CC BY
71
DIOMIDOVA VALENTINA NIKOLAEVNA - doctor of medical sciences, head of the Department of Internal Diseases Propaedeutics with a Radiodiagnostic Course, Chuvash State University; head of Ultrasonic Diagnostics Department, City Clinical Hospital № 1, Russia, Cheboksary.
ВАЛЕЕВА ОЛЬГА ВИТАЛЬЕВНА - врач, Городская клиническая больница № 1, Россия, Чебоксары.
VALEEVA OLGA VITALYEVNA - doctor, City Clinical Hospital № 1, Russia, Cheboksary.
ВОРОПАЕВА ЛИДИЯ АЛЕКСАНДРОВНА - кандидат медицинских наук, старший научный сотрудник научно-исследовательской лаборатории по лучевой диагностике, Чувашский государственный университет, Россия, Чебоксары (gkb1@vdnh.ru).
VOROPAEVA LIDIYA ALEKSANDROVNA - candidate of medical sciences, senior researcher of Research Laboratory for Radiodiagnostics, Chuvash State University, Russia, Cheboksary.
УДК 611.211
О.А. ЕФРЕМОВА, Е.А. ГУРЬЯНОВА,
Л.А. ЛЮБОВЦЕВА, Л.К. ЛЕОНОВА
МОРФОЛОГИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ НЕЙРОЭНДОКРИННЫХ КЛЕТОК КОЖИ И СЛИЗИСТОЙ ОБОЛОЧКИ ОКОЛОНОСОВЫХ ПАЗУХ В НОРМЕ И ПРИ ХРОНИЧЕСКОМ ПОЛИПОЗНОМ РИНОСИНУСИТЕ
Ключевые слова: NSE-клетки, индолсодержащие клетки, кожа, слизистая оболочка около-носовых пазух.
Проведено сравнительное гистологическое и иммуногистохимическое исследование кожи человека и слизистой оболочки околоносовых пазух людей, страдающих хроническим полипо-зным риносинуситом (ХПР). В коже клетки, содержащие нейронспецифическую энолазу (NSE), были выявлены в области потовых желёз, волосяных фолликулов и в базальном слое эпидермиса. В слизистой оболочке околоносовых пазух NSE- и индолсодержащие клетки располагались в эпителии желёз и околоносовых пазух, а также вдоль стенки сосудов в собственной пластинке слизистой оболочки.
O.A. EFREMOVA, E.A. GURIANOVA, L.A. LUBOVTSEVA, L.K. LEONOVA THE MORPHOLOGICAL ANALYSIS OF NEUROENDOCRINAL SKIN CELLS AND MUCOUS MEMBRANE OF PARANASAL SINUS IN NORM AND AT CHRONIC POLYPOUS RHINOSINUSITIS Key words: NSE-cells, indole containing cells, a skin, a mucous membrane of paranasal sinuses.
Comparative histologic and immunohistochemical research of a skin of the person and mucous membrane of paranasal sinus of the people suffering from chronic polypous rhinosinusitis is conducted (CPR). The cells containing neuronspecific enolase (NSE) have been revealed in a skin of sweat glands area, hair follicles and in basal layer of epidermis. In a mucous membrane of paranasal sinuses NSE and indole-containing cells were found in the epithelium of glands, paranasal sinuses and also along a wall of vessels in the own plate of a mucous membrane.
В настоящее время известно, что в коже и слизистой оболочке околоносовых пазух имеются клетки, относящиеся к диффузной нейроэндокринной системе. Эти клетки содержат широкий спектр пептидных гормонов, нейромедиаторов, обладают скрытой метахромазией [6]. Клетки этого типа характеризуются положительной аргентаффинностью и выявляются специфическими иммуногистохимическими методами окраски: на нейронспецифическую энолазу, синаптофизин [3, 5, 6]. Как известно, в слизистой оболочке носа и бронхиального дерева локализуются EC-клетки [1]. Наблюдения ряда авторов показывают, что EC-клетки могут, в некоторых случаях, перерождаться в карциноиды в органах желудочно-кишечного тракта, лёгких и бронхах [7, 8]. Вследствие чего необходимо знать особенности локализации ней-
роэндокринных клеток в коже человека и слизистой оболочке околоносовых пазух как в норме, так и при хроническом полипозном риносинусите, которые до сих пор не описаны.
Цель исследования - выявить NSE- и индолсодержащие клетки в коже и слизистой оболочке околоносовых пазух при хроническом полипозном ри-носинусите.
Материал и методы. Материалом служила кожа 12 женщин в возрасте 45-50 лет, взятая во время пластической операции круговой подтяжки лица (после предварительного согласия пациенток). В ходе операционного вмешательства у 12 человек (возраст 25-50 лет), страдающих хроническим полипоз-ным риносинуситом, были взяты участки слизистой оболочки и полипы око-лоносовых пазух. Контролем служила слизистая оболочка околоносовых пазух, взятая от 5 трупов людей сразу после констатации смерти, погибших в результате травмы и не страдавших при жизни заболеваниями полости носа.
Срезы исследуемых органов толщиной 5 мкм после депарафинирования и регидратации в этаноле нисходящей концентрации погружали в восстанавливающий цитратный буфер (Ph 6,0), затем проводили высокотемпературную обработку прогреванием на водяной бане при 90-95°C в течение 30 мин с целью демаскировки искомых антигенов в тканях. Иммуногистохимиче-скую реакцию проводили методом трехэтапного непрямого иммунофермент-ного анализа с использованием первичных моноклональных антител (МКАТ) к маркеру нейроэндокринных клеток NSE - в разведении 1:100 согласно рекомендациям фирмы-изготовителя (Dako, Дания). Для каждой иммуногисто-химической реакции выполняли негативное контрольное исследование -один из двух серийных срезов, помещенных на предметное стекло, вместо первичных антител обрабатывали контрольными антителами. Визуализацию связавшихся первичных МКАТ проводили, используя набор LSAB-2 (Labeled Streptavidin Biotin) System Peroxidase. Для этого срезы тканей сначала инкубировали в растворе сыворотки, содержащей вторичные антивидовые анти-иммуноглобулиновые биотинилированные антитела. Затем с целью выявления биотиновой метки срезы обрабатывали раствором селективного связывающегося с биотином стрептавидина, конъюгированного с пероксидазой хрена. Для гистохимического выявления пероксидазной активности использовали хромоген-субстратную смесь на основе 3-амино-9-этилкарбазола. Специфичность экспрессии искомого антигена в опытных образцах тканей также подтверждалась отсутствием ее в контрольных срезах, не обработанных первичными МКАТ. Для гистохимической идентификации серотонинсодержащих структур использовали окраску Массона-Фонтаны. Визуальную оценку экспрессии исследуемых антигенных маркеров в коже осуществляли с помощью светового микроскопа «Альтами-био» с приставкой «CANON». Статистическую значимость полученных данных оценивали по t-критерию Стьюдента. Представление о количественном распределении окрашенных клеток получали методом их подсчета в 10 полях зрения микроскопа при об. 40, ок. 10 с последующим вычислением для каждого случая среднего арифметического значения.
и%Г<
- »• .* .• .
Результаты исследований. При изучении срезов кожи человека, окрашенных с помощью МКАТ к NSE, в эпидермисе были выявлены иммунопо-зитивные кератиноциты. Экспрессия вышеназванного маркёра проявляется не на всех участках эпидермиса одинаково. Число NSE-экспрессирующих кератиноцитов, расположенных подряд, составляет от 3 до 30 клеток в группе. В некоторых участках эпидермиса наблюдали иммуннопозитивное окрашивание на NSE не только в базальном, но и в шиповатом слое эпидермиса (рис. 1).
Экспрессия NSE проявляется вя на фоне неокрашенных структур, Н окружающих волосяной фолликул. NSE-положительные клетки характеризуются более крупными размерами, имеют полигональную неправильную или вытянутую форму и красновато-коричневые глыбовидные разнородные гранулы в цитоплазме. NSE-позитивные клетки местами контактируют с нервными волокнами, окружающими волосяную сумку (рис. 2).
Распределение NSE-позитивных клеток около волосяных фолликулов не имеет определенной закономерности. Так, в заушной области, где число волосяных фолликулов достоверно выше, чем в других исследованных точках, число фолликулов, около которых встречается NSE-экспрессирующие клетки, составляет 1-2 на одно поле зрения (табл. 1). Можно предположить, что здесь эти клетки оказывают влияние на рост и дифферен-цировку клеток волосяного фолликула. Вполне возможно, что число этих клеток зависит от фазы роста самого волоса. В то же время встречаются единичные волосяные фолликулы, около которых иммунопо-зитивные клетки образуют непрерывный слой, лежащий снаружи от соединительнотканной сумки. Кроме того, отдельные иммунопозитивные гранулы были замечены в мышце, поднимающей волос. В секреторных клетках концевых отделов потовых железах можно выделить 2 группы NSE-экспрессирующих клеток. Одни клетки содер-
Ш Ж1
Рис. 1. Экспрессия ЫБЕ кератиноцитами базального и шиповатого слоя эпидермиса:
1 - эпителиоциты; 2 - иммунопозитивные клетки. Иммуногистохимический метод на ЫБЕ. Микроскоп Альтами-Био. Ув.*400
ч • - • •г'Зм■■
Рис. 2. Скопление КБЕ-иммуннопозитивных клеток в области волосяного фолликула кожи:
1 - эпителиоциты; 2 - иммунопозитивные клетки. Иммуногистохимический метод на ЫБЕ. Микроскоп Альтами-Био. Ув.*400
жат следы исследуемого вещества, что проявлялось светло-коричневым мелкодисперсным окрашиванием цитоплазмы, а в других - цитоплазма окрашивалась в темно-коричневый цвет. Как тёмные, так и светлые клетки потовых желез давали положительную реакцию на К8Е. Также К8Е-иммунопозитивные клетки местами определялись между миоэпителиальными клетками. Их цитоплазма также содержала равномерно распределенные, окрашенные в краснокоричневый цвет характерные гранулы. Число гранул в клетке составляло 8-16. По описанию такие клетки выявляются в области концевых секреторных отделов потовых желез люминесцентно-гистохимическими методами [4]. Около одной из петель концевого секреторного отдела содержится 5-7 К8Е-экспрес-сирующих клеток (таблица).
Содержание NSE- и индолсодержащих клеток в коже и слизистой оболочке околоносовых пазух при окраске: на нейронспецифическую энолазу и по методу Массона-Фонтаны (М±т)
Исследуемые структуры Окраска на NSE Окраска по Массону-Фонтаны
Кожа Слизистая ХПР Кожа Слизистая ХПР
Эпителий 5,9±0,5 3,7±0,1 2,18±1,8 1,1±0,6 18,6±0,1 12,9±6,9
Собственная пластинка слизистой оболочки - - 0,52±0,3 - - 4,5±2,1
Боуменовы железы - 7,8±0,2 - - 24,5±0,1 7±3,5
Стенка сосудов 0,5±0,1 - - 3,3±1,2 - 4,8±2,7
Потовые железы 7,2±0,9 - - 5,5±2,3 - -
Волосяные фолликулы 15,1± 1,5 - - 7,7±3,4 - -
Нервные стволики 11, 2± 1, 3 - - 5,6±2,5 - -
Примечание. ХПР - хронический полипозный риносинусит.
В интактной слизистой оболочке околоносовых пазух на некоторых участках в эпителии выявленные NSE-положительные клетки имели высокую призматическую форму, ортохромные ядра и слабоокрашенную в краснокоричневый цвет цитоплазму. Они располагались чаще всего небольшими группами по 10-12 клеток, реже - поодиночке (таблица). В эпителии боуме-новых желез выявлялись клетки, имеющие округлые базофильные ядра и слабо окрашенную в красно-коричневый цвет цитоплазму.
При ХПР высокопризматические NSE-положительные клетки встречались в основном в гиперплазированном эпителии по 10-15 в группе. Они выделялись ярко окрашенной в красно-коричневый цвет цитоплазмой. Однако там, где эпителий был слущен, и на базальной мембране располагался один ряд клеток, NSE-положительные клетки имели кубическую форму. Нами выявлено, что при ХПР число иммунопозитивных клеток в эпителии уменьшилось в 1,7 раз по сравнению с таковым в здоровых тканях (таблица). В собственной пластинке слизистой оболочки при ХПР иммунопозитивные клетки в числе 3-4 располагались вдоль сосудов. У некоторых из этих клеток гранулы находились за пределами цитомембраны (рис. 3).
2
Рис 3. КБЕ-содержащие клетки в эпителии слизистой оболочки околоносовых пазух при хроническом полипозном риносинусите:
1 - иммунопозитивные клетки; собственная пластинка слизистой оболочки. Иммуногистохимический метод на ЫБЕ. Микроскоп Альтами-Био. Ув.*900
При окраске по методу Массона-Фонтаны эпителий кожи здоровых людей им-прегнировался в тёмно-коричневый цвет на + 4, выявлялись кератиноциты с интенсивной импрегнацией на + 5.
Эпителий здоровых тканей слизистой оболочки око-лоносовых пазух был интенсивно импрегнирован в тёмнокоричневый цвет на +3. В эпителии встречались участки, где ядра эпителиальных клеток импрегнировались в чёрный цвет на + 5, а их цитоплазма на + 3. Это могли быть ядра как базальных, так и реснитчатых клеток. В собственной пластинке здоровых тканей слизистой оболочки околоносо-вых пазух большинство клеток и волокна имели окрашивание на + 3. Ядра клеток эпителия большинства желёз импрегни-ровались на + 5 (рис. 4).
При ХПР серотонинсодержащие эпителиальные клетки располагались и в многорядном гиперплазированном эпителии, реже - в многослойном метаплазированном. Число таких клеток уменьшилось по сравнению со здоровыми тканями в 1,4 раза. В собственной пластинке слизистой оболочки встречались индолсодержащие фибробласты, лимфоциты, нейтрофилы и плазматические клетки, ядра которых импрегнировались на + 5, а цитоплазма на + 3.
При ХПР в стенке сосудов (капилляров, артерий, вен) определялись индолсодержащие эндотелиальные, гладкомышечные и адвентициальные клетки. Железы были расширены и заполнены секретом. Число серотонинсодержащих эпителиальных клеток желёз в 3,5 раз уменьшилось по сравнению со здоровыми тканями.
Обсуждение результатов. Ранее в коже и в слизистой оболочке околоно-совых пазух люминесцентно-гистохимическими методами были обнаружены
Рис. 4. Индолсодержащие клетки эпителия желёз собственной пластинки слизистой оболочки околоносовых пазух:
1 - индолсодержащие клетки эпителия желёз;
2 - собственная пластинка слизистой оболочки. Окраска по методу Массона-Фонтаны. Микроскоп Альтами-Био. Ув.*400
гранулярные люминесцирующие клетки (ГЛК), содержащие биогенные амины - катехоламины, серотонин, гистамин [4]. В работе показано, что клетки потовых желез, дающие положительную реакцию на нейронспецифическую энолазу, совпадали по локализации с ГЛК кожи. Ранее было установлено, что темные клетки потовых желёз экспрессируют цитокератин; светлые клетки -цитокератин, 8Р (субстанция Р), белок 8-100, а миоэпителиальные - актин, N08-1, СЬЛТ [9]. Нами в области потовых желез кожи человека выявлено два типа NSE-иммунопозитивных клеток. Первый тип составляют секреторные клетки потовых желез, которые экспрессируют NSE в разной степени. Второй тип NSE-позитивных клеток представлен клетками, содержащими крупные гранулы и лежащими с наружной стороны соединительнотканной оболочки потовых желёз. Можно предположить, что клетки первого типа способствуют выделению секрета, а второго - участвуют в регуляции сокращения миоэпите-лиальных клеток, влияя, таким образом, на влажность кожи и электропроводность [2]. Иммунопозитивные клетки выявляются также около волосяных фолликулов в тесной связи с нервными волокнами и в базальном слое эпидермиса, куда подходят свободные нервные окончания.
В слизистой оболочке околоносовых пазух выявлены также два типа NSE-иммунопозитивных клеток. Первый тип составляют клетки эпителия слизистой оболочки околоносовых пазух и эпителия желёз, которые экспрессируют NSE в разной степени. Второй тип NSE-позитивных клеток представлен клетками, располагающимися вдоль стенки сосудов собственной пластинки слизистой оболочки околоносовых пазух. Часть индолсодержащих клеток в слизистой оболочке околоносовых пазух по локализации совпадает с NSE-позитивными клетками первого типа.
Возможно, взаимодействуя с нервными терминалями и являясь продуцентами разнообразных биологически активных веществ, нейроэндокринные клетки служат звеном в регуляции нейроиммуноэндокринных взаимоотношений в области кожи и слизистой и могут выступать в качестве координаторов местных иммунных, нервных и эндокринных механизмов в норме и при возникновении патологии.
Выводы. 1. В коже человека NSE активно экспрессируется некоторыми ке-ратиноцитами базального слоя в области мышцы, поднимающей волос, в области ряда волосяных фолликулов секреторными эпителиоцитами потовых желез.
2. При хроническом полипозном риносинусите число клеток, содержащих NSE, в эпителии уменьшилось по сравнению с таковым в здоровых тканях, а в эпителии желёз исчезло.
3. Индолсодержащие клетки при хроническом полипозном риносинусите были обнаружены в стенке сосудов в местах расположения эндотелиальных, гладкомышечных, адвентициальных клеток, в эпителии желёз, а также в эпителии слизистой околоносовых пазух, где их число было ниже по сравнению с аналогичным показателем в здоровых тканях.
Литература
1. Афанасьева Ю.И. Гистология, цитология и эмбриология / под ред. Ю.И. Афанасьева, Н.А. Юриной. М.: Медицина, 2002. С. 744.
2. Василенко А.М. Нейроэндокриноиммунология боли и рефлексотерапия // Рефлексотерапия. 2007. № 4.С. 4-7.
3. Кветной И.М., Ингель И.Э. Гормональная функция неэндокринных клеток: роль нового биологического феномена в регуляции гомеостаза // Бюл. экспер. биол. и мед. 2000. Т. 130, № 11. С. 483-487.
4. Любовцева Л.А., Ефремова О.А., Голубцова Н.Н. Свойства гранулярных люминесцирующих клеток // Международный журнал по иммунореабилитации. 2009. Т. 11, N° 1. С. 25-26.
5. Ноздрин В.И., Барашкова С. А., Семченко В.В. Кожа и ее производные. Омск: Омск. гос. мед. акад., 2005. 210 с.
6. Смирнова И.О., Кветной И.М., Князькин И.В. Нейроэндокринология кожи и молекулярные маркеры ее старения. СПб.: ДЕАН, 2005. 210 с.
7. Fraser R.G., Pare J.A.P., Pare P.D. et al. Diagnosis of Diseases of the Chest (3rd ed.). Philadelphia: Saunders, 1989. P. 1476-1494.
8. KulreM.H., MayerR.J. Carcinoid tumors // New Engl. J. Med. 1999. Vol. 340. P. 858.
9. Zancanaro C., Merigo F., Creso C. et al. Immunohistochemical evidence suggests intrinsic regulatory activity of human eccrine sweat glands // J Anat. 1999. Vol. 194 (Pt 3). P. 433-444.
ЕФРЕМОВА ОЛЬГА АЛЕКСАНДРОВНА - ассистентка кафедры цитологии, эмбриологии, гистологии, Чувашский государственный университет, Россия, Чебоксары (oefremova13@rambler.ru).
EFREMOVA OLGA ALEXANDROVNA - assistant lecturer of Cytology, Histology, Embryology Department, Chuvash State University, Russia, Cheboksary.
ГУРЬЯНОВА ЕВГЕНИЯ АРКАДЬЕВНА - кандидат медицинских наук, доцент кафедры восстановительной медицины, Чувашский государственный университет, Россия, Чебоксары (eagurian@rambler.ru).
GURIANOVA EVGENIYA ARKADYEVNA - candidate of medical sciences, assistant professor of Regenerative Medicine Department, Chuvash State University, Russia, Cheboksary.
ЛЮБОВЦЕВА ЛЮБОВЬ АЛЕКСЕЕВНА - доктор биологических наук, профессор, заведующая кафедрой цитологии, эмбриологии, гистологии, Чувашский государственный университет, Россия, Чебоксары.
LUBOVTSEVA LUBOV ALEKSEEVNA - doctor of biology sciences, professor, head of Cytology, Histology, Embryology Department, Chuvash State University, Russia, Cheboksary.
ЛЕОНОВА ЛЮДМИЛА КОНСТАНТИНОВНА - кандидат медицинских наук, доцент кафедры цитологии, эмбриологии, гистологии, Чувашский государственный университет, Россия, Чебоксары.
LEONOVA LUDMILA KONSTANTINOVNA - candidate of medical sciences, assistant professor of Cytology, Histology, Embryology Department, Chuvash State University, Russia, Cheboksary.
УДК 616.36:579.84
Г.Ш. ИСАЕВА
ГЕНЕТИЧЕСКАЯ ГЕТЕРОГЕННОСТЬ ШТАММОВ HELICOBACTER PYLORI, ВЫДЕЛЕННЫХ ОТ БОЛЬНЫХ С ЗАБОЛЕВАНИЯМИ ГЕПАТОБИЛИАРНОЙ СИСТЕМЫ
Ключевые слова: Helicobacter pylori, генотипы, гепатобилиарная система.
Образцы ДНКH.pylori, выделенные от 83 больных хроническими воспалительными заболеваниями гепатобилиарной системы, были проанализированы на присутствие vacA, cagA, babA генов. Генотипирование 31 изолята H.pylori показало их гетерогенность. В колонизации печени и желчного пузыря патогенетическую роль могут играть штаммы H.pylori cagА, babA-негативные, vacA-позитивные c незначительным уровнем токсической активности.
G.Sh. ISAEVA
GENETIC HETEROGE^ITY OF STRAINS HELICOBACTER PYLORI ISOLATED FROM PATIENTS WITH HEPATOBILIARY SYSTEM’S DISEASES Key words: Helicobacter pylori, genotypes, hepatobiliary system.
DNA samples of H.pylori isolated from 83 patients with hepatobiliary system’s diseases were analyzed for the presence of vacA, cagA, babA genes. The genotyping study of 31 isolates H.pylori demonstrated their heterogeneity. Strains H.pylori cagА, babA-negative and vacA-positive with low level of toxic activity сan play pathogenic role in the colonization of the liver and the gallbladder.
Штаммы H.pylori отличает огромное генетическое разнообразие. Как известно, штаммы H.pylori разделены на два основных генотипа: тип I - имеющие cagA и экспрессирующие CagA и VacA цитотоксины и тип II - не экспрессирующие их. С определенным генотипом может быть связана различная колони-
