the Clinical Department at the SUBI of the FMBA of Russia, Ozersk, Russian Federation
E-mail: clinic@subi.su https://orcid.org/0000-0003-4407-3749
