CC BY
47
А. А.Серикбаева
МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА КОРЫ НАДПОЧЕЧНИКОВ КРЫС С ДИТИЗОНОВЫМ ДИАБЕТОМ ПРИ ДИАБЕТИЧЕСКОЙ НЕФРОПАТИИ
Кафедра внутренних болезней №2 Карагандинского государственного медицинского университета
Актуальность изучения морфофункцио-нальных характеристик коры надпочечников у больных сахарным диабетом (СД) определяется влиянием глюкокортикоидных гормонов на обмен белков и жиров, повышение процессов глюко-неогенеза. Имеющиеся данные противоречивы, большинство исследователей отмечают достоверное повышение глюкокортикоидной функции коры надпочечников только в период декомпенсации СД, другие считают, что при осложнениях даже во время компенсации и субкомпенсации заболевания отмечается достоверное повышение уровня глюкокортикоидов [3, 4]. В то же время ряд исследователей отмечают повышение уровня кортизола в сыворотке крови у больных СД при артериальной гипертензии [2]. Имеющиеся в литературе данные не дают целостного представления об изменениях в корковом веществе надпочечников, что послужило объектом для изучения возможных морфологических изменений коры надпочечников в эксперименте.
Цель работы - оценка морфометрического и стереометрического состояния коры надпочечников у крыс с дитизоновым диабетом при диабетической нефропатии.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Для изучения морфологического состояния коры надпочечников при экспериментальном ди-тизоновом диабете (Я. А. Лазарис, З. Е. Бавель-ский), проведены опыты на 60 крысах-самцах породы Вистар (половозрелые, вес 200-220 г). Контрольным животным (n=20) однократно вводили в бедренную вену стерильный физиологический раствор в объеме, равном объему дитизона. В опытные группы вошли животные со стойким гипергликемическим состоянием, из которых были сформированы следующие группы животных: I группа (n=20) контроль - крысы интактные; II группа (n=20) - крысы с дитизоновым диабетом, наблюдаемые в течение 60 сут после затравки дитизоном; III группа (n=20) - крысы с дитизоновым диабетом, наблюдаемые в течение 120 сут после затравки дитизоном. Для контроля уровня глюкозы кровь отбирали из хвостовой вены 2 раза в неделю. Уровень глюкозы в крови определяли на приборе «Асси-Chek Active» фирмы Roche» (Германия) c помощью специальных тестирующих полосок этой же фирмы. Все манипуляции с животными проводили в утренние часы с учетом влияния циркадных ритмов.
При гликемии более 11 ммоль/л крысам с
дитизоновым диабетом вводили подкожно инсулин (хумулин-актрапид) из расчета 0,3 ЕД/кг массы тела от одного до двух раз в сут.
Животных умерщвляли путем неполной декапитации под легким эфирным наркозом, согласно международным рекомендациям по проведению медико-биологических исследований с использованием животных [5]. Объектом исследования послужили поджелудочная железа, почки и надпочечники экспериментальных животных. Органы после завершения опыта извлекали, фиксировали в жидкости Буэна и 10% растворе нейтрального формалина, далее проводили в спирте возрастающей концентрации с последующей заливкой в парафин. Депарафинированные срезы толщиной 3-5 мкм окрашивали гематоксилином и эозином для оценки общеморфологической картины. Проводилось морфометрическое и стереометрическое исследования, которые включали в себя измерение ширины коркового слоя надпочечников, клубочковой и сетчатой зоны, диаметра кровеносных сосудов и толщину их стенки для определения сосудистого индекса, а также диаметр ядер и цитоплазмы клеток клу-бочковой и пучковой зоны. Определялся относительный объем интерстиция коркового и мозгового вещества почек, процент склерозированных клубочков и сосудистый индекс для оценки выявленных изменений в почках.
Измерения проводились с помощью измерительного окуляр-микрометра при увеличении 15 и 40. Подсчет всех объемных показателей проводился с помощью сетки Г. Г. Автандилова [1]. Параллельно применяли гистохимический метод определения инсулина в бета-клетках панкреатических островков с помощью псевдоизоцианино-вой реакции. Препараты изучали с помощью люминесцентного микроскопа МЛ-2А в отраженном ультрафиолетовом свете. Интенсивность свечения измеряли цитофотометрической насадкой МФЭЛ-1 и выражали в условных единицах, проводился прямой подсчет количества бета- и альфа-клеток в панкреатических островках. Статистический анализ результатов цифрового материала исследования проводили с использованием программы «STATISTICA» - version 6.0 на компьютере «Intel Core Duo 2,6 ГГЦ», текстовый редактор Microsoft Word 2010. Цифровые значения исследуемых показателей статистически обработаны с вычислением средней арифметической (М), ее ошибки (m). Для определения достоверности различий между средними значениями сравниваемых параметров использовали критерий Стьюдента.
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
Как показало комплексное морфологическое, морфометрическое и стереометрическое исследование у животных после введения дити-зона в эндокринном отделе поджелудочной железы выявлено выраженное уменьшение всех показателей, отражающих функциональное состояние инкреторного отдела поджелудочной железы (табл. 1).
Таблица 1.
Морфометрические показатели эндокринного отдела поджелудочной железы крыс с дитизоновым
диабетом
Группа Vv доля панкреатических островков (%) Количество бета-клеток в островках Интенсивность флюоресценции бета-клеток (у.е.)
I группа (n=20) 1,76±0,004 78,03±3,12 57,66±2,07
II группа (n=20) 0,39±0,02* 6,67±0,41** 11,62±0,91**
III группа (n=20) 0,23±0,02** 3,71±0,27* 6,34±0,45*
* р<0,05; * р<0,01** по сравнению с контрольной группой
При сравнении результатов с показателями в контрольной группе на 60 сут от начала эксперимента резко снижались объемная доля панкреатических островков в 4,5 раза, количество бета-клеток в 11,6 раз и интенсивность флюоресценции в 4,9 раз. На 120 сут от начала эксперимента отмечалось достоверное (р<0,01) уменьшение объемной доли панкреатических островков в 7,6 раза, количество бета-клеток в 21 раз, интенсивность флюоресценции в 9 раз, что свидетельствует о нарушении функционального состояния инкреторного отдела поджелудочной же-лезы с выраженным угнетением инсулиногенеза.
Как показало гистологическое исследование поджелудочной железы, панкреатические островки имели неправильную конфигурацию и плохо контурировались среди структур экзокрин-ного отдела. Синусоидные капилляры панкреати-
ческих островков находились в спавшемся и за-пустеневшем состоянии. Большая часть островков была представлена типичными альфа-клетками с характерными для них морфологическими признаками. В единичных островках, преимущественно в центральной части, можно было определить от 3 до 6 сохранившихся бета-инсулоцитов, которые имели неправильную форму, малые размеры, ядра в них были вакуолизи-рованы. Метохроматическая реакция на инсулин с псевдоизоцином регистрировалась только в единичных бета-инсулоцитах и была слабо выражена, что свидетельствовало о существенном угнетении процессов инсулиногенеза (рис. 1).
На 60 сут дитизонового диабета отмечалось увеличение относительного объема интер-стиция коркового вещества (ОИК) и относительного объема интерстиция мозгового вещества
* % -У А
г J ^ЧГ
■i ^
4?
б
Рис. 1: а) Структура ткани поджелудочной железы, бета-клетки. Контроль, интактная группа. Метахроматическая реакция с псевдоизоцианином, свечение в ультрафиолетовых лучах. Ув.:х400; б) СД. Резкое снижение специфического свечения сохранившихся бета-инсулоцитов в 60 сут. Метахроматическая реакция с псевдоизоцианином. Ув.:х400; в) СД. Сохранившиеся до 5-6 бета-инсулоциты в панкреатическом островке - 120 сут. Окраска гематоксином и эозином. Ув.:х400; г) СД. Единичные бета-инсулоциты в панкреатическом островке 120 сут. Окраска гематоксином и эозином.
Ув.:х400
в
в
Таблица 2.
Морфометрическая характеристика нефросклероза у крыс на разных сроках экспериментального
сахарного диабета
Группа Относительный объем интерстиция коркового вещества (%) Относительный объем интерстиция мозгового вещества (%) Процент склерози-рованных клубочков (%) Сосудистый индекс
I группа (п=20) 13,1±0,47** 21,1±0,70** 0,58±0,01* 0,46±0,01*
II группа (п=20) 24,8±2,45 34,7±2,57 25,9±2,44 1,08±0,03
III группа (п=20) 46,2±3,2* 67,1±2,74* 56,6±2,97* 1,51±0,05*
* р<0,05; ** р<0,01 по сравнению с контрольной группой
(ОИМ) в 1,8 раза и 1,6 раза соответственно по сравнению с контролем за счет нарастания фиб-ропластической реакции. Процент склерозирования клубочков составил 25,9%, увеличился сосудистый индекс в 1,1 раза, что связано, по-видимому, с изменением их стенок в виде фибро-эластоза. Гистологическая картина интимы характеризовалась утолщением, особенно в мелких артериях и артериолах.
Таким образом, картина свидетельствовала о развитии нефросклероза и характеризовалась морфометрическими и стереометрическими показателями, отражающими морфофункцио-нальное состояние почки. На поздних сроках эксперимента (120 сут) ОИК и ОИМ достоверно увеличилось в 3,5 раза и 3,1 раза соответственно по сравнению с контрольной группой. Процент склерозированных клубочков возрос на 56,6%. Клубочки имели характерный вид: их сосудистые пучки превращались в гомогенные образования, которые занимали всю полость капсулы. Отмечалось склерозирование стромы как коркового, так и мозгового вещества с атрофией канальцевого эпителия (рис. 2).
Я? ЖлгЧ
Рис. 2 Склерозирование капсулы клубочка. Диффузно-дистрофические изменения канальцевого эпителия. Окраска гематоксином и эозином. Ув.:х100
При гистологическом и морфометрическом исследовании коры надпочечников отмечалось увеличение ширины коркового слоя за счет гипертрофии клеток клубочковой и пучковой зон, существенно увеличивался диаметр ядер и цитоплазмы. Кортикоциты клубочковой и пучковой зоны выглядели светлыми, отдельные были ваку-олизированы. Ядра были овальной формы с мелкодисперсным хроматином и хорошо выраженны-
ми 1-2 ядрышками, что свидетельствовало о нарастании их функциональной активности (рис. 3).
Рис. 3: а) Кора надпочечников с хорошо дифференцированными слоями. Окраска гематоксином и эозином. Ув. х 400; б) Склерозирование капсулы.
Огрубление и коллагенизация стромы коры надпочечников. Гипертрофия кортикоцитов пучковой зоны с очаговыми дистрофическими изменениями.
Окраска гематоксином и эозином. Ув.:х 400
На 120 сут по сравнению с контролем отмечалось увеличение ширины коркового слоя надпочечника на 15%, диаметра ядер в клубоч-ковой и пучковой зонах на 20 и 8% соответственно. На 60 и 120 сут отмечалось уменьшение объемной доли сосудистого русла на 7% и 21% соответственно по сравнению с контрольной группой, что свидетельствовало о прогрессировании нарушения микроциркуляции, приводящим к нарушению трофики в зависимости от длительности эксперимента. Параллельно с этим в исследуемые сроки увеличился объем соединительной ткани в 1,64 раза и 1,78 раза соответственно по сравнению с контролем, что позволяет предположить трофикоциркуляторные нарушениях в коре
Таблица 3.
Морфометрическая характеристика коры надпочечников крыс с дитизоновым диабетом
Группа Ширина в мкм Диаметр ядер в клу-боч-ковой зоне (мкм) Диаметр ядер в пучковой зоне (мкм) Объемная доля сосудистого русла (%) Объемная доля соединительной ткани (%)
коркового слоя клубочко-вой зоны пучковой зоны
I группа (n=20) 616±0,4 65±0,2 438±0,2 4,5±0,07 5,9±0,026 41,3±0,5 1,4±0,07
II группа (n=20) 620±0,2 66±0,1 439±0,2 5,1±0,08 6,3±0,031 38,6±0,3 2,3±0,11
III группа (n=20) 713±0,9* 69±0,3* 486±2,2 5,4±0,06* 6,4±0,023** 32,5±0,8 2,5±0,08*
* р<0,05; ** р<0,01 по сравнению с контрольной группой
надпочечников и, как следствие, начало заместительного склерозирования.
Анализ полученных данных показал, что при диабетической нефропатии отмечалось изменение коркового слоя надпочечников в виде гипертрофии клубочковой и пучковой зон, увеличения диаметра ядер в этих зонах, что свидетельствовало о повышении функциональной нагрузки органа. Дальнейшее уменьшение объемной доли сосудистого русла и нарастание доли соединительной ткани, по-видимому, приводят к дистрофическим процессам.
ЛИТЕРАТУРА
1. Автандилов Г. Г. Медицинская морфомет-рия //Рук. - М.: Медицина, 1990. - 382 с.
2. Аметов А. С. Инсулиннезависимый сахарный
диабет и артериальная гипертензия. Патогенез. Проблемы управления /А. С. Аметов, И. Ю. Демидова. - М.: «Диа-пресс», 2000. - 35 с.
3. Безверхая Т. П. Глюкокортикоидная функция надпочечников у больных сахарным диабетом // Пробл. эндокринологии. - 1978. - №3. - С. 14 -19.
4. Зверев М. Е. Глюкокортикоидная функция коры надпочечников у больных сахарным диабетом //Здравоохранение Казахстана. - 1987. - С. 34 - 37.
5. Международные рекомендации по проведению медико-биологических исследований с использованием животных //Хроника ВОЗ. - 1985. -Т. 39, №3. - С. 3 - 9.
Поступила 02.11.10
A. A. Serikbayeva
MORPHOFUNCTIONAL CHARACTERISTIC OF ADRENAL CORTEX OF RATS WITH DITIZONIC DIABETES AT DIABETIC NEPHROPATHY
The manual provides a comparative morfostereometric characterization of the adrenal cortex in rats with ditizonic diabetes and diabetic nephropathy. Identified by morphological characteristics suggest that the hypertrophic changes of the adrenal cortex in the early stages are adaptive in nature, in the later stages and dys-
А. А. Сертбаева
ДИАБЕТТ1К НЕФРОПАТИЯ КЕЗ1НДЕ ДИТИЗОНДЫ ДИАБЕТПЕН ЕГЕУК¥ЙРЫЦТАР БУЙРЕК YCTI КАБЫРЫНЬЩ МОРФОФУНКЦИОНАЛДЫК СИПАТТАМАСЫ
Макалада дитизонды диабет мен диабетп нефропатиясы бар егеукуйрыктардыч бYЙрек YCTi безде-ршщ кыртысты кабатыныч салыстырмалы морфостереометриялы сипаттамасы кврсетiлген. Аныкталран морфологиялык белгiлер, бYЙрек Yстi бездер^ч кыртысты кабатыныч гипертрофиялык взгерiстерi алраш-кы сатыларында бешмделген, ал сочгы сатыларында - дистрофиялык сипатка ие екендiгiн мэлiмдеИдi.
Б. М. Садырбекова
ДОППЛЕРОГРАФИЯ В ОЦЕНКЕ АРТЕРИАЛЬНОЙ И ВЕНОЗНОЙ ГЕМОДИНАМИКИ ПЛОДА ПРИ ЗАДЕРЖКЕ ВНУТРИУТРОБНОГО РАЗВИТИЯ
Отделение ультразвуковой диагностики АО «Национальный научный центр материнства и детства» МЗ РК (Астана)
Среди многочисленных методов исследования оценки состояния фетоплацентарной системы наибольшее значение имеет эхография, характеризующаяся неинвазивностью и высокой информативностью, что дает возможность свое-
временно прогнозировать развитие перинатальной патологии, выработать наиболее рациональный план ведения беременности [1]. При изменении в течение беременности тех или иных параметров состояния организмов матери и плода своевременная регистрация изменений и устранение вызвавших их нарушений позволяют уменьшить количество тяжелых перинатальных осложнений [2]. Наиболее частой причиной нарушений со стороны плода во время беременности является фетоплацентарная недостаточность (ФПН), обусловленная морфологическими и функциональными изменениями в плацентарной ткани. Диагностика задержки внутриутробного развития плода (ЗВУР), как следствие хронической ФПН, является одним из сложных в аку-
