CC BY
1420
Птицеводство
www.agroyug.ru
НАНОЭМУЛЬСИОННАЯ ВАКЦИНА ПРОТИВ ИНФЕКЦИОННОГО БРОНХИТА КУР
DOI: 10.24411/9999-007А-2020-10007 УДК 619:578.831.11
Дубовой А.С. старший научный сотрудник, e-mail: alexsd07@mail.ru Самусева Г.Н. старший научный сотрудник, e-mail: Samgally@mail.ru
Бакулин В.А. д.в.н., профессор, заведующий отделом вирусологии и ОБП, bakulinva@bk.ru «Всероссийский научно-исследовательский ветеринарный институт птицеводства» (ВНИВИП) - филиал ФНЦ «ВНИТИП» РАН
Аннотация. Представлены экспериментальные данные иммуногенной активности инактивирован-ной наноэмульсионной вакцины с использованием вариантного штамма ВНИВИП «ГС-11» вируса Инфекционного бронхита кур. Наноэмульсионная вакцина индуцировала более высокий уровень иммунного ответа, чем стандартная инактивирован-ная эмульгированная вакцина.
Ключевые слова: инфекционный бронхит кур, вакцина, иммунитет.
Введение
Инфекционный бронхит кур (ИБК) - высококонтагиозная болезнь с поражением органов дыхания у молодняка, репродуктивных органов и потерей продуктивности у взрослых кур-несушек, а также нефрозонефритным синдромом, наиболее характерным для заражения вариантными штаммами вируса [3,5]. Возбудитель ИБК — РНК-содержащий вирус семейства Coronaviridae, для которого характерна высокая изменчивость в геноме, сопровождающаяся появлению большого количества серотипов [6,7,11]. Иммунитет, приобретенный к одному серо-типу, часто не обеспечивает перекрестной защиты от заражения вирусом других серотипов.
Для специфической профилактики ИБК применяются живые и инактивированные вакцины. Обязательным компонентом инактивированных являются адъюванты, позволяющие значительно повышать антигенную и иммуногенную активность препаратов и увеличивать продолжительность поствакцинального иммунитета. Поэтому исследования, направленные на разработку новых и улучшение существующих адъювантных систем, в том числе наноразмерных, остаются актуальными [6,11].
Представленная работа была посвящена изучению антигенных свойств инактивированной вакци-
Annotation. Experimental data on the immunogenic activity of an inactivated nanoemulsion vaccine using the variant strain VNIVIP "GS-11" of the chicken Infectious bronchitis virus are presented. The nanoemulsion vaccine induced a higher level of immune response than the standard inactivated emulsified vaccine.
Key words: chicken infectious bronchitis, vaccine, immunity.
ны против ИБК в зависимости от размера капель дисперсной фазы [1, 2, 3, 4, 5].
Материалы и методы исследований
В работе использовали вариантный штамм «ГС-11» вируса ИБК (патент ВНИВИП №2658351 от 20 июня 2018 г.), имеющий 98% гомологии со штаммами и изолятами серотипа 793/В (4/91, GeneBank JN192154, AF093794; UK/2/91, GeneBank Z83976 и др.), СПФ-эмбрионы кур 9 - суточного возраста, масляный адъювант Montanide ISA 15 A VG (М/В), цыплят 40 - суточного возраста.
Для накопления вируссодержащего материала ИБК эмбрионы кур заражали штаммом «ГС-11» в аллантоисную полость, инокулируя в каждый эмбрион по 0,2 см3 вируса в дозе 1047 ЭИД50.
Биологическую активность вируса ИБК определяли методом титрации вируссодержащего материала на развивающихся куриных эмбрионах, уровень титров оценивали методом расчета титров по Керберу в модификации Ашмарина [1,2,3,4]. Инактивацию вируссодержащего материала проводили высокоочищенным теотропином (1,8,3,6-диэн-дометилен-1,3,6,8-тетраазациклодекан) - конечная концентрация препарата 0,04%, время инкубации 36 часов, температура инкубации (37,0±0,5) °С. По окончании инактивации проводили нейтрализацию
ЭФФЕКТИВНОЕ № 2 март ЖИВОТНОВОДСТВО 2020
Таблица 1.
Характеристика вакцин № 1 и № 2
Образец вакцины Адъювант Стерильность Полнота инактивации Стабильность эмульсии Вязкость (мм2/с) Безвредность
№ 1 - инактивированная эмульгированная вакцина против ИБК Montanide ISA 15AVG (М/В) стерильна Полностью инактивирована стабильна 45 безвредна
№ 2 - наноэмульсионная вакцина против ИБК Montanide ISA 15AVG(M/B) стерильна Полностью инактивирована стабильна 58 безвредна
остаточного количества теотропина путем добавления 2 М раствора тиосульфата натрия до конечной концентрации 0,03 М/дм3 и охлаждали суспензию до температуры +4-8 °С. Полноту инактивации определяли трехкратными пассажами на куриных эмбрионах. Стандартный образец инактивирован-ной эмульгированной вакцины против ИБК, который выступал в качестве референц-препарата, получали методом гомогенизации водного и масляного компонентов в соотношении 65:35 с помощью гомогенизатора ШгаШггах Т-25. Для получения опытного наноразмерного образца инактивированной эмульгированной вакцины против ИБК композицию дополнительно обрабатывали с помощью гомогенизатора высокого давления EmulsiFlex-C5.
Антигенную активность компонента препаратов оценивали по титрам поствакцинальных антител в ИФА в соответствии с инструкцией по применению набора (Вю^ек).
Результаты исследований и обсуждение
Полученные образцы вакцин № 1 — инактиви-рованная эмульгированная вакцина против ИБК и № 2 — наноэмульсионная вакцина против ИБК) контролировали на стерильность, стабильность эмульсии, вязкость, полноту инактивации и безвредность.
Результаты исследований представлены в табл.1.
Для определения антигенной активности вакцин цыплят опытных групп по 10 голов в каждой иммунизировали изготовленными образцами вакцин, оставляя 10 цыплят в качестве «чистого» контроля. Через 7, 14, 21, 28, 45, 60 суток после иммунизации от цыплят всех групп брали кровь, получали сыворотку и проводили серологические исследования в ИФА на наличие специфических антител к вирусу ИБК. Вакцину считали антигенно активной, если титры поствакцинальных антител к вирусу ИБК через 28 дней были не менее, чем в 2 раза выше минимального положительного титра, указанного в инструкции по применению набора (1:834) при отрицательном иммунном фоне (уровень титров ан-
■гно
■ TI лч и m с*
Рис. 1. Динамика выработки антител к вирусу ИБК после применения нано эмульсионной вакцины и инактивированной эмульгированной вакцины против ИБК.
тител к вирусу ИБК у цыплят контрольной группы) или не менее, чем в 2 раза превышали уровень положительного иммунного фона, и при этом прирост титров антител у цыплят контрольной группы за период опыта не наблюдался.
Результаты исследований образцов вакцин №1 и №2 на антигенную активность представлены на рис. 1.
Как видно из данных, представленных на рис.1, наноэмульсионная вакцина индуцирует более высокий уровень иммунного ответа, оцениваемый по титрам антител к вирусу ИБК в ИФА, чем стандартная инактивированная эмульгированная вакцина.
Заключение
Адъювантная композиция, состоящая из антигена иБк вариантного штамма и масляного адъюван-та, формирующего прямую эмульсию пригодна для изготовления наноэмульсионной вакцины против ИБК. Наноэмульсионная вакцина индуцирует более высокий уровень иммунного ответа, чем стандартная инактивированная эмульгированная вакцина.
1. Бакулин В.А., Сонин П.Ф. Лабораторная диагностика вирусных болезней у животных. СПб, — 2019 г. — 104 с.
2. БакУлин В.А. Иммунодефициты птиц. СПб, — 2019 г. «Свет», 308 с.
3. Дубовой А.С., Самусева Г.Н., Сморчкова Т.Н. Влияние компонентного состава на антигенную активность инактивированной эмульгированной вакцины против инфекционного бронхита кур. Вопросы нормативно-правового регулирования в ветеринарии. СПб., 2017 г, № 4, с.37-40.
4. Никитина Н.В., Леонов И.К., Явдошак Л.И., Трубицин М.М. Специфическая профилактика вирусного гепатита уток. Эффективное животноводство, 2019. — №4, 34-35.
5. Aguilar J. C. Vaccine adjuvants revisited / J.C. Aguilar, E. G. Rodriguez // Vaccine. — 2007. — № 25. — Р. 3752-3762.
6. Aucouturier J, Dupuis L, Ganne V. Adjuvants designed for veterinary and human vaccines// Vaccine. — 2001. — Vol. 19. Р. 2666-2672.
7. Cavanagh, D., Naqi S. Infectious bronchitis // Diseases of Poultry. — 11th ed. — Ames, Iowa, 2003. — P. 101-119.
8. Ignjatovic, J. Isolation of a variant infectious bronchitis virus in Australia that further illustrates diversity among emerging strain / J. Ignjatovic, G. Gould, S. Sapats et al. // Arc. Virol. — 2006. Vol. 151, Р. 1567-1585.
9. Rajput Z.I. Adjuvant effects of saponins on animal immune responses / Z. I. Rajput, Song-hua Hu, Chen-wen Xiao et al // Zhejiang Univ Sci B. — 2007. — Vol. 8. — № 3. — P. 153-161.
10. Liang Z. Arjun S, Nami W. etc., Nanoparticle Vaccines // Vaccine. — 2014. — Vol. 32. — № 3 — Р.327-337.
11. Sekhon B. and Saluja V., Nanovaccines - an overview // International Journal of Pharmaceutical Frontier Research (IJPFR). — 2011. — №1. — Р. 101-109.
