CC BY
0УДК: 615.545.02
МЕГОСИН ПРЕПАРАТИ ВА УНИНГ МЕГАФЕРОН КОМПЛЕКС БИРИКМАСИНИНГ СТАНДАРТЛАШ ТАДКИКОТЛАРИГА ИЛМИЙ
ЁНДАШИШ
Назирова Яйра Косимовна,
фармацевтика фанлари номзоди, катта илмий ходим
УзР ССВ фармацевтика тармогини ривожлантириш Агентлигига царашли
Узбекистон кимё-фармацевтика илмий тадцицот института
Аннотация. Илмий мацола герпес вирусига царши фаолликка эга булган госсипол цосилалари асосида олинган иммуномодуляторлар - мегосин ва мегаферонни урганиш тадцицотларига багишланган. Госсипол цосилаларининг азометин сацлаган турлари асосида дори воситалари, хусусан, радикал - СH2CH2SOзONa (мегосин) сацлаган тури юцори герпес вирусига царши фаолликка эгалиги билан бирга иммуномодуляторлик хусусияти фармакологик тажрибаларда урганилган. Бу бирикмаларнинг глицирризин кислотали комплекс цосилалариузининг юцори даражада сувда эрувчанлик хусусиятининг шуниси билан ацамиятлики, препарат таркибига кирганда биосамарадорлиги сезиларли даражада ошиши кузатилган. Бу эса дори шаклида препарат мицдорини камайтириш имконини беради. Шу мацсадда дастлаб олинган азометин госсипол цосиласи - мегосин ва унинг асосида 1:2 ва 1:4 нисбатларда олинган МАСГК (глицирризин кислотасининг моноаммонийли тузи) - мегаферон препаратларининг гидролизи келгусида препаратлар таркибидаги биологик фаол моддалар мицдорини аницлашусулини ишлабчицишучунурганилди ва илмий асосланди.
Таянч тушунчалар: антигерпетик воситалар, иммуномодуляторлар, госсипол цосилалари, мегосин, мегаферон, супромолекуляр бирикма.
НАУЧНЫЙ ПОДХОД К СТАНДАРТИЗАЦИИ ПРЕПАРАТА МЕГОСИНА И ЕГО КОМПЛЕКСНОГО СОЕДИНЕНИЯ МЕГАФЕРОНА
Назирова Яйра Косимовна,
кандидат фармацевтических наук, старший научный сотрудник
Узбекский химико-фармацевтический НИИ им. А. Султанова
при Агентстве фармацевтического развития МЗ РУз
Аннотация. Научная статья посвящена экспериментальному изучению иммуномодуляторов, производных госсипола противогерпетического действия - мегосина и мегаферона. Фармакологические исследованиями выявлено, что лекарственные средства на основе производных госсипола с азометином, в частности радикала - СH2CH2SOзONa (мегосин) обладают вместе с выраженной активностью против вируса герпеса иммуномодуляторными свойствами. Эти комплексы производных госсипола с глициризиновой кислотой в значительной степени способствуют улучшению биологической доступности препаратов: увеличивает их растворимость, уменьшает дозу препарата в лекарственной форме (сокращает количество препарата для приема. Иммуномодулирующее и противогерпетическое действие продуктов гидролиза первоначального азометинового производного госсипола - мегосина и супрамолекулярного комплекса, полученного на основе МАСГК (моноаммониевой соли глицирризиновой кислоты), - мегаферона было изучено соответствующими фармакологическими исследованиями. Авторами был изучен и научно обоснован гидролиз первоначального азометинового производного госсипола - мегосина и соответствующего супрамолекулярного комплекса, полученного на основе МАСГК, - мегаферона в соотношении 1:2 и 1:4. Для каждого препарата была разработана методика количественного определения компонентов методом высокоэффективной жидкостной хроматографии.
Ключевые слова: антигерпетические средства, иммуномодуляторы, производные госсипола, мегосин, мегаферон, супромолекулярное соединение.
SCIENTIFIC APPROACH TO THE STANDARDIZATION OF THE MEGOSIN DRUG AND ITS COMPLEX MEGAPHERON COMPOUND
Nazirova Yayra Kasimovna,
PhD in Pharmaceutical Sciences
Uzbek Scientific Research Chemical - Pharmaceutical institute under the Agency for the Development of the Pharmaceutical Industry of the Ministry of Health of the Republic of Uzbekistan
Abstract. The article is devoted to the study of immunosodulators - megosin and megaferon, derived from gossypol derivatives, which are active against herpes virus. The immunomodulatory properties of gossipol derivatives based on azometin-preserved species, particularly the radical-type - CH2CH2SO3ONa (megosin), have been shown to be active against high herpes virus. It is worth noting that due to its high water-solubility properties of glycyrrhizin acid derivatives of these compounds, there is a significant increase in the biosecurity of the drug. To this end, the hydrolysis of MASGK (monoammonium salts of glycyrrhizic acid) - megosin, derived from azometin gossipol - ratios of 1:2 and 1:4, has been scientifically substantiated to develop a method for quantifying biologically active substances in the drug.
Keywords: antigens, immunomodulators, gossypol derivatives, megosin, megaferon, supromolecular compound.
Введение
Изыскание новых неординарных, рациональных подходов к профилактике и лечению инфекционных патологий с использованием современных методов химиотерапии, создание новых эффективных иммуномодуляторов, направленных на повышение действенности и сокращение сроков лечения и представляющих достойную конкуренцию антибиотикам инфекционных патологий, являются одними из актуальных направлений современной биоорганической химии и фармации [1 ,2]. Наиболее интересным среди синтезированных азометиновых производных госсипола в плане создания на его основе лекарственных препаратов представляется соединение госсипола, содержащее радикал - СH2CH2SOзONa (мегосин), который
обладает высокой антигерпетической и иммуномоделирующей активностью, что было доказано учеными Института биоорганической химии АН РУз.
Поэтому целью настоящей работы являлись изучение и научное обоснование гидролиза первоначального азоме-тинового производного госсипола - ме-госина, а также изучение гидролиза соответствующего супрамолекулярного комплекса, полученного на основе моноаммониевой соли глицирризиновой кислоты (МАСГК) в соотношении 1:2 и 1:4 и названного нами «мегафероном», для дальнейшей разработки метода количественного определения компонентов.
Методология исследования
Синтез азометинового производного госсипола осуществляли по следующей схеме:
CHO OH
> + RNHo
R-HN-CH
O
OH
HO
► + 2H2O
2
2
Известно, что водные растворы оснований Шиффа нестабильны и гидроли-зуются до первоначальных аминов и альдегидов [2]. Такое свойство также встречается и для азометиновых производных госсипола в водном растворе уже через 30 минут. Для синтезированного соединения при УФ-спектроскопии наблюдается интенсивный максимум поглощения при 247,5 нм и широкая полоса пог-
Рис. 1. Супрамолекулярный комплекс мегосина с МАСГК в соотношении 1:4
Примечательным является тот факт, что при квантово-химических расчетах (расчет выполняли с помощью ММ2) в случае соотношения супрамоле-кулярного комплекса мегосина с МАСГК 1:2 молекула мегосина находится над молекулой МАСГК, а в случае соотношения 1:4 - молекула мегосина находится в полости МАСГК.
Главной причиной создания лекарственных средств на основе глицирризи-новой кислоты и ее производных является ее хорошо выраженное солюбилизи-рующее свойство. Многие плохо растворимые или даже нерастворимые в воде субстанции лекарственных препаратов (аспирин, индометацин и др.) хорошо растворяются в воде в присутствии даже небольшого количества глицирризино-вой кислоты (ГК). Причиной солюбили-зирующего свойства этого природного вещества является, естественно, межмолекулярное взаимодействие, возникающее при контакте глицирризиновой кислоты с различными органическими веществами в растворе [3, 4].
лощения в интервале 320-440 нм с основным максимумом при 402 нм.
Учитывая гидролиз азометиновых производных госсипола в водных растворах, был получен супрамолекулярный комплекс синтезированного вещества с моноаммониевой солью глицирризино-вой кислоты в различных соотношениях (рис. 1 и 2).
Рис. 2. Супрамолекулярный комплекс мегаферона с МАСГК в соотношении 1:2
Результаты исследований
Сравнительный анализ УФ-спект-ров водных растворов мегосина и мега-ферона (супрамолекулярный комплекс мегосина с МАСГК) показывает, что по мере хранения растворов наблюдается сначала некоторое уменьшение, а потом, со временем, увеличение интенсивности оптической плотности при сохранении общей картины спектра.
Для изучения степени гидролиза снимали УФ-спектры полученных супра-молекулярных комплексов в спектрофотометре СФ-26 при длительности 10 мин., 24 ч. и 48 ч. в буферных растворах с рН, равном,62, 7,31 и 10,96 (рис. 3, 4 и 5). Во всех спектрах наблюдается интенсивный максимум поглощения в области 242-252 нм. По мере хранения растворов картина спектров меняется: в случае мегаферона происходит увеличение оптической плотности при 275 нм (с 0,14 до 0,41), но общий вид спектра при этом не меняется.
1,0
0,8
0,6
0,4
0,2
0,0
200
250
300
350
400
450
500
550
1-через 10 мин., 2-через 24 ч., 3-через 48 ч. Рис. 3. Мегаферон с рН=2,62
0,70,60,50,40,30,20,1 -0,0-
-0,1
—I—
300
—I—
500
200 250 300 350 400 450 500 550
1-через 10 мин., 2-через 24 ч., 3-через 48 ч. Рис. 4. Мегаферон с рН=7,31
-°,i -|—I—|—I—|—I—|—I—|—I—|—I—|—I—|—I
200 250 300 350 400 450 500 550
1 - через 10 мин., 2 - через 24 ч., 3 - через 48 ч Рис. 5. Мегаферон с рН=10,96.
Таким образом, водные растворы супрамолекулярных комплексных соединений азометиновых производных гос-сипола (в частности мегосина), в течение 48 ч. частично подвергаются гидролизу. Для получения достоверного результата разработан метод количественного определения мегосина и его комплекса методом высокоэффективной жидкостной хроматографии [5].
Изучение проведено обращенно-фазной хроматографией на колонке 3,0х150 мм, 3,5 мм, ZORBAX SBC18:
- подвижная фаза - предварительно отфильтрованная и дегазированная смесь, состоящая из 35 частей объема
ацетонитрила, 1 части объема уксусной кислоты и 64 частей объема бидистил-лированной воды;
- скорость потока - 1,0 мл/мин;
- детектирование-при длине волны 254 нм;
- время анализа - 16 мин.
Высокоэффективную жидкостную
хроматографию (ВЭЖХ) препаратов проводили с помощью хроматографа Agilent Technologies-1200 (США) в изократичес-ком режиме по отношению к показателям растворов РСО.
Хроматограммы представлены на рис. 6 и 7.
А, №'ауе1еп?Ш=254 пт (D:\HPLC\GLICIR\A000007.D)
.Л.
Рис. 6. Хроматограмма мегосина
2000
1750
1500
1250
1000
750
500
250
0
0
2
4
6
8
10
12
14
Рис. 7. Хроматограмма разделения мегосина и глицирризиновой кислоты
Из вышеприведенных хромато-грамм выявлено, что при температуре колонки 30 0С время для удерживания мегосина составляет 7,2 мин., а с комплексом ГК - 3,2 мин.
Исходя из полученных площадей пиков, определяли количественное содержание субстанций по нижеприведенной формуле:
r_ • acm-100-P -100-100 _ Sucn - acm - P-100 St -aucn -100-100-(100- W) Scm -aucn -(100- W) '
где: Sem - площадь основного пика на хроматограмме раствора рабочего стандартного образца субстанций; Sueл -площадь пика субстанций на хроматограмме раствора испытуемого образца; ает - навеска рабочего стандартного образца, мг; аиеп - навеска испытуемого
образца, мг; W - потеря в массе при высушивании, %; P - содержание изучаемых веществ в рабочем стандартном образце, г.
Результаты расчетов были подвергнуты статической обработке (табл.).
Таблица
Результаты количественного содержания производных госсипола методом _ВЭЖХ и метрологические характеристики определения_
№ Навеска мегаферона, г Х, г Метрологические характеристики
Мегосин
1 0,2501 0,0439 Хср=0,0442; f=4; t(P;f)=2,78; S2=0,0000004; S=0,0000004; ДХср=0,0007848; £ср=1,7%
2 0,2499 0,0442
3 0,2502 0,0444
4 0,2500 0,0451
5 0,2501 0,0432
Мегаферон
1 0,2501 0,2062 Хср= 0,2059; f=4; t(P;f)=2,78; S2=0,0000005; S=0,0007071; ДХср=0,0008775; £ср=0,43
2 0,2499 0,2057
3 0,2502 0,2058
4 0,2500 0,2049
5 0,2501 0,2069
Результаты, представленные в таблице, свидетельствуют о том, что разработанная методика разделения и определения исследуемого вещества достаточно чувствительна. Например, чувствительность обнаружения и определения мегосина составляет 0,025 мкг. Линейность разработанной методики соблюдается в интервале концентрации 0,0253,52 мкг/мкл для мегаферона. Результаты количественного определения подвергались статистической обработке данных, при этом относительная ошибка метода ВЭЖХ для мегосина составила 1,7 %, для мегаферона - 1,25 %.
При дисперсном анализе сравнения вычисленного значения F (критерий
Фишера) с табличным значением получено: Fвычисл. ^табл.. Это доказывает, что разработанный метод ВЭЖХ является наиболее достоверным.
Выводы
Изучен гидролиз первоначального азометинового производного госсипола -мегосина, а также соответствующего супрамолекулярного комплекса,
полученного на основе МАСГК, - мегаферона в соотношении 1:2 и 1:4. Выявлено, что полученные супрамолекуляр-ные комплексные соединения мегосина увеличивают биодоступность препаратов за счет солюбилизирующих свойств глицирризиновой кислоты.
Источники и литература
1. Семенова Т.Б., Федоров С.М., Джумиго П.А. Лечение рецедивирующего герпеса // Вестник дерматологии и венерологии. - 1991. - № 2. - С. 67-68.
2. Барам Н.И. Биологическая активность госсипола и его производных / Н.И. Барам, А.И. Исмаилов, Х.Л. Зияев, К.Ж. Режепов // Химия природных соединений. -2004. - № 3. - С. 171-176.
3. Толстиков Г.А, Муринов Ю.И., Балтина Л.А. Комплексы В-глицирризиновой кислоты как новые транспортные формы // Хим.-фарм. журнал. - 1990. - № 24 (9). -С. 26-27.
4. Балтина Л.А. Получение глицирризиновой кислоты из экстракта солодки / Л.А. Балтина, Н.Г. Сердюк, Л.В. Краснова, Р.М. Кондратенко, Г.А. Толстиков // Хим.-фарм. журнал. - 1994. - № 9. - С. 51-54.
5. Богданова В.Н., Лайпанов А.Х. Применение высокоэффективной жидкостной хроматографии для анализа некоторых сложных лекарственных форм // Проблемы стандартизации и контроля качества лекарственных средств: Матер. докл. Межресп. конф. - М, 1991. - 18-21 дек. - Т. 2. - Ч. 1. - С. 13-14.
Рецензент:
Бобоев И.Д., доктор техничексих наук, ведущий научный сотрудник Института химии растительных веществ при Академии наук Республики Узбекистан.
