CC BY
54
6. Олиферук, Н. С. Оценка фагоцитарной и бактерицидной активности нейтрофилов и макрофагов / Н. С. Олиферук, А. Н. Ильинская, Б. В. Пинегин // Иммунология. 2005. № 1. С. 10-12.
7. Роскин, Г. И. Микроскопическая техника / Г. И. Роскин, JI Б. Левинсон. М., 1957. 467 с.
8. Balleux, R. Е. The mind and the immune system / R. E. Balleux // Theor. Med. 1995. Vol. 15, №40. P. 387.
Т. И. Бирюкова, Г. В. Брюхин
МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ТУЧНЫХ КЛЕТОК ВИЛОЧКОВОЙ ЖЕЛЕЗЫ ПОТОМСТВА САМОК КРЫС С ХРОНИЧЕСКИМ ПОРАЖЕНИЕМ ПЕЧЕНИ РАЗЛИЧНОГО ГЕНЕЗА
Рассмотрены морфофунщионалъные особенности тучных клеток тимуса потомства самок крыс с хроническим поражением печени различного генеза. Установлено, что в тимусе потомства самок крыс с хроническим поражением гепатобилиарной системы имеет место увеличение числа тучных клеток и усиление их функциональной активности, о чем свидетельствует увеличение индекса гранулярного насыщения, а также индекса дегрануляции.
Тучные клетки, или мастоциты, привлекают все большее внимание исследователей, обусловленное тем, что этот тип клеток широко представлен практически во всех органах и тканях. Они участвуют в развитии воспалительных, иммунных, аллергических реакций и многих других патологических процессов, секретируя разнообразные биологически активные вещества [1]. Тучные клетки в тимусе животных представляют компонент специфического микроокружения, способствующего процессам созревания и дифференциров-ки лимфоцитов [4]. В связи с этим целью данного исследования явилось изучение морфофункциональных особенностей тучных клеток тимуса как центрального органа иммуногенеза у потомства самок крыс с хроническим поражением печени различного генеза.
Материалы и методы, В эксперименте были использованы белые лабораторные крысы-самки «Вистар» и их потомство на 1, 15, 30, 45-е и 60-е сутки достнатального онтогенеза. Все животные были разбиты на две группы — «контрольную» и «опытную». В группу контроля входило 50 животных, а в опытную — 97.
Опытную группу 1 составило потомство животных с хроническим D-галактозаминовым поражением печени, а опытную группу 2 — потомство животных с поражением печени, соответствующим гепатиту А. Моделирование хронического поражения в опытной группе 1 осуществляли введением взрослым половозрелым животным гепатотропного яда D(+) — галактозаминатидрохлорида («Sigma-G0500», США) по общепринятой методике (Н, П. Сугробова и др., 1992), По совокупности морфологических и биохимических критериев данная модель поражения печени соответствует вирусному гепатиту В человека. Для воспроизводства модели поражения печени гепатитом А (опытная группа 2) в экспериментальных условиях применялась методика сенсибилизации животных культурой E. Coli (Б. А. Саков и др., 1967).
Для выявления тучных клеток депарафинированные серийные гистологические срезы окрашивали 0,1 %-м раствором толуидинового синего при pH 4,9 [2]. Для комплексной морфометрической оценки тучноклеточной популяции использовали следующие
критерии: определение среднего количества клеток в единице площади, индекс насыщения гепарином, индекс дегрануляции, определение процентного соотношения клеток с различной степенью насыщения и дегрануляции [2].
Статистическую обработку полученных данных проводили с помощью программы SPSS for Windows И.О.
Результаты. Оценка структурно-функционального состояния популяции тучных клеток тимуса осуществлялась с помощью общепринятых критериев [2]. При этом оценивалось среднее содержание клеток в единице площади, а также процентное соотношение клеток с различной степенью гранулярного насыщения и дегрануляции. Полученные результаты отражены в таблицах.
Как видно из табл. 1, у интактных животных наибольшее содержание тучных клеток отмечается в период новорожденное™, а на последующих этапах онтогенеза имеет место постепенное снижение их числа. У подопытных животных период новорожденности, наоборот, характеризуется наименьшим содержанием тучных клеток на единицу площади, а увеличение количества клеток приходится на период полового созревания у животных опытной группы 1 и к периоду половой зрелости у животных опытной группы 2.
Таблица 1
Количество тучных клеток в тимусе потомства экспериментальных животных в различные сроки постнатальяого периода
Группа животных Количество тучных клеток на 105 мкм2
1-е-сут. 15-е сут. 30-е сут 60-е сут
Контрольная 2,3±0,05 1,8±0Д 2,0±0,3 1,7*0,06
Опытная 1 2,4*0,! 2,0*0,05 2,5±0Д 3,4 * ±0,4
Опытная 2 1,9±0,2 2,6 * ±12 2,6±0,2 2,3±0,2
* Результаты статистически достоверны по сравнению с контролем.
Обращает на себя внимание то, что на всех сроках исследования содержание тучных клеток в тимусе подопытных животных обеих групп превышает таковые в контроле. Исключение составили новорожденные крысята 2-й подопытной группы, у которых данный показатель оказался сниженным по сравнению с контролем. Одним из показателей функционального состояния тучных клеток является критерий насыщения цитоплазмы гранулами биологически активных соединений [3]. Нами был проведен анализ процентного содержания тучных клеток с различной степенью гранулярного насыщения цитоплазмы [2]. При этом мы оценивали количество клеток с очень высокой, высокой, умеренной и слабой степенью гранулярного насыщения. В группе контроля на всех сроках развития преобладают клетки 4-го типа (клетки с очень высокой степенью гранулярного насыщения). Аналогичная закономерность выявлена и у подопытных крысят обеих групп. Исключение составили подопытные крысята первой группы, у которых преобладали мастоциты со слабой степенно гранулярного насыщения.
Следует отметить тот факт, что у интактных крысят после рождения имеет место существенное снижение числа мастоцитов с низкой степенью гранулярного насыщения и, напротив, увеличение числа тучных клеток с высокой степенью гранулярного насыщение На последующих этапах исследования данные показатели стабилизируются. Исключение составили 30-дневные крысята (начало периода полового созревания), у которых выявлено заметное увеличение числа клеток с низкой степенью гранулярного насыщения и, напротив, снижение мастоцитов с высокой степенью гранулярного насыщения. Аналогичная закономерность выявлена и у крысят обеих подопытных групп.
Содержание в тимусе экспериментальных животных тучных клеток различной степени насыщения
Группа Степень насыщения* Содержание клеток различной степени гранулярного насыщения цитоплазмы, %
1 сут 15 сут 30 сут 45 сут 60 сут
Контрольная 1 30*3,1 15±1,2 22±3,2 11±3,2 16±4,0
2 32±2,4 16±1Д 20±2,2 16*1,8 14*2,1
з 1 13±2,2 2Ш,3 23±2,8 22*1,2 15±2,3
4 25±3,8 48±2,7 35*3,4 51*1,4 55±3,1
Опытная 1 1 11*±3,2 25*±ЗД 15*2,3 15*2,3 12*2,4
2 33±3,6 20*±1,4 10**1,6 10**1,2 14*1,8
3 25*±3,5 26±1,7 20*3,2 23*1,4 19±2,1
4 27±6,4 29*±2,3 55*±4Д 52±2,3 55±4Д
Опытная 2 1 2б±4,6 17±3,5 6*±1Д 14*2,1 13*1,0
2 22±2,8 23*±0,5' 11**1,5 12*2,3 10±2,1
3 24*±1,6 15*1,1 27*±ЗД 20*2,1 25**3,2
4 28*23 45±1,2 56*±3,6 54*3,1 52±4,3
о Степень гранулярного насыщения тучных клеток: 1 — очень светлые клетки, 2 — светлые клетки, 3 — темные клетки, 4 — очень темные клетки,
* Результаты статистически достоверны по сравнению с контролем.
При этом почти на всех сроках исследования число тучных клеток с высокой степенью гранулярного насыщения крысят обеих подопытных групп превышает таковое в контроле (рис. 1). Исключение составили крысята в подсосный период, у которых содержание в тимусе тучных клеток с высокой степенью гранулярного насыщения снижено по сравнению с контролем.
Количество клеток с высокой степенью гранулярного насыщения, %
9080706050 -40 -3020100
^ контроль □ опытная группа 1 Щ опытная группа2
Возраст, сутки
Рис. I Количество тучных клеток с высокой степенью гранулярного насыщения
в тимусе экспериментальных животных
Эти результаты находятся в полном соответствии с динамикой изменения индекса гранулярного насыщения тучных клеток как у интактных, так и у подопытных животных обеих групп (табл. 3).
Таблица 3
Индекс насыщения (Л-насыщения) и индекс дегрануляции (Л-деграиуляции) тучных клеток тимуса животных в различные сроки постнатального периода
Группа животных 1-е сут 15-е сут 30-е сут 45-е сут 60-е сут
Л 32 Л п П 32 Л 32 Л 32
Контрольная 1,б± 0,3 1,8± 0,03 2,05± 1,3 1,3± 0,08 1,7± 0,2 1,3± ОД 2Д± од 1,5± ОД 2Д± 0,2 1,3± од
Опытная 1 1,7± од 2± 0,06 1,7± 0,09 1,6± 0,05 2Д± 0,09 1,8± 0,05 2,0± 0,07 1,8± 0,06 2,0± од 1,7± 0,07
Опытная 2 1,5± 0,1 2,3± ОД 1,8± 0,25 1,9± 0,04 2,2* од 1,8± 0,09 1,9± од 1,9± од 2,3 0,09 1,7± 0,2
Другим важным показателем, отражающим функциональное состояние тучных клеток, является их популяционный состав по степени дегрануляции. Нами установлено, что у интактных животных после рождения отмечается увеличение числа клеток с низкой степенью дегрануляции до периода полового созревания, а затем, к 45 суткам,— резкое снижение числа неактивных клеток. Такая же динамика наблюдается и в обеих подопытных группах.
Таблица 4
Содержание в тимусе экспериментальных животных тучных клеток с различной степенью дегрануляции
Группа Степень дегрануляции? Содержание клеток различной степени дегрануляции, %
1-е сут 15-е сут 30-е сут 45-е сут 60-е сут
Контрольная 0 10±ЗД 26±1,2 22±ЗД 23±3,3 28±3,0
1 30±3,3 32±1Д 38±2Д 26±1,5 зз±зд
2 31±3,1 20±1,3 22±3,5 24±1,3 19±3,3
3 29=Ь4,7 22±2,6 18±3,3 27±2,2 20±1Д
Опытная 1 0 4±1,6 15*±3,2 16±1,2 15±1,5 15*±3,4
1 18±3,8 29=Й,4 24*±2,4 24±2Д 30±2,8
2 34±2,2 ■ 2б*±1,7 29±1,3 26±2,2 24±1Д
3 44*±2,3 30*±2,3 31*±3,1 35±1,1 31*±3,1
Опытная 2 0 4±1,2 б*±2,5 17±2,2 10*±1,3 Ю*±1,0
1 16*±1,4 ЗШ,5 2144 22±4,5 24±2Д
2 29±3,8 25±2Д ~1 23±3,2 24±3,2 22±2,2
3 51 *±4,б 38*±1,2 39*±2,6 44*±ЗД 42*±3,3
й Степень дегрануляции тучных клеток: 0 — неактивные клетки, 1 слабая дегрануляция, 2 —умеренная дегрануляция) 3 — сильная дегрануляция,
* Результаты статистически достоверны по сравнению с контролем.
Следует отметить, что на всех сроках развития число неактивных тучных клеток в контроле превышает таковое в опытных группах. Данный показатель напрямую коррелирует с динамикой изменения индекса дегрануляции (табл. 3). При этом число активных тучных клеток в контрольной группе постепенно снижается к периоду полового созревания, а затем происходит увеличение данного показателя к моменту наступления половой зрелости, Аналогичная закономерность выявлена и у крысят обеих подопытных
групп (рис. 2). Обращает на себя внимание тот факт, что у подопытных крысят процент активных тучных клеток выше, чем в контрольной группе.
к 70
I 60
I 50 1 40
i30 § 20
I 10
О
- Хфшпрояь
w опыт 2
90 § 80
I 70 I 60
Й 50 •
S 40
| 30 | 20 Ж ю о
15
30
45
60
Возраст, (утки
15
30
45 60 Возраст, сутки
а б
Рис. 2. Динамит изменения популяции неактивных (а) и активных (б) тучных клеток
у экспериментальных животных
Таким образом, у потомства животных с экспериментальным поражением печени установлено увеличение числа тучных клеток в тимусе и изменение их популяционного состава в сторону увеличения числа тучных клеток с высокой степенью гранулярного насыщения и высокой степенью дегрануляции, что свидетельствует, на наш взгляд, об увеличении функциональной активности мастоцитов.
Список литературы
1. Арташян, О. С. Изучение функциональной активности тучных клеток при иммо-билизационном стрессе / О. С. Арташян, Б, Г. Юшков, Е. А. Мухлынина // Цитология. 2006. Т. 48, № 8. С. 665-668.
2. Линднер, Д. П. Морфометрический анализ популяции тучных клеток / Д. П. Линднер [и др.] // Архив патологии. 1976. Т. 38, № 8. С. 3-14.
3. Фрейдлин, И. С. Клетки иммунной системы / И. С. Фрейдлин, А. А. Тотолян. СПб.:
Наука, 2001. 390 с. „
4. Key role of mast cells and their major secretory products in inflammatory bowel disease // World I Gastroenterology. 2004. Feb. 1. Vol. 10, № 3. P. 309-318.
Д. Р. Жданова, О. В. Николина, К. В. Никушкина
МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ЩИТОВИДНОИ ЖЕЛЕЗЫ ПОТОМСТВА САМОК КРЫС С ХРОНИЧЕСКИМ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫМ ПОРАЖЕНИЕМ ПЕЧЕНИ
Изучены морфофункционалъные особенности щитовидной железы потомства самок крыс с хроническим экспериментальным поражением печени. Выявлено повышение функциональной активности щитовидной железы, о чем свидетелъству-
7аТонепо1Т0тЫ тир°Цит0е и д^Щ>^ядер тироцитов, наблюдающееся на фоне повышения концентрации тироксина.
забшетания яетшюГспмгсГ™ пе*1ина™лш>® патологии являются экстрагенитальные
системы [5]. ’ которых особое место занимают болезни гепатобилиарной
68 у е в К00РДйнации и регуляции деятельности всех других
