CC BY
9
МАТЕРИАЛЫ КОНФЕРЕНЦИИ
Ж.М. Козий1, В.Н. Мартинков 1, А.Е. Силин 1, М.Ю. Жандаров 1, Ж.Н. Пугачева1, Л.Е. Коротаева 1, Л.А. Смирнова2
ПРОГНОСТИЧЕСКОЕ И КЛИНИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКИХ, ЦИТОГЕНЕТИЧЕСКИХ МАРКЕРОВ ПРИ МНОЖЕСТВЕННОЙ МИЕЛОМЕ И МОНОКЛОНАЛЬНОЙ ГАММАПАТИИ НЕУТОЧНЕННОГО ЗНАЧЕНИЯ У ЖИТЕЛЕЙ
ГОМЕЛЬСКОГО РЕГИОНА БЕЛАРУСИ
1Государственное учреждение «Республиканский научно-практический центр радиационной медицины и экологии человека», г. Гомель
2Учреждение образования «Белорусская медицинская академия последипломного образования» г. Минск Введение. Множественная миелома (ММ) - злокачественная опухоль из В-лимфоцитов, которая в большинстве случаев проходит стадию моноклональной гаммапатии неуточненного значения (МГНЗ). Выявление молекулярно-генетических, цитогенетических маркеров имеет прогностическое и клиническое значение.
Цель. Определить прогностическую значимость возможных факторов риска у пациентов Гомельского региона.
Материалы и методы. В исследование включено 141 человек (102 человека с МГНЗ и 39 человек с впервые выявленной ММ), находившиеся под наблюдением в ГУ «РНПЦ РМиЭЧ» в период с марта 2018 г. по июнь 2020г. Средний возраст пациентов в группе с МГНЗ составил 60,5 лет, при ММ -65 лет. Всем пациентам выполнены общеклинические исследования, иммунофенотипическое, иммуногистохимическое, цитогенетическое и молекулярно-генетическое исследование костного мозга.
Результаты. В нашем исследовании у всех пациентов ММ с выраженной экспрессией CD138 при иммуногистохи-мическом исследовании отмечалось значимое превышение показателей ФНО, интерлейкина-6, интерлейкина-8 и чаще определялась секреция легких цепей лямбда (р <0,001). В группе МГНЗ выявлена сильная положительная корреляция между повышенной продукцией легких цепей каппа в крови и их экспрессией в костном мозге (р<0,001; R=0,790), а так же между уровнями ^-6 и ^-8 в периферической крови (р<0,001; R=0,785). За время наблюдения у двоих пациентов МГНЗ с данными характеристиками заболевание трансформировалось во ММ. Значительное превышение уровня фактор некроза опухоли (ФНО-а) относительно нормального значения выявлено у пациентов с ММ (59,5%) и МГНЗ (39,1%).
Хромосомные изменения плазматических клеток костного мозга при ММ включали ^4;14) - 1 пациент, у 2 пациентов ^4;16), у 1 пациента делеция 13q и у 1 пациента гиперпло-идия и полиплоидия. У одного пациента выявлены нарушения, связанные с 4, 14 и 16 хромосомой. Прогрессия Мм у данного пациента наступила спустя 4 месяца после про-
веденной аутологичной трансплантации периферической стволовой клетки и двух курсов поддерживающей терапии леналидомидом. У пациентки из группы ММ с выявленной делецией 13q заболевание сопровождалось наличием множественных мягкотканных компонентов различной локализации с инфильтрацией мышц спины и ягодичных мышц опухолевыми плазматическими клетками. За период наблюдения и лечения у пациентки развилась резистентность к полихимиотерапии (отсутствие ремиссии после 3 курсов VCD (бортезомиб, дексаметазон, циклофосфан), 1 курса PAD (док-сорубицин дексаметазон, бортезомиб)). В течение 3 месяцев заболевание спрогрессировало в острый плазмоклеточный лейкоз с последующей гибелью пациентки на фоне острого тромбоза легочной артерии. При исследовании пациентов с МГНЗ, только у 2 выявлены хромосомные изменения в виде полиплоидии. В группе с ММ мутация V600E гена BRAF выявлена у одной пациентки. Клинически заболевание у нее сопровождалось выраженным деструктивным синдромом с наличием множественных мягкотканных компонентов. Мутации гена k-RAS выявлены у 3-х пациентов с ММ. У двоих пациентов из группы заболевание оказалась резистентным к терапии бортезомибом (не достигнута ремиссия после 4 курсов VCD (бортезомиб, дексаметазон, циклофосфан). При тестировании мутаций BRAF и k-RAS в группе МГНЗ у пациентов определен нормальный генотип, возможно мутации не были выявлены по причине относительно небольшого количества плазматических клеток в исследуемых образцах.
Выводы. Выявление цитогенетических и молекулярно-генетических повреждений позволяет уже на первых этапах диагностики ММ и МГНЗ отнести пациентов к группе риска и сделать выбор тактики ведения.
З.В. Конова, Е.Н. Паровичникова, И.В. Гальцева, М.Ю. Дроков, Ю.О. Давыдова, Н.М. Капранов, М.В. Довыденко, В.А. Васильева, Л.А. Кузьмина, В.Г. Савченко
НЕБЛАГОПРИЯТНОЕ ВЛИЯНИЕ МИНИМАЛЬНОЙ ОСТАТОЧНОЙ БОЛЕЗНИ НА РЕЗУЛЬТАТЫ ТРАНСПЛАНТАЦИИ АЛЛОГЕННЫХ ГЕМОПОЭТИЧЕСКИХ
СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК
Федеральное государственное бюджетное учреждение «Национальный медицинский исследовательский центр гематологии» Министерства здравоохранения Российской Федерации, г. Москва
Введение. МОБ-позитивный статус является независимым прогностическим фактором для пациентов с острым миелоидным лейкозом (ОМЛ), определение минимальной остаточной болезни (МОБ) необходимо для стратификации пациентов на группы риска и принятия решения о модификации терапии на дотрансплантационном этапе. Генетическое и иммунофенотипическое разнообразие ОМЛ представляет собой серьезную проблему для проведения мониторинга МОБ в повседневной клинической практике. Для оценки МОБ наиболее широко применяются методы многоцветная
проточная цитометрия (МПЦ) и полимеразная цепная реакция (ПЦР). Имеются данные относительно независимого влияния предтрансплантационного МОБ-статуса на результаты трансплантации аллогенных гемопоэтических стволовых клеток (алло-ТГСК).
Цель. Оценить влияние предтрансплантационного МОБ-статуса, определяемого с помощью МПЦ и ПЦР, на долгосрочные результаты алло-ТГСК.
Материалы и методы. В исследование было включено 103 пациента с ОМЛ, которым была выполнена алло-ТГСК в
ВЕСТНИК ГЕМАТОЛОГИИ, том XVII, № 2, 2021
НМИЦ гематологии в период с сентября 2015 года по декабрь 2020 года. Все пациенты были в первой полной морфологической ремиссии перед алло-ТГСК. Медиана наблюдения за пациентами составила 16,8 (1-55) месяцев. С целью определения МОБ всем пациентам было выполнено иммунофеноти-пическое исследование образцов костного мозга с помощью 6-цветной МПЦ (BD FACS Canto II, США) непосредственно перед алло-ТГСК. МОБ методом МПЦ выявляли с помощью сочетания двух подходов: метод «пустых мест» и поиск клеток с лейкоз-ассоциированным иммунофенотипом. У 46 пациентов из 103 в дебюте заболевание выявлялись молекулярные маркеры, такие как NPM1, FLT3, RUNX1-RUNX1T1, MLL и CBF0-MYH11, что позволило определить МОБ-статус у этих пациентов с помощью ПЦР. Общую (ОВ) и безрецидивной выживаемость (БРВ), а также вероятность развития рецидива (ВРР) рассчитывали по методу Каплана-Майера. Сравнение показателей выживаемости в группах выполняли при помощи logrank теста. Статистически значимыми считали различия при p <0,05.
Результаты. С помощью МПЦ из 103 пациентов у 19 (18,4%) был определен МОБ-позитивный статус (МОБ+). Из 42 пациентов, имевших молекулярные маркеры, МОБ методом ПЦР была выявлена у 12 (28,6%) пациентов. У 9 пациентов МОБ выявлялась при МПЦ и ПЦР исследовании (МОБ+/+), 3 пациента были МОБ-позитивны только при ПЦР (МОБ ПЦР+МПЦ-), 10 пациентов были МОБ+ только методом МПЦ (МОБ МПЦ+) из них 1 больная имела молекулярный маркер и была МОБ- методом ПЦР, 33 пациента были МОБ-негативны двумя методами (МОБ -/-), 48 пациентов были МОБ- только
методом МПЦ (МОБ МПЦ-), ПЦР исследование им не проводилось. Мы объединили в одну группу всех МОБ+ пациентов, вне зависимости от метода исследования, и сравнили результаты алло-ТГСК МОБ+ пациентов, МОБ МПЦ- и МОБ -/-: у пациентов с МОБ+ статусом была достоверно худшая ОВ (44% против 58% против 92%, р=0,0035), БРВ (30% против 52% против 92%, р<0,0001) и более высокую ВРР (67% против 16% против 0%, р<0,0001). Кроме того, необходимо отметить, что МОБ-/-пациенты имели достоверно лучшую БРВ по сравнению с МОБ МПЦ- пациентами (92% против 52%, р=0,009б). Мы проанализировал результаты алло-ТГСК у МОБ+ и МОБ- пациентов в зависимости от метода детекции МОБ и получили схожие данные, статистический анализ выявил значимые различия между МОБ+ и МОБ-негативными пациентами, вне зависимости от метода исследования: у пациентов с МОБ+ статусом была худшая ОВ (МПЦ: 35% против 67%, р=0,0003; ПЦР: 59% против 92%, р=0,0059), БРВ (МПЦ: 20% против 63%, р<0,0001; ПЦР: 40% против 88%, <0,0001) и более высокую ВРР (МПЦ: 77% против 11%, р<0,0001; ПЦР: 56% против 5%, <0,0001).
Выводы. Детектируемая перед алло-ТГСК МОБ - прогностический фактор риска развития рецидива, оказывающий влияние на ОВ и БРВ, вне зависимости от метода определения (МПЦ или ПЦР). Исследование МОБ у пациентов с ОМЛ непосредственно перед выполнением трансплантации аллогенно-го костного мозга может использоваться для стратификации риска алло-ТГСК и выявления пациентов, которым необходимо проведение профилактической посттрансплантационной терапии с целью предотвращения рецидива заболевания.
Д.В. Курочкин1, Т.Н. Субботина12, Е.А. Дунаева3, К.О. Миронов3, А.С. Хазиева4, Е.В. Васильев4
СКРИНИНГ СОМАТИЧЕСКИХ МУТАЦИЙ В ГЕНЕ CALR С ПОМОЩЬЮ
HRM-АНАЛИЗА
1Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования «Сибирский федеральный
университет», г.Красноярск 2Федеральное государственное бюджетное учреждение «Федеральный Сибирский научно-клинический центр
Федерального медико-биологического агентства», г. Красноярск 3Федеральное бюджетное учреждение науки «Центральный научно-исследовательский институт эпидемиологии» Роспотребнадзора, г. Москва
4Краевое государственное бюджетное учреждение здравоохранения «Краевая клиническая больница», г. Красноярск
Введение. В соответствии с клиническими рекомендациями ВОЗ, анализ соматических мутаций в гене CALR, а также мутаций в генах JAK2 и MPL включен в список критериев диагностики Ph-миелопролиферативных новообразований (Ph-МПН). В гене CALR было обнаружено более 50 различных вариантов мутации, среди которых наиболее частыми являются делеция 52 п.н. (p.L367fs * 46), также называемая типом 1, и вставка 5 п.н. (p.K385fs * 47), также называемая типом 2 (88%). Остальные 12% - это менее частые вставки, делеции или их комбинации. Поэтому важно разработать недорогой скрининговый тест, который может обнаружить любые мутации в анализируемом фрагменте ДНК гена CALR.
Цель. Целью этого исследования был скрининг CALR мутаций с помощью HRM-анализа с использованием термо-циклера CFX96 и программного обеспечения Precision Melt Analysis (Bio-Rad, США) у пациентов с Ph-МПН.
Материалы и методы. В исследование были включены 12 CALR«+» образцов ДНК с различными вариантами мутаций от пациентов с диагнозом Ph-МПН. Уровень аллельной нагрузки находился в диапазоне 27 - 50%. HRM-анализ выполняли с использованием набора реагентов Precision Melt Supermix в присутствии красителя Eva Green (Bio-Rad, США). ПЦР с дополнительной стадией плавления с высоким разрешением проводили на приборе CFX96 (Bio-Rad, США) по следующей программе: денатурация при 95° C в течение 2 минут, затем 40 циклов при 95° C в течение 10 секунд, 57° C
в течение 30 секунд и 72° C в течение 30 секунд. Программа плавления с высоким разрешением состояла из денатурации при 95° C в течение 30 секунд, ренатурации при 60° C в течение 1 минуты и плавления при 60-95° C с градиентом 0,2° C в 10 секунд. Для наиболее распространенных вариантов CALR мутаций (c.1092_1143del и c.1154_1155insTTGTC) был проанализирован порог обнаружения мутантного ал-леля. Для этого было выполнено разведение заклониро-ванных образцов дикого типа и с мутацией для получения проб с различными уровнями аллельных нагрузок 100%, 50%, 25%, 12,5%, 6,25%, 3,13% несущих выявленные ранее мутации.
Результаты. По результатам анализа CALR «+» образцов в программе «Precision Melt Analysis» все кривые плавления продуктов амплификации четко разделены на 3 кластера относительно образцов без мутаций. В частности, три CALR«+» образца с классической мутацией типа 2 (c.1154_1155insTTGTC) и образец с мутацией (c.1154_1155insGTGTC) были отнесены в единый кластер №1. Шесть других образцов с мутацией типа 1 (c.1092_1143del) и образец с мутацией (с.1111_114^еЦ также были отнесены к одному кластеру №2. Образец с сочетанными мутациями (cmB^minsCTTTGCTT и c.1131_1133delAGA) был отнесен к отдельному кластеру №3. Порог обнаружения в случае анализа мутаций c.1092_1143del и c.1154_1155insTTGTC составил 12,5% наличия мутантного аллеля в образце.
