CC BY
56
УДК 616.613-003.7+616-092.9
МОРФОЛОГИЧЕСКАЯ ОЦЕНКА ОРГАНОВ МОЧЕВЫДЕЛИТЕЛЬНОЙ СИСТЕМЫ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫХ ЖИВОТНЫХ ПРИ ПРИМЕНЕНИИ ПОЛИКОМПОНЕНТНЫХ ЛИТОЛИТИЧЕСКИХ РАСТВОРОВ НА ОСНОВЕ ТРИЛОНА Б
А. А. Шевырин*, кандидат медицинских наук, А. И. Стрельников, доктор медицинских наук,
A. Л. Палкин, кандидат медицинских наук,
B. И. Демидов, кандидат медицинских наук
ГБОУ ВПО «Ивановская государственная медицинская академия» Минздрава России, 153012, Россия, г. Иваново, Шереметевский просп., д. 8
РЕЗЮМЕ Изучено действие литолитических растворов на структуру органов мочевыделительной системы экспериментальных животных при их местном использовании. Эксперимент проводился на 18 кроликах, которым в мочевые пути вводились различные по химическому составу литолитические растворы. После завершения эксперимента по стандартным методикам осуществлялся забор секционного материала. С помощью световой микроскопии производилось гистологическое исследование органов мочевыделитель-ной системы, данные которого были обработаны статистически. Результаты показали отсутствие грубых патоморфологических изменений со стороны мочевыводящих путей лабораторных животных при введении литолитических растворов на основе трилона Б.
Ключевые слова: мочекаменная болезнь, химический литолиз, трилон Б, структурные изменения мочевыделительной системы.
* Ответственный за переписку (corresponding author): e-mail: moon-insomnia@mail.ru
Мочекаменная болезнь является одним из распространенных урологических заболеваний и встречается у 3-5% населения [3, 5-8, 13], поэтому проблема диагностики и патогенетического лечения больных уролитиазом остается одной из актуальных [1, 2, 4, 11]. Перспективным направлением в лечении мочекаменной болезни становится литолиз конкрементов. В научной литературе встречаются единичные сведения об использовании комплексонов с целью лизиса почечных камней [10, 12, 14].
Несмотря на некоторые попытки использования комплексонов с целью литолиза, они пока не получили широкого применения в лечении уро-литиаза - прежде всего, из-за недостаточно из-
ученного воздействия веществ этой группы на организм.
В предыдущих работах нами была доказана ли-толитическая эффективность раствора трилона Б при его использовании in vitro при различных вариантах состава мочевых камней. В то же время в литературе отсутствуют данные о воздействии данных растворов на мочевую систему [9].
В связи с этим целью данного исследования явилась оценка структурных изменений органов мочевыделительной системы экспериментальных животных при местном использовании литолити-ческих растворов на основе трилона Б.
MORPHOLOGICAL EVALUATION OF UROPOIETIC SYSTEM ORGANS IN EXPERIMENTAL ANIMALS IN USAGE OF B-TRILON BASED POLYCOMPONENT LITHOLYTIC SOLUTIONS
Shevyrin A. A., Strelnikov A. I., Palkin A. L., Demidov V. I.
ABSTRACT Litholytic solutions effect on the structure of uropoietic system organs in experimental animals in their local application was studied. The experiment was carried out upon 18 rabbits; litholytic solutions of various chemical composition were introduced into their urinary tracts. The selection of sectional samples was done after the experiment by standard techniques. Histological investigation of uropoietic system organs was made by light microscopy; the data obtained were processed statistically. The results demonstrated the lack of coarse pathomorphological changes of uropoietic tracts in laboratory animals in B-trilon based litholytic solutions.
Key words: urolithiasis, chemical litholysis, B-trilon, structural changes of uropoietic system.
В рамках этой цели были поставлены следующие задачи:
1. Изучить местное действие литолитических растворов на основе трилона Б.
2. Провести сравнительный анализ морфологических изменений при воздействии различных литолитических растворов на основе трилона Б.
МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ
Работа выполнялась на базе кафедры факультетской хирургии и урологии и экспериментальной клиники с виварием НИЦ ГБОУ ВПО ИвГМА Минздрава России.
Эксперимент проводился на половозрелых нелинейных кроликах обоих полов в возрасте от 1,2 до 1,6 года массой 3,0-3,5 кг (18 штук). Растворы в мочевые пути вводились двумя способами: ретроградно путем катетеризации мочевого пузыря и антеградно путем установки пиелостомы с последующей фиксацией ее к коже с помощью люмботомии. Введение выполнялось медленно капельно с целью исключения травматического воздействия раствора, подаваемого под давлением. Раствор подогревался до температуры 37,0 ± 0,1°С, длительность эксперимента составляла 30 минут.
Экспериментальные животные были разделены на три группы (по шесть особей в каждой): контрольная (введение физиологического раствора), I опытная (введение 1%-ного литолитического раствора трилона Б) и II опытная (введение литолитического раствора, состоящего из 1%-ного трилона Б, 2,5%-ного цитрата калия и 0,25%-ного ампициллина). По остальным параметрам (температура и объем, скорость и продолжительность его поступления в мочевые пути) использованные растворы и методика их введения совпадали во всех группах.
Для оценки местных изменений в динамике каждая из вышеназванных групп делилась на две подгруппы (по 3 кролика в каждой), отличающиеся сроками забора материала: на 3-и и 6-е сутки после введения раствора. Методом эвтаназии лабораторных животных являлась воздушная эмболия центральной вены наружной поверхности ушной раковины.
После выведения животных из эксперимента производился забор внутренних органов по стандартизированной схеме: фрагменты чашечно-ло-ханочной системы обеих почек, симметричные участки мочеточников, стенка мочевого пузыря (общее количество изученных фрагментов в каждом наблюдении - 10). Фиксацию, окраску и изготовление гистологических препаратов осу-
ществляли по стандартным методикам. Срезы изучались посредством световой микроскопии при помощи микроскопа «Микмед-2 ЛОМО».
Статистический анализ полученных данных проводился с использованием пакетов прикладных программ «Excel» (версия 7.0), «Statistica for Windows» (версия 5.3) с учетом вычислительных методов, рекомендованных для биологии и медицины.
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
Во всех наблюдениях при макроскопическом исследовании мочевого пузыря, мочеточника и почки патологических изменений не выявлено.
Сравнительная характеристика морфологических изменений органов мочевыделительной системы при введении разных по составу литолитических ратворов представлена в таблице.
В контрольной группе лишь в пяти случаях на 3-и сутки эксперимента имели место структурные изменения, характеризующиеся лейкоцитарной инфильтрацией и умеренной гиперемией мочевого пузыря, и в двух случаях - аналогичные изменения мочеточников, что статистически значимо реже по сравнению с I опытной группой (трилон Б) (р < 0,05). В остальных случаях при изучении гистологических препаратов не установлено каких-либо отклонений в структуре исследуемых объектов (рис. 1).
В I опытной группе (трилон Б) в четырех наблюдениях на границе коркового и мозгового вещества почек и по ходу соединительнотканных прослоек стромы в направлении к почечным лоханкам, а также под базальной мембраной переходного эпителия мочевого пузыря наблюдалась незначительная очаговая воспалительная инфильтрация с преобладанием нейтрофилов (рис. 2). Данные изменения возникали на 3-и сутки эксперимента и встречались статистически значимо чаще (р < 0,05), чем у животных других групп. На 6-е сутки явления воспалительного характера исчезли, сохранялось только незначительное полнокровие, частота обнаружения которого статистически значимо превышала таковую в контрольной группе. При этом в шести случаях на 3-и сутки аналогичная инфильтрация выявлялась в субэпителиальных отделах мочевого пузыря, под базальной мембраной переходного эпителия. На 6-е сутки эксперимента в мочеточниках и мочевом пузыре воспалительная инфильтрация не наблюдалась (рис. 3, 4).
Во всех исследованных объектах корковое вещество почек можно рассматривать как неизмененное. Эпителий канальцев мозгового вещества (ближе к почечным лоханкам), переходный эпите-
Таблица. Сравнительная оценка структурных изменений органов мочевыделительной системы в зависимости от характера вводимого раствора
Исследуемый орган и путь введения раствора Структурные изменения Число наблюдений, абс. (%)
Контрольная группа (физиологический раствор) I опытная группа (трилон Б) II опытная группа (трилон Б, цитрат К, ампициллин)
3-и сутки 6-е сутки 3-и сутки 6-е сутки 3-и сутки 6-е сутки
Мочевой пузырь (ретроградно) Лейкоцитарная инфильтрация 4 (13,3%) 0 (0%) 4 (13,3%) 0 (0%) 4 (13,3%) 0 (0%)
Отек, венозное полнокровие 1 (3,3%) 0 (0% 2 (6,8%) 0 (0%) 1 (3,4%) 0 (0%)
Норма 1 (3,3%) 6 (20%) 0 (0%) 6 (20%) 1 (3,3%) 6 (20%)
Мочеточник (антеградно) Лейкоцитарная инфильтрация 2 (6,8%) 0 (0%) 0 (0%) 0 (0%) 0 (0%) 0 (0%)
Отек, венозное полнокровие 0 (0%) 0 (0%) 4 (13,3%)*Л 0 (0%) 0 (0%) 0 (0%)
Норма 10 (33,3%) 12 (40%) 8 (26,7%) 12 (40%) 12 (40%) 12 (40%)
Почка (антеградно) Лейкоцитарная инфильтрация 0 (0%) 0 (0%) 4 (13,3%)*Л 0 (0%) 0 (0%) 0 (0%)
Отек, венозное полнокровие 0 (0%) 0 (0%) 4 (13,3%)*Л 4 (13,3%)*Л 0 (0%) 0 (0%)
Норма 12 (40%)° 12 (40%) 4 (13,3%) 8 (26,7%) 12 (40%)° 12 (40%)
Всего 30 (100%) 30 (100%) 30 (100%) 30 (100%) 30 (100%) 30 (100%)
Примечание. Статистическая значимость различий: * - в сравнении с контрольной группой (р < 0,05); Л - в сравнении со II группой (р < 0,05); ° - в сравнении с I группой (р < 0,05).
лий почечных лоханок, мочеточников и мочевого пузыря имел признаки очаговой вакуольной дистрофии с десквамацией отдельных эпителиоци-тов. Слизистая и мышечная оболочки мочевого пузыря во всех случаях имели признаки умеренно выраженного отека. Описанные изменения наблюдались как в опытных, так и в контрольных группах.
Во II опытной группе (раствор трилона Б, цитрата калия и ампициллина) установлена незначительная вакуольная дистрофия с десквамацией единичных клеток переходного эпителия моче-выводящих путей, умеренно выраженный отек соединительной ткани слизистой и подслизистой оболочек мочевого пузыря (рис. 5). В четырех случаях на 3-и сутки эксперимента обнаружива-
Рис. 1. Почка при введении физиологического раствора. Корковое вещество почки. Неизмененные почечные клубочки, проксимальные и дистальные извитые канальцы. Окраска гематоксилином и эозином. Увеличение х 100.
Рис. 2. Почка при введении раствора трилона Б. Очаговая воспалительная инфильтрация стромы в мозговом веществе почки. Окраска гематоксилином и эозином. Увеличение х 200.
Рис. 3. Мочеточник (поперечный срез) при введении раствора трилона Б. Стенка мочеточника без патологических изменений. Окраска гематоксилином и эозином. Увеличение * 100.
Рис. 5. Мочеточник при введении раствора трилона Б, цитрата калия и ампициллина. Слизистая и подсли-зистая оболочки мочеточника. Переходный эпителий с участками вакуолизации. Умеренный отек подсли-зистой оболочки. Окраска гематоксилином и эозином. Увеличение * 200.
лось слабо выраженное реактивное воспаление, проявляющееся очаговой лейкоцитарной инфильтрацией слизистой оболочки мочевого пузыря. В составе воспалительного инфильтрата преобладали полиморфноядерные лейкоциты. Очаги инфильтрации локализовались на границе коркового и мозгового вещества почки по ходу стромального компонента. На 6-е сутки эксперимента структурные изменения со стороны органов мочевой системы выявлены не были.
Рис. 4. Мочевой пузырь при введении раствора трилона Б. Мочевой пузырь без морфологических изменений. Окраска гематоксилином и эозином. Увеличение х 200.
Полученные результаты говорят об отсутствии грубых патоморфологических изменений моче-выводящих путей лабораторных животных при введении литолитических растворов на основе трилона Б. Выявленные структурные изменения слизистой оболочки органов мочевыделительной системы не являются специфическими.
Однако сравнительный анализ различных литолитических растворов свидетельствует о неоднозначной местной ответной реакции органов мо-чевыделительной системы животных. Наиболее благоприятным действием в связи с отсутствием местных структурных изменений является раствор, включающий цитрат калия, трилон Б и ампициллин.
ВЫВОДЫ
1. Оценка структурных изменений органов мо-чевыделительной системы лабораторных животных в эксперименте выявила отсутствие существенных местных морфологических изменений в ответ на введение литолитических растворов на основе трилона Б.
2. Сравнительный анализ действия различных литолитических растворов показал, что наиболее безопасным является раствор, состоящий из цитрата калия, трилона Б и ампициллина ввиду отсутствия морфологических изменений мочевыделительной системы при его введении.
ЛИТЕРАТУРА
1. Борисов, В. В. Консервативная литокинетическая терапия камней почек и мочеточников / В. В. Борисов, Н. К. Дзеранов. - М., 2006. - 56 с.
2. Дзеранов, Н. К. Дистанционная ударно-волновая литотрипсия мочекаменной болезни : автореф. дис. ... д-ра мед. наук / Н. К. Дзеранов. - М., 1994. - 36 с.
3. Дзеранов, Н. К. Комплексная литолитическая терапия уратного нефролитиаза / Н. К. Дзеранов, Д.
A. Бешлиев, Р. И. Багиров // Урология. - 2006. -№ 6. - С. 38-44.
4. Колпаков, И. С. Мочекаменная болезнь : учеб. пособие / И. С. Колпаков. - М. : Академия, 2006. - 224 с.
5. Лопаткин, Н. А. Дистанционная ударно-волновая ли-тотрипсия спустя 10 лет / Н. А. Лопаткин, Н. К. Дзеранов // Материалы Пленума правления Российского общества урологов. - М., 1996. - С. 313-323.
6. Руководство по урологии / под ред. Н. А. Лопаткина. - М. : Медицина, 1998. - Т. 2. - 768 с.
7. Тиктинский, О. Л. Мочекаменная болезнь / О. Л. Тик-тинский, В. П. Александров. - СПб., 2000. - 384 с.
8. Трапезникова, М. Ф. Современные аспекты нефро-литотрипсии // Материалы Пленума правления Российского общества урологов / М. Ф. Трапезникова,
B. В. Дутов. - Саратов, 1998. - С. 259-273.
9. Шевырин, А. А. Литолиз конкрементов мочевыдели-тельной системы раствором комплексона трилон Б (медицинские, химические и биологические аспекты) : автореф. дис. ... канд. мед. наук / А. А. Шевырин. - М., 2008. - 24 с.
10. Яненко, Э. К. Современный взгляд на лечение больных мочекаменной болезнью / Э. К. Яненко, О. В. Константинова // Урология. - 2009. - № 5. -С. 61-66.
11. Arrabal, M. M. Study of physical-chemical factors in patients with renal lithiasis / M. M. Arrabal, A. Fernandez Rodriguez, M. A. Arrabal Polo // Arch. Esp. Urol. -2006. - Vol. 59, № 6. - Р. 583-594.
12. Lemann, J. J. Hypercalciuria and stones / J. J. Lemann, E. M. Worcester, R. W. Grav // Am. J. Kidney Dis. -1991. - № 4. - Р. 386-391.
13. Simon, C. Antibiotica - therapie in klinik und praxis? / C. Simon. - Stuttgart ; New York : Schattauer, 1989. -XVI. - 699 р.
14. Urinary Oxalate level and the Enteric Bacterium Oxalobacter formingenes in Patients with Calcium Oxalate Urolithiasis / С. Kwak [et al.] // Europ. Urol. -2003. - № 44. - Р. 475-481.
