CC BY
65
Координаты для связи с авторами: Гордиенко Виктор Петрович - д-р мед. наук, профессор, заведующий кафедрой онкологии АГМА, тел. 8-(4162)-53-90-89, е-таП: [email protected]; Сапегина Ольга Владиславовна - главный врач Амурского областного онкологического диспансера, тел.: 8-(4162)-51-55-13, 49-11-90; Коробкова Татьяна Николаевна - ассистент кафедры онкологии АГМА, тел. 8-(4162)-53-90-89; Ролько Евгения Михайловна - заведующая оргметодотделом (ОМК) Амурского областного онкологического диспансера, тел. 8-(4162)-49-10-78.
□□□
УДК 618.19. -006.46-036-053-07:616-076.5].001.8 А. С. Шайкина1, Б. Я. Рыжавский2
МОРФОМЕТРИЧЕСКИЙ И ГИСТОХИМИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ ЭПИТЕЛИОЦИТОВ МОЛОЧНЫХ ЖЕЛЕЗ В НОРМЕ И ПРИ НЕКОТОРЫХ
ПАТОЛОГИЧЕСКИХ ПРОЦЕССАХ
Краевой клинический центр онкологии, 680042, ул. Воронежское шоссе, 164, тел. 8—(4212)—41—60—72, e-mail: [email protected];
Дальневосточный государственный медицинский университет,
680000, ул. Муравьева-Амурского, 35, тел. 8—(4212)—32—63—93, e-mail: [email protected], г. Хабаровск
Резюме
Проведены исследования возрастных изменений размеров эпителиоцитов внутридольковых и междольковых протоков и концентрации нуклеиновых кислот (НК) в нормальной молочной железе (МЖ) женщин в возрастном интервале от 14 до 88 лет, а также - у новорожденных детей. Установлено, что максимальные размеры ядрышек и ядер в эпителии протоков приходится на возрастные группы 14-30 лет и 31-40 лет, максимальная концентрация НК - на 14-30 лет. В климактерическом периоде данные показатели уменьшаются, что можно связать с происходящим в этот период снижением концентрации в крови яичниковых стероидов. В ткани МЖ, не пораженной опухолевым процессом при раке (средний возраст - 52,53±1,9 года), происходит достоверное увеличение площади сечения эпителиоцитов и концентрации НК в них, то есть эти показатели сравниваются с таковыми в МЖ более молодых женщин. В группе женщин с наличием в ткани МЖ фиброзно-кистозной мастопатии или фиброаденомы (средний возраст - 40,35±1,8 лет) выявлены аналогичные отклонения от «возрастного контроля» - достоверное увеличение площади сечения ядер эпителиоцитов внутри- и междольковых протоков, а также увеличение концентрации НК в последних. Высказывается предположение, что выявленные особенности морфометрических и гистохимических показателей у женщин с этой патологией обусловлены повышением в крови уровня эстрогенов.
Ключевые слова: молочная железа, морфометрия, нуклеиновые кислоты, возраст, рак, мастопатия.
A. S. Shaikin1, В. Ya. Ryzhavskii2
MORPHOMETRIC AND HISTOCHEMICAL ANALYSIS OF EPITHELIOCYTES OF MAMMARY GLANDS IN HEALTHY PATIENTS AND IN PATIENTS WITH SOME PATHOLOGICAL PROCESSES.
1Far Eastern State Medical University;
2Regional cancer center, Khabarovsk
Summary
The evaluation of age-related changes of size of intralobular and interlobular epitheliocytes and levels of nucleic acids in healthy women (age 14-88 years) and infants was performed. We found that maximum nucleolus and nucleus size of intralobular and interlobular epitheliocytes was observed in patients aged 14-30 years and 31-40 years and maximum level of nucleic acid was observed in patients aged 14-30 years. These values decreased in climacterical period, that was probably caused by decreased blood concentration of ovarian steroids. We found significantly increased size of cross-sectional area of epitheliocytes and levels of nucleic acids in nontumorous tissues of mammary gland in patients with breast cancer. The significantly increased size of cross-sectional area of nuclei of intralobular and interlobular epithelial cells and increased level of nucleic acids in interlobular epithelial cells were found in patients (mean age 40,35±1,8 years) with fibrocystic mastopathy. We assumed that these finding were caused by increased level of estrogens in studied patients.
Key words: mammary gland, morphometry, nucleic acids, age, cancer, mastopathy.
Молочные железы (МЖ), являющиеся мишенью для многих гормонов, находятся под сложным контролем эндокринной системы, подвергаются закономерным изменениям, обусловливаемых гормональным статусом [2, 3, 6]. Строение МЖ в норме вариабельно у одной и той же женщины в зависимости от возраста, постоянной смены процессов пролиферации, диффе-ренцировки и инволюции, связанных с периодом жизни (пубертатный, репродуктивный, постменопауза), фазой менструального цикла и выполнением репродуктивной функции. При рождении девочки молочные железы недоразвиты, формируются только главные протоки [1]. У половозрелой женщины доли состоят из долек, образованных многократно ветвящимися млечными протоками, которые вне лактации заканчиваются слепыми трубочками - млечными альвеолярными протоками. Из протоков в период лактации развиваются альвеолы. По окончании лактации молочные железы подвергаются физиологической инволюции. Клетки железистых долек нормальной ткани молочной железы формируют ацинусы и внутридольковые протоки, которые расположены в рыхлой соединительной ткани и образованы одним-двумя слоями клеток [9].
Морфологические исследования МЖ посвящены преимущественно ее состоянию при раке (РМЖ), а также - при мастопатии [8, 10, 13]. В то же время, МЖ в норме изучена в гораздо меньшей степени, чем при опухолях и предопухолевых процессах в ней, хотя знание морфологии нормальной ткани МЖ является одним из условий адекватной оценки их изменений при различных видах дисплазий, доброкачественных опухолях, а также при РМЖ [5, 7, 14]. Ранее нами [11, 12] были проведены сопоставления рецепторов к эстрогенам и прогестерону в паренхиматозных клетках МЖ у женщин разного возраста в норме, нормальной ткани МЖ при РМЖ и при мастопатии. Настоящая работа является продолжением данных исследований и посвящена изучению возрастной динамики эпители-оцитов МЖ в норме у женщин разного возраста, а также - при РМЖ и мастопатии.
Материалы и методы
Исследованы молочные железы 175 женщин, среди которых - 48 женщин, погибших в результате травм и 7 новорожденных и мертворожденных детей женского пола. При их судебно-медицинских вскрытиях не было обнаружено патологических изменений молочной железы, органов репродуктивной и эндокринной систем. У 53 женщин с диагнозом «рак молочной железы» исследованию подвергалась нормальная ткань железы из операционного материала от этих пациенток. У 62 женщин с диагностированными фиброаденомами и фиброзно-кистозными мастопатиями исследовался очаг поражения.
Материал, представленный нормальной тканью молочной железы, разделен на несколько групп по возрасту: 1-я группа - новорожденные, в том числе мертворожденные (п=7); 2-я группа - от 14 до 30 лет (п=6); 3-я группа - от 31 до 40 лет (п=4); 4-я группа - от 41 до 50 лет (п=11); 5 группа - от 51 до 65 лет (п=13); 6 группа - от 66 до 88 лет (п=14). Ткань молочной железы с патологическими процессами была разделе-
на на две группы: 7 группа - РМЖ (возраст от 22 до 85 лет), средний возраст - 52,53±1,9 года (п=53), и 8 группа - фиброзно-кистозная мастопатия (ФКМ) и фиброаденомы (ФА) от 18 до 71 года, средний возраст -40,35±1,8 (п=62).
Полученный материал был фиксирован в 10 %% нейтральном забуференном формалине. После заливки в парафин готовили срезы толщиной 4 мкм. Препараты окрашивали галлоцианином по Эйнарсону [4] на нуклеиновые кислоты. Интенсивность реакции измеряли на аппарате «Мекос» (^=550 нм) в эпителиоцитах внутридольковых и междольковых протоков, причем в последних исследованию подвергался внутренний слой многослойного эпителия, наиболее близкий к просвету протока. В каждом случае измерения проводили не менее чем в 20 эпителиоцитах каждой локализации. Статистическая обработка количественных данных проводилась при помощи пакета программ «Statistica 6.0».
Результаты и обсуждение
Возрастные особенности эпителиоцитов МЖ в норме. Полученные результаты (таблица) свидетельствуют о том, что как размерные характеристики исследованных эпителиоцитов МЖ, так и концентрация в них НК, не претерпевают в норме резких онтогенетических изменений. Это дает основание предполагать, что без применения морфометрии и цитоспектрофото-метрии они не могли бы быть выявлены.
Проведенные исследования показали, что размеры ядрышек в клетках внутридольковых протоков МЖ максимальны в 3-й группе (3,58±0,18 мкм2), у 31-40-летних женщин. Они достоверно больше, чем у женщин в климактерическом периоде (5-я и 6-я группы). У женщин 3-й группы максимальны и размеры ядрышек в клетках междольковых протоков (3,88±0,12 мкм2) и достоверно превосходят таковые во 2-й, 4-6-й группах (Р<0,05). Концентрация НК в ядрышках клеток внутридольковых протоков была наибольшей у женщин 2-й группы (14-30 лет), достоверно превышая ее в 6-й. Аналогичные результаты получены при изучении НК в ядрышках междольковых протоков: концентрация НК в них была более высокой, чем в 4-6-й группах (р<0,05). Таким образом, размеры ядрышек и концентрация в них НК были максимальными у женщин 14-30 и 31-40 лет. Учитывая функциональную роль ядрышек [9], можно полагать, что полученные данные отражают максимальную интенсивность синтеза рибосомальных РНК в эпителии протоков МЖ женщин данного возраста.
Размеры ядер клеток внутри- и междольковых протоков, как и размеры ядрышек, были максимальны в МЖ женщин 31-40 лет (3-я группа), однако, отличия от 2-й, 4-6-й групп были статистически недостоверны (табл.). Максимальная концентрация НК в ядрах эпителиоцитов протоков наблюдалась в МЖ женщин 2-й группы. Она была здесь достоверно большей, чем у женщин 6-й группы во внутридольковых протоках и 4-6-й групп в междольковых протоках.
Размеры цитоплазмы эпителиоцитов протоков МЖ женщин 2-6-й групп не имели достоверных межгрупповых различий. Концентрация НК в ней была
максимальной у женщин 2-й группы (как и в ядрах и ядрышках). В 3-й группе она достоверно снижалась, в 4-6-й группах она не имела достоверных отличий со 2-й группой.
Таким образом, в репродуктивном и пострепродуктивном периоде онтогенеза эпителиоциты МЖ претерпевают изменения размерных характеристик, а также концентрации в них НК. Данные литературы [2, 3, 6] позволяют считать, что важнейшим фактором, обусловливающих их, являются изменения концентрации половых гормонов, для которых МЖ - орган-мишень. По-видимому, гормоны, циркулирующие в системе мать-плацента-плод, а также гормоны, продуцируемые яичниками плода и новорожденной, поступающие с молоком матери, могли обусловливать особенности, выявленные нами в МЖ новорожденных (таблица).
Особенности эпителиоцитов в неизмененных участках МЖ при РМЖ. Изучение характера реакции проводилось в участках, не пораженных опухолевым процессом. Полученные показатели сравнивали с показателями 5-й группы контроля, близкой по возрасту. Морфометрический анализ показал, что площадь сечения и концентрация НК в ядрышках и ядрах во внутридольковых протоках в сравнении с контролем достоверно увеличены (таблица). Концентрация НК в ядрышках эпителиоцитов эпителия междольковых протоков равняется 0,79±0,02 усл. ед. (у контрольных 0,49±0,028 усл. ед.), то есть имеется ее достоверное увеличение по сравнению с контролем. Достоверных межгрупповых отличий в показателях размеров эпите-лиоцитов междольковых протоков не обнаружено.
Особенности реакции в очагах мастопатии и фиброаденомы. Характер реакции сопоставлялся с реакцией в 4-й группе, близкой по возрасту. Было установлено, что площадь сечения ядер эпителиоцитов внутридольковых и междольковых протоков достоверно превышает контрольные показатели. Концентрация
НК ядрышка и ядра эпителиоцитов междольковых протоков достоверно возросла по сравнению с контрольной группой, во внутридольковых протоках различия концентрации НК с контролем были не достоверны.
Выводы
Таким образом, проведенные исследования позволили получить новые данные о возрастных изменениях размеров эпителиоцитов внутридольковых и междоль-ковых протоков и концентрации НК в МЖ женщин в возрастном интервале от 14 до 88 лет, а также их особенности у новорожденных детей. Установлено, что максимальные размеры ядрышек и ядер в эпителии протоков приходится на возрастные группы 14-30 лет и 31-40 лет, максимальная концентрация НК - на 14-30 лет. В климактерическом периоде данные показатели уменьшаются, что можно связать с происходящим в этот период снижением концентрации в крови яичниковых стероидов [3].
В ткани МЖ, не пораженной опухолевым процессом при РМЖ (средний возраст - 52,53±1,9 года), происходит достоверное увеличение площади сечения эпителиоцитов и концентрации НК в них, то есть эти показатели сравниваются с таковыми в МЖ более молодых женщин. В группе женщин с наличием в ткани МЖ фиброзно-кистозной мастопатии или фиброаденомы (средний возраст 40,35±1,8 лет) выявлены аналогичные отклонения от «возрастного контроля» - достоверное увеличение площади сечения ядер эпителиоцитов внутри- и междольковых протоков, а также увеличение концентрации НК в последних. Учитывая данные литературы [8, 10, 13] о роли гиперэстрогении в развитии РМЖ и мастопатии, можно полагать, что выявленные особенности морфоме-трических и гистохимических показателей у женщин с этой патологией обусловлены именно повышением уровня эстрогенов.
Таблица
Морфометрические и гистохимические показатели в эпителиоцитах молочной железы
Группы ^—■— ' ^ ^——" Показатели Новорожденные (1) Норма, 14-30 лет (2) Норма, 31-40 лет (3) Норма, 41-50 лет (4) Норма, 51-65 лет (5) Норма, 66-88 лет (6) РМЖ (7) ФКМ+ФА (8)
Площадь сечения, мкм2, внутри-дольковые протоки: ядрышко ядро цитоплазма - 3,2±0,27 11,97±0,83 19,25±2,0 3,58±0,1856* 12,2±0,55 20,5±1,92 2,93±0,28 10,8±0,88 23,6±1,58 3±0,12 11,09±0,76 23,5±1,16 2,82±0,11 10,8±0,52 22,02±0,86 3,56±0,085 13,54±0,315 18,99±0,49 3,4±0,08 14,13±0,264* 22,55±0,73
междольковые протоки, мн. р. эп: ядрышко ядро цитоплазма - 3,3±0,19 12,05±1,1 20,3±2,7 3,88±0,124д6* 13,3±1,14 20,58±2,04 2,87±0,27 11,68±0,87 23,89±1,53 3,25±0,2 11,45±0,91 25,5±1,24 3,11±0,13 11,59±0,62 24,19±1,26 3,57±0,09 13,8±0,35 19,3±0,51 3,5±0,097 14,4±0,254* 23,34±0,67
главные протоки: ядрышко ядро цитоплазма 2,9±0,14 11,6±0,43 14±0,349 - - - - - - -
Концентрация НК, усл. ед., внутридольковые протоки: ядрышко ядро цитоплазма - 0,7±0,116* 0,66±0,066* 0,57±0,053* 0,6±0,09 0,498±0,07 0,43±0,02 0,56±0,06 0,56±0,05 0,54±0,06 0,47±0,03 0,517±0,03 0,56±0,05 0,45±0,03 0,49±0,03 0,47±0,03 0,77±0,025* 0,66±0,0145* 0,505±0,012 0,68±0,018 0,59±0,014 0,48±0,01
междольковые протоки, мн. р. эп: ядрышко ядро цитоплазма - 0,76±0,14-5'6* 0,69±0,074-5'6* 0,58±0,043* 0,64±0,06 0,54±0,05 0,44±0,02 0,47±0,06 0,48±0,05 0,46±0,06 0,49±0,028 0,5±0,03 0,54±0,04 0,44±0,03 0,45±0,02 0,48±0,035 0,79±0,025* 0,67±0,16 0,52±0,01 0,72±0,024* 0,62±0,014* 0,51±0,01
главные протоки: ядрышко ядро цитоплазма 0,729±0,04 0,579±0,05 0,45±0,04 - - - - - - -
Примечание. * - обозначены показатели, достоверно отличающиеся от показателей 2-й группы; 3,4,5,6 - достоверные отличия от соответ-
ствующих групп.
Литература
1. Бурдина Л. М. Дисгормональные гиперплазии молочных желез - особенности развития, дифференциальная диагностика // Радиология - практика. -2007. - № 3. - С. 44-61.
2. Гильмутдинова М. Р., Гатауллин И. Г., Петров С. В. Особенности гормонального статуса женщин, больных раком молочной железы, при наличии отдаленных метастазов // Казанский медицинский журнал. - 2007. - Т. 88, № 5. - С. 463-465.
3. Кира Е. Ф., Бескровный С. В., Ильин А. Б. Влияние препаратов гестагенного ряда на морфофункци-ональное состояние молочных желез // Журнал акушерства и женских болезней. - 2000. - Т. 49, № 2. -С. 75-84.
4. Кисели Д. Практическая микротехника и гистохимия. - М.: Медицина, 1965. - 400 с.
5. Летягина В. П. Первичные опухоли молочной железы // Практическое руководство. - Москва: Ми-клош, 2005. - 332 с.
6. Прилепская В. Н., Швецова О. Б. Доброкачественные заболевания молочных желез: принципы терапии // Гинекология. - 2000. - № 6. - С. 201-204.
7. Розин Д. Л. Опухоли молочных протоков. - Баку, 1989. - 332 с.
8. Сидоренко Л. Н. Мастопатия. - 2-е изд. - Л.: Медицина, 1991. - 264 с.
9. Хадыров Э. А. Ультраструктурные особенности паренхиматозных клеток молочных желез в норме, при фиброаденоме и при фиброзно-кистозной болезни // Морфологические ведомости. - 2010. - № 1. -С. 102-104.
10. Хамитова Г. В., Гилязутдинов И. А., Гилязут-динова З. Ш., Тухватуллина Л. М. Дисгормональные заболевания молочных желез центрального генеза // Казанский медицинский журнал. - 1998. - № 2. -С. 109-113.
11. Шайкина А. С., Рыжавский Б. Я., Беков С. В. Иммуногистохимический анализ рецепторов к прогестерону в молочных железах в норме и при некоторых патологических процессах // Дальневосточный медицинский журнал. - 2012. - № 2. - С. 72-74.
12. Шайкина А. С., Рыжавский Б. Я., Беков С. В. Иммуногистохимический анализ рецепторов к эстрогенам в молочных железах в норме и при некоторых патологических процессах // Дальневосточный медицинский журнал. - 2012. - № 4. - С. 48-50.
13. Kubista E., MullerG., Spona J. Die conservative therapie der Mastopatie // Zbl. Gynacol. - 1983. - Vol. 105, № 18. - P. 1153-1162.
14. Robin C., Jungers С. Epidemiologie des affections mammaires // Rev. med. Bruxelles. - 1982. - Vol. 3, № 9. -P. 629-636.
Координаты для связи с авторами: Шайкина Александра Сергеевна - врач-патологоанатом КГБУЗ «Краевого клинического центра онкологии», тел. 8-(4212)-41-06-29; Рыжавский Борис Яковлевич - заведующий кафедрой гистологии ДВГМУ, тел. 8-(4212)-32-63-93.
□□□
