CC BY
14
УДК 611.4:636.3
МОРФОЛОГИЧЕСКИЕ ИЗМЕНЕНИЯ В КРОВИ И НЕКОТОРЫХ ЭНДОКРИННЫХ ЖЕЛЕЗАХ У КОЗ ПРИ ГЕМОНХОЗЕ
А. А. БАРАНОВСКИЙ, Д. Н. ФЕДОТОВ, А. И. ЖУКОВ, В. А. МАРГЕЛОВ
УО «Витебская государственная академия ветеринарной медицины», г. Витебск, Беларусь, 210026
(Поступила в редакцию 15.01.2018)
В статье рассматривается влияние гемонхоза на морфологические изменения в крови, щитовидной, поджелудочной и вилочковой железах. Установлено появление эри-тропении, нейтрофилии, деструктивных изменений в тканях желез.
Ключевые слова: козы, паразиты, кровь, щитовидная железа, поджелудочная железа, тимус.
The article examines the impact of haemonchosis to the morphological changes in the blood, thyroid, pancreas and thymus. Set the appearance of erythropenia, neutrophilia, destructive changes in the gland tissues.
Key words: goats, parasites, blood, thyroid, pancreas, thymus.
Введение. Полная реализация потенциала сельскохозяйственных животных зависит от ряда факторов, таких как кормление, условия содержания, наследственность. Но при полном соблюдении всех вышеуказанных моментов невозможно добиться высокой молочной и мясной продуктивности от животных, зараженных паразитами. Оценка ущерба, причиняемого гельминтами сельскохозяйственным животным, является важной задачей.
Анализ источников. Картина изменений морфологических показателей крови является симптоматическим отражением патологического процесса, протекающего в организме животного. Она является значимым аргументом для оценки тяжести течения и прогноза болезни.
Исследование крови у животных с диагностической целью и для раскрытия механизма патогенного влияния приобрело широкое распространение и нередко имеет важнейшее значение при оценке различных патологий, в том числе и паразитарного характера [1, 4].
Важное значение имеют и знания о влиянии гельминтов на органы эндокринной системы, а именно на морфологию щитовидной железы, так как ее гормоны регулируют и стимулируют все основные процессы жизнедеятельности организма, тем самым способствуя его адаптации и реактивности к неблагоприятным факторам внутренней и внешней среды. Тимус при этом является уникальным органом. Он является одновременно центральным органом иммунной системы и эндокринной железой, вырабатывающей пептидные гормоны, под влиянием которых тимоциты завершают свое развитие в периферических орга-
нах иммунитета. Также он одним из первых реагирует на попадание в организм антигенов [1, 2].
Изучение морфологии поджелудочной железы, как одной из самой крупной полифункциональной железы аппарата пищеварения, важно из-за её участия в пищевой адаптации организма и регулировании желудочно-кишечного гомеостаза, гормонального регулирования метаболизма [5, 6].
Цель работы - выяснить степень влияния возбудителей гемонхоза на морфологический состав крови коз, структуру ряда эндокринных желез.
Материал и методика исследований. Для выявления патологического воздействия гемонхов на организм коз был проведен опыт по заражению 5 козлят в возрасте 3-х месяцев инвазионными личинками Haemonchus contortus (Rudolphi, 1802) в дозе 500±36,2 экземпляров на козленка. Изучение влияния паразитов на гематологический статус инвазированных гемонхами животных проводили путем изучения морфологических показателей крови. В данном опыте было сформировано две группы козлят четырехмесячного возраста, по 5 голов в каждой. Первая группа животных была интактной, вторая группа сформирована из козлят, экспериментально инвазированных гемонхами. Содержали козлят в условиях, исключающих естественное заражение, что подтверждалось трехкратными отрицательными результатами ко-проскопических исследований и отсутствием яиц в фекалиях у контрольных животных в течение эксперимента. За козлятами было установлено наблюдение.
До заражения и на 1, 3, 7, 14, 30 дни после заражения у козлят брали кровь и исследовали по следующим показателям: количество эритроцитов, лейкоцитов, уровень гемоглобина, гематокрита.
Взятие крови осуществляли с соблюдением правил асептики и антисептики из яремной вены в две пробирки: в первой для стабилизации крови использовали 10 %-й раствор трилона Б из расчета 2 капли на 5 см3 крови, вторая служила для получения сыворотки крови. Сыворотку крови получали после ее свертывания при температуре +18 -+20 °С, с последующим охлаждением до температуры +4 °С и центрифугированием в течение 10 минут при 3000 об/мин.
Общий гематологический анализ крови проводили с помощью автоматического гематологического анализатора «Abacus Junior Vet». Биохимическое исследование сыворотки крови проводили на автоматическом биохимическом анализаторе «EUROLyser» с использованием наборов реактивов фирмы Cormey.
Для выведения лейкограммы готовили мазки крови на тонких обезжиренных стеклах, высушивали их на воздухе, фиксировали 5 минут в 70 %-м растворе этанола, окрашивали азур-эозином по методу Романовского-Гимзе.
Проводили убой 3-х козлят на 30-й день из каждой группы и отбирали кусочки органов эндокринной системы (тимуса, щитовидной железы, поджелудочной железы), фиксировали их в 10 %-м нормальном формалине. Морфометрию гистосрезов и их приготовление осуществляли в лаборатории кафедры патологической анатомии и гистологии УО «Витебская государственная академия ветеринарной медицины».
Абсолютную массу желез измеряли на электронных весах Scout Pro модели SP402, с точностью до 0,01 г.
Гистологические срезы толщиной 10-15 мкм изготавливали на замораживающем «Криостат» микротоме фирмы Microm модели «HM 525». Полученные препараты для обзорного изучения окрашивали гематоксилин-эозином.
Абсолютные измерения и фотографирование структурных компонентов щитовидной железы, тимуса и поджелудочной железы осуществляли при помощи светового микроскопа «Olympus» модели «BX-41» с цифровой фотокамерой системы «Altra 20» с использованием программы «Cell A».
Результаты исследований и их обсуждение. В результате наших исследований было выявлено, что присутствие гемонхов в сычуге коз отрицательно сказывается на морфологических показателях крови, о чем свидетельствует повышение содержания лейкоцитов на 20,7 % к 30-му дню после инвазирования (до 13,98±0,12*109/л, Р<0,05) в инва-зированной группе, что выше, чем у интактных животных на 18,7 % (11,78±0,07*109/л), а также снижение содержания эритроцитов на 16,3 % к последнему (30-му) дню по сравнению с изначальным уровнем (до 12,16±0,1*1012/л при Р<0,05), что было на 12,96 % ниже, чем у здоровых животных (13,97±0,09*1012/л при Р<0,05). Концентрация гемоглобина в крови зараженных животных была ниже на 7,8 % в 30-й день опыта, по сравнению с 1-м днем в этой группе. При этом она уступала таковой в крови интактных животных на 7,24 % на 30-й день (100,50±0,41 г/л при Р<0,05 и 108,34±0,917 г/л, соответственно). Гема-токрит у здоровых животных оставался выше, чем у зараженных гемо-нхами, и на 30-й день разница составила 9,77 % (25,99±0,18 % и 23,45±0,08 %, при Р<0,05, соответственно). Учитывая снижение содержания эритроцитов и гемоглобина в крови до нижних границ нормы, приведенные данные свидетельствуют о лучшем функциональном состоянии организма здоровых животных и возникшей нагрузке на иммунную систему у инвазированных животных.
В лейкограмме инвазированных коз наблюдалась нейтрофилия со смещением влево - количество палочкоядерных нейтрофилов в инва-зированной группе к концу опыта увеличилось в 2,9 раза (до 7,03±0,05 % при Р<0,05) по сравнению с началом опыта и превышало данный показатель в интактной группе в 2,6 раза.
На 30-й день появились юные нейтрофилы (1,02±0,42 %), повысилось содержание эозинофилов в 3,1 раза за период опыта (до 14,50±0,13 % при Р<0,05), что выше, чем у интактных животных в конце опыта в 2,1 раза (4,65±0,37 %). Также в крови у больных коз отмечено достоверно меньшее (на 31,1 %) содержание моноцитов на 30-й день опыта, по сравнению с интактными (2,53±0,02 % при и 3,67±0,03 % (Р<0,05) соответственно).
Согласно нашим исследованиям, у здоровых и больных гемонхозом козлят абсолютная масса щитовидной железы составляет 0,75±0,014 г и 0,75± 0,007 г соответственно. Её гистологическая картина у больных козлят показывает, что паренхиматозные элементы железы находятся в деструктивном состоянии. Фолликулы имеют крупные размеры, диаметр которых составляет 86,6±37,72 мкм (Р<0,05), что в 1,5 раза больше по сравнению с фолликулами в железах здоровых козлят (таблица ). Тиреоциты (эпителиальные клетки фолликулов) плоской формы -у козлят, больных гемонхозом, кубической формы - у здоровых животных. Их высота составляет 3,6±1,34 мкм (Р<0,01) и 6,4±1,77 мкм, соответственно. Ядра тиреоцитов овальной формы, расположены в центре или параллельно стенкам фолликулов. В железе здоровых козлят часть ядер содержат эухроматин и по 2 ядрышка, что указывает на активное участие тиреоцитов в процессах белкового синтеза, однако у больных козлят таких ядер не обнаружено. У последних выявляется большое количество межфолликулярных островков, которые состоят из клеток, находящихся на разных стадиях дифференцировки. Данное явление является следствием восполнения дефицита разрушенных фолликулов данного органа.
Бледно окрашенный коллоид в большинстве фолликулов, их малый диаметр и присутствие в них вакуолей, а также тиреоцитов кубической формы свидетельствует о высокой функциональной активности щитовидной железы у здоровых козлят.
У зараженных животных мы выявили разрушенные фолликулы крупных размеров, плоскую форму у тиреоцитов. Указанное свидетельствует о развитии гипофункционального состояния щитовидной железы у козлят при гемонхозе.
Тимус представлен парной шейной и непарной грудной долями, с хорошо выраженной дольчатостью. Однако у козлят, больных гемо-нхозом, часть шейной доли значительно замещена жировой тканью, что свидетельствует о начале инволютивных процессов, при этом абсолютная масса вилочковой железы составляет 2,0±0,02 г (Р<0,05), что в 1,45 раз меньше по сравнению со здоровыми козлятами (таблица 1).
В результате гистологического исследования тимуса у зараженных козлят установлено, что в его дольках мозговое вещество превалирует над корковым. При этом толщина медуллы у больных козлят в 1,8 раза
больше по сравнению со здоровыми животными. Диаметр телец Гас-саля у здоровых козлят составил 36,7±7,98 мкм, а у
Морфофункциональные показатели желез эндокринной, иммунной и пищеварительной систем у здоровых и больных гемонхозом козлят
Показатели Интактные козлята Инвазированные козлята
Щитовидная железа
Абсолютная масса, г 0,75±0,014 0,75±0,007
Диаметр фолликулов, мкм 58,6±19,91 86,6±37,72 *
Высота тиреоцитов, мкм 6,4±1,77 3,6±1,34 **
Толщина интерфолликулярных островков, мкм 114,9±61,42 221,8±59,64 **
Тимус
Абсолютная масса, г 3,2±0,01 2,0±0,02 *
Толщина коркового вещества, мкм 151,4±12,86 161,1±29,49
Толщина мозгового вещества, мкм 202,0±55,61 360,0±94,30 ***
Диаметр телец Гассаля, мкм 36,7±7,98 17,5±4,55 ***
Поджелудочная железа
Абсолютная масса, г 4,4±0,05 3,8±0,01
Диаметр долек, мкм 233,9±36,31 180,1±12,91 *
Диаметр ацинусов, мкм 21,7±7,87 24,2±13,85
Количество ацинусов в поле зрения, шт. 372,6±35,68 289,0±11,58 *
Диаметр клеток, мкм 10,0±2,51 8,3±0,91
* - Р<0,05; ** - Р<0,01; *** - Р<0,001. инвазированных - 17,5±4,55 мкм (Р<0,001).
Представленные данные свидетельствуют о том, что инвазирование гемонхами приводит к торможению процессов возрастной дифференциации паренхимы тимуса и угнетению пролиферативной активности лимфоцитов.
У больных гемонхозом козлят абсолютная масса поджелудочной железы составляет 3,8±0,01 г, что в 1,2 раза меньше, чем у интактных животных (таблица). Её гистологический анализ у больных козлят показывает, что паренхиматозные элементы железы находятся в деструктивном состоянии, которое проявляется нарушением структуры аци-нусов и уменьшением размеров долек железы в 1,3 раза по сравнению со здоровыми козлятами. Количество ацинусов поджелудочной железы в поле зрения микроскопа у здоровых животных составило 372,6±35,68 штук, а у больных козлят - 289,0±11,58 штук (Р<0,05), т. е. в 1,3 раза меньше. Все это свидетельствует о том, что при инвазирова-нии коз гемонхами происходит снижение участия указанной железы в пищевой адаптации организма, а также функциональной активности ее экзокринного аппарата.
Заключение. Результаты исследований позволяют утверждать, что инвазирование гемонхами приводит к нарушениям в организме коз и структурно-функциональным перестройкам важнейших желез внутренней секреции, что, в сравнении с интактными животными, проявляется: пониженным уровнем содержания эритроцитов на 12,96 %
(12,16±0,07х1012/л, Р<0,05) и гемоглобина на 7,24 % (100,50±0,42 г/л, Р<0,05); появлением в лейкограмме зараженных животных юных форм нейтрофилов (1,02±0,42 %, Р>0,05), палочкоядерной нейтрофилии (7,03±0,06 %, Р<0,001); снижением функциональной активности щитовидной железы в результате сильных деструктивных изменений композиции органа; снижением абсолютной массы тимуса в 1,45 раза (до 2,0±0,02 г, Р<0,05), дисбалансом между его корковым и мозговым веществом, что в результате приводит к ранней инволюции органа и снижению иммунного статуса организма козлят; деструктивными изменениями в паренхиме поджелудочной железы, что сказывается на снижении экзокринной секреции, а также замедлении роста и развития её структурных компонентов.
ЛИТЕРАТУРА
1. Кузник, Б. И. Иммуногенез, гемостаз и неспецифическая резистентность организма / Б. И. Кузник, Н. В. Васильев, Н. Н. Цибиков. - М. : Медицина, 1989 г. - С. 188-190.
2. Минич, А. В. Влияние эзофагостомозной инвазии на морфологические и биохимические показатели крови крупного рогатого скота / А. В. Минич, А. А. Антипов, Т. И. Бахур // Науковий вюник ветеринарно! медицини. - Бша Церква, 2017. - Вип. 1 (133). - С. 105-111.
3. Паразитозы желудочно-кишечного тракта овец и коз и меры борьбы с ними : рекомендации / А. И. Ятусевич [и др.]. - Витебск, 2017. - 20 с.
4. Паразитологическое обследование объектов внешней среды и отбор диагностического материала: методические рекомендации / А. И. Ятусевич [и др.]. - Витебск: ВГАВМ, 2016. - 36 с.
5. Рекомендации по применению новых лекарственных средств растительного и химического происхождения при гельминтозах и протозоозах мелких жвачных : рекомендации / А. И. Ятусевич [и др.]. - Витебск, 2017. - 28 с.
6. Уша, Б. В. Клиническая диагностика внутренних незаразных болезней животных / Б. В. Уша, И. М. Беляков, Р. П. Пушкарев. - М. : Колос, 2004. - С. 378-389.
7. Шиндила, Е. М. Эффективность применения гипохлорита натрия при лечении телят, больных диспепсией / Е. М. Шиндила, А. И. Жуков // Актуальные проблемы интенсивного развития животноводства : матер. XVII Междунар. студ. науч. конф., посвящ. 80-летию кафедры зоогигиены, экологии и микробиологии УО БГСХА, Горки, 29-30 мая 2014 г. - Горки: БГСХА, 2014. - С. 378-380.
8. Ятусевич, А. И. Формирование паразитарных систем у мелкого рогатого скота в условиях Республики Беларусь / А. И. Ятусевич [и др.]. // Ученые записки. - Витебск: УО ВГАВМ, 2016. - Т. 52, вып. 3. - С. 115-118.
