CC BY
40
ДОКЛАДЫ АКАДЕМИИ НАУК РЕСПУБЛИКИ ТАДЖИКИСТАН _2015, том 58, №8_
АКУШЕРСТВО
УДК 616-007;611.811.012;611.013.85
В.Ю.Мельникова, член-корреспондент АН Республики Таджикистан М.Ф.Додхоева,
А.В.Колобов*
НЕКОТОРЫЕ АСПЕКТЫ ВРОЖДЁННЫХ ПОРОКОВ РАЗВИТИЯ ЦЕНТРАЛЬНОЙ НЕРВНОЙ СИСТЕМЫ У ПЛОДА
Таджикский государственный медицинский университет им. Абуали ибн Сино, Санкт-Петербургский государственный университет, Россия
В статье приведены результаты определения экспрессии Шх-2.2 в ворсинчатом хорионе плаценты человека в норме (контрольная группа) и при врождённых пороках развития центральной нервной системы (ЦНС) у плода (основная группа). Выяснилось, что при иммуногистохимическом исследовании плацент экспрессия Nkx-2.2 отмечалась только в эндотелиоцитах сосудов ворсинчатого хориона плацент контрольной группы. Относительная площадь экспрессии N^-2.2 составила 0.82±0.08%. В то же время экспрессия Шх-2.2 в клетках ворсинчатого хориона плацент основной группы отсутствовала.
Ключевые слова: врождённые пороки развития центральной нервной системы - ворсинчатый хорион плаценты - экспрессия Шх-2.2.
Современные молекулярно-биологические исследования позволили значительно расширить представления о структурно-функциональной организации плаценты человека и представить её как чрезвычайно своеобразный орган, важнейшей функцией которого является синтез и секреция широкого спектра биологически активных сигнальных молекул, посредством которых осуществляется регуляция процессов, обеспечивающих нормальное развитие плода [1].
При врождённых пороках развития (ВПР) ЦНС плода наблюдается плацентарная недостаточность, морфологическими критериями которой является незрелость ворсинчатого хориона в виде задержки созревания и дифференцировки ворсин, что сопровождается недостаточной васкуляризаци-ей и приводит к нарушению плацентарного кровообращения, дистрофично-некротическим процессам в синцитии, цитотрофобласте, эндотелиоцитах. Выявлено, что морфологические проявления апоптоза наблюдаются во всех клеточных популяциях ворсинчатого хориона - синцитии, цитотрофобласте, клетках стромы, эндотелиоцитах. При ВПР ЦНС в первом и втором триместрах апоптозный индекс достоверно ниже [2].
По данным Д.А.Умарбаевой [3], в последах с ВПР плода наибольшим изменениям подвергаются четыре параметра - увеличение объёмной доли интервиллезного фибриноида на 68%, уменьшение объёмной доли периферического трофобласта на 56.8%, артерий на 68% и вен ворсинчатого хориона на 29.8%.
Адрес для корреспонденции: Мельникова Вероника Юрьевна. 734003, Республика Таджикистан, г. Душанбе, пр. Рудаки, 139, Таджикский государственный медицинский университет. E-mail: veronika. melnikova. 86@mail.ru
По данным исследования О.В.Островской с соавт. [4], при ВПР в 63.5% случаев морфологическими методами определяются инфекционно-воспалительные изменения в тканях, причём в половине из них продуктивно-альтернативные, пролиферативные процессы, характерные для вирусных инфекций.
Представленные в научной литературе результаты экспериментальных исследований и клинических наблюдений свидетельствуют о том, что в то время как в области этиопатогенеза и диагностики врождённых пороков развития прогресс очевиден, такие аспекты данной проблемы, как структура факторов риска в изучаемой популяции, роль плаценты в формировании ВПР ЦНС плода, генетические механизмы их возникновения, остаются недостаточно изученными.
Целью данной работы явилось изучение экспрессии Nkx-2.2 в ворсинчатом хорионе плаценты человека в норме и при врождённых пороках развития центральной нервной системы у плода.
Методы исследования
В исследование включены 15 плацент плодов, у которых имела место аненцефалия (основная группа), и 20 плацент доношенных новорождённых без аномалий и пороков развития (группа контроля).
Изучение гистоструктуры плаценты проводилось стандартизированным методом согласно «Методическим рекомендациям по проведению массовых морфологических исследований последов» (Цинзерлинг В.А. и соавт., 1998). Образцы тканей фиксировались в 10%-ном нейтральном (pH 7.2) растворе формалина и заливались в парафин. Срезы окрашивались гематоксилином и эозином. Изучение экспрессии белков проводили иммуногистохимическим методом (ИГХ) на препаратах, приготовленных из образцов плацент. Для проведения иммуногистохимической реакции с использованием моноклональных мышиных антител к Nkx-2.2 (Abcam, 0.5 цг/мл) использовали стандартный одно-этапный протокол с высокотемпературной демаскировкой антигенов в 0.01 М цитратном буфере (рН 6.0).
Морфометрическое исследование проводили с помощью системы компьютерного анализа микроскопических изображений, состоящей из микроскопа Leica, цифровой камеры Leica, персонального компьютера на базе Intel и программного обеспечения Leica QWin. В каждом случае анализировали 10 полей зрения при увеличении ><400. Определяли относительную площадь экспрессии Nkx-2.2, которая представляла собой отношение площади, занимаемой иммунопозитивными клетками, к общей площади клеток в поле зрения, выражаемое в процентах.
Статистический анализ проводили при помощи критерия Манна-Уитни.
Результаты и их обсуждение
Средний возраст женщин в основной группе составил 25.1±1.4 лет, который варьировал от 18 до 35лет, в контрольной группе - 27.3±1.4, варьировавший от 20 до 42 лет. Роженицы раннего репродуктивного возраста основной группы составили (до 20 лет) - 20%, активного репродуктивного возраста (20-34 лет) - 73.3%, позднего репродуктивного возраста (35 лет и более) - 6.7%. В группе контроля роженицы раннего репродуктивного возраста отсутствовали, активного составили 85%, позднего - 15% соответственно. При изучении паритета в основной группе выявлено, что большинство обследованных женщин оказалось первородящими - 53.3%, повторнородящих (2-4 родов) были
46.7%, многорожавших (5 родов и более) - не оказалось. В группе контроля на долю первородящих пришлось 5% повторнородящих - 90%, и многорожавших - 5%. Все женщины из обеих групп были местной национальности. Среди них домохозяйками в основной группе оказались 14 (93.3%) и одна служащая, в группе контроля домохозяйками были 15 (75%) и 5 (25%) служащих. Индекс массы тела основной группы составил 23.5±0.8, а в группе сравнения 26.9±0.4.
Таблица
Сравнительная характеристика перенесённых заболеваний в основной и контрольной группе
Структура заболеваний Основная группа, п=15 Контрольная группа, п=20
число % число %
Диффузное увеличение щитовидной железы 4 26.7 - -
Анемия 8 53.3 11 55
ОРВИ 15 100 19 95
Хр. пиелонефрит 12 80 - -
Гепатит А 1 6.7 - -
Малярия 2 13.3 - -
Тонзиллит 1 6.7 1 5
Основной патологией, на фоне которой наступила и развивалась беременность, оказалась ОРВИ - 100% и 95% соответственно (таблица). Йоддефицитные заболевания сопутствовали беременности в 26.7% случаев в основной группе, хронический пиелонефрит - 12 (80%). Следовательно, наличие у больных двух и более очагов хронической инфекции на фоне анемии, йоддефицитных заболеваний, дефицита массы тела, заболеваний почек позволяет отнести их к группе экстрагенитальной патологии, которая представляет риск по развитию врождённых пороков развития. Из осложнений беременности в основной группе следует отметить многоводие - 10 (66.7 %).
К особенностям наблюдений в плацентах основной группы (рис.2) следует отнести нарушение ветвления ворсинчатого хориона с преобладанием стволовых и промежуточных ворсинок, с фиброзом стромы ворсинок и сниженной васкуляризацией фиброзированных ворсинок.
Таким образом, правильно организованная прегравидарная подготовка пациенток, особенно молодых женщин, антенатальное наблюдение и правильный уход за беременными женщинами, ультразвуковой скрининг в ранние сроки беременности, своевременное выявление пороков развития плода и прерывание беременности могут способствовать значительному снижению частоты рождения детей с различными уродствами и инвалидности с детства. При иммуногистохимическом исследовании плацент было показано, что экспрессия Nkx-2.2 отмечалась только в эндотелиоцитах сосудов ворсинчатого хориона плацент контрольной группы (рис.1). Относительная площадь экспрессии Nkx-2.2 составила 0.82±0.08%. В то же время экспрессия Nkx-2.2 в клетках ворсинчатого хориона плацент основной группы отсутствовала (рис.3).
Рис. 1. Ворсинчатый хорион плаценты группы контроля, окр, гематоксилин-эозин, хЮО.
Рис. 2. Ворсинчатый хорион плаценты основной группы: нарушение ветвления ворсинок, фиброз ворсинок,
отложения фибриноида, окр, гематоксилин-эозин, х100.
Рис. 3. Ворсинки хориона: отсутствие экспрессии Nkx-2.2, ИГХ, х400.
Рис. 4. Экспрессия Ыкх-2.2 в эндотелиоцитах сосудов ворсинчатого хориона, ИГХ, х400.
Поступило 10.06.2015 г.
ЛИТЕРАТУРА
1. Нечаев В.Н. Врождённые аномалии развития. - Мат-лы XII Всеросс. научного форума «Мать и дитя», 2011, с.470-471.
2. Шерстнева О.В. Пренатальная ультразвуковая диагностика агенезии мозолистого тела. - Медицинский альманах, 2011, №4, с.259-261.
3. Умарбаева Д.А. Анализ факторов риска у женщин с пороками развития плода. - Вестник Кыргызско-Российского Славянского университета, 2012, т.11, №3, с.175-178.
4. Островская О.В. Оценка роли инфекционных факторов при перинатальной смертности - Мат-лы VIII Всеросс. форума «Мать и дитя», 2006, с.603-604.
В.Ю.Мельникова, М.Ф.Додхоева, А.В.Колобов*
БАЪЗЕ ЧАНБА^ОИ нуцсощои модарзодии системаи
МАРКАЗИИ АСАБИ ТИФЛ
Донишго^и давлатии тиббии Тоцикистон ба номи Абуали ибни Сино, Донишго^и давлатии Санкт-Петербург, Руссия
Дар макола натичаи тадкикотхои муайян кардани экспрессияи Nkx-2.2 дар хориони ворсинии машимаи занони солим (гурухи контролй) ва машимаи тифли нуксони системаи марказии асаб дошта (гурухи асосй) оварда шудааст. Маълум шуд, ки дар мавриди тадкикоти иммуногистокимёвии машимаи занони солим экспрессияи Nkx-2.2 танхо дар эндотелиоситхои рагхои хориони ворсинй муайян карда шудааст. Майдони нисбии экспрессияи Nkx-2.2 0.82±0.08%-ро ташкил медихдд. Хдмзамон, экспрессияи Nkx-2.2 дар хучайрахои хориони ворсинии машимаи гурухд асосй чой надошт.
Калима^ои калиди: нуцсони модарзодии системаи асаб - хориони ворсинии машима - экспрессияи Ыкх-2.
V.U.Melnikova, M.F.Dodkhoeva, A.V.Kolobov* SOME ASPECTS OF CONGENITAL MALFORMATIONS OF THE CENTRAL
NERVOUS SYSTEM OF THE FETUS
Avicenna Tajik State Medical University, St.-Petersburg State University, Russia
The results of the expression of Nx-2.2 in the chorionic villi of human placenta in normal (control group) and congenital malformations of the central nervous system of the fetus (the main group). It was found that the expression of immunohystochemical study of placentas Nkx-2.2 was observed only in the vascular endothelial placenta chorionic villi of the control group. The relative area of expression Nkx-2.2 was 0.82 ± 0.08%. At the same time, the expression of Nkx-2.2 cells in the chorionic villi of placentas main group absent.
Key words: congenital malformations of the central nervous system - the chorionic villi of the placenta - the expression Nkx-2.2.
