CC BY
36
© РАЗУВАЕВА Я.Г., НИКОЛАЕВ С.М., МАРХАЕВА Л.Э., ЗАНДАНОВ А.О., САМБУЕВА З.Г. - 2010
МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНАЯ ОЦЕНКА ФАРМАКОТЕРАПЕВТИЧЕСКОЙ ЭФФЕКТИВНОСТИ ФИТОСРЕДСТВ ГЕПАТОФИТА И ПОЛИФИТОХОЛА ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМ ТЕТРАЦИКЛИНОВОМ ГЕПАТИТЕ
Я.Г. Разуваева, С.М. Николаев, Л.Э. Мархаева, А.О. Занданов, З.Г. Самбуева (Институт общей и экспериментальной биологии СО РАН, директор - д.б.н., проф. Л.Л. Убугунов;
Бурятский государственный университет, г. Улан-Удэ, ректор - чл.корр. РАО, проф. С.В. Калмыков;
Иркутский государственный институт усовершенствования врачей, ректор - д.м.н., проф. В.В. Шпрах)
Резюме. Установлено, что введение фитосредств полифитохола и гепатофита оказывает выраженное гепатопротекторное действие, уменьшая некротические, мезенхимально-воспалительные и дистрофические процессы в гепатоцитах и стимулируя регенерацию печеночных клеток на фоне тетрациклинового гепатита. Полифитохол оказывает более выраженное холере-тическое действие по сравнению с гепатофитом.
Ключевые слова: тетрациклиновый гепатит, полифитохол, гепатофит.
MORPHOFUNTIONAL ESTIMATION OF PHARMACOTHERAPEUTIC EFFICIENCY OF BOTANIC REMEDIES HEPATOPHYT AND POLYPHYTOCHOL IN EXPERIMENTAL TETRACYCLINE-INDUCED HEPATITIS
Ya.G. Razuvaeva, S.M. Nicolaev, L.E. Marchaeva, A.O. Zandanov, Z.G. Sambueva (Institute of General and Experimental Biology SB RAS; Buryat State University, Ulan-Ude;
Irkutsk State Institute of Postgraduate Medical Education)
Summary. It is established, that botanic remedies Hepatophyt and Polyphytochol show hepatoprotective activity in experimental tetracycline hepatitis. They prevent degenerative, mesenchymal-inflammatory and necrotic processes and stimulate regeneration of hepatocytes on tetracycline-induced hepatitis background. Polyphytochol shows more expressed choleretic activity in comparison with Hepatophyt.
Key words: tetracycline-induced hepatitis, Polyphytochol, Hepatophyt__________________________
Известно, что лекарственные препараты различных групп (антибиотики, цитостатики и др.) в большинстве случаев обладают побочным действием в виде гепатотоксического эффекта, что обусловлено особенностями кровоснабжения печени и метаболизмом препаратов [1,6,7]. Так, антибиотики тетрациклинового ряда, в частности тетрациклин, относятся к средствам с прямым повреждающим действием на печень и приводят к внутрипеченочному холестазу [2,12].
В связи с этим актуальным является поиск средств, способных повышать резистентность печени к повреждающему действию лекарственных препаратов. Особого внимания заслуживают средства природного происхождения, отличающиеся, как правило, широтой терапевтического действия, малой токсичностью и связанной с этим возможностью их длительного применения. В соответствии с этим на основе прописей тибетской медицины разработаны комплексные растительные средства условно названные полифитохол и гепатофит. Полифитохол получен в форме экстракта сухого из Helichrysum arenarium L., Tanacetum vulgare L., Mentha x piperita L., Glycyrrhiza uralensis Fisch., Urtica dioica L. и Rosa sp. Данное средство, оказывающее желчегонное, умеренное противовоспалительное и спазмолитическое действие, рекомендовано ФК Минздрава РФ (PN 001301/02-2002) для лечения и профилактики заболеваний органов гепатобили-арной системы. Гепатофит представляет собой сумму сухих экстрактов из 7 видов растительного сырья: Inula helenium L., Sophora flavescens Solander, Zingiber officinalis Roscoe, Sambucus sibirica Nakai, Sanguisorba officinalis L., Crataegus sp. и Malus baccata L. [11].
Целью настоящей работы явилась морфофункциональная оценка фармакотерапевтической эффективности растительных средств гепатофита и полифитохола при тетраци-клиновом гепатите.
Материалы и методы
Лекарственный гепатит воспроизводили на 52 белых крысах линии Wistar обоего пола с исходной массой 180-200 г путем внутрижелудочного введения тетрациклина гидрохлорида в дозе 40 мг/кг массы один раз в сутки в течение одного месяца - 30 дней [9]. Животным первой опытной группы одновременно водили per os полифитохол в дозе 0,25 г/ кг (экспериментально-терапевтическая доза) в виде водного раствора 1 раз в сутки в течение 30 дней, животным второй опытной группы - гепатофит в дозе 0,10 г/кг. Крысам третьей опытной группы с введением указанного антибиотика для сравнения вводили отвар антилитогенного сбора, состоящего из коры крушины, листьев мяты перечной, трав
зверобоя и чистотела [10] по аналогичной схеме. Животным контрольной группы одновременно с тетрациклином вводили эквиобъемное количество очищенной воды в аналогичном режиме. Интервалы между введениями тетрациклина гидрохлорида и лекарственных веществ, а также воды в соответствующих группах животных составляли 5 часов. Морфофункциональное исследование печени проводили на 30 сутки с начала опыта.
Для оценки морфофункционального состояния печени подопытных животных использовали ряд гистологических, гистохимических и гистоэнзимологических методик. Для гистологического исследования кусочки печени крыс фиксировали в 10% растворе нейтрального формалина и заливали в парафин. Срезы окрашивали гематоксилином-эозином [4]. Для выявления активности сукцинатдегидрогеназы (СДГ) свежезамороженные срезы, приготовленные на криостате, окрашивали тетразолиевым синим (по Нахласу), для определения содержания гликогена - ШИК-реакцией и нейтральных жиров - Суданом III и IV [4]. На 30 сутки наблюдений проводили морфометрическое исследование печени животных. На микропрепаратах печени крыс в 10 полях зрения в области портальных трактов (ПТ) и центральной вены (ЦВ) подсчитывали количество гепатоцитов: «нормальных», гипертрофированных, двуядерных, с зернистой и жировой дистрофиями и некротизированных. С помощью компьютерной программы «Motic Image 2000» определяли площадь участков желчных пигментов.
Значимость различий между указанными параметрами среди опытной и контрольной групп животных оценивали с помощью непараметрического критерия Манна-Уитни. Различия считали значимыми при р<0,05 [8].
Результаты и обсуждение
Результаты патоморфологических исследований показали, что у животных контрольной группы на 30 сутки введения тетрациклина гидрохлорида в печени наблюдали полнокровие центральных и портальных вен и синусоидальных капилляров, диффузное расширение синусоидальных пространств и скопление в желчных капиллярах и гепатоцитах желчных пигментов, что характерно для холестаза. В зоне ПТ отмечали мезенхимально-клеточную инфильтрацию, а также участки гепатоцитов с зернистой, мелко- и среднекапельной жировой дистрофией. В гепатоцитах, подверженных дистрофическим изменениям, наблюдали уменьшение содержания гликогена и снижение активность СДГ. Данные морфометрических исследований показали (табл. 1), что для тетрациклинового гепатита характерно увеличение доли ге-
Таблица 1
Влияние гепатофита, полифитоxола и препарата сравнения на морфометрические показатели печени белый крыс при тетрациклиновом гепатите
Гепатоциты Группы животных
Интакт Контроль Гепатофит Полифитохол отвар
Область центральной вены
Нормальные, % 58,4±3,85 38,7±2,65 59,7±2,13 57,3±3,63* 51,2±2,04
Гипертрофированные, % 13,6±1,53 1,5±0,19 5,3±0,19 5,7±0,34* 4,7±0,21
Двуядерные, % 18,8±1,15 9,7±1,60 12,0±0,38 12,8±1,07* 11,0±0,21
Зернистой дистрофией, % 4,0±0,38 30,6±4,10 17,0±1,34 15,1±1,40* 19,1±1,02
Жировой дистрофией, % - 2,2±0,42 1,2±0,23 0,2±0,19* 0,9±0,03
Некротизированные, % 5,2±0,57 17,9±1,19 4,7±0,96 9,0±0,67* 12,9±0,96
Область портального тракта
Нормальные, % 64,2±2,30 32,0±2,08 53,8±2,46 59,1±3,01* 54,6±3,12
Гипертрофированные, % 13,2±1,15 1,5±0,38 3,9±0,69 3,2±0,09* 2,8±0,13
Двуядерные, % 13,2±1,53 8,7±0,92 10,4±0,46* 10,4±1,09 8,4±0,23
Зернистой дистрофией, % 3,6±0,19 19,8±5,19 13,0±1,34 13,7±1,21* 15,6±0,94
Жировой дистрофией, % - 20,8±2,26 8,3±1,38 5,6±0,50* 9,4±0,58
Некротизированные, % 5,4±0,57 17,2±1,26 8,8±1,38 7,9±0,48* 9,2±0,18
Примечание: * - различия значимы по сравнению с данными у животных контрольной группы при р<0,05.
патоцитов, подверженных жировой дистрофии. Количество их в области ЦВ увеличивалось в 1,2 раза, а в области ПТ - в 20,8 раз по сравнению с данными у крыс интактной группы.
Это обусловлено тем, что тетрациклины подавляют выработку транспортных белков, обеспечивающих выведение фосфолипидов из гепатоцита, что приводит к развитию жировой дистрофии [12]. В области ЦВ и ПТ наблюдали увеличение в 7,0 и 5,5 раз соответственно количества гепатоцитов, подверженных зернистой дистрофии, и в среднем в 3,3 раза некротизированных гепатоцитов по сравнению с показателями у интактных животных.
На микропрепаратах печени животных, получавших полифитохол и гепатофит в указанных дозах, а также препарат сравнения, наблюдали нарушения микроциркуляции: кровенаполнение центральных и портальных вен, расширение синусоидального пространства, стаз эритроцитов в
Контроль Г епатофит Полифитохол
Рис. 1. Влияние полифитохола и гепатофита на образование желчных пигментов в печени белых крыс при тетрациклиновом гепатите.
капиллярах, а также гепатоциты, подверженные зернистой и жировой дистрофии. Результаты морфометрических исследований показали (табл. 1), что на фоне введения животным полифитохола и гепатофита в области ЦВ количество гепа-тоцитов с зернистой дистрофией снижалось соответственно в 2,0 и 1,8 раза; с жировой дистрофией - в 11,0 и 1,8 раза, число некротизированных гепатоцитов - в 2,0; в области ПТ количество гепатоцитов с зернистой дистрофией - в 1,5 раза, с жировой дистрофией - в 1,5 и 2,5 раза, некротизирован-ных гепатоцитов - в 2,2 и 2,0 раза по сравнению с показателями у животных контрольной группы. На фоне введения
ЛИТЕРАТУРА
1. Белоусов Ю.Б. Общая и частная клиническая фармакокинетика. - М., 2006. - 807 с.
2. Болезни печени и желчевыводящих путей: Руководство
крысам полифитохола и гепатофита (табл. 1) количество двуядерных гепатоцитов в зоне ЦВ увеличивалось соответственно на 32 и 24%, в зоне ПТ - в среднем на 20% по сравнению с контролем. Более того, при введении животным исследуемых фитоэкстрактов число гипертрофированных гепато-цитов в зонах ЦВ и ПТ повышалось в среднем в 3,6 и 2,3 раза соответственно по сравнению с данными у контрольных животных. Увеличение количества двуядерных и гипертрофированных свидетельствует об усилении репаративных процессов в печени животных опытных групп. Подтверждением этому служат также данные ШИК-реакции: содер-
жание гликогена в печени животных, получавших полифитохол и гепатофит, было значительно выше такового в контроле. На фоне введения исследуемых препаратов также отмечалось увеличение активности СДГ в печени животных. Отвар сбора во второй опытной группе крыс уступал по действию.
На фоне введения исследуемых средств скопления желчных пигментов в печени опытных животных встречались значительно реже, и они были значительно меньших размеров по сравнению с таковыми у контрольных животных. При определении площади желчных конгломератов было установлено, что у животных контрольной группы она достигала в среднем 231,6±10,32 мкр2. На фоне введения гепа-тофита данный показатель снижался в 2,1 раза и составлял 107,8±5,97мкр2 (р<0,05), а на фоне введения полифитохола -35,2±1,63 мкр2 (р<0,05) (рис. 1).
Таким образом, результаты проведенных патоморфологических исследований свидетельствуют о гепатозащитном действии поли-фитохола и гепатофита на фоне тетрацикли-нового гепатита. Показано, что исследуемые фитоэкстракты уменьшают некротические, мезенхимально-воспалительные и дистрофические процессы в гепатоцитах, снижают интенсивность воспалительной реакции печени и стимулируют регенерацию печеночных клеток. Введение полифитохола оказывает более выраженное холеретическое действие по сравнению с гепатофитом и препаратом сравнения, скопление желчных пигментов в печени животных. Выраженное фармакотерапевтическое влияние исследуемых средств при данном патологическом состоянии обусловлено содержанием в фитосредствах биологически активных веществ, в основном полифенольной природы. Последние, являясь природными антиоксидантами [3,5], обеспечивают стабилизацию биомембран, повышают энергетический потенциал гепатоцитов, увеличивают сократительную способность околоканальцевых микрофиламетов и тем самым стимулируют синтез и транспорт холатов, экскрецию билирубина и холестерина с желчью, а также ускоряют регенерацию и восстановление функциональной активности гепатоцитов. Сочетание холеретических и гепатопротекторных свойств исследуемых средств аргументирует целесообразность их широкого применения для профилактики и лечения повреждений органов гепатобилиарной системы.
для врачей / Под ред. В.Т. Ивашкина. - М., 2002. - 416 с.
3. Катикова О.Ю., Костин Я.В. Тишкин В.С. Гепатопротекторное действие препаратов растительного происхождения // Эксперим. и клин. фармакол. - 2002. - Т.
65. №1. - С.41-43.
4. Микроскопическая техника: Руководство / Под ред. Д.С. Саркисова и Ю.Л. Перова. - М., 1996. - 544 с.
5. Николаев С.М. Растительные комплексы при повреждениях гепатобилиарной системы. - Новосибирск, 1992. - 155 с.
6. Онучина Е.В., Рожанский А.А., Казакова Р.В., Пошкайте И.А. Лекарственное поражение печени // Сибирский медицинский журнал (Иркутск). - 2007. - № 3. - С.88-91.
7. Полунина Т.Е., Маев И.В. Медикаментозные гепатиты // Фарматека. - 2006. - Т. 127. №12. - С.34-39.
8. Сергиенко В.И., Бондарева И.Б. Математическая стати-
стика в клинических исследованиях. - М., 2006. - 253 с.
9. Скуя Н.А. Хронические заболевания желчных путей (патогенез и лабораторная диагностика). - Л., 1972. - 229 с.
10. Соколов С.Я. Фитотерапия и фитофармакология: Руководство для врачей. - М., 2000. - 976 с.
11. Чехирова Г.В., Самбуева З.Г., Ербаева Л.В., Асеева Т.А. и др. Способ получения средства, обладающего желчегонной и противовоспалительной активностью // Патент РФ № 215591237от 20.11.2000.
12. Шерлок Н., Дули Дж. Заболевания печени и желчных путей. - М., 1999. - 925 с.
Информация об авторах: Улан-Удэ, ул. Сахьяновой, 6, Институт общей и экспериментальной биологии СО РАН, тел. (3012)433713, е-шаП: 1аШг75@ mail.ru, Разуваева Янина Геннадьевна - к.б.н., научный сотрудник лаборатории безопасности биологически активных веществ ИОЭБ СО РАН; Николаев Сергей Матвеевич - д.м.н., профессор, заведующий лабораторией экспериментальной фармакологии ИОЭБ СО РАН; Самбуева Зинаида Гомбожаповна - к.б.н., научный сотрудник лаборатории безопасности биологически активных веществ ИОЭБ СО РАН; Занданов Александр Октябревич - к.м.н., доцент, заведующий кафедрой терапии медицинского факультета БГУ; Мархаева Лариса Эдуардовна -старший преподаватель кафедры терапии медицинского факультета БГУ
© МАХМАДАЛИЕВ Х.Ж., КАЛДЫБАЕВА А.О., АБДУСАМАТОВ А.А., НАБИЕВ А.Н. - 2010
ГЕПАТОЗАЩИТНОЕ ДЕЙСТВИЕ СТИМУСОЛА ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМ ХРОНИЧЕСКОМ ГЕПАТИТЕ
Х.Ж. Махмадалиев1, А.О. Калдыбаева1, А.А. Абдусаматов1, А.Н. Набиев2 ('Ташкентский педиатрический медицинский институт, Республика Узбекистан, и.о. ректора - д.м.н., проф. А.И.
Искандаров, кафедра фармакологии, зав. - д.м.н., проф. А.А. Абдусаматов; Государственный центр экспертизы и стандартизации лекарственных средств Минздрава Республики Узбекистан, директор - д.ф.н.,
проф. Х.К. Жалилов)
Резюме. Изучено влияние стимусола (смесь экстракта корня солодки и мумие) на процессы перекисного окисления липидов, желчеобразовательную и желчевыделительную функцию печени при хроническом гепатите. Установлено, что стимусол у крыс с хроническим гелиотриновым гепатитом оказывал антиоксидантное и антихолестатическое действие. Стимулировал угнетенные гелиотрином холатосинтетические процессы в гепатоцитах. Улучшал экскрецию билирубина и холестерина в желчь. По степени гепатозащитной активности не уступал известному гепатопротектору силибор.
Ключевые слова: стимусол, корень солодки, мумие, силибор, хронический гелиотриновый гепатит, конъюгированные диены, диенкетоны, малоновый диальдегид, каталаза, супероксиддисмутаза, желчевыделение, желчные кислоты, холестерин, билирубин.
THE HEPATOPROTECTIVE EFFECT OF STIMUSOL IN EXPERIMENTAL CHRONIC HEPATITIS
H.J. Mahmadaliev1, A.O. Kaldibaeva1, A.A. Abdusamatov1, A.N. Nabiev2 (‘Tashkent Pediatric Medical Institute of Health Ministry of the Republic Uzbekistan, 2Head Department of Drug and
Medical Equipment Quality Control)
Summary. The influence of stimusol (admixture of extract of radix Glycyrrhiza and mumie) on processes of lipid peroxidation , bile protection and bile - excreting functions of liver, in chronic heliotrine hepatitis has been studied. It was determined that stimusol in rats with chronic heliotrine hepatitis rendered antioxidant and choleretic action, stimulated depressed heliotrine bile acidsynthetic processes in hepatocytes, improved excretion of cholesterol and bilirubin in bile. Hepatoprotective activity of stimusol was the same as in well known hepatoprotector Siliborum.
Key words: stimusol, liquorice, mummie, silibor, chronic heliotrine hepatitis, conjugative diens and dien ketones, catalase, superoxiddismutase, jaundice, bile acids, cholesterol, malonaldehyde, bilirubin.
В генезе заболеваний печени и желчевыводящих путей наряду с цитолитическим синдромом значительная роль принадлежит холестазу и нарушению реологических свойств желчи, приводящих к снижению секреторной и метаболической функции печени, нарушению детоксикации экзо- и эндотоксинов [14]. Патогенетическая терапия гепатопротек-торами направлена на коррекцию этих основных звеньев заболевания.
В настоящее время остается высокой потребность в ге-патопротекторных средствах, которые повышают резистентность печени к действию ксенобиотиков, нормализуют метаболические процессы в условиях напряжения детоксицирующей функции. Исследованиями последних лет подтверждена целесообразность применения фитопрепаратов при гепатитах. Они обладают гепатопротекторными свойствами, в механизме которых отмечено уменьшение синдрома цитолиза гепатоцитов, нормализация или существенное улучшение гликогенообразующей способности печени, усиление де-зинтоксикационной, пигментообразующей и экскреторной функций [6].
В связи с этим, изыскание новых лекарственных средств растительного и природного происхождения, сочетающих
гепатопротекторную и желчегонную активность, является одной из актуальных задач современной медицины.
Целью данной работы явилось изучение влияния сти-мусола на процессы перекисного окисления липидов и желчеобразовательную и желчевыделительную функции печени при хроническом гелиотриновом гепатите.
Материалы и методы
Впервые нами проведены исследования антиоксидантного и желчегонного действия стимусола при хроническом гелиотриновом гепатите. Стимусол - препарат, который является биоактивной композицией, состоящий из сухого экстракта корня солодки голой и мумие в соотношении 1:1. Сухой экстракт корня солодки голой выпускается в виде таблеток фармацевтической промышленностью страны. Мумие - природный смолоподобный продукт, представляющий собой бесформенные куски с неравномерно-ячеистой или гладкой поверхностью, твердой или упругой консистенции, обладающие характерным бальзамическим запахом, производится отечественными фармацевтическими фирмами [11]. Данная биоактивная композиция - стимусол разработана в
