CC BY
21
УДК 615.32: 616.36-003.93 DOI: https://doi.org/10.34680/2076-8052.2021.3(124).82-89
МОРФОЛОГИЧЕСКАЯ И БИОХИМИЧЕСКАЯ ОЦЕНКА ПРОТИВОФИБРОЗНОЙ АКТИВНОСТИ ЭКСТРАКТОВ ПЛОДОВ СЕМЕЙСТВА ВЕРЕСКОВЫЕ, ПРОИЗРАСТАЮЩИХ НА ТЕРРИТОРИИ ЮГРЫ
Е.А.Кривых, Н.С.Кавушевская*, А.Е.Гуляев**, Л.В.Коваленко*
MORPHOLOGICAL AND BIOCHEMICAL EVALUATION OF THE ANTIFIBROTIC ACTIVITY OF THE HEATHER FAMILY BERRIES EXTRACTS GROWING IN YUGRA REGION
E.A.Krivykh, N.S.Kavushevskaya*, A.E.Guliaev**, L.V.Kovalenko*
Ханты-Мансийская государственная медицинская академия, [email protected] *Сургутский государственный университет, natalya.kavushevskaya@mail. ru **National Laboratory Astana, г. Нур-Султан, Республика Казахстан
Работа посвящена определению гепатопротекторных свойств полифенольных экстрактов плодов клюквы обыкновенной (Vaccinium oxycoccus L.), черники обыкновенной (Vaccinium myrtillus L.), брусники обыкновенной (Vaccinium vitis-idaea L.) и голубики обыкновенной (Vaccinium uliginosum L.). Исследование проведено на 70 крысах-самцах линии Wistar 7-8 месяцев, массой тела 210-230 г. Фиброз печени был моделирован путем токсического поражения раствором четыреххлористого углерода (CCI4) — 0,2 мл/100 г массы тела в рафинированном оливковом масле (1:1). Доказано, что полифенольные экстракты плодов черники обыкновенной (Vaccinium myrtillus L.) (наиболее выражено), голубики обыкновенной (Vaccinium uliginosum L.), клюквы обыкновенной (Vaccinium oxycoccus L.) и брусники обыкновенной (Vaccinium vitis-idaea L.) (в наименьшей степени) могут уменьшать выраженность повреждений печени, вызываемых CCl4. Полученные сведения позволяют предполагать возможность применения исследуемых экстрактов в качестве корректоров процесса фиброза.
Ключевые слова: фиброз печени, полифенолы, плоды клюквы обыкновенной (Vaccinium oxycoccus L.), плоды черники обыкновенной (Vaccinium myrtillus L.), плоды брусники обыкновенной (Vaccinium vitis-idaea L.), плоды голубики обыкновенной (Vaccinium uliginosum L.)
Для цитирования: Кривых Е.А., Кавушевская Н.С., Гуляев А.Е., Коваленко Л.В. Морфологическая и биохимическая оценка противофиброзной активности экстрактов плодов семейства вересковые, произрастающих на территории Югры // Вестник НовГУ. Сер.: Медицинские науки. 2021. №3(124). С.82-89. DOI: https://doi.org/10.34680/2076-8052.2021.3(124).82-89
The focus of the paper is to determine hepatoprotective properties of polyphenolic extracts of the fruits of cranberry (Vaccinium oxycoccus L.), blueberry (Vaccinium myrtillus L.), cranberry (Vaccinium vitis-idaea L.) and blueberry (Vaccinium uliginosum L.). The study was conducted on 70 male Wistar rats aged 7-8 months, weighing 210-230 g. Liver fibrosis was modeled by toxic damage with a solution of carbon tetrachloride (CCl4) - 0.2 ml/100g of body weight in refined olive oil (1:1). It has been proven that polyphenolic extracts of blueberry (Vaccinium myrtillus L.) (most pronounced), blueberry (Vaccinium uliginosum L.), cranberry (Vaccinium oxycoccus L.) and cranberry (Vaccinium vitis-idaea L.) (least pronounced) can reduce the severity of liver damage caused by CCl4. The obtained data suggest that the studied extracts can be used as correcting agents for fibrosis.
Keywords: liver fibrosis, polyphenols, fructus Vaccinium oxycoccus, fructus Vaccinium myrtillus L., fructus Vaccinium vitis-idaea L., fructus Vaccinium uliginosum L.
For citation: Krivykh E.A., Kavushevskaya N.S., Guliaev A.E., Kovalenko L.V. Morphological and biochemical evaluation of the antifibrotic activity of the heather family berries extracts growing in Yugra region // Vestnik NovSU. Issue: Medical Sciences. 2021. №3(124). P.82-89. DOI: https://doi.org/10.34680/2076-8052.2021.3(124).82-89
«Фиброз печени» — тип реактивного процесса, характеризующийся чрезмерным накоплением волокнистой соединительной ткани в печени [1]. Множество разнотипных экзогенных повреждений печени могут иметь своим исходом данный патологический процесс [2].
Многочисленные исследования in vitro и in vivo показали, что окислительный стресс опосредует начало и прогрессирование фиброза печени [3.4]. Избыточ-
ное накопление свободных радикалов разрушает макромолекулы мембран, вызывая ускорение апоптоза или некроз гепатоцитов, стимулирует выработку про-фиброгенных медиаторов и непосредственно активирует звездчатые клетки печени, что приводит к инициированию процессов фиброзирования. Поэтому коррекция окислительного стресса может являться потенциальной терапевтической стратегией предупреждения развития или торможения фиброза печени [5].
Считается, что фармакотерапевтические возможности при завершенном фиброзе — циррозе — сводятся только к симптоматической коррекции [6]. Но согласно литературным данным, ранние стадии процесса могут иметь обратимый характер при своевременном воздействии на ведущие звенья патогенеза [7]. На этом фоне природные антиокси-данты, полифенолы плодов клюквы обыкновенной (Vaccinium oxycoccus L.), черники обыкновенной (Vaccinium myrtillus L.), брусники обыкновенной (Vaccinium vitis-idaea L.) и голубики обыкновенной (Vaccinium uliginosum L.) привлекают все большее внимание как потенциальные корректоры фибрози-рования [8]. Но к настоящему времени в литературных источниках имеются данные экспериментальных исследований фармакологических свойств экстрактов плодов черники обыкновенной [9]. Относительно других плодов семейства Вересковые сведенья носят фрагментарный характер, а эффекты на моделях повреждения печени не описаны.
Цель работы: определение гепатопротектор-ных свойств полифенольных экстрактов плодов клюквы обыкновенной (Vaccinium oxycoccus L.), черники обыкновенной (Vaccinium myrtillus L.), брусники обыкновенной (Vaccinium vitis-idaea L.) и голубики обыкновенной (Vaccinium uliginosum L.) на модели токсического повреждения печени CCl4.
Материал и методы исследования
Плоды клюквы обыкновенной (Vaccinium oxycoccus L.), черники обыкновенной (Vaccinium myrtillus L.), брусники обыкновенной (Vaccinium vitis-idaea L.) и голубики обыкновенной (Vaccinium uliginosum L.) были собраны в летне-осенний период 2018 г. в Сургутском районе Ханты-Мансийского автономного округа — Югры.
Полученные экстракты плодов концентрировали в вакуумном испарителе до уровня полифенолов 10 мг/мл.
Для количественного определения полифенолов в полученных экстрактах использовали коммерческий набор «Polyphenols folin-ciocalteu (ENOLOGY line by BioSytems. Spain)», в перерасчете на галловую кислоту.
Референс-препаратом был выбран Силимарин ГЕКСАЛ® (Silymarin HEXAL®) (сухой экстракт рас-торопши пятнистой 172 мг в капсуле), вводили внутрь через желудочный зонд в дозе 200 мг/кг, предварительно суспендировали в крахмальной взвеси (вводимый объем — 0,2-0,3 мл).
Исследование проведено на 70 крысах-самцах линии Wistar 7-8 месяцев, массой тела 210230 г. Животные содержались в клетках при комнатной температуре (22±2)°С с 12-часовым циклом свет/темнота и минимальной относительной влажностью 40%. Кормили стандартным гранулированным кормом, доступ к воде был свободным, ad libitum [10].
Животные были разделены на семь групп по 10 особей. Распределение по группам представлено в табл.1.
Таблица 1
Экспериментальные группы животных
№ группы Объект исследования
I Интактные крысы
II Контрольная патология (животные без лечения)
III Животные с патологией, которым вводили экстракт клюквы обыкновенной
IV Животные с патологией, которым вводили экстракт брусники обыкновенной
V Животные с патологией, которым вводили экстракт черники обыкновенной
VI Животные с патологией, которым вводили экстракт голубики обыкновенной
VII Животные с патологией, которым лечение проводили референс-препаратом Силимарин ГЕКСАЛ®
К концу эксперимента 6 крыс погибли (4 — в группе II, по одной — в группах III и VI).
Фиброз печени был моделирован путем токсического поражения раствором четыреххлористого углерода (CCl4) — 0,2 мл/100 г массы тела в рафинированном оливковом масле (1:1).
Ежедневно в течение 14 дней вводили внутри-желудочно через зонд животным групп I-II по 0,2 мл физиологического раствора, групп III-VII — исследуемые экстракты (из расчета 10 мг/кг) и референс-препарат (вводимый объем 0,2-0,3 мл).
Через 3 часа после первого внутрижелудочно-го введения в группе I внутрибрюшинно была выполнена инъекция физиологического раствора, а в группах II-VII — инъекция раствора четыреххлори-стого углерода (CCl4, 0,2 мл/100г массы тела в рафинированном оливковом масле (1:1)) для моделирования токсического повреждения печени. Далее, два раза в неделю (понедельник — четверг) на протяжении 2 недель повторяли введение CCl4 в соответствии с протоколом, предложенным Constandinou et al. [11].
Животных выводили из эксперимента через сутки после последнего введения CCl4 под рауш-наркозом. Кровь собирали и центрифугировали при 2200 g 15 мин. Образцы плазмы хранили при -20°С для биохимического анализа AST, ALT, общего билирубина и триглицеридов. Исследования проводили на автоматическом биохимическом анализаторе XL100 (Erba Lachema, Чехия) в соответствии с инструкциями производителя.
Печень была выделена, промыта и взвешена. Также до извлечения печени была определена масса крысы. Индекс печени в соответствии с рекомендациями Yang et al [12] рассчитывали по формуле: (масса печени / масса крысы) х 100%.
Для гистологического исследования были взяты образцы ткани поперечного сечения цен-
тральной части правой доли печени крысы, которые фиксировали в 10% формалине при 4°С не менее 24 часов. Через двадцать четыре часа образцы ткани печени промывали водой и проводили в спиртах возрастающей концентрации (70, 90, 96 и 100%), затем погружали в ксилол и заливали в парафиновые блоки. Срезы тканей толщиной 5 мкм делали на санном микротоме «Leica SM 2000R». Срезы сначала депарафинировали в ксилоле, а затем гидратиро-вали в серии снижающихся концентраций спирта (100, 96 и 70%).
Для гистологической оценки степени тяжести фиброза печени окрашивали коллагеновые волокна по Ван Гизону, используя следующую процедуру: депарафинизированные и гидратированные срезы погружали в 70% этанол, содержащий 1% хлористого водорода, инкубировали в растворе резорцин-фуксин в течение 60 мин и промывали в 100% этаноле и в воде с последующим окрашиванием раствором Ван Гизона (насыщенная пикриновая кислота, содержащая 0,09% кислого фуксина) в течение 5 мин.
Гистопатологический и морфометрический анализы были выполнены на поперечном сечении печени, индивидуально, путем случайной выборки для каждого животного в каждой группе, используя 10 полей зрения. Полуколичественный подсчет был выполнен с применением системы, адаптированной из METAVIR, дифференцируя стадии (F-оценки) от F0 до F4. Крысы были разделены на пять групп: F0 — нет фиброза, F1 — легкий фиброз (портальный фиброз без септ), F2 — умеренный фиброз (мало септ), F3 — тяжелый фиброз (многочисленные септы без цирроза) и F4 — цирроз. У крыс контрольной группы фиброз не воспроизводили. F2, F3 и F4 были определены как значительный фиброз. Кроме того, дополнительно все срезы печени были оценены по шкале ISHAK. Гистологическое исследование материала по отношению к клиническим данным проводилось вслепую.
Гистоморфометрический анализ проводился на специализированном аппаратном компьютеризированном комплексе фирмы «Leica microsystems» на микроскопе «Leica DM 1000».
Обращение с животными соответствовало «Правилам надлежащей лабораторной практики», утвержденных приказом Министерства здравоохранения РФ №199н от 01.04.2016, и Межгосударственным стандартам ГОСТ 33215-2014, ГОСТ 33216-2014 «Руководство по содержанию и уходу за лабораторными животными», соответствующими Европейской конвенции о защите позвоночных животных, используемых в экспериментах и в других научных целях (ETS N 123, Страсбург, 18 марта 1986 г. c приложением от 15.06.2006 г). Исследования одобрены комиссией по этике медицинского института Сургутского государственного университета.
Результаты
Количественный состав полифенольных соединений в экстрактах плодов семейства Вересковые показан в табл.2.
Таблица 2
Уровень концентрации основных полифенольных соединений в экстрактах плодов семейства Вересковые
Исследуемые Содержание
экстракты плодов полифенолов mgGAE /ml
Клюквы обыкновенной 14,6 ± 0,9
Брусники обыкновенной 16,3 ± 1,7
Черники обыкновенной 29,1 ± 1,4
Голубики обыкновенной 25,5 ± 0,9
Примечание: результаты представлены какM±m при n = 3
Как видно, исследуемые экстракты плодов характеризуются относительно высоким уровнем полифенольных соединений, наибольшее содержание отмечается у черники обыкновенной и голубики обыкновенной.
Введение крысам экстрактов плодов семейства Вересковые на фоне субхронической СС14 интоксикации существенно отразилось на исследованных в условиях данного эксперимента лабораторных показателях, представленных в табл.3.
Таблица 3
Влияние экстрактов плодов семейства Вересковые на индекс печени у крыс при экспериментальном фиброзе
Группы Масса тела Масса печени Индекс печени
I (n = 10) 232,9 ± 8,42 9,7 ± 1,22 4,16 ± 0,51#
II (n = 6) 185,5 ± 6,15* 11,0 ± 0,92 5,93 ± 0,26*
III (n = 9) 198,6 ± 9,14 10,5 ± 0,73 5,29 ± 0,38*
IV (n = 10) 218,4 ± 7,11 11,6 ± 0,97 5,31 ± 0,63*
V (n = 10) 233,2 ± 9,08 10,3 ± 1,24 4,42 ± 0, 44#
VI (n = 9) 229,4 ± 5,12 12,1 ± 1,98 5, 27 ± 0,60*
VII (n = 10) 236,3 ± 5,48 10,9 ± 1,10 4,61 ± 0,45#
Примечание: * — р <0,05 при сравнении с интактными крысами; #— р <0,05 при сравнении с контролем (модель фиброза).
Как показано в табл.3, средняя масса тела у крыс группы II была ниже, чем у интактных животных группы I (р < 0,05), а индекс печени был выше, чем у крыс I группы, что можно считать типичным для модели фиброза печени. Индексы печени у крыс III, IV, VI группы достоверно не отличались по этому показателю от крыс в контрольной группе II. Но индексы печени в группе V и VII снижались по сравнению с контролем и незначительно отличались от ин-тактных крыс группы I.
Уровень концентрации цитолитических ферментов аспартатаминотрансферазы (ACT) и аланина-минотрансферазы (АЛТ), а также содержание триг-лицеридов (ТГ) и общего холестерина (ОХ) показан в табл.4.
Таблица 4
Биохимические показатели сыворотки крови крыс в сыворотке крови крыс
Группы АСТ (U/L) АЛТ (U/L) ТГ (mg/dL) ОХ (mg/dL)
I (n = 10) 12,4 ± 1,17 5,4 ± 0,87 5260,2 ± 94,20 114,7 ± 9,44
II (n = 6) 149,8 ± 12,60* 28,9 ± 2,17 * 14386,5 ± 104,37* 535,3 ± 22,18 *
III (n = 9) 97,4 ± 5,73* 17,3± 2,04 *# 10534,7 ±122,60 # 398,5 ± 29,46 #
IV (n = 10) 104,9 ± 11,62* 16,9 ± 1,65*# 11053,2 ± 144,62 # 480,4 ± 29,80#
V (n = 10) 58,3 ± 4,82 *# 11,2 ± 2,05 *# 8060, 0 ± 207, 16 # 240,8± 16,70#
VI (n = 9) 73,5 ± 4,88*# 16,8 ± 1,91*# 9110,8 ± 99,38# 278,5 ± 30,27#
VII (n = 10) 53,2 ± 6,73* # 10,6 ±1,76 *# 9763,4 ± 160,45 # 490,7 ±20,44
* — р < 0,05 при сравнении с нормой; # — р < 0,05 при сравнении с контролем (модель фиброза).
Таблица 5
Гистоморфометрическая оценка эффективности экстрактов плодов семейства Вересковые
при экспериментальном фиброзе
Группы F0 F1 F2 F3 F4 p—value1 p—value
I (n = 10) 100%(10/10) — — — — — 0,001
II* (n = 6) — 16,7% (1/6) 16,7% (1/6) 50,0% (3/6) 16,7% (1/6) 0,001 —
9) = (n * 55,5%(5/9) 33,3%(3/9) 11,1 %(1 /9) — — 0,113 0,003
IV* (n = 10) 20%(2/10) 30%(3/10) 20%(2/10) 30%(3/10) — 0,002 0,118
V# (n = 10) 50%(5/10) 40%(4/10) 10%(1/10) — — 0,063 0,003
VI# (n = 9) 56%(5/9) 33%(3/9) 11 %(1 /9) — — 0,113 0,003
VII# (n = 10) 60%(6/10) 20%(2/10) 10%(1/10) 10%(1/10) — 0,143 0,016
Примечание: * — р < 0,05 при сравнении с нормой; # — р < 0,05 при сравнении с контролем (модель фиброза).
В сыворотке крови крыс с контрольной патологией II группы отмечено повышенное содержание ACT и АЛТ, что свидетельствует о цитолитических процессах. Увеличение показателей ТГ и ОХ свидетельствует о нарушении липидного обмена. Оба феномена типичны для токсического повреждения печени, вызываемого четыреххлористым углеродом. Референс-препарат Силимарин ГЕКСАЛ® (группа VII) обеспечивает снижение ACT и АЛТ, ТГ, но не ОХ. Как видно из табл.4, все экстракты плодов (группы III-VI) в условиях данного эксперимента подобно референс-препарату препятствуют подъему АЛТ, а также увеличению концентрации ТГ и ОХ в крови крыс. Экстракты клюквы обыкновенной и брусники
обыкновенной (группы III и IV) не снижали достоверно уровень концентрации АСТ в сравнении с группой II в отличие от экстрактов черники обыкновенной и голубики обыкновенной (группы V и VI).
Результаты гистоморфометрического исследования влияния экстрактов исследуемых плодов на формирование фиброза печени при введении CCl4 описаны в табл.5.
Статистический анализ данных проводился с использованием непараметрических U-критериев Кру-скала—Уоллиса и Манна—Уитни, поскольку полученные данные не соответствовали нормальному распределению, а дисперсия не была однородной. Значения р <0,05 считались статистически значимыми.
100' 908070' 60' 5040' 30' 20100-
%
□ F0
□ F1
□ F2 |F3 ■ 14
Интактные Контроль Клюква Брусника Черника Голубика Силимарин крысы (модель (норма) фиброза)
Рис.1. Гистоморфометрическая оценка воздействия экстрактов плодов семейства Вересковые на фиброз печени крыс
? л
* д
\
' - к' ' у »Г *
* Сч.
150 urn
О
с d
Рис.2. Микрофотографии ткани печени крыс: а — интактная группа, гистологически нормальное строение, нативные волокна коллагена были обнаружены в портальных трактах и печеночных венах, фиброза нет (ГО); Ь, с — контрольная группа, разрастание коллагеновых волокон с образованием фиброзных септ, нарушающих структуру печеночной ткани (стрелка) и образующих ложные дольки (звездочка), в части гистологических срезов — без центральных вен, окруженных тонкопетлистой соединительнотканной сетью ^3),. d — экстракт клюквы обыкновенной, нативные волокна коллагена были обнаружены в портальных трактах и печеночных венах, фиброза нет ^0), окраска: Ван Гизон, ув. *100 (а-с); *200
a
Как видно из табл.5 и рис.1, гистологическое строение ткани печени крыс интактной группы в 100% случаев соответствовало норме (Р0). В группе II без гистологических признаков фиброза печени не выявлено, в одном случае (16,7%) обнаружен фиброз без образования септ (П), в остальных случаях определялось разрастание коллагеновых волокон в области портальной вены с образованием фиброзных септ, как единичных, так и множественных, объединяющихся между собой с образованием ложных долек, что характеризуется как значительный фиброз (стадии Г2-Р4) (рис.2Ь, 2с). Сходная гистологическая картина наблюдалась в группе IV, получавшей экстракт плодов брусники обыкновенной (р < 0,05). В группах III, получавших экстракты клюквы обыкновенной, V — черники обыкновенной, VI — голубики обыкновенной и VII — Силимарин ГЕКСАЛ®, в 80% случаев образование коллагена обнаружено в минимальном количестве, преимущественно в области портальной вены, с распространением в небольшом количестве в некоторые портальные тракты, в единичных случаях — с образованием коротких фиброзных септ, что соответствует стадиям Г0 и П по METAVIR и незначительно отличается от группы I (р > 0,05). Антифибро-тические эффекты концентратов полифенолов плодов клюквы обыкновенной, черники обыкновенной, голубики обыкновенной и Силимарина ГЕКСАЛ® показали отсутствие статистически значимых отличий между группами (р > 0,05).
На рис.2 представлена корреляционная взаимосвязь между биохимическими показателями сыворотки крови и стадией фиброза (METAVIR). В сыво-
ротке крови крыс I группы повышения биохимических маркеров не выявлено. В сыворотке крови крыс II группы обнаружено повышенное содержание АЛТ, АСТ, ТГ и ОХ, маркирующее цитолитическое повреждение печени и нарушения липидного обмена, сопровождающееся повышением степени фиброза.
С повышением уровня биохимических маркеров при гистологическом исследовании отмечалось увеличение разрастания коллагеновых волокон с образованием фиброзных септ, нарушающих структуру печеночной ткани и образующих ложные дольки (рис.2Ь, 2c). В группе II в 83,3% случаев обнаружены мосто-видные фиброзы, связывающие сосудистые структуры, что является отличительным признаком прогрессирующего фиброза (F2-F4). Портальный цирроз формируется вследствие вклинивания в дольки фиброзных септ из расширенных и склерозированных портальных и перипортальных полей, что ведет к соединению центральных вен с портальными сосудами и появлению мелких (монолобулярных) ложных долек разной величины и формы, в части гистологических срезов — без центральных вен, окруженных тонкопетлистой соединительнотканной сетью (рис.2с).
Подобная гистологическая картина выраженного фиброза ассоциировалась с более высокими показателями биохимических маркеров (рис.4). В группах III-VI отмечались более низкие значения биохимических маркеров, ассоциирующиеся с отсутствием гистологических признаков фиброза печени (рис.2^ 3f-h), что свидетельствует об антифибротическом и гепатопротекторном действии исследуемых экстрактов плодов семейства Вересковые.
8 h Рис.3. Микрофотографии ткани печени крыс: е — экстракт брусники обыкновенной, разрастание коллагеновых волокон с образованием единичных ^2) и множественных ^3) фиброзных септ. f — экстракт черники обыкновенной, нативное периваскуляр-ное разрастание коллагеновых волокон, периваскулярный фиброз без образования септ ^1). д — экстракт голубики обыкновенной, фиброза нет ^0). — Силимарин ГЕКСАЛ®, фиброза нет, нативное периваскулярное разрастание коллагеновых волокон ^0); окраска: Ван Гизон. ув. х100 (е); *200 (Мл)
Обсуждение
Введение крысам CCl4 на протяжении 2-х недель в группе II привело к формированию картины повреждения ткани печени, которая сопровождалась снижением массы тела, увеличением массы печени и повышением индекса печени. При этом в сыворотке крови возрастала концентрация ACT, АЛТ, ТГ и ОХ.
Морфологически это выражалось появлением признаков фиброза в группе II: при окрашивании по Ван Гизону коллагеновые волокна вокруг центральной вены и портальной области демонстрировали выраженную пролиферацию с образованием фиброзных септ, нарушающих структуру печеночной ткани и образующих ложные дольки.
В качестве референс-препарата был выбран Силимарин ГЕКСАЛ® гепатопротекторного действия, состоящий из смеси флавонолигандов — силибина, сили-дианина и силикристина, получаемые из плодов расто-ропши пятнистой (Silybum marianum) [13]. Разные авторы описывают его противовоспалительное и проапопто-тическое действие, антиоксидантный эффект, в целом эти свойства гипотетически могут противодействовать возникновению и развитию механизмов повреждения, которые ответственны за развитие фиброза [14,15].
В условиях эксперимента у крыс при воспроизведении патологии действие Силимарина ГЕКСАЛ® проявлялось снижением печеночного индекса, уменьшением, в сравнении с контролем, концентрации ACT, АЛТ и ТГ, но не в отношении ОХ. Гистологически у животных группы VII в 8 случаях (80%) образование
коллагена было невыраженным, преимущественно в области портальной вены, с распространением в небольшом количестве в некоторые портальные тракты, в единичных случаях — с образованием коротких фиброзных септ, что соответствует стадиям F0 и F1 по METAVIR. У 10% животных выявлен незначительный фиброз с единичными септами (F2), еще у 10% — фиброз с множественными септами без цирроза (F3).
Введение крысам экстракта плодов черники обыкновенной (группа V) на фоне воспроизведенной патологии печени проявлялось снижением печеночного индекса за счет снижения массы печени и отсутствием торможения прироста массы тела в сравнении с контролем. Экстракты других плодов клюквы обыкновенной, брусники обыкновенной и голубики обыкновенной развитие гепатомегалии не предотвращали.
Экстракты черники обыкновенной и голубики обыкновенной в условиях данного эксперимента подобно референс-препарату препятствовали подъему уровня цитолитических ферментов ACT и АЛТ под действием CCl4, а экстракты клюквы обыкновенной и брусники обыкновенной проявляли эффект в отношении только АЛТ. Торможение роста в крови АСТ и АЛТ под влиянием экстрактов плодов мы более всего склонны связывать с ограничением процесса повреждения клеток CCl4. Эту способность экстракта черники обыкновенной отмечают и другие исследователи на экспериментальных моделях фиброза печени под действием CCl4 [16]. Видимо, можно считать, что этот эффект вообще типичен для полифенольных экстрактов.
крысы (норма)
Контроль Клюква Брусника Черника Голубика Силимарин
(модель
фиброза)
Контроль Клюква Брусника Черника Голубика Силимарин
(модель
фиброза)
7 0006 0005 000' 4 ООО-
ТГ (mg/dL)
ОХ (mg/dL)
Интактные Контроль Клюква Брусника Черника Голубика Силимарин крысы (модель
(норма) фиброза)
□ F0
F1
□ F2
Интактные Контроль Клюква Брусника Черника Голубика Силимарин крысы (модель
(норма) фиброза)
F3
F4
Рис.4. Анализ корреляционной связи между степенью фиброза и биохимическими показателями сыворотки крови как проявление антифибротических и гепатопротекторных свойств экстрактов плодов семейства Вересковые
Положительное действие исследуемых экстрактов на липидный обмен проявлялось снижением по сравнению с контролем концентрации ТГ и ОХ в крови крыс. Тенденция к нормализации показателей липидного обмена также является часто регистрируемым эффектом полифенольных экстрактов черники обыкновенной [17].
Таким образом, действие экстрактов плодов клюквы обыкновенной, брусники обыкновенной, черники обыкновенной и голубики обыкновенной, выражающееся в ограничении цитолитического эффекта, препятствии нарушению липидного обмена, торможении провоспалительного эффекта, снижении уровня оксидативного стресса при интоксикации крыс СС14. Косвенным свидетельством этого можно считать факт большей активности во всех проявлениях экстракта черники обыкновенной, содержание по-лифенольных соединений в котором превосходит остальные экстракты плодов.
Разница в гистологической степени фиброза между интактной и контрольной группой была статистически значима (¿> < 0,05), что свидетельствует о том, что модель фиброза печени была успешно воспроизведена. Разница в гистологической степени фиброза печени между группой контроля и группами, принимавшими концентраты полифенолов плодов клюквы обыкновенной, черники обыкновенной, голубики обыкновенной была статистически значимой (¿> < 0,05), что свидетельствует об антифибротиче-
ском действии экстрактов данных плодов на печень в условиях экспериментальной патологии.
В данной работе получены доказательства того, что полифенольные экстракты плодов черники обыкновенной ^асстшт тугйИш L.) (наиболее выражено), голубики обыкновенной ^ассшит uliginosum L.), клюквы обыкновенной ^асстшт охусоссш L.) и брусники обыкновенной ^асстшт vitis-idaea L.) (в наименьшей степени) могут уменьшать выраженность повреждений печени, вызываемые СС14 и в перспективе являться корректорами процесса развития фиброза.
1. Yoon S., Kang G., Eom G.H. HDAC Inhibitors: Therapeutic Potential in Fibrosis-Associated Human Diseases. Int J Mol Sci., 2019, no.20(6), p. E1329. DOI: 10.3390/ijms20061329.
2. Wynn, T.A. Cellular and molecular mechanisms of fibrosis. J. Pathol., 2008, vol.214, pp.199-210.
3. Wu D.D., Wang D.Y., Li H.M., et al. Hydrogen Sulfide as a Novel Regulatory Factor in Liver Health and Disease. Oxid Med Cell Longev. 2019 Jan 20;2019:3831713. DOI: 10.1155/2019/3831713
4. Ore A., Akinloye O.A. Oxidative Stress and Antioxidant Biomarkers in Clinical and Experimental Models of NonAlcoholic Fatty Liver Disease. Medicina (Kaunas), 2019, vol.55(2), p.E26. DOI: 10.3390/medicina55020026
5. Lin L., Zhou F., Shen S., et al. Fighting Liver Fibrosis with Naturally Occurring Antioxidants. Planta Med., 2018, vol.84(18), pp.1318-1333.
6. Kockerling D., Nathwani R., Forlano R., et al. Current and future pharmacological therapies for managing cirrhosis and its complications. World J Gastroenterol., 2019, vol.25(8), pp.888-908.
7. Ebrahimi H., Naderian M., Sohrabpour A.A. New Concepts on Reversibility and Targeting of Liver Fibrosis; A Review Article. Middle East J Dig Dis., 2018, vol.10(3), pp.133148.
8. Li S., Tan H.Y., Wang N., et al. The Potential and Action Mechanism of Polyphenols in the Treatment of Liver Diseases. Oxid Med Cell Longev., 2018, vol.2018, pp.18394818. DOI: 10.1155/2018/8394818
9. Sun J., Wu Y., Long C., et al. Anthocyanins isolated from blueberry ameliorates CCl4 induced liver fibrosis by modulation of oxidative stress, inflammation and stellate cell activation in mice. Food Chem Toxicol., 2018, vol.120, pp.491499.
10. Barthold S.W., Bayne K.A., Davis M.A. Guide for the care and use of laboratory animals. Washington: National Academy Press; 2011., Applied Research Ethics National Association (ARENA) and Office of Laboratory Animal Welfare (OLAW) Bethesda: National government publication; 2002. Institutional animal care and use committee guidebook.
11. Constandinou C., Henderson N., Iredale J. P. Modeling liver fibrosis in rodents. Methods in Molecular Medicine, 2005; vol.117, pp.237-250.
12. Yang Q., Xie R.J., Geng X.X. Effect of Danshao Huaxian capsule on expression of matrix metalloproteinase-1 and tissue inhibitor of metalloproteinase-1 in fibrotic liver of rats. World J Gastroenterol, 2005, vol.11, pp.4953-4956.
13. Kim N.C., Graf T.N., Sparacino C.M., et al. Complete isolation and characterization of silybins and isosilybins from milk thistle (Silybum marianum). Org Biomol Chem., 2003,vol.1(10), pp.1684-9.
14. Loguercio C., Festi D. Silybin and the liver: From basic research to clinical practice. World J. Gastroenterol., 2011, vol.17, pp.2288-2301. Sokar S.S., El-Sayad M.E., Ghoneim M.E., et al. Combination of Sitagliptin and Silymarin ameliorates liver fibrosis induced by carbon tetrachloride in rats. Biomed Pharmacother., 2017, vol.89, pp.98-107.
15. Kheiripour N., Karimi J., Khodadadi I., et al. Hepatoprotec-tive Effects of Silymarin on Liver Injury via Irisin Upregula-tion and Oxidative Stress Reduction in Rats with Type 2 Diabetes. Iran J Med Sci., 2019, vol.44(2), pp.108-117.
16. Cásedas G., Les F., Gómez-Serranillos M.P., et al. Antho-cyanin profile, antioxidant activity and enzyme inhibiting properties of blueberry and cranberry juices: a comparative study. Food Funct., 2017, vol.8(11), pp.4187-4193.
