CC BY
27
УДК 6Ґ6.932:576.809.4
С.В.Титова, А.В.Соколенко, Ю.М.Ломов, Л.С.Подосинникова, Е.А.Меньшикова, А.В.Миронова
і
г
МОРФОЛОГИЧЕСКИЕ ИЗМЕНЕНИЯ В ПОПУЛЯЦИИ ХОЛЕРНЫХ ВИБРИОНОВ ПРИ ПЕРЕХОДЕ В НЕКУЛЬТИВИРУЕМОЕ СОСТОЯНИЕ ПОД ВЛИЯНИЕМ ОТДЕЛЬНЫХ АБИОТИЧЕСКИХ И БИОТИЧЕСКИХ ФАКТОРОВ В ЭКСПЕРИМЕНТЕ
Ростовский-на-Дону научно-исследовательский противочумный институт
Морфологическая структура популяции холерных вибрионов в процессе перехода в некультивируемое состояние (НС) претерпевает стадийность, которая не отличается в изученных моно- и двухкомпонентных системах за исключением с живыми Scenedesmus quadricauda и Paramecium caudatum. Перераспределение клеток с образованием конгломератов позволяет предположить, что подобные образования могут выполнять структур-¡но-трофическую функцию, направленную на сохранение популяции холерных вибрионов в вегетативной или НФ при температуре культивирования 4-6 °С.
Некультивируемые формы (НФ) холерных вибрионов описаны впервые в 1982 г. [15]. Выявлены отдельные абиотические факторы индукции, однако влияние биотических компонентов практически не изучено, но эти данные имеют огромное значение, так как холерные вибрионы являются обитателями поверхностных водоемов. В неблагоприятных ^условиях морфологические изменения являются следствием физиологической модификации клетки [1]. В связи с этим морфологическая характеристика популяции позволяет судить о гетерогенности по способности переходить в НС.
В настоящее время описано изменение размеров и форм некультивируемых клеток вибрйонов различных видов. Vibrio c'nolerae в НС уменьшаются до 2/3, V. vulnificus до 1/3 . от первоначального объема, становятся неподвижными, изменяется форма клетки, V. parahaemolyticus в НС имеют различную форму от палочковидной до сферической [8, 12]. Ранее нами описаны изменения морфологии клеток холерных вибрионов при переходе в НС в морской и дистиллированной воде, отмечена стадийность этого процесса [9]. Работа в этом направлении была продолжена, изучены особенности морфологической изменчивости популяции' под влиянием биотических компонентов в лабораторных экосистемах. ; '
Цель работы - морфологическая характеристика популяции холерных вибрионов в процессе образования НФ в лáбopaтopныx экосистемах с фито- и зоогидробионтами.
Материалы и методы
В работе использованы vct+ штаммы холерных вибрионов 01 й 0139 серогрупп. Популяция инфузорий Paramecium caudatum выделена из -воды р. Дон в 1996 г., популяция водорослей Scenedesmus quadricauda получена из' лаборатории Азовского научно-исследовательского института рыбного хозяйства. Экзометаболиты водорослей Sc. quad^icau-da получали путем центрифугирования водоро'Ьлей, находящихся в стационарной фазе роста, при 3-|4 тыс. оборотов/мин в течение 10 мин. Полученный супернатант отделяли от осадками фильтровали че-
рез фильтр с диаметром пор 0,22 мкм (фирма МШ1-роге). Разрушенные на разной стадии жизненного цикла водоросли получали путем сбора урожая старой увядающей культуры с фильтра. Разрушали инфузории путем прогревания на водяной бане при температуре 56 °С 30 мин.
Среды культивирования: дистиллированная вода, физиологический раствор, водопроводная отстоянная кипяченая вода с добавлением солей (К>Ю3 -0,1 г/л, К2НР04 - 0,01 г/л’, 1у^804 - 0,01 г/л) и без них, речная вода. Исходные концентрации холерных вибрионов - 1-106 м.к./мл, инфузорий - 110 -Ы03особей/мл, водорослей - 1-104-Ы08 клеток/мл; НФ холерных вибрйонов получали, как описано ранее [7].
Для характеристики популяции холерных вибрионов использовали препараты «раздавленной капли» с водным раствором акридинового оранжевого (АО) 0,5 мкг/мл, фиксированные мазки с окраской по Граму и специфическими холерными флуоресцирующими иммуноглобулинами.
Результаты
Динамика перехода холерных вибрионов в НС и возврат к культивируемому состоянию во всех изученных экспериментальных пробах представлена тремя периодами: в первом периоде происходит постепенное снижение КОЕ, во втором - рост на питательных средах отсутствует, но в микроскопических препаратах обнаруживаются типичные клетки, в третьем - частичная реверсия культивируемо-сти, КОЕ 101—102 м.к./мл.
При культивировании холерных вибрионов в моно- и двухкомпонентных системах разного состава и температуре 4-6 °С наблюдали переход вегетативных клеток холерных вибрионов в НС в течение 5-60 сут (таблица).
В монокомпонентных системах с физиологическим раствором, в водопроводной, кипяченой воде с добавлением солей и без них, речной воде динамика перехода и изменения морфологии вегетативных клеток в НФ были однотипными. В переходном периоде происходят качественные изменения в морфологическом составе популяции, при этом общее
Результаты трансформации холерных вибрионов в НФ при 4-6 °С
Условия Штаммы Сроки, сут
1 5 10 15 1 20 | 25 зо 60 90
Дистиллированная вода V. сігоіегае 16077 + 0 -
V. еіюг 5879 + 0 - -
Физиологический раствор V. сИоІегае 16077 + 0 -
V. еіюг 5879 + + + + + + 0
Водопроводная кипяченая вода V. сігоіегае 16077 . ' + + 0
V. еІЮг5819 + + 0 -
Речная вода V. сігоіегае 16077 + + 0 -
V. еііог 5879 + + + + + + + 0 .
Минеральная среда V. сИоІегсіе 16077 + + 0 -
У.еІЮг 5879 + + + + 0 -
Минеральная среда с водорослями V. сігоіегае 16077 + + 0 -
V. еіюг 5879 + + + 0 -
Минеральная среда со старой увядающей V. сїюіегае 16077 + + + + + 0 -
культурой водорослей У.єіюг 5879 + + + + + + + 0 -
Минеральная среда с экзометаболитами V. скоіегае 16077 + + + + 0 -
водорослей V. еІЮг5Ю9
Водопроводная кипяченая вода с инфузориями V. сИоІегае 16077 + + 0 -
V. еіюг 5879 + + 0 -
Водопроводная кипяченая вода с разрушенными V. сИоІегае 16077 + + ,+ 0 -
инфузориями V. еіюг 5879 + + + 0
Примечания: «+» - КОЕ определяются на плотных питательных средах, «О» - не определяются.
количество клеток остается на первоначальном уровне, но появляются уменьшенные приблизительно в три раза от первоначального размера с изменением формы от укороченных палочек до кокковидных, при окрашивании акридиновым оранжевым люминесцируют оттенками красной гаммы. Таким изменениям в переходный период подвержены около 10 % клеток в средах культивирования с физиологическим раствором и речной водой и 30 % - в средах с водопроводной водой с добавлением солей и без них, около 50 % измененных клеток теряют подвижность. Отмечено, что во всех популяциях холерных вибрионов образуются конгломераты, которые можно разделить на три типа. Большая часть типичных клеток (10 %) участвует в образовании конгломератов первого типа. При витальном окрашивании акридиновым оранжевым выявляются скопления зеленых неподвижных палочек, соединенных различной степени окрашивания межклеточной субстанцией (рисунок, а). Окрашивание по Граму негативное, более интенсивный цвет самих палочек. По окончании переходного периода в популяции остается примерно 10 % типичных клеток холерных вибрионов, 40 % гетероморф-ных и 50 % клеток составляют конгломераты второго типа, которые состоят из округлых неправильной формы клеток красного цвета. Диаметр конгломератов превышает в несколько раз длину клетки холерных вибрионов. Клетки близко расположенные друг к другу. Между этими округлыми клетками или на их поверхности расположены зеленые палочки холерных вибрионов (рисунок, б). Окрашивание по Граму негативное, более интенсивный цвет по периферии округлой клетки и самих палочек.
В первые 10 сут НС при микроскопии препаратов морфологических отличий от переходного периода не выявлено. Несмотря на отсутствие положительных результатов в высевах на плотных питательных средах, в препаратах регистрируются типичные единичные подвижные клетки холерных
вибрионов (до 5 клеток в 50 % полей зрения): После 10 сут исследования происходят количественные изменения в популяции с сокращением общего количества клеток на 50 %, изменения затрагивают и конгломераты с переходом в третий тип, отличающиеся от второго типа отсутствием зеленых палочек (рисунок, в). Дальнейшая судьба популяции холерных вибрионов - распад конгломератов, в препаратах регистрируются гетероморфные клетки, неподвижные, красного цвета и единичные (до пяти клеток во всех полях зрения) уменьшенные подвижные палочки.
При культивировании холерных вибрионов в дистиллированной воде в переходном периоде происходит уменьшение общего количества клеток, и появляются гетероморфные «бочкообразной» формы клетки, увеличенные в объеме. В период НС популяция состоит из единичных гетероморфных клеток оранжевого цвета и единичных конгломератов красного цвета.
При культивировании холерных вибрионов с живыми и разрушенными водорослями, а также их метаболитами наблюдаются отличия в динамике перехода вегетативных клеток холерных вибрионов в НС. В пробах с живой культурой 5с. quadricauda холерные вибрионы переходят в НС на 10-15-е сутки. В переходном периоде в микроскопических препаратах обнаружены типичные палочки холерных вибрионов, постепенно утрачивающие подвижность. В НС популяция представлена типичными, неподвижными палочками. Общее количество клеток изменяется несущественно, клетки 5с. quadri-са^а имеют нетипичную форму: увеличенные в размерах, без усиков, не образовывают ценобии, окрашенные в красный цвет, с включениями зеленого цвета и без них.
В пробах с экзометаболитами водорослей наблюдаются все стадии перехода холерных вибрионов в НС, описанные ранее в экспериментах из мо-нокомпонентных систем, несмотря на их пролонги-
а б в
Некультивируемые формы холерных вибрионов в стадии конгломерации: а - конгломерат 1 -го типа; б - конгломерат 2-го; в - конгломерат 3-го; г - конгломерат 1-2 го типов (окрашивание АО). хбЗО
рующее воздействие на переходные формы, - до 20 сут исследования. I
В пробах со старой увядающей культурой водорослей переходный период продлевается до 1 мес. Популяция холерных вибрионов представлена изолированными гетероморфными клетками и конгломератами, которые состоят из микробных клеток, клеток водорослей на разных стадиях разрушения и межклеточной субстанции. В НС общее количество микробных клеток уменьшается как изолированных гетероморфных, так и типичных, входящих в состав конгломератов. При окрашивании акридиновым оранжевым микробные клетки люминесцируют зеленым, клетки разрушенных водорослей - красным, а межклеточная субстанция -светло-зеленым (рисунок, г). С увеличением возраста клеток в НС межклеточная субстанция, соединяющая микробные клетки и водоросли, становится менее выраженной, в конгломератах третьего типа -отсутствует.
При культивировании холерных вибрионов с живыми Р. саис1аШт переход в НС происходит на 10-15-е сутки исследования. Микроскопическая картина препаратов в переходном периоде . представлена типичными клетками холерных вибрионов и клетками Р. саиАаШт с видимыми фаголизосома-ми. В период НС до 10 сут общее количество клеток холерных вибрионов уменьшено, в микроскопических препаратах регистрируются единичные 1-2 клетки холерных вибрионов, клетки Р. саийаШт уменьшены в размерах, без видимых фаголизосом. После 10 сут общее количество Р. саис1ашт снижается, размеры их клеток уменьшены в 3 раза, клетки холерных вибрионов не обнаружены.
В пробах с разрушенными инфузориями! пере-ход холерных вибрионов в НС происходит ;на 5-15-е сутки. В переходный период в препаратах выявляются типичные подвижные и неподвижные клетки холерных вибрионов. Неподвижные клетки образуют конгломераты, основой которых служит, видимо, разрушенное тело инфузории, в виде шарообразной структуры, микробные клетки адгезиру-ются на поверхности. В НС типичных подвижных клеток в препаратах не выявлено, все клетки входят в состав конгломератов с тенденцией к уменыие-, нию количества клеток холерных вибрионов.
Обсуиедение
Представленные выше результаты модельных опытов показали, что в закрытых одно- и двухкомпонентных экосистемах при низкой температуре и без освещения холерные вибрионы переходят в НС в разные сроки, зависящие от состава среды V. cholerae 0139 серогруппы (vct+) в два раза быстрее, чем V. cholerae 01 (vct+) образуют НФ. Вероятно, это индивидуальная способность штаммов переживать неблагоприятные условия в НС. Увеличение сроков выживания холерных вибрионов в переходных формах в пробах с автоклавированной речной водой (более 30 сут) позволяет предположить пролонгирующее действие ее органических компонентов. Анализируемые результаты, полученные в экспериментальных пробах с Sc. quadricauda и холерными вибрионами, позволяют сделать вывод о бактериостатическом воздействии клеток водорослей, находящихся в стационарной фазе развития, несмотря на постоянную темновую фазу, при которой не происходит полноценного развития зеленых водорослей с выделением активнодействующего ингибирующего вещества бактериальных клеток [4]. В то же время наличие в средах культивирования экзометаболитов Sc. quadricauda и старой увядающей культуры водорослей вдвое пролонгировало сроки перехода в НС V. cholerae 0139 серогруппы. В литературе есть сведения о бактерицидной активности воды, из которой удаляли клетки Sc. quadricauda или при их разрушенном состоянии, а пробы с живыми клетками (старой культуры) оказывались нетоксичными [2]. Это еще раз подчеркивает неоднозначность воздействия зеленых водорослей на микробные клетки. Взаимоотношения между живыми клетками P. caudatum и холерными вибрионами подробно описаны нами ранее [10] и характеризуются как «хищник - жертва». Аналогичные отношения наблюдаются и с переходными и НФ холерных вибрионов. Динамика перехода холерных вибрионов в экспериментальных экосистемах с разрушенными инфузориями не отличается от большинства изученных проб.
Таким образом, сохранение популяции холерных вибрионов в вегетативной или НФ при температуре культивирования 4-6 °С зависит от состава
среды культивирования и присутствия живых и разрушенных зеленых одноклеточных водорослей и инфузорий, что согласуется с данными литературы и еще раз подчеркивает, что количественные изменения бактерий в течение вегетационного периода определяется комплексом биотических и абиотических факторов [13].
При изучении морфологической структуры популяции микроорганизмов оценивают количественное соотношение клеток разного возраста, размера и генотипа [5], последний признак нами не изучался. Микроскопирование нативных и фиксированных препаратов показало гетерогенность популяции холерных вибрионов по морфологии и по способности связывать краситель. По мере старения популяции изменялось. соотношение клеток разной морфологии, а также люминесценция клеток: от зеленой к красной. Известно, что характер люминесценции с акридиновым оранжевым определяется состоянием клеточной стенки и цитоплазмы [14]. Вероятно, продукты метаболизма и автолиза влияют на динамику перехода холерных вибрионов в НС и морфологическую структуру популяции вибрионов. Витальное окрашивание конгломератов из холерных вибрионов и холерных вибрионов вместе с разрушенными на разных стадиях водорослями позволяет предположить, что подобные образования могут выполнять структурно-трофическую функцию.
Анализ микроскопических препаратов позволяет выделить стадии перехода вегетативных клеток холерных вибрионов в переходные и затем в НФ. Стадийность не отличалась в изученных моно- и двухкомпонентных системах, за исключением проб с живыми 5с. циайпсаийа и Р. саисЫит. Сначала происходит перераспределение клеток, одни участвуют в образовании конгломератов, о которых есть сведения в специальной литературе [9], теряя при этом подвижность, другие - уменьшаются в размерах, округляются, есть упоминание об увеличенных в десять раз клетках холерных вибрионов, находящихся в НС [8].
Конгломерация клеток начинается в переходном периоде, это явление, возможно, направлено на способность к выживанию популяции холерных вибрионов. Межклеточная субстанция, вероятно, это межклеточное вещество, входящее в состав конгломерата, признано авторами [3] полифункцио-нальным, через него осуществляются межклеточные связи, процессы адгезии и колонизации, защита бактерий от воздействия факторов среды. Использование нами специфической холерной ЛЮМ сыворотки позволило подтвердить видовую принадлежность холерных вибрионов в конгломератах, а также выявить в динамике сохранность их антигенных свойств. Вероятно, конгломераты представляют собой фрагменты биопленки и выполняют защитную и трофическую функции. В препаратах с акридиновым оранжевым нежизнеспособные клетки укрупнены, примерно в десять раз превышают размеры типичных клеток холерных вибрионов, красного цвета, а на них располагаются типичные клетки холерных вибрионов зеленого цвета. Дальнейшая судьба конгломератов - распад клеток или при улучшении условий культивирования увеличение коли-
чества клеток, расположенных на конгломератах.
В экспериментальных пробах, возраст которых не превышает один месяц, популяция клеток холерных вибрионов становится мономорфной, состоит из измененных по форме и уменьшенных клеток. Экспериментально установлено, что клетки холерных вибрионов, находящихся в НС более ¡4 мес., имеют глубокие структурные изменения, уменьшенные размеры, с гладкими очертаниями, 'овальной формы, без жгутика, с электронно-плотной продольной складкой, составляют основную'массу популяции [9]. В пробах остаются и единичные подвижные, уменьшенные клетки, видимо, .не способные к размножению на использованных нами твердых питательных средах. Вероятно, это связано с тем, что при такой низкой концентрации может значительно слабее идти рост культуры [11], но также и с тем, что в условиях голодания жизнеспособность бактерий сохраняется. При отсутствии роста деление может продолжаться, и в результате образуются мелкие клетки, обозначенные в литературе как «ультрамикрококки», «минибактерии», такие клетки проходят через фильтр с порами диаметра 0,22 мкм й иногда невидимы в световой микроскоп [3].
Таким образом, проведенные эксперименты показали, что морфологическая структура популяции холерных вибрионов в процессе перехода в НС претерпевает изменения. Разные биотические компоненты лабораторных экосистем влияют на динамику перехода в НС, но не оказывают существенного влияния на морфологическую гетерогенность популяции. Выявленным этапам развития популяции соответствуют структурно-морфологические особенности и состав клеток на разных стадиях перехода в НС.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1. Вайсман И.Ш. // ЖМЭИ. - 1984. -.№ 4. - С. 3-8. -2. Горюнова С.В., Демина Н.С. Водоросли - продуценты токсических веществ. - М.: Наука, 1974. - 256 с. - 3. Громов Б.В., Павленко Г.В. Экология бактерий: Уч. пособие. - Л.: Изд-во ЛГУ, 1989. - 248 с. - 4. Левина Р.И. // Всесоюз. со-вещ. по культивированию одноклеточных водорослей: Тез. докл. — Л., 1961. - С. 22-23. - 5. Одум Ю. Основы экологии / Пер. с англ. - М.: Мир, 1975. - 740 с. - 6. Павлова И.Б., Ленченко Е.М. // ЖМЭИ. - 1998. - № 5. - С. 13-17. - 7. По -досинникова Л.С., Соколенко A.B., Чепкова Е.А. и др. // Пробл. комиссия «Холера и патоген, для человека вибрионы». - Ростов н/Д, 1999.-С. 39^11. - 8. Савельев В.H., Грижебовский Г.М., Брюханов А.Ф. и др.//Природноочаговые особо опасные инф. на юге России их профилакт. и лаб. диагн.: Сб. науч. тр., поев. 100-летию Астраханской ПЧС. -Астрахань, 2001. - С. 194-196. - 9. Соколенко A.B. Морфология, ультраструктура, метаболизм некультивируемых форм холерных вибрионов: Автореф. дис. ... канд. биол. наук. - Саратов, 2000. - 21 с. - 10. Титова С.В. Взаимоотношение холерных вибрионов с инфузориями разных видов. Деп. ВИНИТИ 29.05.98. - № 1671-В98. - 11. Kaperelyans A.S., Kell D.В'.II Trend in Microbiol. - 1996. - Vol. 4. - P. 237-242. -12.Kond'o K., Takade A., Amako K. // FEMS Microbiol. Lett. - 1994. - Vol. 123, N 1-2. - P. 179-184. - 13. Lipp E.K., Huq A., Colwell R.R. // Clin. Microbiol. Rev. - 2002. -Vol. 15, N 4. - P. 757-770. - 14. Strugger S. Fluoreszenzmik-roskopische und mikrobiologie. - Hanover, 1949. - S."27.' -’’IS. Xu H.-Sh., Roberts N., Singleton F.L. el al.'ll Microbiol. Ecol.-1982.-Vol. 8, N4.-P. 313-323.. ,
S.V.Titova, A.V.Sokolenko, Yu.M.Lomov, L.S.Podosinnikova,
E.A.Men’shikova, A.V.Mironova j
Morphological Changes in a Cholera,Vibrio Population During its Transition into Non-Culturing State Due to the Effects of Individual Abiotic and Biotic Factors under Experimental Conditions
Rostov-On-Don Anti-Plague Research Institute Morphological structure of a cholera vibrio population in the process of its transition into the non-culturing state (NCS) undergoes similar step
changes both in the mono- and two-component systems except the cases with live Scenedesmus quadricauda, and Paramecium caudatum. The redistribution of the cells accompanied with .conglomeration suggests that these formations might play a structural and trophical role, aimed at maintenance of cholera vibrios in the vegetative form or NCS at cultivation temperature of about 4 to 6 °C. •
Поступила 16.01.04
ИММУНОЛОГИЯ И ПАТОГЕНЕЗ
УДК 616.982.27-039:577.1
В.В.Алексеев, Т.Ю.Кивокурцева, А.Т.Яковлев, Н.Г.Плеханова
ИЗУЧЕНИЕ БИОХИМИЧЕСКИХ ПРОЦЕССОВ В МАКРООРГАНИЗМЕ ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМ МЕЛИОИДОЗЕ
•( • Волгоградский научно-исследовательский противочумный институт
■ I . . '
Проведено изучение биохимических процессов, происходящих в макроорганизме при экспериментальном мелиоидозе, при заражении штаммами возбудителя с различной вирулентностью. Установлено, что при острой форме мелиоидоза, вызванной высоковирулентным штаммом, уже на ранней стадии заболевания в макроорганизме выявляются значительные нарушения белкового, углеводного, липидного обменов. Возрастала активность ряда ферментов. Клиническое течение мелиоидоза подтверждали тесты по определению билирубина в крови и тимоловая проба. Отмечен значительный сдвиг электролитного обмена. Значительного изменения го; меостаза у животных, инфицированных слаб'овирулентным штаммом, не отмечено.
В последние годы, наряду с морфологическими и физиологическими сторонами патогенеза, ^большое значение придается биохимическим аспектам инфекционного процесса, а симптомокомплекс многих заболеваний в ряде случаев объясняют преимущественно с биохимических позиций [3,4].
Диагностический аспект клинической биохимии образует неразрывное целое с клиническими проявлениями. Все виды обмена веществ в макроорганизме взаимосвязаны друг с другом. Однако при конкретных нозологических формах на первый план выступает картина нарушения определенного 'обмена веществ, поэтому изучение этих процессов позволяет понять механизмы развития болезни [2].
Цель настоящей работы - изучение биохимических процессов, происходящих в макроорганизме при экспериментальном мелиоидозе, вызванном штаммами с различной степенью вирулентности.
Материалы и методы
Для изучения влияния степени патогенности инфекта на изменение биохимических процессов при мелиоидозе использовали высоковирулентный штамм ВигкИоШепа pseu.doma.llei 100 (Ц) 50 = 20 м.к. .для морских свинок) и его антигенный вариант -В. рзеикота1Ш 100-16-1 (Аг8Г), несинтезирующий поверхностный гетерополимер белково-углевОдной ) природы (мол. масса 800_кДа), один из главных факторов патогенности микроба. Мутантный штамм вызывал гибель единичных животных.
Морских свинок заражали 24-часовой агаровой культурой В. рзеиёотсйЫ 100 . подкожно дозой 5-103 м.к. Срок наблюдения составлял 14 сут. Динамику биохимических показателей крови оценивали на 1, 3, 5, 7, 10, 13-е сутки после заражения.
Вторую группу животных заражали 24-часовой агаровой культурой В. р5е^ота1Ш 100-16-1 (Аг8~) подкожно дозой 1-10 м.к. Наблюдение за этой группой велось в течение , 35 сут, пробы крови забирали на 1, 2, 3, 5, 10, 15, 20 и 35-е сутки.
Биохимические параметры сыворотки крови морских свинок изучали с использованием соответствующих диагностических наборов реактивов фирмы «ЬасЬета» (ВГПО, Чехия). Количественное содержание активных веществ измеряли на компьютеризированном фотометре «Мюго1аЬ-200» (Мегск, Германия) с автоматическим учетом стандартов и контрольных тестов. Каждый биохимический тест повторяли 3-кратно (п = 3).
Результаты и обсуждение
Определение лабораторно-клинических параметров крови морских свинок, зараженных подкожно взвесью вирулентного штамма В. рзеиёотайе1 100, показало, что наблюдается значительный сдвиг белкового обмена, начиная уже с 3-го дня после введения инфекта, что соответствовало острой фазе инфекционного : процесса. Гиперпротеинемия сохранялась с 3-го по 7-й день заболевания, затем концентрация белка снижалась (табл. 1). Нарушение
