CC BY
64
УДК 616-006-092.9:615.831:616-073.524
E.V Zagaynova1, M.V Shirmanova12, M.A. Sirotkina1, L.B. Snopova1,1.V Balalaeva2, M.S. Kleshnin3, A.G. Orlova3, I.V Turchin3, L.A. Sedakova4, V.I. Romanenko4, E.M. Treshalina4
MONITORING PHOTOSENSITIZER ACCUMULATION IN TUMOR BY DIFFUSE FLUORESCENCE TOMOGRAPHY
Nizhny Novgorod State Medical Academy 2N.I. Lobachevsky State University of Nizhny Novgorod 3Institute of Applied Physics RAS, Nizhny Novgorod 4N.N. Blokhin Russian Cancer Research Center RAMS, Moscow
ABSTRACT
The investigation is concerned with in vivo monitoring of photosensitisers accumulation in tumor and their biodistribution by fluorescence diffuse tomography (FDT). Two-dimensional fluorescence images have been acquired by a FDT device. Based on these images we could assess dynamics of accumulation of photosens, 5ALA induced by protoporfirin IX and photoditazin in grafted mouse tumors. Selective photosensitiser accumulation and fluorescence in tumor increased FDT signal and provided good visualization of a growing part of tumor. The maximum accumulation of a drug in tumor was 3 - 4 hours after injection for 5ALA, 4 - 24 hours for photosens, and 3 - 4 hours for photoditazine. We have also shown the possibility to detect biodestribution of photosensitisers in normal tissues (skin and abdominal cavity organs). The results were confirmed by a standard spectroscopic method.
Key words: fluorescence diffuse tomography, photosensitisers, tumor model, in vivo.
E.B. Загайнова1, М.В. Ширманова12, М.А. Сироткина1, Л.Б. Снопова1, И.В. Балалаева2, М.С. Клешнин3, А.Г. Орлова3, И.В. Турчин3, Л.А. Седакова4, В.И. Романенко4, E.M. Трещалина4
МОНИТОРИНГ НАКОПЛЕНИЯ ФОТОСЕНСИБИЛИЗАТОРОВ В ОПУХОЛИ МЕТОДОМ ДИФФУЗИОННОЙ ФЛЮОРЕСЦЕНТНОЙ ТОМОГРАФИИ
1 Нижегородская государственная медицинская академия 2Нижегородский государственный университет им. Н.И. Лобачевского
3Институт прикладной физики РАН, Москва 4ГУ РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН, Москва
РЕЗЮМЕ
Исследование включало мониторинг накопления в опухоли и биораспределение фотосенсибилизаторов в условиях in vivo методом диффузионной флюоресцентной томографии (ДФТ). На установке для ДФТ получены двумерные изображения, которые позволили неинвазивно и прижизненно оценить динамику накопления фотосенса, 5-Ала-индуцированного Пп1Х и фотодитазина в перевиваемых опухолях мышей. Показано, что избирательное накопление фотосенсибилизаторов опухолевой тканью и их флюоресценция приводят к возрастанию ДФТ-сигнала и отчетливой визуализации растущей части опухоли. Показано, что максимум накопления фотосенсибилизаторов в опухоли составляет для аласенса 3 - 4 ч, для фотосенса — до 24 ч, для фотодитазина — 2 - 3 ч. Продемонстрирована возможность оценки биораспределения фотосенсибилизаторов в нормальных тканях (коже, органах брюшной полости). Результаты подтверждены стандартными спектрометрическими измерениями.
Ключевые слова: диффузионная флюоресцентная томография, фотосенсибилизаторы, перевивные опухоли, in vivo.
ВВЕДЕНИЕ
диагностики опухолей и служит для контроля накопления
Флюоресцентная диагностика (ФД) и фотодинамиче- и выведения из тканей, а инициированные ими свободно-ская терапия (ФДТ) с применением фотосенсибилизаторов радикальные реакции обеспечивают противоопухолевый разной химической природы находят все большее распро- эффект.
странение в онкологии [1; 2; 8; 9]. При этом способность Ключевыми свойствами фотосенсибилизатора, опреде-
фотосенсибилизаторов флюоресцировать лежит в основе ляющими эффективность ФД и ФДТ, являются высокая се-
лективность накопления в опухоли, быстрое выведение из нормальных тканей, интенсивное поглощение и флюоресценция в красной или ближней ИК области спектра [11]. Высокая селективность накопления фотосенсибилизатора в опухоли минимизирует вероятность повреждения здоровых тканей при проведении ФДТ. Интенсивное поглощение и флюоресценция фотосенсибилизатора в красном и ближнем ИК диапазоне, где биологические ткани наиболее прозрачны, открывает перспективу диагностики и лечения глубоко локализованных очагов опухоли.
В настоящее время для оценки диагностических свойств и исследования фармакокинетики фотосенсибилизаторов в доклинических испытаниях используются в основном спектрометрические методы. Так, конфокальная микроспектрометрия позволяет определять концентрации и локализацию флюоресцирующих соединений в единичных клетках и тканевых срезах [4], спектрофотометрия — регистрировать флюоресценцию гомогенизированных образцов органов и тканей [7; 17]. Для измерения флюоресцентного сигнала с поверхности изолированных органов, тканей и опухоли in vivo активно применяется метод локальной флюоресцентной спектроскопии [12; 15]. Однако наиболее актуальной остается задача разработки методов визуализации флюоресценции на уровне целого организма, которые позволяли бы получать информацию о биораспределении фотосенсибилизаторов прижизненно и неинвазивно и учитывать индивидуальные особенности при планировании фотодинамической терапии.
Перспективным методом визуализации является диффузионная флюоресцентная томография (ДФТ). Метод ДФТ основан на получении in vivo информации о флюоресцирующих объектах в биоткани на глубине до нескольких сантиметров с миллиметровым разрешением на основе обработки сигнала от прошедшего через ткань лазерного излучения [19].
Цель настоящей работы состояла в выявлении возможностей прижизненного мониторинга накопления в опухоли и исследовании биораспределения фотосенсибилизаторов в условиях in vivo методом ДФТ.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ Животные, опухолевые модели
Исследование выполнено на 65 мышах массой 20 - 25 г В качестве моделей опухолевого роста использовались 2 перевиваемые опухоли различного гистогенеза: эпидермо-идная карцинома легкого Льюис (LLC) у мышей-гибридов BDF1 и плоскоклеточный рак шейки матки (РШМ-5) у мышей CBA. Опухоли трансплантировали подкожно в область левой лопатки взвесью опухолевой ткани в стерильной питательной среде. Исследование начинали на 10 - 11-й день после трансплантации, когда объем опухоли составлял не менее 100 мм3.
Фотосенсибилизаторы
В работе исследована динамика накопления в опухоли и биораспределение 3 отечественных фотосенсибилизаторов 2-го поколения, которые в настоящее время применяются в клинике для флюоресцентной диагностики и фотодинами-ческой терапии рака: фотосенс, аласенс и фотодитазин. Все они имеют интенсивное поглощение и флюоресценцию в
красной области спектра, где биологические ткани обладают наибольшей прозрачностью, что открывает перспективу визуализации глубоко локализованных очагов опухоли. Фотосенсибилизаторы вводили в терапевтических дозах с учетом коэффициента пересчета доз для мышей.
Фотосенс (ФГУП «ГНЦ «НИОПИК») — раствор смеси натриевых солей сульфированного фталоцианина алюминия в дистиллированной воде. Максимум поглощения 675 нм, максимум флюоресценции 685 нм [16]. Фотосенс вводили внутривенно в дозе 1 мг/кг веса животного.
Аласенс (ФГУП «ГНЦ «НИОПИК») — 5-аминолевули-новая кислота. Аласенс является предшественником фотоак-тивного соединения протопорфирина IX (Пп1Х). Максимум поглощения Пп1Х 633 нм, максимум флюоресценции 705 нм [8]. Аласенс вводили перорально в дозе 400 мг/кг
Фотодитазин (ООО «Вета-Гранд») — глюкаминовая соль хлорина Е6 [5]. Максимум поглощения 662 нм, максимум флюоресценции 675 нм. Фотодитазин вводили внутривенно в дозе 25 мг/кг
Диффузионный флюоресцентный томограф
Исследование выполнено на диффузионном флюоресцентном томографе ФДТ-2М, созданном в Институте прикладной физики Российской академии наук [19]. В ДФТ-установке источниками излучения являются лазеры красного и ближнего ИК-диапазона. Облучение объекта происходит на длине волны возбуждения флюоресцирующих веществ, а детектирование сигнала только в спектре флюоресценции. Регистрация флюоресцентного сигнала осуществляется с помощью охлаждаемого высокочувствительного фотоэлектронного умножителя (рис. 1). Для разделения спектров облучения и флюоресценции используется комбинация интерференционных и абсорбционных фильтров. Сканирование объекта обеспечивается синхронным пошаговым перемещением источника и детектора, расположенных в планарной конфигурации («на просвет»). Для процедуры сканирования животное после предварительной депиляции помещается между 2 стеклянными пластинами (расстояние между пластинами — 1,2 мм) с легким прижатием. Конструкция установки позволяет производить замену
Рис. 1. Внешний вид сканирующей системы ДФТ-установки
Рис. 2. ДФТ-мониторинг биораспределения Пп1Х у мыши с РШМ-5:
а — контроль до введения; б — 1 ч; в — 3 ч; г — 5 ч после перорального введения аласенса в дозе 400 мг/кг. Размер изображений 35 X 50 мм. Область опухоли выделена пунктиром. Флюоресценция в органах брюшной полости показана стрелками.
источников и фильтров в системе сканирования и подбирать оптимальные по своим оптическим характеристикам для конкретного флюорофора.
Источники и фильтры в сканирующей системе ДФТ-установки были подобраны в предварительном эксперименте с учетом спектральных характеристик фотосенсибилизаторов. Для возбуждения флюоресценции использован полупроводниковый лазер с длиной волны 635 нм, мощностью на объекте 20 - 30 мВт. Регистрация сигнала, прошедшего через объект, производилась в диапазоне 660 - 760 нм (фильтр HQ 710/50). Область сканирования составляла 35 X 50 мм, шаг сканирования — 1 мм, время получения одного изображения — порядка 10 мин.
ДФТ-изображения получали in vivo до введения фотосенсибилизатора (контроль) и затем каждые 30 мин по достижении максимума накопления фотосенсибилизаторов в опухоли. Максимум накопления оценивался визуально по интенсивности ДФТ-сигнала в области опухолевого очага. Известно, что эндогенная флюоресценция биологических тканей в красной области спектра крайне мала [10]. Поэтому регистрируемая флюоресценция в данной области может быть обусловлена только экзогенными маркерами, а получаемые ДФТ-изображения дают прямую информацию о накоплении фотосенсибилизаторов. Длительность наблюдения в зависимости от фотосенсибилизатора составляла 3 - 24 ч.
Для подтверждения результатов ДФТ использовали данные, полученные методом спектрометрии органов и тканей ex vivo. В точке максимума накопления фотосенсибилизатора в опухоли животных умерщвляли передозировкой эфирного наркоза. На волоконном спектрометре QE65000 анализировали флюоресценцию образцов опухоли, кожи и органов брюшной полости в диапазоне 660 - 760 нм при возбуждении лазером на 635 нм. Контролем служили ткани животных, которым фотосенсибилизаторы не вводили.
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
На установке для ДФТ выполнен прижизненный мониторинг накопления в опухоли и биораспределения фото-сенса, 5-АЛК-индуцированного Пп1Х и фотодитазина. В ходе проведенного исследования были получены двумерные флюоресцентные изображения мышей с привитыми опухолями 2 типов через различное время после введения фотосенсибилизаторов. Контролем служили изображения тех же животных до введения препаратов.
На ДФТ-изображениях светлые тона соответствуют наибольшей интенсивности регистрируемого сигнала. Контрольные ДФТ-изображения всегда выглядят темными, имеют низкую интенсивность сигнала, хотя отдельные участки, например, натянутая кожа подмышечных впадин, немного светлее. Это связано с попаданием на детектор возбуждающего лазерного излучения, проходящего сквозь тонкие участки тела.
В качестве примера in vivo мониторинга накопления в опухоли и биораспределения фотосенсибилизатора на рис. 2 представлены результаты эксперимента с введением аласенса мыши линии CBA с РШМ-5. Опухоль располагалась на левой лопатке и к началу наблюдения имела объем 290 мм3. Ввиду селективного накопления в опухолевых клетках Пп1Х через 1 ч после введения аласенса область опухоли становится более светлой (рис. 2, б). Постепенно визуальный контраст опухоли увеличивается и достигает максимума к
4-5 ч наблюдения (рис. 2, г). На полученных изображениях отмечается слабая флюоресценция в коже, а также достаточно интенсивная флюоресценция в органах брюшной полости, поскольку фотосенсибилизатор накапливается как в опухолевых клетках, так и в неопухолевых тканях. При этом свечение начинается с 1 ч после введения аласенса и постепенно возрастает в течение последующих 3 - 5 ч.
Важно, что мониторинг накопления в опухоли и биора-
ФОТОДИНАМИЧЕСКАЯ ТЕРАПИЯ 33
Рис. 3. ДФТ-изображение мыши с РШМ-5: а — контроль; б — через 3 ч после внутривенного введения фотосенса в дозе 1 мг/кг.
Размер изображений 35 X 50 мм. Область опухоли выделена пунктиром. Флюоресценция в органах брюшной полости показана стрелкой.
Рис. 4. ДФТ-изображение мыши с РШМ-5: а — контроль; б — через 4 ч после внутривенного введения фотодитазина в дозе 25 мг/кг.
Размер изображений 35 X 50 мм. Область опухоли выделена пунктиром. Флюоресценция в органах брюшной полости показана стрелкой.
спределения фотосенсибилизаторов методом ДФТ выполняется прижизненно на одном и том же животном.
Наиболее яркие изображения опухолей получены с применением фотосенса (рис. 3). При внутривенном введении фотосенс быстро поступает в кожу и органы брюшной полости и изменения на изображениях в виде увеличения интенсивности ДФТ-сигнала регистрируются уже через 30 мин после введения препарата. При этом даже очень малые количества фотосенсибилизатора в коже на фоне ее высокой прозрачности иногда приводят к очень яркой засветке, которая мешает дифференцировать опухоль. Это особенно характерно для первых 2 ч наблюдения. Время максимального накопления препарата в опухоли составляет 3 - 24 ч. В органах брюшной полости ДФТ-сигнал достигает наибольших значений к 3 ч наблюдения. При этом интенсивность его как в опухоли, так и в органах брюшной полости была значительно выше, чем в случае аласенса.
В случае фотодитазина флюоресценция в опухоли и органах брюшной полости отмечается через 30 мин после
введения. Характерно стабильное достижение максимума накопления фотодитазина в разных опухолевых моделях к
2 - 3 ч после введения. Наибольшая интенсивность сигнала в органах брюшной полости наблюдается к 2 - 4 ч (рис. 4). Значения ДФТ-сигнала ниже, чем при применении фото-сенса. Тем не менее благодаря высокой избирательности накопления фотодитазина в опухоли по сравнению с окружающими тканями можно легко идентифицировать новообразование на изображениях. Флюоресценция кожи очень слабая.
Проведенное исследование позволило установить, что метод ДФТ может обеспечить прижизненное наблюдение динамики накопления фотосенсибилизаторов в опухоли, коже и органах брюшной полости животного.
Полученные результаты подтверждены спектрометрическим исследованием изолированных органов и тканей в максимуме накопления фотосенсибилизаторов. Полученные спектры опухолевой ткани с характерными пиками фотосенсибилизаторов представлены на рис. 5. Видно, что наи-
Длина волны, н б
Рис. 5. Спектры флюоресценции опухолевой ткани ex vivo без введения (пунктирная линия) и в максимуме накопления фотосенсибилизаторов (сплошная линия):
а — аласенса (400 мг/кг); б — фотосенса (1 мг/кг), в — фотодитазина (25 мг/кг). Спектры измерены при возбуждении 635 нм и нормированы на величину диффузно рассеянного в ткани сигнала возбуждающего лазерного излучения на 635 нм.
Рис. 6. Сравнение 2 опухолевых моделей
на 11-й день после перевивки:
а, б — ДФТ-изображения через 2 ч после
введения фотосенса в дозе 1 мг/кг;
в, г — гистологические образцы (окраска
гематоксилином и эозином, х200).
а, в — РШМ-5; б, г — LLC.
1 — периферическая растущая зона опухоли; 2 — центральная зона некроза.
большая интенсивность флюоресценции с максимумом на 685 нм характерна для фотосенса. Для аласенса и фото-дитазина значения интенсивности примерно одинаковы, а максимумы лежат на 705 и 675 нм соответственно. Уровень флюоресценции в контроле без фотосенсибилизатора не превышал 150 отн.ед.
Существенных различий в динамике накопления фотосенсибилизаторов в 2 опухолевых моделях LLC и РШМ-5 методом ДФТ выявлено не было. Однако имелись отличия в ДФТ-изображениях указанных опухолей, связанные с их гистологическими особенностями (рис. 6). Известно, что при подкожной трансплантации LLC растет относительно быстро и довольно рано некротизируется. Поэтому, как правило, на ДФТ-изображениях центральная часть данной опухоли, соответствующая зонам некроза, не накапливает фотосенсибилизатора и выглядит темной, тогда как периферическая активно растущая зона опухоли накапливает фотосенсибилизатор и выглядит светлой. Изображение РШМ-5 всегда относительно однородное и светлое. Типичные ДФТ-изображения 2 опухолей продемонстрированы на рис. 6
Гистологическое исследование образцов опухолевой ткани подтвердило наличие крупных некротических очагов в LLC и их отсутствие в РШМ-5 (рис. 6, б, в).
Результаты по динамике накопления 3 различных фотосенсибилизаторов в экспериментальных опухолях, полученные методом ДФТ, совпадают с литературными данными, полученными традиционными методами. Так, в работах с использованием 5-АЛК [18; 20] указывается, что максимальная интенсивность флюоресценции в опухоли в связи с накоплением Пп1Х наблюдается в период 3 - 6 ч после введения препарата. В этот же период отмечается максимальное содержание в опухоли фотодитазина. Согласно данным [3; 14] фотосенс характеризуется более длительным временем накопления в опухолевой ткани. Несмотря на то, что высокая интенсивность флюоресценции фотосенса в опухоли отмечается уже через 1 ч после введения, накопление его в опухоли происходит в течение 24, а по некоторым сведени-
ям даже 48 ч и зависит от индивидуальных особенностей опухоленосителя.
На полученных ДФТ-изображениях видна флюоресценция в области брюшной полости. Это соответствует сведениям о том, что все фотосенсибилизаторы вызывают специфическую флюоресценцию в нормальных органах и тканях. По данным [18; 20] высокий уровень флюоресценции Пп1Х регистрируется в кишечнике, печени и почках. Для фотосенса в фазе накопления в опухоли характерна флюоресценция в печени и селезенке [3; 7]. В случае фото-дитазина наряду с опухолью отмечается флюоресценция преимущественно в кишечнике [6; 13]. Несмотря на то, что анатомические особенности животного не дают возможности идентифицировать органы по топологии ДФТ-сигнала на двумерных изображениях, ДФТ-исследование позволяет прижизненно оценить уровень флюоресценции и динамику накопления фотосенсибилизаторов в нормальных тканях.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
Данная работа демонстрирует возможность прижизненного мониторинга накопления в опухоли и нормальных тканях органических фотосенсибилизаторов разной химической природы методом ДФТ.
На установке для ДФТ нами получены двумерные флюоресцентные изображения, которые позволили неинвазивно и прижизненно оценить динамику накопления фотосенса, 5-Ала-индуцированного Пп1Х и фотодитазина в перевиваемых опухолях мышей — эпидермоидной карциноме легкого Льюис и плоскоклеточном ороговевающем раке шейки матки РШМ-5. Избирательное накопление фотосенсибилизаторов опухолевой тканью и их флюоресценция привели к возрастанию ДФТ-сигнала и отчетливой визуализации растущей части опухоли. С помощью нового метода ДФТ установлено, что среди фотосенсибилизаторов фотосенс характеризуется самым длительным периодом накопления в опухоли — до 24 ч. Пп1Х достигает максимума накопления в опухоли за 3 - 4 ч, а фотодитазин — за 2 - 3 ч. Быстрое и
стабильное достижение максимума накопления в опухоли, характерное для фотодитазина, имеет несомненное клиническое значение, поскольку позволяет спланировать наиболее эффективное терапевтическое воздействие. Динамика накопления фотосенсибилизаторов в 2 изученных опухолях практически не отличалась. Все фотосенсибилизаторы вызывали флюоресценцию в органах брюшной полости. При этом наибольшая интенсивность ДФТ-сигнала в опухоли, коже и органах брюшной полости была характерна для фото-сенса, что связано с наиболее высоким квантовым выходом флюоресценции. Полученные результаты подтверждаются спектрометрическими измерениями и хорошо согласуются с литературными данными.
Метод ДФТ может стать незаменимым инструментом при доклиническом изучении новых фотосенсибилизаторов и позволит в более короткое время и на ограниченном числе животных получить высокоинформативные сведения об основных биологических характеристиках новых препаратов для ФД и ФДТ.
Работа выполнена при поддержке грантов РФФИ (№№ 07-02-01262, 07-02-01146, 08-02-99049), Программы президиума РАН «Фундаментальные науки — медицине» и Федерального Агентства по Науке и Инновациям (проект № 2.522.11.2002).
Авторы выражают благодарность Шаховой Наталье Михайловне, Булгаковой Наталье Николаевне за помощь на различных этапах работы.
ЛИТЕРАТУРА
1. Вакуловская Е.Г., Стратонников А.А., Таболиновская Т.Д., Кондратьева Т.Т. Фотодинамическая терапия у больных раком слизистой оболочки полости рта, ротоглотки и нижней губы // Сибирский онкологический журнал. - 2005. - 14(2). - С. 13-17.
2. Гельфонд М.Л. Фотодинамическая терапия в онкологии // Практическая онкология. - 2007. - 8(4). - С. 204-210.
3. Морозова Н.Б., Якубовская Р.И., Деркачева В.М., Лукьянец Е.А. Биораспределение препарата фталосен-са у интактных животных и животных с опухолями различного гистогенеза // Российский онкологический журнал. - 2007. - 1. - С. 37-43.
4. Назарова А.И., Феофанов А.В., Кармакова Т.А. и др. Влияние заместителей на фотохимические и биологические свойства 13,15-№циклоимидных производных хлорина р6 // Биоорганическая химия. - 2005.
- 31(5). - С. 1-14.
5. Патент РФ 2276976 Фотосенсибилизатор и способ его получения / Пономарев Г.В., Тавровский Л.Д., Зарецкий А.М. и др. — Опубл. 27.05.2006.
6. Решетников А.В., Иванов А.В., Абакумова О.Ю. и др. Оценка биологических свойств новых фотосенсибилизаторов хлоринового ряда // Использование лазеров для диагностики и лечения заболеваний. Научноинформационный сборник (приложение к бюллетеню “Лазер-информ”). - 2001. - 3. - С. 34-40.
7. Смирнова З.С., Оборотова Н.А., Макарова О.А. и др. Эффективность и фармакокинетика липосомаль-
ной лекарственной формы фотосенсибилизатора «Фотосенс» на основе сульфофталоцианина алюминия // Химико-фармацевтический журнал. - 2005 -39(7). - С. 3-6.
8. Соколов В.В., Чиссов В.И., Филоненко Е.В. и др. Флюоресцентная диагностика раннего центрального рака легкого // Пульмонология. - 2005. - 1. - С. 107-116.
9. Цыб А.Ф., Каплан М.А. Возможности и перспективы применения фотодинамической терапии // Российские Медицинские Вести. - 2002. - 2. - С. 19-24.
10. Чиссов В.И., Соколов В.В., БулгаковаН.Н., Филоненко Е.В. Флюоресцентная эндоскопия, дермаскопия и спектрофотометрия в диагностике злокачественных опухолей основных локализаций // РБЖ. - 2003. -2(4). - С. 45-56.
11. Якубовская Р.И., Казачкина Н.И. Кармакова Т.А. и др. Скрининг и медико-биологическое изучение отечественных фотосенсибилизаторов // Росс. Хим. Журн.
- 1998. - 5, XLII. - С. 17-23.
12. Bulgakova N.N., Kazachkina N.I., Sokolov V.V., Smirnov V V Local fluorescence spectroscopy and detection of malignancies using laser excitation at various wavelengths // Laser Physics. - 2006. - 16(5). - P. 889-895.
13. Corner C.J., Ferrarlo A. Tissue Distribution and photosensitizing properties of mono-L-aspartyl chlorin e6 in a mouse tumor model // Cancer Research. - 1990. - 50. - P. 3985-3990.
14. Kazachkina N.I., Zharkova N.N., Fomina G. et al. Pharmocokinetical study of Al- and Zn-sulphonated phthalocyanines // Proc. SPIE. - 1996. - 2924. - P. 233242.
15. Loschenov V.B., Konov V.I., ProkhorovА.М. Photodynamic therapy and fluorescence diagnostics // Laser Physics. -2000. - 10(6). - P. 1188-1207.
16. Lukyanets E.A. Phthalocyanines as photosensitizers in the photodynamic therapy of cancer // J. Porphyrins Phthalocyanines. - 1999. - 3. - P. 424-432.
17. Schneckenburger H., Lang M., Kollner T. et al. Fluorescence spectra and microscopic imaging of porphyrins in single cells and tissues // Lasers in Medical Science. - 1989. - 4(159). - P. 159-166.
18. Sroka R., Beyer W., Gossner L. et al. Pharmacokinetics of 5-aminolevulinic-acid-induced porphyrins in tumour-bearing mice // Journal of Photochemistry and Photobiology B: Biology. - 1996. - 34. - P. 13-19.
19. Turchin I.V., Balalaeva I.V., Vasil’ev R.B. et al. Imaging of QDs-labeled tumors in small animals by fluorescence diffuse tomography // Laser Phys. Lett. - 2006. - 3(4). -P. 208-211.
20. Venosa G.D., Batlle A., Fukuda H. et al. Distribution of
5-aminolevulinic acid derivatives and induced porphyrin kinetics in mice tissues // Cancer Chemother Pharmacol.
- 2006. - 58. - P. 478-486.
21. Поступила 01.07.2008.
