МОНОКЛОНАЛЬНЫЕ АНТИТЕЛА В ИССЛЕДОВАНИИ СОСУДИСТОГО КОМПАРТМЕНА СЕЛЕЗЕНКИ ЧЕЛОВЕКА Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

РАЗДЕЛ 2. ТЕОРЕТИЧЕСКИЕ ДИСЦИПЛИНЫ CHAPTER 2. THEORETICAL DISCIPLINE

Т.М. Досаев, Н.С. Ахмад, Д.С. Байгамысова, Б.Ш. Шакенов, А.А. Балапанова, Г.Т. Алжанбекова, С.П. Пернебекова, С.С. Курбаниязова

Казахский национальный медицинский университет имени С.Д.Асфендиярова

Кафедра анатомии Алматы, Казахстан

МОНОКЛОНАЛЬНЫЕ АНТИТЕЛА В ИССЛЕДОВАНИИ СОСУДИСТОГО КОМПАРТМЕНА

СЕЛЕЗЕНКИ ЧЕЛОВЕКА

Резюме. Сравнительный иммуногистохимический анализ маркеров CD31, CD34, Ki67, ERG (ETS-related gene) показал, что наиболее высокоспецифичным маркером для морфологического исследования микроциркуляторного русла селезенки человека является ERG (ETS-relatedgene). Ключевые слова: иммуногистохимия, селезенка, микроциркуляция

Т.М. Досаев, Н.С. Ахмад, Д.С. Байгамысова, Б.Ш. Шакенов, А.А. Балапанова, Г.Т. Алжанбекова, С.П. Пернебекова, С.С. Курбаниязова

С.Ж. Асфендияров атындагы Казац улттыцмедицинаyHueepcumemi Анатомия кафедрасы Алматы, Казахстан

АДАМ К0КБАУЫРЫНЫН, КДНТАМЫРЛЫ Б6ЛШ1Н ЗЕРТТЕУДЕП МОНОКЛОНАЛЬД1 АНТИДЕНЕЛЕР

Туйт. CD31, CD34,Ki67, ERG(ETS-related gene) маркертц салыстырмалы иммуногистохимиялыц талдауы, адам кекбауырынъщ микроциркуляторлы цанайналымын зерттеу ушт ец жогаргы спецификалыцмаркерi болып ERG(ETS-relatedgene) екешн керсетть

Tyürndi свздер: иммуногистохимия, кекбауыр, микроциркуляция

T.M. Dossaev, N.S. Akhmad, D.S. Baigamisova, B.Sh. Shakenov, A.A. Balapanova, G.T. Alzhanbekova, S.P. Pernebekova, S.S. Kurbaniyazova

Asfendiyarov Kazakh national medical university Department of the Anatomy Almaty, Kazakhstan

MONOCLONAL ANTIBODIES IN THE STUDY OF THE VASCULAR COMPARTMENT OF THE HUMAN SPLEEN

Resume. Comparative immunohistochemical analysis of markers CD31, CD34, Ki67, ERG (ETS-related gene) showed that ERG (ETS-relatedgene) is the most highly specific marker for morphological study of the human spleen microvasculature. Key words: immunohistochemistry, spleen, microcirculation

БИОМЕДИЦИНА

BIOMEDICINE

УДК 611.01-611.41

Введение. До настоящего времени селезенка представляет собой единственный орган в организме человека с не установленной окончательно системой микроциркуляции [1]. Так, в селезенке отсутствует маргинальный синус, характерный для селезенки животных, и функцию которого, как принято считать, выполняют многочисленные венозные синусы красной пульпы. Терминальные артериолы красной пульпы селезенки продолжаются в капилляры, часть которых имеют открытые концы, из которых кровь поступает в селезеночные тяжи. Пространства в ретикулярной соединительной ткани без эндотелия в селезеночных тяжах осуществляют открытый

компонент кровообращения в селезенке. Некоторые исследователи полагают, что большая часть крови проходит через открытый компонент микроциркуляторного русла [2]. Тогда как другие считают, что закрытый тип кровообращения в селезенке составляет 80-90% кровотока [3]. Для решения этих вопросов авторы использовали различные маркеры (СЭ34, СЭ141, С0271) для четкого выявления эндотелия капилляров и венозных синусов, а также трехмерное моделирование микроциркуляторного русла селезенки человека. Тем не менее, до сих пор прямая связь между капиллярами

и венозными синусами не была убедительно продемонстрирована [3].

Исходя из того, что клетки опухолей экспрессируют хотя бы один из маркеров сосудистой дифференцировки некоторые исследователи, для выявления особенностей структурной организации микроциркуляторного русла селезенки человека, использовали маркеры, предназначенные для выявления различных опухолей [4]. Цель исследования. Нами была поставлена цель -методами иммуногистохимии определить наиболее информативные маркеры для выявления эндотелия капилляров красной пульпы селезенки. Материал и методы. Исследование выполнено на парафиновых блоках селезенки от десяти взрослых людей из фонда кафедры анатомии КазНМУ им. С. Асфендиярова.

Серийные парафиновые срезы толщиной 5 мкм фиксированной формалином селезенки

окрашивались иммуногистохимически

моноклональными антителами против CD31, CD34, Ki67, ERG (ETS-related gene). Демаскировку

осуществляли в растворе буфера pH 9,0 в аппарате PT LINK DAKO в течение 20 минут при температуре +97С. Постановку реакции проводили в Autostainer Link 48 DAKO с использованием системы визуализации En Vision Flex+Mouse (Link). Подкраска En Vision FLEX HEMATOXYLIN.

Дегидратация в 3-х сменах спирта этилового и просветление в Q-ксилоле. Заключение в покровную среду MOUNT-QUICK. Для контроля часть срезов окрашивалась гематоксилином и эозином. Результаты исследования. CD 31- один из основных белков межклеточных контактов эндотелиальных клеток. Часто используется как маркёр эндотелия при иммуногистохимических исследованиях. В меньших количествах выявляется на

циркулирующих тромбоцитах, моноцитах, нейтрофил ах и на некоторых типах Т-клеток. В паренхиме селезенки человека экспрессия маркера CD31 выявлялась в основном в артериолах лимфоидных узелков и реже в эндотелии некоторых венозных синусов. В артериальных капиллярах экспрессия CD31 не выявлялась (Рисунок 1).

Рисунок 1 - Селезенка человека. Реакция на маркер CD31

CD34 - это белок, который обычно вырабатывается клетками внутри кровеносных сосудов, иммунными клетками и поддерживающими клетками. Он также может вырабатываться опухолевыми клетками. CD34 широко рассматривается как маркер сосудистых эндотелиальных клеток -

предшественников. Свойства эндотелиальных клеток CD34 + часто связаны с гемопоэтическими

клетками, поскольку оба типа клеток могут быть выделены из периферической крови с использованием CD34 в качестве антигена. В селезенке человека экспрессия CD 34 носила очаговый характер в эндотелии отдельных венозных синусов и не выявлялась в артериолах и капиллярах красной пульпы (Рисунок 2).

Наиболее известным среди тканевых маркеров является Ю-67. Он используется в качестве универсального маркера пролиферации при оценке роста злокачественных опухолей. Экспрессия Ю-67

является независимым показателем прогноза рецидива и выживаемости у больных. Существует прямая корреляционная зависимость между количеством опухолевых клеток, экспрессирующих

Ю-67 и наличием простатической

интраэпителиальной неоплазии. В селезенке человека маркер Ю-67 проявлял высокую экспрессию на лимфоцитах в Т-зависимой зоны лимфоидных узелков и не выявлялся в эндотелии

артериол лимфоидных узелков и капиллярах красной пульпы селезенки. Так же отсутствовала экспрессия в эпителиальных клетках венозных синусов (Рисунок

3).

W

«. 1 -» ч

» " - «w

» >,.- i . • .*

Рисунок 3 - Селезенка человека. Реакция на маркер Ki-67.

Ген ERG (ETS-related gene) синтезируемый эпителиальными клетками нормальной простаты, относится к числу онкогенов, который достоверно высоко экспрессируется при раке предстательной железы.

В нашем исследовании использование ERG (ETS-related gene) показало высокую экспрессию в

эндотелиальных клетках капилляров красной пульпы и позволило проследить продольные срезы капилляров на длительном протяжении (до 160 мкм в длину), заканчивавшихся открытыми концами в паренхиму красной пульпы и изливающие клетки крови в пространства селезеночных тяжей (Рисунок 4).

Рисунок 4 - Селезенка человека. Реакция на маркер ERG (ETS-related gene).

Обсуждение. Анализ препаратов показал, что наиболее четко и убедительно прослеживались разветвления терминальных артериол только на препаратах с положительной экспрессией ERG в эндотелиальных клетках.

Как показало наше исследование, маркер ERG (ETS-related gene) проявляет высокую экспрессию в эпителиальных клетках микрососудистого русла селезенки, что позволяет использовать его при изучении красной пульпы селезенки. Вывод. Таким образом, в результате проведенного исследования нами было установлено, что наиболее высокоспецифичным маркером для

морфологического исследования

микроциркуляторного русла селезенки человека является маркер ERG (ETS-related gene).

Вклад авторов. Все авторы принимали равносильное участие при написании данной статьи. Конфликт интересов - не заявлен. Данный материал не был заявлен ранее, для публикации в других изданиях и не находится на рассмотрении другими издательствами.

При проведении данной работы не было финансирования сторонними организациями и медицинскими представительствами. Финансирование - не проводилось.

Авторлардьщ улесь Барлык; авторлар осы ма;аланы

жазуга тен, дэрежеде катысты.

Мудделер цацтьгеысы - мэлiмделген жо;.

Бул материал баска басылымдарда жариялау ушш

бурын мэлiмделмеген жэне бас;а басылымдардын,

карауына усынылмаган.

Осы жумысты журпзу кезшде сырт;ы уйымдар мен медициналык; екшджтердщ каржыландыруы жасалган жо;.

Царжыландыру жYргiзiлмедi.

Authors' Contributions. All authors participated equally

in the writing of this article.

No conflicts of interest have been declared.

This material has not been previously submitted for

publication in other publications and is not under

consideration by other publishers.

There was no third-party funding or medical representation in the conduct of this work.

Funding - no funding was provided.

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1 Steiniger B.S. et all.,2018. Locating human splenic capillary in virtual reality. Sci Rep 8:15720. https://doi.org/10.1038/s41598-018-34105-3

2 Steiniger B.S. et all.,2021. Exploring human splenic red pulp vasculature in virtual reality. Histochemistry and Cell Biology, v.155, 341-354

3 Buffet P.A. et all.,2011. The pathogenesis of malaria in humans: insights from splenic physiology. Blood, 2011, v.117, n2, 381-392

4 Neuhauser TS, Derringer GA, Thompson LD, FanburgSmith JC, Miettinen M, Saaristo A, Abbondanzo SL. Splenic angiosarcoma: a clinicopathologic and immunophenotypic study of 28 cases. Mod Pathol. 2000;13(9):978-987.

Контактные данные

Досаев Тасбулат Молдахметович, профессор кафедры анатомии КазНМУ имени С.Д. Асфендиярова E-mail: dosaev.t@kaznmu.kz Orcid.org/0000-0001-5220-0061