CC BY
0
DOI: 10.48612/sbornik-2023-1-58 УДК 619:616-091:615.9:599.32
МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНАЯ ОЦЕНКА ПРЕПАРАТА ДОН-1 ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМ
ХРОНИЧЕСКОМ ТОКСИКОЗЕ
Басанкин Алексей Вадимович, канд. вет. наук
Семененко Марина Петровна, д-р вет. наук, доцент
ФГБНУ «Краснодарский научный центр по зоотехнии и ветеринарии»,
г. Краснодар, Российская Федерация
По результатам гистологического исследования внутренних органов и патоморфологи-ческой картины крыс при длительном воздействии на их организм препарата ДОН-1 в субтоксических дозах морфологических изменений в органах не установлено, что свидетельствует об отсутствии на них дополнительной нагрузки и хорошей переносимости препарата лабораторными животными.
Ключевые слова: препарат; хроническая токсичность; лабораторные крысы; гистологическое исследование
MORPHOFUNCTIONAL EVALUATION OF THE DRUG DON-1 IN EXPERIMENTAL
CHRONIC TOXICOSIS
Basankin Alexey Vadimovich, PhD Vet. Sci.
Semenenko Marina Petrovna, Dr. Vet. Sci., Associate Professor
Krasnodar Research Centre for Animal Husbandry and Veterinary Medicine, Krasnodar, Russian Federation
According to the results of the histological study of the internal organs and the pathomorpholog-ical picture of rats with prolonged exposure of the DON-1 drug in subtoxic doses, morphological changes in the organs were not determined, which indicates the absence of additional stress on them and the good tolerance of the drug by laboratory animals.
Key words: drug; chronic toxicity; laboratory rats; histological examination
Доклиническое изучение безопасности -сложная многоплановая процедура, включающая в себя комплекс исследований систем и органов на различных уровнях организации. Итоговые результаты таких экспериментов подвергаются перекрестному сопоставлению и признаются значимыми только при совпадении частных заключений по каждому фрагменту с обязательным учетом возможного влияния фармакологических эффектов, присущих изучаемому веществу [1].
Данные, получаемые в ходе клинико-лабораторных исследований, в частности гематологических, биохимических и патомор-фологических, представляют особую ценность при составлении полной картины токсического действия препарата при его многократном введении, поскольку позволяют идентифицировать органы-мишени воздействия препарата, оценить степень и обратимость эффектов и, соответственно, спрогно-
зировать возможные нежелательные явления при клинических наблюдениях у людей. Поскольку совокупность полученных в вышеупомянутых исследованиях данных при корректной их интерпретации вносит существенный вклад в формирование соотношения «риск-польза» при обсуждении программы развития препарата, необходимо обеспечивать качество получаемых данных на всех этапах проведения испытаний [2, 4].
Патоморфологические исследования органов и тканей позволяют на клеточном уровне представить характер повреждений. В ходе системного анализа полученных данных возможно однозначно выявить системы организма, наиболее подверженные токсическому действию препарата, а также оценить степень воздействия и обратимость эффектов [3].
Методика исследований. Препарат ДОН-1 разработан в проблемной лаборатории Краснодарского политехнического института
и представляет собой жидкую композиционную смесь, состоящую из 2-бутенолида (кро-тонолактоны) - 35 %, малеиновой и фумаро-вой кислот - 35 % и воды - 30 %.
Хроническая токсичность препарата проведена на трех группах лабораторных крыс (n=10) со средней массой тела 110±5,7 г, отобранных рандомизированно с учетом возраста, пола и зоосоциальных аспектов (животные, проявляющие агрессию, демонстрирующие доминантное поведение или не обладающие коммуникационными признаками в эксперимент не включались).
Выбор доз препарата ДОН-1 для инициации токсикологических исследований в опытных группах основывался от числового показателя среднесмертельной дозы, полученной в остром эксперименте и составил 1/5 и 1/10 от LD50, или 0,5 и 0,25 мл/кг массы тела. Образцы препарата применялись в натив-ном виде с последующим приготовлением лекарственной формы - болюсов, задаваемых грызунам индивидуально в утренние часы до основного кормления. Основу болюсов составляла овсяная мука (farina avenica). Для животных контрольной группы болюсы готовились без добавления в состав препарата ДОН-1. При этом осуществлялся обязательный контроль индивидуального потребления болюсов подопытными крысами, после чего через 1,5 часа всем животным скармливались корма основного рациона.
Макроскопическая оценка органов и тканей грызунов, обобщенная для всех групп исследованных животных, выявила следующее:
Телосложение крыс развито согласно возраста и половой принадлежности, упитанность средняя, без отложения избыточной подкожной жировой клетчатки. Кожные по-
Макроскопическое и гистологическое исследование внутренних органов проводилось посмертно в конце эксперимента у пяти животных из каждой группы.
Результаты исследований и их обсуждение. Установлено, что 90-дневное пероральное применение лабораторным крысам образцов препарата ДОН-1 в изучаемых дозах не вызывает гибели, интоксикации организма и нарушений поведенческих реакций (общая слабость, адинамия, быстрая утомляемость, болевой синдром, жидкий стул, повышение температуры, судороги, изменение рефлексов не установлены) при 100 %-ной сохранности.
На 90 день исследования из эксперимента с соблюдением правил биоэтики (эвтаназия изофлураном (^ойигапе)) было выведено по пять крыс из каждой группы для па-томорфологического и гистологического исследования. Посмертный патоморфологиче-ский анализ включал вскрытие, макроскопическое исследование, взвешивание внутренних органов с последующим отбором образцов для гистологического исследования.
Результаты морфометрического анализа органов крыс свидетельствуют об отсутствии статистически значимых отличий в относительных массах и массовых коэффициентов (МК) органов в сравнении с аналогичными показателями контрольных животных (таблица 1).
кровы не нарушены, поверхностные опухоли не визуализируются.
Ушные раковины целостные, конъюнктива глаз светло-розового цвета, целостность не нарушена. Полость носа, слизистая оболочка ротовой полости и язык без патологических изменений, зубы сохранены, переломы и сколы отсутствуют, опухолевых перерожде-
Таблица 1 -Масса внутренних органов белых крыс (М ± m; n=5)
Орган Группы
1 опытная 2 опытная Контроль
относительная масса, г МК, % относительная масса, г МК, % относительная масса, г МК, %
Сердце 0,89±0,03 0,50 0,93±0,04 0,53 0,95±0,05 0,51
Легкие с трахеей 2,39±0,17 1,35 2,48±0,21 1,40 2,46±0,11 1,33
Печень 7,86±0,59 4,43 8,12±0,67 4,59 8,24±0,64 4,47
Селезенка 0,86±0,09 0,49 0,98±0,10 0,55 0,99±0,08 0,54
Почки 2,19±0,13 1,24 2,28±0,26 1,29 2,32±0,08 1,26
Желудок 2,31±0,37 1,30 2,47±0,51 1,39 2,45±0,21 1,33
ний и абсцессов не наблюдается. Осмотр шеи, груди, живота, подмышечных и паховых областей, наружных половых органов и естественных отверстий (анус, вульва у самок и мочеиспускательный канал у самцов) патологических изменений и новообразований не выявил.
При ревизии внутренних органов грудной и брюшной полостей анатомических нарушений не установлено, париетальный и висцеральный листки плевры и брюшины тонкие, блестящие, гладкие.
Легкие светло-розового цвета, без повреждений, абсцессов и спаечных процессов не выявлено. Перикард без патологических изменений, скопления жидкости не выявлено. Диафрагма не нарушена.
Сердце не увеличено, кровоизлияния отсутствуют, крупные магистральные сосуды без патологии, умеренно кровенаполнены.
Слизистая ротовой полости, пищевода, желудка и кишечника без патологии, светло-розового цвета. Тонкий отдел кишечника умеренно наполнен кормовыми массами, наличие аутолитических изменений не выявлено. Печень - красно-коричневого цвета, на разрезе без кровоизлияний и некротических очагов, капсула блестящего цвета, без нарушений и утолщения. Поджелудочная железа бело-розового цвета, без патологий. Селезенка в размере не увеличена, темно-бордового цвета, умеренно-плотной консистенции.
Почки - плотные, на разрезе выражен корковый и мозговой слои, капсула целостная, без повреждений и кровоизлияний. Мочеточники без нарушений, желтовато-
Рисунок 1 - Околоядерный перинуклеарный ореол в гепатоцитах печени, участки гидропической дистрофии
Окраска гематокскилин-Выводы. Сопоставление результатов
розового цвета, мочевой пузырь без патологий, слизистая розового цвета, кровоизлияний не выявлено. Просвет заполнен мочой светло-желтого цвета. Надпочечники без патологий.
При осмотре головного мозга кровоизлияний, признаков воспаления, гиперплазии, скопления жидкости в полостях черепа не выявлено.
Далее, образцы внутренних органов крыс были подвергнуты гистологическому исследованию. Установлено, что микроскопическая структура органов животных во всех группах существенных различий не имела. Однако в печени грызунов, получавших наиболее высокую тестируемую дозу препарата ДОН-1 (0,5 мл/кг) в гепатоцитах очагово обнаруживались перинуклеарные ореолы, цитоплазма которых в участках, прилегающих к ядерной оболочке, вследствие утраты тинкториальных свойств, выглядела пустой. Кроме этого в печени фиксировались участки гидропической дистрофии, а также имела место макрофагальная реакция, обнаруживаемая в виде отдельных узелков в цитоплазме клеток (рис. 1).
В корковом слое почек выявлялась незначительная пролиферация, а также определялись единичные макрофаги, отражающие спад макрофагальной активности (рис. 2), указывающей на то, что препарат ДОН-1, введенный в высокой дозе, поглощается макрофагами, которые еще какой-то период времени после окончания эксперимента, остаются его пассивными носителями.
Рисунок 2 - Незначительные пролифераты в корковом слое почек
зином, увеличение 400х
гистологического исследования внутренних
органов и патоморфологической картины при вскрытии крыс опытных и контрольной групп указывает на то, что длительное воздействие препарата ДОН-1 в вышеуказанных дозах и экспозиции не вызывает морфологических изменений в изученных органах, существенно отличающихся от обнаруженных в контроле, что свидетельствует об отсутствии на них дополнительной нагрузки и хорошей переносимости препарата лабораторными животными.
Список литературы
1. Гуськова Т.А. Токсикология лекарственных средств. М.: «Русский врач», 2003. - 154 с.
2. Колобов А. А. Доклинические исследования безопасности (острой и хронической ток-
сичности) потенциального лекарственного средства на основе пептидэргического нейро-и стресс-протектора / А. А. Колобов, М. П. Смирнова, Е. А. Кампе-Немм, В. М. Шпень, А. А. Вирцев и др. // Современные проблемы науки и образования. - 2019. - № 5. - С. 3.
3. Меньшикова Л. А. Особенности доклинических исследований инновационных лекарственных препаратов / Л. А. Меньшикова, И. Г. Печенкина, Н. С. Береза // Разработка и регистрация лекарственных средств. - 2013. - № 1 (2). - С. 62-65.
4. Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств. Под ред. А. Н. Миронова. Часть первая. М.: Гриф и К, 2012. - С. 13-51.
DOI: 10.48612/sbornik-2023-1-59 УДК 619:615.099; 619:615.9
К ВОПРОСУ БЕЗОПАСНОСТИ ПРЕПАРАТА КАРТИСИЛАН В РАМКАХ ОСТРОГО ТОКСИКОЛОГИЧЕСКОГО ЭКСПЕРИМЕНТА
Винокурова Диана Петровна1, канд. вет. наук Семененко Марина Петровна2, д-р вет. наук, доцент Сампиев Абдулмуталип Магаметович2, д-р фарм. наук, профессор 1ФГБОУ ВО «Кубанский государственный аграрный университет», г. Краснодар, Российская Федерация
ФГБНУ «Краснодарский научный центр по зоотехнии и ветеринарии», г. Краснодар, Российская Федерация
В статье представлены результаты оценки потенциальной опасности и величины токсических параметров нового препарата картисилан на организм белых крыс в остром токсикологическом эксперименте. Полученные результаты показывают, что препарат по ГОСТ 326442014 «Методы испытания по воздействию химической продукции на организм человека. Острая пероральная токсичность - метод определения класса острой токсичности» отнесен к 5 классу опасности; по ГОСТ 12.1.007-76 «Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности» - к 4 классу опасности.
Ключевые слова: препарат; доклинические исследования; острая токсичность; лабораторные крысы
TO THE QUESTION OF SAFETY OF THE DRUG CARTISILAN IN THE FRAMEWORK OF ACUTE TOXICOLOGICAL EXPERIMENT
Vinokurova Diana Petrovna1, PhD Vet. Sci. Semenenko Marina Petrovna2, Dr. Vet. Sci., Associate Professor Sampiev Abdulmutalip Magametovich2, Dr. Pharm. Sci., Professor 1Kuban State Agrarian University, Krasnodar, Russian Federation
2Krasnodar Research Centre for Animal Husbandry and Veterinary Medicine, Krasnodar, Russian Federation
