МАТЕРИАЛЫ V НАЦИОНАЛЬНОГО КОНГРЕССА ПО РЕГЕНЕРАТИВНОЙ МЕДИЦИНЕ
269
микроокружения. C помощью интравитальной микроскопии показана миграция флюоресцентно-меченных TIL и опухоль-ассоциированных МСК в очаг солидной опухоли. Полученные результаты могут лечь в основу новых технологий адоптивной иммунотерапии солидных опухолей, преодоления иммуносупрессивного микроокружения и дальнейших модификаций иммунных клеток, усиливающих их противоопухолевую активность. Исследование выполнено при финансовой поддержке Российского научного фонда № 21-74-20110 и № 22-64-00057.
НАРУШЕНИЯ ВЗАИМОДЕЙСТВИЯ КЛЕТОК-ПРЕДШЕСТВЕННИЦ И ИХ МИКРООКРУЖЕНИЯ КАК ОСНОВА ПАТОЛОГИИ
Б.Г. Юшков
Институт иммунологии и физиологии УрО РАН, Екатеринбург, Россия ГАУЗ СО Институт медицинских клеточных технологий, Екатеринбург, Россия
e-mail: b.yushkov@iip.uran.ru
Ключевые слова: стволовые клетки, микроокружение, патология.
В последние годы все больше внимания привлекает проблема взаимоотношения клеток-предшественниц с их микроокружением. Считается, что активность стволовых клеток подлежит неклеточно-автономной регуляции из локального микроокружения или «ниши». Вместе с тем, не только микроокружение влияет на пролиферацию и дифференцировку клеток, но и последние могут оказывать влияние на формирование нужного им микроокружения.
Физиологически ниша состоит из различных тканевых компонентов, клеточных популяций (фибробласты, макрофаги, тучные клетки, Т-лимфоциты) и растворимых факторов, которые жестко регулируют поведение стволовых клеток.
Исследования при экстремальных состояниях свидетельствуют об изменении в экстрацеллюлярном матрик-се соотношения между гликопротеидами и кислыми ГАГ. Последние выступают в качестве факторов, блокирующих или запускающих механизмы митоза. При иммоби-лизационном стрессе в экстрацеллюлярном матриксе костного мозга снижается концентрация глюкозы, что предотвращает репликативное старение, усиливает ми-тохондриальное дыхание в мезенхимальных стволовых клетках человека. Кроме того, снижаются концентрации ЛДГ, щелочной и кислой фофатаз и возрастают концентрации холестерина, триглицеридов и фосфора, изменяется характер образуемых таким матриксом кристаллов. При воспалении в межклеточной среде костного мозга повышается концентрация витаминов В1, В2, В12, РР, С и падает В6.
В результате перестройки микроокружения может исчезнуть «ниша» резидентной стволовой клетки, что дает основание ввести термин «мигрирующая ниша», который хорошо объясняет феномен «клональной сукцессии». Некоторые авторы считают предпочтительным использование термина «непрерывное высвобождение стволовых клеток для дифференцировки».
Патология взаимодействия может быть результатом поражения самих стволовых клеток или дефекта микроокружения. При этом нормальные ССК животных с врожденным дефектом микроокружения могут
компенсировать дефект ССК, что показано на примере кроветворной ткани, сперматогенеза, развития молочной железы.
Признание нарушений микроокружения в патогенезе заболеваний требует разработки методов целенаправленной их коррекции путем модулирования микроокружения. В качестве примера можно привести направленную на фибробласты терапию при раке молочной железы, предлагаемую Ashleigh Unsworth et al.
ДВУХВЕКТОРНАЯ СИСТЕМА НА ОСНОВЕ АДЕНОАССОЦИИРОВАННОГО ВИРУСА ДЛЯ ГЕННОЙ ТЕРАПИИ ДИСФЕРЛИНОПАТИИ
И.А. Яковлев1, 2, А.М. Емелин3, И.С. Лимаев3, О.Н. Чернова3, М.О. Мавликеев3, В.О. Солдатов4, А.В. Дейкин4, М.В. Корокин4, М.В. Покровский4, А.А. Ризванов5, Р.В. Деев1, 3, А.А. Исаев1
1 ПАО «Институт Стволовых Клеток Человека», Москва, Россия
2 ООО «Генотаргет», Москва, Россия
3 ФГБОУ ВО Северо-Западный государственный медицинский университет им. И.И. Мечникова Минздрава России, Санкт-Петербург, Россия
4 НИУ Белгородский государственный университет, Белгород, Россия
5 ФГАОУ ВО Казанский (Приволжский) федеральный университет, Казань, Россия
e-mail: ivan@ivan-ya.ru
Ключевые слова: адено-ассоциированный вирус, миоди-строфия, дисферлинопатия, генная терапия, регенерация мышечной ткани.
Дисферлинопатия — орфанное фенотипически гетерогенное заболевание, вызываемое патогенными вариантами в гене DYSF, и нарушении синтеза трансмембранного белка дисферлина, одной из главных функций которого является участие в репарации дефектов клеточных мембран мышечных волокон (МВ). Неуклонное развитие дисферлинопатии приводит к тяжелой инвалидности в трудоспособном возрасте. На сегодняшний день не существует одобренных методов этиопатогенетиче-ского лечения дисферлинопатии.
Для реализации генотерапевтического подхода к лечению дисферлинопатии был использован аденоассо-циированный вирус (ААВ) 9 серотипа. Для доставки кодон-оптимизированного гена дисферлина, размер которого превышает лимит ёмкости ААВ, была использована двухвекторная система, в которой 2 вируса несли
2 части кДНК дисферлина (AAV9.DYSF). Эксперимент проводился на трансгенных мышах B6.A-Dysfprmd/GeneJ Bla/J. В 1 группе 12 самцам линии Bla/J была выполнена внутривенная инъекция вируса, забор биоматериала на 3, 6 и 12 недель. Во 2 группе выполнялось внутримышечное введение (в 3 дозировках) и внутривенное введение (в 1 дозировке), забор биоматериала через
3 недели. Для оценки влияния трансгенного дисфер-лина на состояние мышечной ткани были выполнены: ПЦР-РВ для количественной оценки копий ДНК и РНК, иммунофлюоресцентные реакции с диагностическими антителами, окраска гематоксилином и эозином для оценки морфометрических показателей. Во всех группах определен продукт иммунофлюоресцентной реакции, свидетельствуя о выработке дисферлина как минимум до 12 недели. В группе 2 количество дисферлин-позитив-ных МВ зависело от количества введенного ААВ. Таким
Гены & Клетки XVII, №3, 2022