CC BY
55
УДК: 616.5-002.525.2: 616.61-002.26 © К.А. Нагорнова, О.В. Бугрова, 2011
К.А. Нагорнова, О.В. Бугрова НЕКОТОРЫЕ ПРОФИБРОГЕННЫЕ ЦИТОКИНЫ ПРИ СИСТЕМНОЙ КРАСНОЙ ВОЛЧАНКЕ И ИХ ПРОГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ
ГБОУ ВПО «Оренбургская государственная медицинская академия» Минздравсоцразвития, г. Оренбург
У 80 больных системной красной волчанкой (СКВ) определяли содержание моноцитарного хемотаксического протеина-1 (MCP-1) в сыворотке и моче, трансформирующего фактора роста (TGF-p1) и коллагена IV типа в моче методом имму-ноферментного анализа для оценки их прогностической значимости в прогрессировании поражения почек. Отмечалось повышение уровня МСР-1 в сыворотке крови и моче, TGF-p1 и коллагена IV типа в моче. Наличие активного волчаночного нефрита (ВН) с нефротическим синдромом (НС) и снижение функции почек ассоциировались с более значительным повышением МСР-1, TGF-p1 и коллагена IV типа в моче. При наличии вторичного антифосфолипидного синдрома (АФС) на фоне СКВ достоверно превалировали профиброгенные факторы - TGF 61 и коллаген IV типа. Показана достоверная корреляция МСР-1 с активностью ВН, коллагена IV типа с АФС. Повышение коллагена IV типа в моче ассоциируется с неблагоприятным течением СКВ со снижением функции почек.
Ключевые слова: системная красная волчанка, волчаночный нефрит, моноцитарный хемотаксический протеин-1, про-фиброгенные цитокины, прогноз.
K.A. Nagomova, O.V. Bugrova SOME PROFIBROGENIC CYTOKINES IN SYSTEMIC LUPUS ERYTHEMATOSUS AND THEIR PROGNOSTIC VALUE
In 80 patients with systemic lupus erythematosus (SLE) we measured the level of monocyte chemoattractant protein -1 (MCP-1) in serum and urine, transforming growth factor (TGF-p1) and type IV collagen in urine using enzyme immunoassay to assess their prognostic significance in the progression of renal disease. There was an increase in the level of MCP-1 in serum and urine, TGF-p1 and type IV collagen in urine. The presence of active lupus nephrirtis (LN) with nephrotic syndrome, reduced kidney function was associated with a more substantial increase in MCP-1, TGF-p1 and type IV collagen in urine. In the presence of a secondary antiphospholipid syndrome (APS) concomitant to SLE, profibrogenic factors - TGF 61 and type IV collagen significantly prevailed. Significant correlations between MCP-1 and LN activity, as well as collagen type IV and APS, were shown. Increased level of type IV collagen in urine was associated with an unfavorable course of SLE and reduced kidney function.
Key words: systemic lupus erythematosus, lupus nephrirtis, monocyte chemoattractant protein -1, profibrogenic factors, profi-brogenic cytokines, prognosis.
Ухудшение почечной функции при вол-чаночном нефрите (ВН) ассоциируется с наличием тубулоинтерстициального поражения, в развитие которого важная роль отводится профиброгенным цитокинам -моноцитарному хемотаксическому протеину-1 (МСР-1),
трансформирующему фактору роста (ГОР-Р1) и коллагену IV типа [3]. Уровни цитокинов коррелируют с тяжестью ВН, но прогностическое значение их, как и изменения при наличии вторичного антифосфолипидного синдрома (АФС), не оценивалось [1, 2, 6]. Роль коллагена IV типа при системной красной волчанке (СКВ) была определена только в эксперименте [5].
Цель: определить содержание МСР-1, ТОБ-р1 и коллагена IV типа в моче у больных СКВ и оценить их прогностическую значимость.
Материал и методы
Обследовано 80 больных СКВ, большинство женщины (91%) в возрасте 37,1±11,9 года, давностью болезни 9,1±8,1 года, преимущественно подострым и хроническим течением (40% и 52,5%) II степенью активности (57,5%). Контрольную группу составили 30 относительно здоровых лиц. Критериями исключения были наличие сахарного диабета и иное поражение почек. Диагноз СКВ устанав-
ливали на основании критериев ACR (1997); оценка клинической активности проводилась по критериям Насоновой В.А (1972), по шкалам SLEDAI-K2 и SLAM, повреждения - по шкале SLICC/ACR [4]. Наличие АФС устанавливали в соответствии с критериями г. Саппоро, 1999.
Значения индексов SLEDAI-K2 и SLAM у пациентов СКВ составили 12,5±7,9 и 10,8±4,9, SLICC/ACR - 2,5±1,7. У 28 (35%) выявлен вторичный АФС. Поражение почек было у 56 (70%): в виде ВН - у 53 (94,6%): активный - с нефротическим синдромом (НС) - 26 (49%) и выраженным мочевым синдромом (ВМС) - 21 (39,6%); неактивный нефрит (НН) - 6 (11,4%). У 3 (4,8%) выявлены признаки возможной АФС-ассоциированной нефропатии (АФСН) [2, 7].
Оценивали уровень креатинина сыворотки, суточной протеинурии (СПУ), отнесенной к массе тела в кг, осадок мочи, пробу Зимницкого, скорость клубочковой фильтрации (СКФ) по формуле Кокрофта-Голдта и MDRD [8]. Клинические варианты ВН определяли по классификации И.Е. Тареевой (1995); активность ВН - по шкале SLICC RA/RE [9]. Оценку МСР-1 в сыворотке и моче проводили методом иммуноферментного анализа (ИФА) с помощью набора human MCP-1,
TGF ß1 и коллагена IV типа в моче методом ИФА с помощью наборов для определения human TGF-ß1 и Biotrin Urinary Collagen IV EIA (США).
Полученные материалы были подвергнуты статистической обработке в программе Statistika 6.0 (фирмы StatSoft Inc.) методами вариационной статистики. Различия средних и коэффициенты корреляции признавались статистически достоверными при уровне значимости p<0,05.
Результаты и обсуждение У больных СКВ уровни МСР-1 в сыворотке и моче были выше контроля, нарастали
при активном ВН (табл.1). У больных без ВН МСР-1 в сыворотке был в норме, в моче - достоверно выше контроля. У больных активными формами ВН и при нарастании его активности по индексу SLICC RA/RE отмечался рост параметра в моче больше, чем в сыворотке. Имелась взаимосвязь уровня МСР-1 мочи с СПУ (r=0,34, p=0,03), что, вероятно, подтверждает роль МСР-1 мочи как биомаркера активности воспалительного процесса в паренхиме почек [6]. У пациентов с нормальной функцией почек МСР-1 повышался в большей степени в сыворотке, а при снижении СКФ - в моче.
Таблица 1
Параметр МСР-1 сыворотки, пг/мл МСР-1 мочи, пг/мл TGF-ß1 мочи, пг/мл Коллаген IV типа мочи, мкг/л
Контроль (n=30) 338,7±81,9 88,1±48,5 687,0±69,6 1,1±0,4
Больные СКВ, n=80 495,9±583,7 316,8±442,4** 877,1±290,8 *** 3,8±6,0 **
C ПП, n=56 515,9±591,5 * 379,3±505,0** 893,0±325,8 *** 3,7±5,7 **
Без ПП, n=24 443,0±572,5 157,7±113,3** 836,4±172,1 *** 3,9±6,9 *
Активный ВН, n=47 538,6±634,2 * 408,9±553,9*** 899,3±338,1*** 3,6±5,9***
Неактивный ВН, n=6 493,5±349,3 * 239,8±194,4** 790,0±77,5 ** 2,0±0,6 ***
СКФ, мл/мин нормальная, n=44 530,23±507,88 * 306,91±440,18 ** 874,54±234,24 *** 3,3±5,29 **
сниженная, n=36 453,92±669,87 328,91±451,2 ** 880,29±354,62 *** 4,36±6,84 **
SLICC RA/RE, баллы 0 (n=18) 410,2±348,0 400,3±664,0*** 901,18±438,8 *** 2,26±2,09 *
1-5 (n=24) 684,1±811,9 * 282,1±240,3** 810,87±142,32 *** 2,86±3,03 **
более 5 (n=11) 406,9±300,6 595,1±691,6** 1021,82±354,93 *** 6,14±10,79 ***
* Достоверное изменение показателя — р<0,05. ** р<0,01. *** р<0,001 по сравнению с контролем. ПП- поражение почек, СКФ по МВКО
В целом по группе СКВ отмечался рост содержания TGF ß1 и коллагена IV типа в моче. При наличии поражения почек значение TGF ß1 было выше, чем при отсутствии ВН. Уровень коллагена был достоверно повышен и сопоставим в этих подгруппах, но увеличивался как и TGF ß1 при росте активности ВН по шкале SLICC RA/RE, что подтверждалось корреляцией коллагена IV типа с уровнем СПУ (r=0,43, p<0,05). Снижение СКФ приводило к увеличению показателей, что может отражать иммунное воспаление в тубулоин-терстиции и ассоциироваться с гломерулоск-лерозом и тубулоинтерстициальным фиброзом [1, 3, 6].
Таблица 2
Профиброгенные цитокины у больных с СКВ в зависимости от наличия АФС
Параметр АФС (n=28) Без АФС (n=52) Контроль (n=30)
МСР-1 в сыворотке, пг/мл 400,32±499,1 547,35±622,98 * 338,7±81,93
МСР-1 в моче, пг/мл 200,86±159,96 *** • 381,7±530,52 *** • 88,05±48,48
TGF-ß1 в моче, пг/мл 936,43±352,53 *** 843,8±247,45* ** 687,0±69,59
Коллаген IV типа в моче, мкг/мл 6,28±9,17 ** •• 2,35±2,14 *** •• 1,07±0,38
* Достоверное изменение показателя — р<0,05.
**р<0,01. ***р<0,001 по сравнению с контролем
• р<0,05, •• р<0,01 достоверное изменение параметра в группах между собой
При наличии и отсутствии вторичного АФС все параметры в моче (МСР-1, ТОБ-Ы и коллаген IV типа) были значимо выше, чем в контроле (табл. 2), в группе без АФС был повышен МСР-1 в сыворотке. Уровни МСР-1 в сыворотке и моче оказались ниже, а ТОБ-Ы и коллагена - выше в группе с АФС. Имелась достоверная взаимосвязь коллагена IV типа в моче с наличием АФС (г=0,31, р=0,04).
Таблица 3
Профиброгенные цитокины у больных СКВ с ВН в зависимости от наличия АФС
Параметр ВН с АФС (n=15) ВН без АФС (n=45) Контроль (n=30)
МСР в сыворотке, пг/мл 319,2±173,13 618,13±692,41 *** • 338,7±81,93
МСР в моче, пг/мл 190,2±171,6 *** • 471,83±599,74 *** • 88,05±48,48
ТОБ-В1 в моче, пг/мл 977,33±409,42 *** 848,61±272,59 *** 687,0±69,59
Коллаген IV типа в моче, мкг/мл 5,64±9,38 *** • 2,42±2,43 ** • 1,07±0,38
* Достоверное изменение показателя — р<0,05.
** р<0,01. ***р<0,001 по сравнению с контролем.
• р=0,03 достоверное изменение параметра в группах между собой.
В группе ВН на фоне АФС (п=15) уровни МСР-1 в сыворотке и моче были достоверно ниже, чем при ВН без АФС (табл. 3). Уровни ТОБ В1 и коллагена IV типа в подгруппе ВН с АФС оказались выше, чем в подгруппе ВН без АФС. Еще у 3 пациентов со вторичным АФС и вероятной АФСН наблю-
далось значимое возрастание профиброген-ных цитокинов по сравнению с контролем и подгруппой больных с АФС. Уровень коллагена IV типа в моче был сопоставим в обеих подгруппах. Таким образом, при наличии ВН на фоне АФС и в трех случаях возможной АФСН по сравнению с ВН без АФС достоверно превалировали профиброгенные факторы ТОБ В1 и коллагена IV типа и снижался МСР-1, что может отражать интраренальный процесс фиброзной окклюзии пораженных сосудов вследствие вторичной активации ре-нин-ангиотензиновой системы и стимуляции синтеза факторов роста, в частности ТОБ В1, при меньшей выраженности иммуновоспали-тельных реакций [2, 7].
Для оценки прогностической значимости профиброгенных цитокинов и коллагена
IV типа проведено динамическое наблюдение за показателями функции почек (среднее время наблюдения - 12,25 месяца) у 43 пациентов с СКВ. Учитывая однонаправленность изменения цитокинов МСР-1 и ТОБ-Р1 мочи (г=0,28, р=0,04), всех пациентов разделили для дальнейшего анализа с точки зрения исходно нормальных и высоких значений МСР-1 в сыворотке и моче и ТОБ-Р1 в моче независимо от уровня коллагена мочи, а затем - исходно нормальных и высоких значений коллагена IV типа в моче независимо от содержания МСР-1 и ТОБ-Р1. В большинстве случаев имелся ВН: 22 из 25 (86%) - в подгруппе исходного повышения МСР-1 и ТОБ-р1; 19 из 24 (79%) - в подгруппе повышенного коллагена; 11 из 18 (61%) - в подгруппе нормальных МСР-1 и ТОБ-р1; 13 из 19 (68%) - в подгруппе нормального коллагена. Функция почек и объем иммуносупрессивной терапии в подгруппах были сопоставимы.
В подгруппе исходного повышения МСР-1 и ТОБ-р1 через год наблюдения имелась тенденция к ухудшению по уровню СПУ, креатинина и СКФ. В подгруппе повышенного коллагена СПУ снизилась, но имелся достоверный рост креатинина, снижение СКФ и
удельного веса мочи. В подгруппах нормальных МСР-1 и ТОБ-Р1 и коллагена IV типа отмечалось снижение протеинурии, функция почек не менялась. Пятеро больных за время наблюдения умерли: 3 - от инфекционных осложнений и полиорганной недостаточности, 2 - вследствие дыхательной недостаточности на фоне высокой легочной гипертензии. В 4 случаях из 5 имелись активные формы ВН со значительным ростом значений МСР-1, ТОБ-Р1 и коллагена IV типа (у 3); в одном случае ВН с НС уровни МСР-1 и ТОБ-Р1 мочи были нормальны, но содержание коллагена IV типа было самым высоким (37 мкг/л). При аутопсии этого пациента обнаружен нефрит с диффузными пролиферативными изменениями и сегментарным склерозом петель клубочков. Еще у 1 больной с изначальным поражением почек, проявлявшемся суточной протеинурией 1 г/л, но с высоким уровнем МСР-1 в сыворотке и коллагена IV типа в моче, спустя 6 месяцев развился активный ВН с НС с быстрым снижением азотвы-делительной функции почек.
Выводы
У больных с СКВ наблюдается повышение уровня МСР-1 в сыворотке крови и в большей степени в моче; отмечается рост уровней профиброгенных факторов - трансформирующего фактора роста В1 и коллагена IV типа в моче. Наличие активного ВН с НС, снижение функции почек ассоциируются с более значительным повышением МСР-1 в моче по сравнению с сывороткой, а также ТОБ-Р1 и коллагена IV типа в моче. Имеется достоверная взаимосвязь МСР-1 с активностью ВН. При наличии вторичного АФС у больных СКВ достоверно превалируют про-фиброгенные факторы - ТОБ В1 и коллаген IV типа мочи. Отмечается прямая достоверная взаимосвязь коллагена IV типа в моче со вторичным АФС. У больных с повышением коллагена IV типа в моче ассоциируется неблагоприятное течение болезни со снижением функциональной способности почек.
Сведения об авторах статьи:
Нагорнова Ксения Александровна, очный аспирант кафедры факультетской терапии и эндокринологии ОГМА, 460000, г. Оренбург, ул. Советская, 6, раб. тел. 8 (3532) 76-58-42, e- mail: [email protected]
Бугрова Ольга Викторовна, профессор, д.м.н., профессор кафедры факультетской терапии и эндокринологии ОГМА, 460000, г. Оренбург, ул. Советская, 6, рабочий телефон 8 (3532) 76-58-42, e-mail: [email protected]
ЛИТЕРАТУРА
1. Арзиманова, Н. А. Клинико-лабораторные и иммунные особенности поражения почек у больных системной красной волчанкой: автореферат дисс. ... канд. мед. наук. - Ярославль, 2009. - 35 с.
2. Козловская, Н. Л. Клинические и морфологические особенности волчаночного нефрита при системной красной волчанке с антифосфолипидным синдромом/ Е. М. Шилов, Н. А. Метелева, В. А. Варшавский, Н. Г. Мирошниченко, Н. А. Самокишина, А. Г. Серова, С. Г. Нестерова //Терапевтический архив.- 2006.-№5.-С. 21-31.
3. Паунова С. С. Патогенетические основы нефросклероза (Обзор литературы)// Нефрология и диализ.- 2005.-№7.-С. 2.
4. Ревматология: клинические рекомендации / под ред. Акад. РАМН Е.Л. Насонова. - 2-е изд., испр. и доп. - М.: Гэотар-Медиа, 2010.-752с.
5. Bergijk EC. Differential expression of collagen IV isoforms in experimental glomerulosclerosis/ I.E. van Alderwegen, H.J. Baelde, E. de Heer, K. Funabiki, H. Miyai et al.// J Pathol.- 1998.-№184.-p.307-315
6. Chan RW-Y. Urinary mononuclear cell and disease activity of systemic lupus erythematosus/ FM.-M. Lai, EK.-M. Li, L.-S. Tam, K.-Y. Chung, K.-M. Chow, PK.-T. Li, C-C. Szeto// Lupus.-2006.-№15.-p. 262-267.
7. Daugas E. Antiphospholipid syndrome nephropathy in systemic lupus erythematosus/ D. Nochy, DL. Huong, P. Duhaut, et al.// JAm-SocNephrol.-2002.-№13.-p.42-52.
8. Levey A.S. A more accurate method to estimate glomerular .ltration rate from serum creatinine: a new prediction equation. Modification of Diet in Renal Disease Study Group/ J.P. Bosch, J.B. Lewis, T. Greene, et al.// Ann Intern Med.-1999.-№130.-p. 461-470
9. Petri M. Systemic lupus international collaborating clinics renal activity/response exercise/ N. Kasitanon, S.S. Lee et al.// Arthr. Rheum.-2008.- №58(6).-p. 1784-8.
УДК 616.98:579.842.14:579.252.55:615.281./33.015.8]-07:578.52 © Р.Г. Назмутдинова, Р.Т. Мурзабаева, А.Р. Мавзютов, 2011
Р.Г. Назмутдинова1, Р.Т. Мурзабаева1, А.Р. Мавзютов1,2 ВЗАИМОСВЯЗЬ ГЕНЕТИЧЕСКИХ МАРКЕРОВ ПАТОГЕННОСТИ S. ENTERITIDIS С АНТИБИОТИКОРЕЗИСТЕНТНОСТЬЮ КУЛЬТУР
1ГБОУ ВПО «Башкирский государственный медицинский университет» Минздравсоцразвития России, г. Уфа 2ООО Исследовательский центр «Лаборатория», г. Уфа
Обследовано 105 больных сальмонеллёзом. Выделенные культуры S. enteritidis исследованы методом ПЦР на наличие фрагментов генов, ассоциированных с «островами» патогенности E.coli: hlyA, hlyB (гемолизины), sfaG и sfaA (фимбриаль-ные антигены типа S).
Фрагменты генов «островов» патогенности E.coli обнаружены у 102 из 105 исследованных штаммов S. enteritidis (97,1%). Всего выявлено 190 генетических детерминант: hlyA-50 (49,0%), hlyB-54 (52,9%), sfaG-57 (55,9%) и sfaA- в 29 (28,4%). При этом у 40 (39,2%) штаммов выявлено по одному гену: hlyA - 7, hlyB - 13, sfaG - 18, sfaA - 2, у следующих 40 (39,2%) - комбинации из двух генетических детерминант, у 18 (17,6%) сальмонелл - сочетания из трёх. 4 штамма (3,9%) возбудителя одновременно несли фрагменты hlyA, hlyB, sfaA и sfaG. Установлена корреляционная связь между наличием у
S. enteritidis фрагментов генов «островов» патогенности, ассоциируемых с патогенностью E.coli и резистентностью к ампициллину, доксициклину, цефазолину, левомицетину, карбенициллину. Установлена зависимость тяжести болезни от фактора полирезистентности микроба.
Ключевые слова: «острова» патогенности, сальмонеллез, взрослые, антибиотикорезистентность, клинические проявления.
R.G. Nazmutdinova, R.T. Murzabayeva, A.R. Mavzyutov GENETIC MARKERS OF PATHOGENICITY SALMONELLA ENTERITIDIS AND ANTIBIOTIC RESISTANCE
We examined 105 patients. The isolated S. enteritidis cultures were examined by means of PCR for the presence of gene fragments associated with E.coli pathogenicity «islands»: hlyA, hlyB (hemolysins), sfaA (type S fimbrial antigenes).
The gene fragments of pathogenicity «islands» were detected in 102 out of 105 studied samples (97.1%) of S. enteritidis strains.
A total of 190 genetic determiners were identified: hlyA - in 50 samples (49.0%); hlyB - in 54 (52.9%); sfa - in 57 (55.9%); sfaA -in 29 (28.4%). Therewith, 40 salmonella strain samples (39.2%) were found to have only one genetic determiner, in hlyA- 7 ; hlyB-13 ; sfaG - 18 ; sfaA - 2 . The subsequent 40 samples (39.2%) were revealed to possess combinations of two bacterial determiners.
In 18 salmonella samples (17.6%), there were observed combinations of 3 genetic determiners. Four salmonella samples simulte-neously possessed fragments of hlyA, hlyB, sfaA and sfaG. A correlation between E.coli pathogenicity-associated gene fragments of pathogenicity «islands» in S. enteritidis samples and resistance to ampicillin, doxycycline, cefazolin, levomycetin, carbenicillin. A correlation between the severity of the disease and the polyresistance of the microbial agent was determined.
Key words: pathogenicity “islands”, salmonellosis, adults, antibiotic resistance, clinical manifestations.
В настоящее время сальмонеллёзы яв- ДНК бактериофагов, транспозонов или плаз-
ляются одной из важных проблем инфекци- мид [4,7], что и определяет темпы формиро-
онной патологии в большинстве стран мира, вания лекарственной устойчивости, неуправ-
что обусловливается способностью сальмо- ляемый характер заболеваемости и тяжёлое
нелл длительно сохраняться во внешней сре- течение болезни. Резистентность сальмонелл
де, полирезистентностью к антибактериаль- к большинству АБП контролируется преиму-
ным препаратам и значительной генетической щественно генами, расположенными на плаз-
пластичностью микроорганизмов [3]. Среди мидах [2, 6, 8].
генетических детерминант патогенности Целью настоящего исследования яви-
большое значение придаётся структурным и лось изучение характера взаимосвязей между
регуляторным генам, сгруппированным в мо- частотой обнаружения фрагментов генов
бильные кластеры («островки» и «острова» «островов» патогенности, ассоциируемых с
патогенности), способные к горизонтальному патогенностью E.coli у клинических штаммов
и вертикальному перемещениям и встраива- сальмонелл и антибиотикорезистентностью
нию в определённые сайты бактериальной культур, также клиническими особенностями
