CC BY
32
УДК 615.45 : 612.111 : 615.281.9
МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ ЭРИТРОЦИТОВ СОБАКИ ПРИ ЭКСТРАКОРПОРАЛЬНОМ НАСЫЩЕНИИ ЦЕФАЛО-СПОРИНОВЫМИ АНТИБИОТИКАМИ
А.Г. ИВОНИН***, Е.В. ПИМЕНОВ***, В.А. ОБОРИН***, А.В. ЧЕР-НЯДЬЕВ***
*Отдел сравнительной кардиологии Коми НЦ УрО РАН, г. Сыктывкар **Вятская государственная сельскохозяйственная академия, г. Киров ***Вятский государственный университет, г. Киров [email protected]
Изучено морфофункциональное состояние эритроцитов собаки, подвергнутых экстракорпоральному насыщению цефтриаксоном и цефотаксимом. Показано, что обработка эритроцитарной массы препаратами в концентрации 20 мг/мл сопровождается эхиноцитарной трансформацией клеток, снижением агрега-ционной способности, деформируемости и механической резистентности эритроцитов. На основании полученных результатов сделаны предположения о возможных механизмах включения цефалоспоринов в эритроциты in vitro и высвобождения препаратов из клеток в условиях организма.
Ключевые слова: эритроциты собаки, экстракорпоральная обработка, цефа-лоспорины, диметилсульфоксид, морфология, агрегация, деформируемость, механическая резистентность
A.G. IVONIN, E.V. PIMENOV, V.A. OBORIN, A.V. CHERNYADYEV. MOR-PHOFUNCTIONAL CHARACTERISTICS OF DOG ERYTHROCYTES AT EXTRACORPORAL SATURATION WITH CEPHALOSPORIN ANTIBIOTICS
Morphofunctional state of dog erythrocytes at extracorporal saturation with cefotaxime and ceftriaxone is studied. It is shown that treatment of erythrocyte mass by drugs at concentration of 20 mg/ml is accompanied by discocyte-echinocyte transformation of cells, decrease of aggregation, deformability and mechanical resistance of erythrocytes. The use of dimethylsulfoxide as a stimulator of the binding of antibiotics with erythrocytes resulted in the increase of type III echinocytes among the transformed cells, promoted the decrease of elasticity and mechanical stability of erythrocytes. Assumptions about the possible mechanisms of the binding of cephalosporins with erythrocytes in vitro and the release of drugs from cells in the body are made.
Keywords: dog erythrocytes, extracorporeal saturation, cephalosporins, dimethylsulfoxide, morphology, aggregation, deformability, mechanical resistance
Введение
Приоритетной задачей современной фармакологии и медицины является разработка систем транспорта лекарственных средств в организме. Применение переносчиков лекарств дает возможность модифицировать фармакокинетические и фармакодинамические параметры препаратов, снижает вероятность развития побочных реакций [1]. Среди потенциальных носителей лекарственных веществ особое место занимают форменные элементы крови, в частности эритроциты, в которые при определенных условиях может быть введена достаточно высокая доза препаратов без заметного ущерба для жизни клетки [2]. К достоинствам эритроцитов как транспортной формы лекарств относятся идеальная биосовместимость (при использовании аутологичных клеток), отсутствие токсических продуктов деградации, длительность
обращения в кровотоке, доступность в препаративном количестве [3]. При внутривенном введении препаратов в составе эритроцитарных «контейнеров» могут быть достигнуты как увеличение времени циркуляции лекарства [4], так и его преимущественная доставка в органы, богатые макрофагами [5].
Большой интерес вызывает возможность использования эритроцитов в качестве носителей антибиотических препаратов. Применение антибиотиков, заключенных в клетки-переносчики, позволит минимизировать нежелательные явления, присущие данным лекарственным средствам при традиционных способах введения (токсическое действие высоких доз, аллергизация организма, угнетение иммунитета) [6]. Известны примеры успешного экспериментального получения и клинического использования эритроцитарных носителей антибиотиков различных классов [7, 8]. Од-
нако недостаточно изученными остаются вопросы влияния экстракорпорального («вне тела») насыщения эритроцитов препаратами на морфологические и функциональные свойства клеток. Результаты исследований в этом направлении могут способствовать уточнению механизмов взаимодействия антибиотиков с эритроцитами в условиях обработки клеток in vitro, позволят прогнозировать поведение эритроцитов-переносчиков в организме [9].
Ранее нами была разработана методика включения в эритроциты млекопитающих (собаки, кошки) антибиотических препаратов группы це-фалоспоринов [10]. Цель настоящей работы заключалась в оценке параметров морфофункцио-нального состояния эритроцитов собаки, подвергнутых экстракорпоральному насыщению цефа-лоспоринами.
Материал и методы
Объектом исследования являлись эритроциты стабилизированной гепарином (5.0 ЕД/мл) периферической венозной крови клинически здоровых беспородных собак (n=12) массой 12-18 кг. Эритроциты отделяли от плазмы и других форменных элементов крови путем центрифугирования в течение 10 мин (1000 g, 4°С) и дважды отмывали фосфатно-солевым буфером, содержащим 137 мМ NaCl, 2 мМ KCl, 8.1 мМ Na2HPO4, 1.9 мМ NaH2PO4, рН 7.4.
Включению в клетки подвергали цефало-спорины III поколения: цефтриаксон (ЦТР) и це-фотаксим (ЦФТ). Насыщение эритроцитов антибиотиками осуществляли путем совместной инкубации клеток с препаратами при 37°С в буферном растворе [10]. Продолжительность инкубации составляла 20 мин, гематокрит суспензии - 80%, концентрация препаратов - 20 мг/мл. В качестве «корректора» связывания цефалоспоринов с клетками применяли апротонный растворитель диме-тилсульфоксид (ДМСО) в концентрации 1,0 мг/мл среды [11]. По окончании инкубации пробы центрифугировали (1000 g, 10 мин, 4°С), отбирали су-пернатант, эритроциты однократно отмывали фосфатным буфером (рН 7.4). Далее часть клеток ли-зировали в охлажденной до 0°С дистиллированной воде. В лизатах определяли концентрацию антибиотиков методом диффузии в агар [12].
У оставшихся негемолизированных эритроцитов исследовали морфологические и функциональные свойства. Контролем служили отмытые эритроциты, инкубируемые в фосфатном буфере без антибиотиков и ДМСО. Для оценки поверхностной архитектоники клеток использовали метод сканирующей электронной микроскопии. При подготовке микропрепаратов эритроциты фиксировали приготовленном на фосфатном буфере в 2,5%-ном растворе глутарового альдегида, в течение 1 ч. при комнатной температуре, дважды промывали буфером и дважды - дистиллированной водой (1000 g, 5 мин, 4°С). Затем взвесь клеток наносили тонким слоем на покровное стекло, высушивали на воздухе и напыляли слоем платины толщиной 6-7 нм. Пре-
параты просматривали с помощью микроскопа JSM-6510 LV («Jeol», Япония) при ускоряющем напряжении 15 кВ и увеличении ><2000-3000. Количественное распределение морфологических форм эритроцитов в препаратах оценивали, пользуясь классификацией [13]. Спонтанную агрегацию эритроцитов в аутологичной плазме исследовали методом оптической микроскопии в камере Горяева, определяя процент свободных (неагрегированных) клеток в суспензии и средний размер агрегатов [14]. Просмотр эритроцитов осуществляли на световом микроскопе Миктрон 400-М («Ломо», Россия) при увеличении х400. Деформируемость (жесткость) эритроцитов оценивали по степени пакуемости клеток при центрифугировании в капилляре Панченко-ва [15], сравнивая сжимаемость исследуемых клеток и 100% жестких эритроцитов, получаемых в результате обработки 2,5%-ным раствором глута-ральдегида. Определение механической резистентности эритроцитов проводили согласно методу [16], выявляя степень лизиса клеток после механического воздействия путем ротации (2000 g, 30 мин, 4°С). Концентрацию свободного гемоглобина в среде при оценке уровня гемолиза регистрировали на спектрофотометре Specol 1300 («Analitic Jena AG», Германия)при Л 415 нм.
Цифровые значения представлены в виде среднего значения ± среднеквадратичное отклонение. Статистическую значимость различий между сравниваемыми группами устанавливали с помощью непараметрического критерия Манна-Уитни.
Результаты и обсуждение
Эффективность «загрузки» эритроцитов це-фалоспоринами зависела от наличия в среде инкубации ДМСО. В немодифицированной среде (при отсутствии апротонного растворителя) показатель связывания ЦТР и ЦФТ с эритроцитами составил 40.87±5.16% и 36.75±3.93% соответственно. Внесение в пробы ДМСО приводило к статистически значимому (p<0,01) повышению уровня включения препаратов в клетки - до 65.51±5.38% для ЦТР и до 62.84±6.47% для ЦФТ. Ввиду наличия у молекул цефалоспориновых антибиотиков нескольких ионо-генных групп [17] наиболее вероятным механизмом их связывания с эритроцитами является фиксация на клеточной мембране. Кроме того, возможно проникновение цефалоспоринов, диссоциирующих на ионы, внутрь эритроцитов через белковые каналы мембраны. Известно, что молекулы ДМСО обладают амфифильностью, что позволяет им погружаться в липидную фазу биомембран, изменять ее стабильность и проницаемость для других соединений [18]. Повышение уровня насыщения эритроцитов антибиотиками в присутствии ДМСО, по-видимому, связано именно с этим явлением. Отсутствие достоверных различий между показателями включения ЦТР и ЦФТ в эритроциты в одних и тех же условиях свидетельствовало о схожести механизмов аккумуляции препаратов клетками.
Электронно-микроскопические исследования показали, что инкубация эритроцитов с антибиотиками сопровождалась выраженными изменениями
морфологии и поверхностной структуры клеток (табл. 1). При обработке эритроцитов ЦТР и ЦФТ в пробах по сравнению с контролем значительно сокращалась доля дискоцитов (клеток в форме двояковогнутого диска, нормоцитов) (p<0,01), снижалось количество плоских клеток, сфероцитов (клеток сферической формы) и стоматоцитов (чашеобразных клеток) (p<0,05). В то же время увеличивалось содержание эхиноцитов I порядка (дисков с одним или несколькими выростами), II порядка (дисков с грубыми конусовидными выростами по всей поверхности) и III порядка (сферических клеток с тон-
кими отростками в виде шипов) (p<0,01). При инкубации эритроцитов с цефалоспоринами в присутствии ДМСО по сравнению с обработкой только антибиотиками в клеточной суспензии снижалось содержание эхиноцитов I и II порядков (p<0,01), но увеличивалось количество эхиноцитов III порядка (p<0,01). Электронные микрофотографии различных морфологических форм эритроцитов в контроле и после инкубации с цефалоспоринами на примере ЦТР приведены на рисунке.
Изменения поверхностной архитектоники эритроцитов после инкубации с цефалоспоринами мог-
Таблица 1
Морфологический состав эритроцитов собаки после экстракорпоральной обработки цефалоспоринами, %
Вариант эксперимента
Формы эритроцитов Контроль (эрит- Эритроциты + Эритроциты + ЦТР Эритроциты + Эритроциты +
роциты + буфер) ЦТР + ДМСО ЦФТ ЦФТ + ДМСО
Дискоциты 81.94±3.20 0.38±0.20** 0.3±0.14** 0.32±0.19** 0.27±0,16**
Плоские 6.34±1.02 4.31 ± 1.19* 3.82±0.77** 5.14±0.46* 4.54±1.16*
Эхиноциты
I порядка 4.59±0.89 14.55±2.35** 7.86±1.82**°° 17.61±2.67** 6.52±0.96**°°
II порядка 3.65±1.09 74.42±4.86** 40.77±7,20**°° 68,40±6.03** 36.41 ±4.41**°°
III порядка 0.85±0.45 5.23±1.91** 46.12±6.62**°° 7.76±4.87** 51.42±5.19**°°
Сфероциты 1.43±0.38 0.71±0.25* 0.89±0.36* 0.45±0.32* 0.63±0.22**
Стоматоциты 1.20±0.81 0.40±0.16* 0.24±0.12** 0.37±0.22* 0.21 ±0.14**
Примечание: *р<0,05, **р<0,01 - различия статистически значимы по сравнению с контролем; °°р<0,01 -по сравнению с образцами, содержащими антибиотик без ДМСО.
ли быть обусловлены характером взаимодействия антибиотиков с мембранными структурами. Согласно гипотезе сопряженного бислоя [19], к появлению кренированных (с наружными выростами) морфологических форм эритроцитов приводит встраивание экзогенных соединений во внешний монослой клеточной мембраны. Таким образом, наблюдаемая эхиноцитарная трансформация эритроцитов, возможно, объяснялась накоплением молекул це-фалоспоринов преимущественно в наружном слое мембраны и его непропорциональным расширением. Форма эритроцитов при обработке препаратами в отсутствии ДМСО, по-видимому, была также обусловлена высоким значением осмолярности среды, содержащей слабо проникающие в клетки соединения (цефалоспорины). Причиной увеличения содержания в образцах с ДМСО эхиноцитов III порядка могло являться повышение проницаемости эрит-роцитарной мембраны для антибиотиков, индуцированное апротонным растворителем. В этом случае поступление препаратов внутрь эритроцитов приводило к увеличению объема внутриклеточной жидкости и вызывало разбухание клеток.
Эритроциты, утратившие форму двояковогнутого диска, необходимую для эффективного осуществления газотранспортной функции, в организме подвергаются захвату и разрушению клетками ретикулоэндотелиальной системы, главным образом печени и селезенки [5]. Поэтому логично допустить, что модифицированные в ходе экстракорпоральной обработки цефалоспоринами эритроциты в процессе циркуляции будут утилизироваться в вышеуказанных органах с созданием высоких локальных концентраций транспортируемых препаратов.
В табл. 2 представлены результаты оценки функциональных свойств эритроцитов, подвергнутых насыщению антибиотиками. Способность клеток к агрегатообразованию в аутологичной плазме на фоне инкубации с ЦТР и ЦФТ уменьшалась, о чем свидетельствовало повышение (p<0,01) содержания в суспензии неагрегированных эритроцитов и снижение (p<0,01) среднего размера агрегатов в сравнении с контролем. Клетки, «нагруженные» цефалоспоринами и морфологически представленные преимущественно эхиноцитами, формировали агрегаты без определенной структуры, в
то время как клетки из контрольных образцов (дис-коциты) образовывали линейные агрегаты в виде «монетных столбиков». Обработка эритроцитарной массы цефалоспоринами в присутствии ДМСО не вызывала существенных изменений степени агрегации и формы клеточных скоплений в сравнении с насыщением препаратами в среде, не содержащей апротонный растворитель. Вероятной причиной снижения агрегационной способности эритроцитов при инкубации in vitro с антибиотиками являлась утрата исходной дискоидной формы, увеличивающей площадь контакта между клетками и способствующей их ассоциации [20].
Общеизвестно, что повышение агрегации эритроцитов ухудшает кровоток в микрососудах и окси-генацию тканей, способствует развитию тромбозов и ишемии [21, 22]. Результаты определения агрега-ционной способности эритроцитов после обработки цефалоспоринами позволили предположить, что реинфузия «нагруженных» антибиотиками клеток не будет оказывать отрицательного влияния на микроциркуляторные процессы в организме.
Коэффициент деформабельности эритроцитов после обработки ЦТР и ЦФТ превышал (p<0,05) аналогичный показатель в контроле, что указывало на увеличение ригидности (жесткости) клеток при насыщении препаратами. Инкубация суспензии эритроцитов с цефалоспоринами и ДМСО сопровождалась повышением (p<0,05) коэффициента дефор-мабельности клеток по сравнению с обработкой только антибиотиками и, следовательно, приводила к дальнейшему снижению способности эритроцитов к деформации. Увеличение жесткости эритроцитов после обработки антибиотиками объясняли изменениями вязкоэластических свойств клеточной мембраны, сопутствующими связыванию препаратов из инкубационной среды и сопряженными с морфологической трансформацией клеток. Более выраженное снижение деформируемости эритроцитов на фоне обработки ЦТР и ЦФТ совместно с ДМСО могло быть обусловлено усилением напряжения мембраны вследствие увеличения объема клеток и их сферуляции.
При оценке механической стойкости эритроцитов, инкубируемых с цефалоспоринами, было установлено повышение (p<0,01) процента лизиса
Таблица 2
Характеристики функционального состояния эритроцитов собаки после экстракорпоральной обработки цефалоспоринами
Вариант эксперимента
Показатель Контроль (эритроциты + буфер) Эритроциты + ЦТР Эритроциты + ЦТР + ДМСО Эритроциты + ЦФТ Эритроциты + ЦФТ + ДМСО
Неагрегированные эритроциты, % 44,7±5,68 80,7±4,88** 83,4±6,38** 79,5±5,10** 84,9±7,69**
Число эритроцитов / агрегат 6.69±1.53 4.03±0.81** 3.81±0.74** 4.23±0.90** 3.94±1.19**
Коэффициент деформабельности, усл. ед. 0.54±0.06 0.62±0.08* 0.71±0.06** ° 0.61±0.05* 0.68±0.07** °
Лизированные клетки в среде после механического воздействия, % 3.05±0.47 5.93±0.57** 6.95±0,84** ° 6.29±0.51** 7.13± 1.06** °
Примечание: *р<0,05, **р<0,01 - различия статистически значимы по сравнению с контролем; °р<0,05 по сравнению с образцами, содержащими антибиотик без ДМСО.
клеток после внешнего воздействия по сравнению с контрольными эритроцитами. Добавление в инкубационную среду к антибиотикам ДМСО вызывало еще более значительное снижение механической резистентности эритроцитов, о чем свидетельствовало возрастание (p<0,05) процента гемолиза после действия внешнего фактора по сравнению с эритроцитами, инкубируемыми с одними цефало-споринами. Отрицательную динамику показателя устойчивости эритроцитов к механическим нагрузкам после обработки антибиотиками связывали с нарушением геометрии и эластичности клеток.
Деформируемость и механическая резистентность эритроцитов являются важными показателями, определяющими движение крови в капиллярах. Благодаря способности к деформации под действием внешних сил эритроциты могут проникать в кровеносные сосуды меньшего, чем они сами, диаметра и, таким образом, обеспечивать диффузию газов на высоком уровне [23]. На наш взгляд, повышение жесткости «нагруженных» цефалоспори-нами эритроцитов, сопровождаемое уменьшением механической стойкости, может способствовать разрушению клеток при прохождении через узкие капилляры и высвобождению препаратов в зонах микроциркуляции. Таким образом, при введении эритроцитарных носителей антибиотиков в кровоток, по-видимому, будет иметь место как внутриклеточный (в макрофагах печени и селезенки), так и внутрисосудистый (в капиллярной сети) их гемолиз.
Заключение
Обработка эритроцитов собаки цефтриаксо-ном и цефотаксимом in vitro приводит к схожим неспецифическим изменениям морфофункционально-го состояния эритроцитарной мембраны, выражающимся в кренации клеток, снижении их агрега-ционной способности, деформируемости и механической устойчивости. Внесение в среду инкубации диметилсульфоксида с целью стимуляции включения препаратов в эритроциты приводит к повышению степени эхиноцитарной трансформации клеток, способствует уменьшению эластических свойств и механической резистентности эритроцитов. Полученные данные расширяют представления о характере взаимодействия цефалоспоринов с эритроцитами в условиях экстракорпоральной обработки клеток, позволяют прогнозировать фарма-кокинетику препаратов при введении в кровоток в ассоциации с эритроцитами.
Работа выполнена при частичной финансовой поддержке гранта РФФИ 15-04-06312.
Литература
1. Allen T.M., Cullis P.R. Drug delivery systems: entering the mainstream // Science. 2004. Vol. 303. № 5665. P. 1818-1822.
2. Jaitely V., Kanaujia P., Venkatesan N. et al. Resealed erythrocytes: drug carrier potentials and biomedical applications // Indian Drugs. 1996. Vol. 33. № 12. P. 589-594.
3. Rossi L., Serafini S, Pierige F. et al. Erythro-cyte-based drug delivery // Expert Opin. Drug Deliv. 2005. Vol. 2. № 2. P. 311-322.
4. Lewis DA., Alpar H.O. Therapeutic possibilities of drugs encapsulated in erythrocytes // Int. J. Pharm. 1984. Vol. 22. № 7. Р. 137146.
5. Alvarez F.J., Jordan JA., Calleja P. et al. Cross-linking treatment of loaded erythrocytes increases delivery of encapsulated substance to macrophages // Biotechnol. Appl. Biochem. 1998. Vol. 27. № 2. P. 139-143.
6. Генинг Т.П., Колкер И.И., Жумадилов Ж.Ш. Использование форменных элементов крови для направленной доставки химиотерапев-тических и диагностических препаратов в очаг поражения // Антибиотики и химиотерапия. 1988. Т. 33. № 11. С. 867-871.
7. Лазарев А.И., Сипливый Г.В., Кукурека А.В., Сипливая Л.Е. Экспериментальное обоснование использования клеточных носителей для направленного транспорта антибиотиков и фторхинолонов при необструктивном пиелонефрите // Российский медико-биологический вестник. 2009. №1. С. 58-62.
8. Mil^n C.G., Castaneda AZ, Lоpez F.G., Marinero M.L. Pharmacokinetics and biodistribution of amikacin encapsulated in carrier eryt-hrocytes // J. Antimicrob. Chemother. 2008. Vol. 61. № 2. Р. 375-381.
9. Gothoskar A.V. Resealed erythrocytes: a review // J. Pharm. Technol. 2004. № 3. Р. 140-158.
10. Ивонин А.Г., Пименов Е.В., Копылов С.Н., Оборин ВА Оценка возможности включения цефалоспориновых антибиотиков в эритроциты мелких домашних животных // Вестник ветеринарии. 2015. № 73 (2). С. 64-68.
11. Фармакоэкономический анализ применения клеточно-ассоциированной антибактериальной терапии при внебольничной пневмонии различной степени тяжести / Н.А.Пятаев,
B.В. Кузин, Г.А. Бояринов, О.В. Журова, О.В. Минаева // Вестник интенсивной терапии. 2006. № 5. С. 14-17.
12. Антибиотики, сульфаниламиды и нитрофу-раны в ветеринарии/ В.Ф.Ковалев, И.Б.Волков, Б.В.Виолин, Р.А.Ортман, В.С.Хоменко, Н.Р.Хоменко. М.: Агропромиздат, 1988. 223 с.
13. Козинец Г.И., Симоварт ЮА. Поверхностная архитектоника клеток периферической крови в норме и при заболеваниях системы крови. Таллин: Валгус, 1984. 116 с.
14. Методические подходы к исследованию реологических свойств крови при различных состояниях / И.Н.Медведев, С.Ю.Завалиши-на, Е.Г.Краснова, О.В.Гамолина, И.А.Скоря-тина, Т.С. Фадеева // Российский кардиологический журнал. 2009. № 5. С. 42-45.
15. Моисеева О.М., Моисеев С.И., Гуревич В.С. Способ определения деформабельности эритроцитов // Лабораторное дело. 1990. № 10.
C. 55-57.
16. Ганиткевич Я.В., Черненко Л.И. Методика определения механической резистентности
эритроцитов//Лабораторное дело. 1978. №2. С.116-117.
17. Чуев П.Н., Кресюн В.И., Каташинский О.Ю. Клиническая фармакология цефалоспори-нов. Одесса: Черноморье, 1997. 136 с.
18. Yu Z.W., Quinn P.J. The modulation of membrane structure and stability by dimethyl sul-phoxide (review) // Mol. Membr. Biol. 1998. Vol. 15. № 2. Р. 59-68.
19. Sheets M.P., Singer S.J. Biological membranes as bilayer couples. A molecular mechanism of drug-erythrocyte interactions // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1974. Vol. 71. № 11. P. 4457-4461.
20. Berling C, Lacombe C, Lelievre J., Allary M., Saint-Blancard J. The RBC morphological dependence of the RBC disaggregability // Bior-heology. 1988. Vol. 25. № 5. Р. 791-798.
21. Reinhart W. Hemorheology: blood flow hematology // Schweiz. Med. Wochenschr. 1995. Vol. 125. № 9. Р. 387-395.
22. Baskurt O.K., Meiselman Н.J. Blood rheology and hemodynamics // Semin. Thromb. He-most. 2003. Vol. 29. № 5. Р. 435-450.
23. Левин ГЯ, Соснина Л.Н. Исследование реологических свойств эритроцитов, модифицированных для направленного транспорта лекарственных веществ // Фундаментальные исследования. 2013. № 2. С. 105-109.
References
1. Allen T.M., Cullis P.R. Drug delivery systems: entering the mainstream // Science. 2004. Vol. 303. № 5665. P. 1818-1822.
2. Jaitely V., Kanaujia P., Venkatesan N. et al. Resealed erythrocytes: drug carrier potentials and biomedical applications // Indian Drugs. 1996. Vol. 33. № 12. P. 589-594.
3. Rossi L., Serafini S, Pierige F. et al. Erythro-cyte-based drug delivery // Expert Opin. Drug Deliv. 2005. Vol. 2. № 2. P. 311-322.
4. Lewis DA., Alpar H.O. Therapeutic possibilities of drugs encapsulated in erythrocytes // Int. J. Pharm. 1984. Vol. 22. № 7. Р. 137-146.
5. Alvarez F.J., Jordan JA., Calleja P. et al. Cross-linking treatment of loaded erythrocytes increases delivery of encapsulated substance to macrophages // Biotechnol. Appl. Biochem. 1998. Vol. 27. № 2. P. 139-143.
6. Gening T.P., Kolker I.I., Zhumadilov Zh.Sh. Ispol'zovanie formennyh ehlementov krovi dlya napravlennoj dostavki himioterapevti-cheskih i diagnosticheskih preparatov v ochag porazheniya [The use of blood cells for targeted delivery of chemotherapeutic and diagnostic agents in the lesion] // Antibiotiki i khimioterapiya [Antibiotics and chemotherapy]. 1988. Vol. 33. № 11. P. 867-871.
7. Lazarev A.I., Siplivy G.V., Kukureka A.V., Sip-livaya L.E. Eksperimental'noe obosnovanie is-pol'zovaniya kletochnyh nositelej dlya naprav-lennogo transporta antibiotikov i ftorhinolo-nov pri neobstruktivnom pielonefrite [Experimental validation of using cell-based carriers
for the directed transport of antibiotics and fluoroquinolones for nonobstructive pyelone-phritis]//Rossijskij mediko-biologicheskij ves-tnik im. akad. I.P. Pavlova [I.P.Pavlov Russian Med.-Biol. Bull.]. 2009. №1. P. 58-62.
8. Mil^n C.G., Castaneda AZ, Lоpez F.G., Marinero M.L. Pharmacokinetics and biodistribution of amikacin encapsulated in carrier eryt-hrocytes // J. Antimicrob. Chemother. 2008. Vol. 61. № 2. P. 375-381.
9. Gothoskar A.V. Resealed erythrocytes: a review // J. Pharm. Technol. 2004. № 3. P. 140-158.
10. Ivonin A.G., Pimenov E.V., Kopylov S.N., Obo-rin VA. Ocenka vozmozhnosti vklyucheniya cefalosporinovyh antibiotikov v ehritrocity melkih domashnih zhivotnyh [Evaluation of incorporation of cephalosporin antibiotics into erythrocytes of domestic animals] // Vestnik veterinarii [Herald of veter. Medic.]. 2015. № 73 (2). P. 64-68.
11. Pyataev NA, Kuzin V.V., Boyarinov GA., Zhu-rova O.V., Minaeva O.V. Farmakoehkonomi-cheskij analiz primeneniya kletochno-associi-rovannoj antibakterial'noj terapii pri vnebol' nichnoj pnevmonii razlichnoj stepeni tyazhesti [Pharmacoeconomic analysis of application of cell-associated antibiotic therapy in community-acquired pneumonia of varying severity] // Vestnik intensivnoj terapii [Intensive Care Herald]. 2006. № 5. P. 14-17.
12. Kovalev V.F., Volkov I.B., Violin B.V., Ortman RA., Homenko V.S., Homenko N.R. Antibiotiki, sul'fanilamidy i nitrofurany v veterinarii [Antibiotics, sulfonamides and nitrofurans in veterinary medicine]. Moscow: Agropromiz-dat, 1988. 223 p.
13. Kozinets G.I., Simovart YuA. Poverhnostnaya arhitektonika kletok perifericheskoj krovi v norme i pri zabolevaniyah sistemy krovi [Surface architectonics of peripheral blood cells in norm and at blood system diseases]. Tallin: Valgus, 1984. 116 p.
14. Medvedev I.N., Zavalishina S.Yu., Krasnova E.G., Gamolina O.V., Skoryatina I.A., Fadeeva T.S. Metodicheskie podhody k issledovaniyu reologicheskih svojstv krovi pri razlichnyh sostoyaniyah [Methodological approaches to the study of rheological properties of blood at various states] // Rossijskij kardiologicheskij zhurnal [Russian J. of Cardiology]. 2009. №5. P. 42-45.
15. Moiseeva O.M., Moiseev S.I., Gurevich V.S. Sposob opredeleniya deformabel'nosti ehritro-citov [Method for determination of erythrocytes deformability] // Laboratornoe delo [Laboratory practice]. 1990. № 10. P. 55-57.
16. Ganitkevich Ya.V., Chernenko L.I. Metodika opredeleniya mekhanicheskoj rezistentnosti ehritrocitov [Methods of determining the mechanical resistance of erythrocytes] // Labora-tornoe delo [Laboratory practice]. 1978. № 2. P. 116-117.
17. Chuev P.N., Kresyun V.I., Katashinsky O.Yu. Klinicheskaya farmakologiya cefalosporinov
[Clinical pharmacology of cephalosporins]. Odessa: Chernomorye, 1997. 136 p.
18. Yu Z.W., Quinn P.J. The modulation of membrane structure and stability by dimethyl sul-phoxide (review) // Mol. Membr. Biol. 1998. Vol. 15. № 2. P. 59-68.
19. Sheets M.P., Singer S.J. Biological membranes as bilayer couples. A molecular mechanism of drug-erythrocyte interactions // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1974. Vol. 71. № 11. P. 4457-4461.
20. Berling C., Lacombe C, Lelievre J., Allary M., Saint-Blancard J. The RBC morphological dependence of the RBC disaggregability // Bior-heology. 1988. Vol. 25. № 5. P.791-798.
21. Reinhart W. Hemorheology: blood flow hematology // Schweiz. Med. Wochenschr. 1995. Vol. 125. № 9. Р. 387-395.
22. Baskurt O.K., Meiselman Н.J. Blood rheology and hemodynamics // Semin. Thromb. He-most. 2003. Vol. 29. № 5. Р. 435-450.
23. Levin G.Ya, Sosnina L.N. Issledovanie reolo-gicheskih svojstv ehritrocitov, modificirovan-nyh dlya napravlennogo transporta lekarstven-nyh veshchestv [Investigation of rheological properties of erythrocytes, modified for the directed transport of pharmaceutical substances] // Fundamental'nye issledovaniya [Fundamental research]. 2013. № 2. P. 105-109.
Статья поступила в редакцию 26.07.2016.
