CC BY
21
МЕДИЦИНСКИЙ
АЛЬМАНАХ
II. Инфекции, связанные с оказанием медицинской помоши: микробиологические аспекты. Проблема резистентности возбудителей к антимикробным препаратам
УДК: 579.861.2:616.9-053.2
Код специальности ВАК: 14.02.02
МОНИТОРИНГ БИОПЛЕНКООБРАЗУЮШЕИ СПОСОБНОСТИ У ЦИРКУЛИРУЮЩИХ В ДЕТСКОМ СТАЦИОНАРЕ КОАГУЛАЗОНЕГАТИВНЫХ СТАФИЛОКОККОВ
Е. В. Беляева, Г. Б. Ермолина, Е. В. Борискина, Д. В. Кряжев, И. С. Шкуркина,
ФБУН «Нижегородский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. акад. И. Н. Блохиной»
Дата поступления 09.06.2018
Беляева Елена Вячеславовна - e-maii: [email protected]
Способность бактерий формировать биопленки рассматривается в настоящее время как один из факторов их вирулентности. Цель исследования: анализ пленкообразующей способности коагу-лазонегативных стафилококков, циркулирующих в детском стационаре, и ее взаимосвязи с другими факторами патогенности (гемолитической и протеолитической активностями). Материалы и методы. Исследованы способность к формированию биопленки, протеолитическая и гемолитическая активности у 540 штаммов коагулазонегативных стафилококков, выделенных от пациентов и из внешней среды детского стационара в 2016-2018 гг. Результаты и выводы. Проявления факторов патогенности у доминирующих среди коагулазонегативных стафилококков видов S. haemolyticus и S. epidermidis имели разнонаправленный характер. Способность к пленкообразованию у штаммов S. haemolyticus была достоверно выше, а у штаммов S. epidermidis ниже, чем у других видов исследованных стафилококков. Штаммы S. epidermidis проявляли более высокий уровень протеолитической активности, чем другие изоляты. Уровень гемолитической активности S. haemolyticus был достоверно выше, чем у других видов исследованных стафилококков. Корреляционный анализ факторов патогенности коагулазонегативных стафилококков с определением коэффициента ранговой корреляции Спирмена показал, что между гемолитической активностью и пленкообразующей способностью существует умеренная прямая связь. Была выявлена обратная умеренная корреляционная связь между протеолитической и гемолитической активностями, протеолитической активностью и пленкообразованием. Предположена роль высокой способности к формированию биопленки у штаммов S.haemolyticus в циркуляции этих патогенов в стационаре.
Ключевые слова: коагулазонегативные стафилококки, формирование биопленки,
протеолитическая и гемолитическая активности.
The ability of bacteria to form biofilms is currently considered as one of the factors of their virulence. Purpose of the study was to analyze the film - forming ability of coagulase-negative staphylococci circulating in the children's hospital, and its relationship with other pathogenicity factors (hemolytic and proteolytic activities). Materials and methods. The ability to form a biofilm, proteolytic and hemolytic activity in 540 strains of coagulase-negative staphylococci isolated from patients and from the external environment of the children's hospital in 2016-2018. Results and conclusions. The expression of these virulence factors by dominant among coagulase-negative staphylococci species S. haemolyticus and S. epidermidis was different. The ability to film formation in S. haemolyticus strains was significantly higher, and in S.epidermidis strains lower than in other species of the studied staphylococci. Strains of S. epidermidis showed a higher level of proteolytic activity than other isolates. The level of hemolytic activity of S. haemolyticus was significantly higher than in other types of staphylococci. Correlation analysis of virulence factors coagulase-negative staphylococci by determining the Spearman rank correlation coefficient showed that between hemolytic activity and film-forming ability there is a moderate direct relationship. The inverse moderate correlation between proteolytic and hemolytic activities, proteolytic activity and film formation was revealed. The role of high ability to form a biofilm in S. haemolyticus strains in the circulation of these pathogens in the hospital is suggested.
Key words: coagulase-negative staphylococci, biofilm formation, proteolytic and hemolytic activities.
Введение
Проблема образования биопленок различными видами бактерий широко обсуждается в последнее время. Особенное внимание исследователей привлекают в этом отношении этиопатогены инфекций, связанных с оказанием медицинской помощи (ИСМП), поскольку сформированные ими биопленки на медицинской аппаратуре и различных поверхностях способствуют персистенции и активной циркуляции бактерий в стационаре [1-3]. Считается, что до 80% всех бактериальных инфекций человека связаны с образованием биопленок [4]. Во многом
это обусловлено особенностями свойств микроорганизмов, формирующих биопленку: способностью передачи информации между клетками, различной метаболической активностью клеток в биопленке, снижением чувствительности к антибактериальным препаратам, возможностью избегать воздействия иммунной системы [5]. Способность бактерий формировать биопленки рассматривается в настоящее время как один из факторов их вирулентности, при этом разные виды условно-патогенных микроорганизмов обладают различной способностью
AI
SSM
к биопленкообразованию [6]. Наряду с этим возбудители ИСМП обладают целым рядом признанных факторов патогенности, среди которых важное место занимают токсины, гемолизины, внеклеточные ферменты различной специфичности, компоненты клеточной стенки и др. [7]. В связи с этим представляет несомненный интерес исследование совокупности факторов патогенности, присущих госпитальным штаммам, в том числе формирования биопленки. Среди возбудителей ИСМП группа коагулазонегативных стафилококков (CoNS) привлекает внимание именно благодаря способности прикрепляться к самым различным полимерным материалам, обсеменять практически любые инородные тела (венозные катетеры, артериовенозные шунты для гемодиализов, протезы суставов, сосудистые трансплантанты и др.), что может обеспечивать их этиологическую роль в развитии многих поражений (кожные инфекции, конъюктивиты, синуситы, тонзиллиты, отиты, пневмонии, инфекции мо-чевыводящих путей, артриты суставов, остеомиелиты, эндокардиты,сепсис и многие другие), особенно у лиц с ослабленным иммунитетом [8-10]. К такой группе риска относятся новорожденные и дети грудного вскармливания, находящиеся в стационаре [11]. В ряде исследований, проведенных в различных городах России, было показано, что в этиологической структуре гнойно-септических инфекций новорожденных в детских стационарах преобладали бактерии рода Staphylococcus, лидирующее положение среди которых занимали коагулазонега-тивные стафилококки [12-14].
Цель работы: анализ пленкообразующей способности коагулазонегативных стафилококков, циркулирующих в детском стационаре, и ее взаимосвязи с другими факторами патогенности (гемолитической и протеолитической активностями).
ТАБЛИЦА 1.
Распределение исследованных штаммов с учетом источника выделения
Материалы и методы
В работе были исследованы 540 штаммов коагулазонегативных стафилококков, выделенных в 2016-2018 гг. в детском стационаре г. Н. Новгорода и отнесенных к видам S. epidermidis, S. haemolyticus, S. hominis и S. warneri с помощью рутинных методов и методом времяпролетной MALDI-TOF масс-спектрометрии на масс-спектрометре Autoflex speed (Bruker Daltonics, Германия) с использованием программного обеспечения MALDI Biotyper 3.0 [15]. Культуры были выделены от детей возраста от 1 часа до 28 суток (с конъюнктивы глаз, из зева, носа, ушей, кожных складок и пупочных ранок новорожденных при поступлении в стационар и в ходе лечения, а также с интубацион-ных трубок и катетеров пациентов ОРИТ, из крови, спинномозговой жидкости и промывных вод желудка), а также из грудного молока родильниц, с рук медперсонала и из смывов с манипуляционных столиков.
В качестве факторов патогенности были определены протеолитическая активность по гидролизу казеина при рН 8,0 с использованием внеклеточных экстрактов CoNS [16], гемагглютинирующие свойства штаммов при выращивании на 5%-ом кровяном агаре [17]. Об уровне гемолитической активности каждого штамма судили по радиусу зоны гемолиза вокруг колонии с вычетом радиуса самой колонии и расценивали как очень слабый (до 1 мм), слабый (<1,5 мм), средний (2-2,5 мм), высокий (>3 мм).
Способность к формированию биопленки [18] оценивали по прилипанию клеток к лункам пластикового планшета и интенсивности их окрашивания кристалвиолетом, которая измерялась в единицах оптической плотности (ОП) при длине волны 540 нм. Степень пленкообразования определяли по коэффициенту k, рассчитанному как отношение разности суммарной оптической плотности ОП540 опытных образцов и контрольных к суммарной ОП540 выросших в
№№ Источник выделения Число выделенных штаммов
Всего S. epidermidis S. haemolyticus S. hominis S. warneri
1 Раневое отделяемое 186 96 74 12 4
2 Отделяемое конъюнктивы глаз 77 48 25 4 0
3 Отделяемое верхних дыхательных путей 163 46 98 14 5
4 Кровь 26 21 1 4 0
5 Спинномозговая жидкость 17 5 9 0 3
6 Смывы с интубационныхтрубок 21 2 17 2 0
7 Смывы с катетеров 4 2 2 0 0
8 Промывные воды желудка 23 4 18 1 0
9 Грудное молоко 9 8 1 0 0
10 Внешняя среда 14 2 8 0 4
ТАБЛИЦА 2.
Распределение доминирующих в детском стационаре видов коагулазонегативных стафилококков по способности к пленкообразованию
Виды Общее количество штаммов Способность к пленкообразованию
Отсутствует (k < 2) Умеренная(k = 2-5) Высокая (k = 5-10) Сверхвысокая (k > 10)
Кол-во штаммов % Кол-во штаммов % Кол-во штаммов % Кол-во штаммов %
S. epidermidis 234 33 14,1 174 74,4 27 11,5 - -
S. haemolyticus 253 3 1,2 71 28,1 141 55,7 38 15,0
S. hominis 37 2 5,4 21 56,8 12 32,4 2 5,4
S. warneri 16 - - 10 62,5 6 37,5 - -
МЕДИЦИНСКИЙ
АЛЬМАНАХ
лунках планшета клеток до окрашивания. Пленкообразующими считали культуры, если значения k превышали 5 или 10 (высокая и сверхвысокая степени пленкообразования) либо находились в пределах от 2 до 5 (умеренная степень), остальные оценивались как непленкообразующие.
Статистическую обработку полученных результатов проводили с использованием программ Microsoft Excel и Biostat 2009. Определяли показатель средних величин (М), стандартную ошибку средних величин этих показателей (m), достоверность различий показателей в сравниваемых группах с использованием t-критерия Стьюдента, коэффициент корреляции по Спирмену. Различия считали достоверными при р<0,05.
Результаты и их обсуждение
В предыдущей работе нами было показано, что среди циркулирующих в детском стационаре в 2016 г. коагулазо-негативных стафилокков преобладали S. epidermidis и S. haemolyticus, также отмечались случаи выделения S. hominis и S. warneri [15]. Исследование изолятов CoNS из этого стационара в течение 2,5 лет подтвердило эти данные: доминирующими культурами остались два вида -S. epidermidis и S. haemolyticus, на третьем и четвертом месте по частоте встречаемости находились S. hominis и S. warneri, также были выявлены в единичных количествах S. lugdunensis, S. simulans, S. hyicus, S. capitis, S. cohnii. Исследование факторов патогенности клинических изолятов проводили у представителей видов CoNS, наиболее часто встречающихся в детском стационаре (таблица 1). В видовой структуре CoNS различных локусов в основном преобладал S. epidermidis, однако из отделяемого зева, носа, ушей, промывных вод желудка, смывов с интубационных трубок и с объектов внешней среды в 2-9 раз чаще выделялись штаммы S. haemolyticus.
Способность к формированию биопленки наблюдалась у 85,9% штаммов S. epidermidis, 98,8% S. haemolyticus, 94,6% S. hominis и всех исследованных штаммов S. warneri (таблица 2). При этом основная доля изолятов S. epidermidis, S. hominis и S. warneri проявляли умеренную способность к пленкообразованию, а 70,7% штаммов
S. haemolyticus - высокую и сверхвысокую способность. Следует отметить, что 37,8% штаммов S. hominis также отличались высокой способностью к формированию биопленки. Средние значения степени пленкообразования k у штаммов S. haemolyticus были достоверно выше, а у штаммов S. epidermidis достоверно ниже, чем у других видов CoNS (таблица 3). Различия в способности формирования биопленки могут быть связаны с уровнем экспрессии других факторов вирулентности бактерий.
Внеклеточная протеолитическая активность (ПА) является одним из факторов патогенности бактерий, обеспечивающих за счет гидролиза белковых субстратов их инвазию в ткани макроорганизма и защиту от опсонизации и воздействия различных факторов неспецифического и специфического иммунитета [16, 19]. Проведенное нами исследование ПА 285 клинических изолятов CoNS показало, что в большинстве случаев их протеолитические свойства не были высокими (таблица 4). Лишь у 30 культур (10,5% от общего числа исследованных штаммов) были выявлены значения ПА от 1,0 до 4,9 е.а./мл, более чем у половины культур CoNS (51,6%) - низкие значения ПА (0,1-0,9 е.а./мл), а у 108 культур (37,9%) - очень низкие значения ПА (менее 0,1 е.а./мл). Средние значения ПА были достоверно выше у штаммов S. epidermidis, чем у других видов CoNS (таблица 5). Штаммы S. hominis также отличались более высоким уровнем ПА по сравнению с культурами S. haemolyticus и S. warnen.
Наличие гемолизинов у стафилококков считается важным признаком их вирулентности. Гемолитическая активность (ГА) является видовым признаком S.haemolyticus и характерна для культур S. epidermidis, S. hominis, S. warneri, однако по выраженности этого признака культуры могут различаться. В нашем исследовании высокой ГА обладали 85,1% штаммов S. haemolyticus, 25,0% S. warneri, 18,9% S. hominis и 15,2% S. epidermidis, средней ГА - 9,5%, 6,3%, 48,7% и 34,2% штаммов соответственно. Слабая гемолитическая активность была выявлена у 68,8% S. warneri, 41,6% S. epidermidis, 27,0% S. hominis и 4,9% S. haemolyticus. У двух штаммов S. hominis, одного S. haemolyticus и
ТАБЛИЦА 3.
Показатели пленкообразования исследованных штаммов коагулазонегативных стафилококков
Виды Степень пленкообра зования (k) Оценка достоверности разницы в значениях k (p)
S. epidermidis -S. haemolyticus S. epidermidis -S. hominis S. epidermidis -S. warneri S. haemolyticus -S. hominis S. haemolyticus -S. warneri
S. epidermidis 3,50 ± 0,11 0,000001 0,002584 0,012939 0,000004 0,001870
S. haemolyticus 7,02 ± 0,21
S. hominis 4,82 ± 0,42
S. warneri 5,03 ± 0,60
ТАБЛИЦА 4.
Распределение доминирующих в детском стационаре видов CoNS по протеолитической активности
Виды Общее количество штаммов Значения протеолитической активности (ПА)
<0,1 е.а./мл 0,1-0,9 е.а./мл 1,0-4,9 е.а./мл
Кол-во штаммов % Кол-во штаммов % Кол-во штаммов %
S. epidermidis 144 10 6,9 109 75,7 25 17,4
S. haemolyticus 105 78 74,3 25 23,8 2 1,9
S. hominis 24 11 45,8 10 41,7 3 12,5
S. warneri 12 9 75,0 3 25,0 - -
AI
SSM
22 штаммов (9,1%) S. epidermidis гемолитические свойства отсутствовали. Средняя величина ГА была достоверно выше у S. haemolyticus, чем у других видов CoNS (таблица 6).
Учитывая, что образование биопленок и экспрессия генов вирулентности у многих бактерий регулируется общей системой «Quorum Sensing», нами был проведен корреляционный анализ изученных факторов патогенности CoNS с определением коэффициента ранговой корреляции Спирмена. В целом, для всех штаммов CoNS оказалось характерным наличие прямой умеренной корреляции между гемолитической активностью и способностью к формированию биопленки (rs=0,464, p=0,01), что же касается их протеолитиче-ской активности, то здесь наблюдалась обратная умеренная корреляция со способностью к пленкообразованию (rs=-0,493, p=0,01). Такая же тенденция была выявлена и во взаимосвязи гемолитической и протеолитической активностей - обратная умеренная корреляция или обратная связь средней силы по шкале Чертока (rs=-0,51, p=0,01). Возможно, наличие такого агрессивного фактора патогенности как гемолизины снижает необходимость энергетических затрат клетки на продукцию внеклеточных протеолитических ферментов, либо протеиназы стафилококков способны в какой-то степени инактивировать собственные гемолизины. Наличие сильной связи между пленкообразующей и гемолитической активностями было отмечено для культур Pseudomonas aeruginosa, изолированных из раневого отделяемого и мокроты [3]. Для клинических изолятов Burkholderia cepacia была характерна высокая протеолитическая активность при различных степенях пленкообразования, что не позволяло выявить корреляцию между этими факторами патогенности [20]. Нами ранее была отмечена высокая пленкообразующая способность у штаммов S.aureus и низкая - у CoNS, изолированных из носоглотки практически здоровых людей [21]. В настоящем исследовании среди CoNS, выделенных со слизистых оболочек верхних дыхательных путей пациентов детского стационара с ослабленным иммунитетом, преобладали S.haemolyticus, характеризующиеся высокой способностью к формированию биопленки, коррелирующей с их гемолитическими свойствами. Среди немногочисленных изолятов CoNS из смывов с интубационных трубок и внеш-
ней среды стационара также доминировали культуры S. haemolyticus, среди изолятов CoNS из очагов поражения на коже новорожденных доля S. haemolyticus составляла 39,8%. Следует отметить, что ранее при расследовании вспышки гнойно-септических инфекций в одном из акушерских стационаров г. Нижнего Новгорода был выявлен большой процент выделения стафилококков от новорожденных, при этом большинство культур, изолированных из наружного слухового прохода и пупка, относились к виду S. haemolyticus [22]. Можно предположить, что циркуляция культур S. haemolyticus в детском стационаре связана с экспрессивностью их биопленкообразования.
Выводы
1. Способность к формированию биопленки была обнаружена у более 90% исследованных штаммов четырех видов коагулазонегативных стафилококков, циркулирующих в детском стационаре. Основная доля изолятов S. epidermidis, S. hominis и S. warneri обладали умеренной способностью к пленкообразованию, а 70,7% штаммов S. haemolyticus и 37,8% штаммов S. hominis - высокой. Показатели пленкообразования у штаммов S.haemolyticus были достоверно выше, а у штаммов S. epidermidis достоверно ниже, чем у других видов CoNS.
2. Исследованные культуры коагулазонегативных стафилококков в основном отличались низкими значениями протеолитической активности. Уровень ПА штаммов S. epidermidis был достоверно выше, чем у других видов CoNS, а штаммы S.hominis проявляли более высокую ПА, чем S. haemolyticus и S. warneri.
3. У большинства культур S. haemolyticus показатели гемолитической активности были высокими, S. hominis и S. epidermidis - средними и слабыми, S. warneri - слабыми. Средняя величина ГА была достоверно выше у S. haemolyticus, чем у других видов CoNS.
4. Выявлена умеренная прямая корреляция между гемолитической активностью и пленкообразующей способностью исследованных штаммов CoNS и обратная умеренная корреляция между протеолитической и гемолитической активностями, протеолитической активностью и пленкообразованием.
ТАБЛИЦА 5.
Показатели протеолитической активности исследованных штаммов CoNS
Виды Средние значения ПА (е.а./мл) Оценка достоверности разницы в значениях ПА (p)
S. epidermidis -S. haemolyticus S. epidermidis -S. hominis S. epidermidis -S. warnen S. haemolyticus -S. hominis S. haemolyticus -S. warneri
S. epidermidis 0,68 ± 0,04 0,000001 0,003483 0,000001 0,005487 0,007274
S. haemolyticus 0,13 ± 0,03
S. hominis 0,39 ± 0,09
S. warneri 0,11 ± 0,04
ТАБЛИЦА 6.
Показатели гемолитической активности исследованных штаммов CoNS
Виды Средняя величина ГА (мм) Оценка достоверности разницы в значениях ГА (p)
S. epidermidis - S. haemolyticus S. epidermidis -S. hominis S. haemolyticus - S. hominis S. haemolyticus - S. warneri
S. epidermidis 1,6 ± 0,1 0,002976 0,046505 0,014240 0,004689
S.haemolyticus 4,0 ± 0,8
S. hominis 2,0 ± 0,2
S. warneri 1,6 ± 0,3
МЕДИЦИНСКИЙ
АЛЬМАНАХ
ЛИТЕРАТУРА
1. Акимкин В.Г., Тутельян А.В. Актуальные направления научных исследований в области инфекций, связанных с оказанием медицинской помощи, на современном этапе. Здоровье населения и среда обитания. 2018. № 4 (301). С. 46-50.
Akimkin V.G., Tutel'yan A.V. Aktual'ny'e napravleniya nauchny'x issle-dovanij v oblasti infekcij, svyazanny'x s okazaniem medicinskoj pomoshhi, na sovremennom e'tape. Zdorov'e naseleniya i sreda obitaniya. 2018. № 4 (301). S. 46-50.
2. Корниенко М.А., Копыльцов В.Н., Шевлягина Н.В. и др. Способность стафилококков различных видов к образованию биопленок и их воздействие на клетки человека. Молекулярная генетика, микробиология и вирусология. 2016. № 1. С. 18-25.
Kornienko M.A., Kopyl'cov V.N., Shevlyagina N.V. i dr. Sposobnost' stafilokokkov razlichny'x vidov k obrazovaniyu bioplenok i ix vozdejstvie na kletki cheloveka. Molekulyarnaya genetika, mikrobiologiya i virusologiya. 2016. № 1. S.18-25.
3. Кузнецова М.В., Николаева Н.В., Розанова С.М., Карпунина Т.И. Формирование биопленок нозокомиальными штаммами Pseudomonas aeruginosa. Журнал микробиологии. 2011. № 4. С. 8-14.
Kuznecova M.V., Nikolaeva N.V., Rozanova S.M., Karpunina T.I. Formirovanie bioplenok nozokomial'ny'mi shtammami Pseudomonas aeruginosa. Zhurnal mikrobiologii. 2011. № 4. S. 8-14.
4. Марданова А.М., Кабанов Д.А, Рудакова Н.Л., Шарипова М.Р. Биопленки: основные методы исследования: учебно-методическое пособие. Казань: К(П)ФУ. 2016. 42 с.
Mardanova A.M., Kabanov D.A, Rudakova N.L., Sharipova M.R. Bioplenki: osnovny'e metody issledovaniya: uchebno-metodicheskoe posobie. Kazan': K(P)FU. 2016.42 s.
5. Лямин А.В., Боткин Е.А., Жестков А.В. Методы выявления биопленок в медицине: возможности и перспективы. Клиническая микробиология и антимикробная химиотерапия. 2012. Т. 14. № 1. С. 17-22.
Lyamin A.V., Botkin E.A., Zhestkov A.V. Metody' vy'yavleniya bioplenok v medicine: vozmozhnosti i perspektivy'. Klinicheskaya mikrobiologiya i antimikrobnaya ximioterapiya. 2012. T. 14. № 1. S. 17-22.
6. Hoiby N., Ciofu O., Johansen H.K. et al. The clinical impact of bacterial biofilms. International Journal of Oral Sciences. 2011. № 3 (2). P. 55-65.
7. Руководство по медицинской микробиологии. Частная медицинская микробиология и этиологическая диагностика инфекций /под ред. А.С. Лабинской, Н.Н. Костюковой, С.М. Ивановой. М.: Изд-во БИНОМ. 2012. 1152 с.
Rukovodstvo po medicinskoj mikrobiologii. Chastnaya medicinskaya mikrobiologiya i e'tiologicheskaya diagnostika infekcij/pod red. A.S. Labinskoj, N.N. Kostyukovoj, S.M. Ivanovoj. M.: Izd-vo BINOM. 2012. 1152s.
8. Воронина О.Л., Кунда М.С., Дмитренко О.А. и др. Оценка видового разнообразия коагулазоотрицательных стафилококков, выделенных в стационарах Российской Федерации в 2009-2010 гг. Журнал микробиологии. 2011. № 1. С. 3-8.
Voronina O.L., Kunda M.S., Dmitrenko O.A. i dr. Ocenka vidovogo raznoobraziya koagulazootricatel'ny'xstafilokokkov, vy'delenny'x v stacionarax Rossijskoj Federacii v 2009-2010 gg. Zhurnal mikrobiologii. 2011. № 1. S. 3-8.
9. Широкова И.Ю. Эпидемиологические и микробиологические особенности инфекций, обусловленных коагулазоотрицательными стафилококками: автореф. дис. ... канд. мед. наук. Н. Новгород. 2014. 23 с.
Shirokova I.YU. E'pidemiologicheskie i mikrobiologicheskie osobennosti infekcij, obuslovlenny'xkoagulazootricatel'ny'mistafilokokkami:avtoref. dis.... kand. med. nauk. N. Novgorod. 2014. 23 s.
10. Наумкина Е.В., Матущенко Е.В., Абросимова О.А. и др. Микробиологический мониторинг как основа эпидемиологического надзора и антимикробной терапии в условиях многопрофильного стационара. Клиническая лабораторная диагностика. 2018. Т.63(2). С. 113-118.
Naumkina E.V., Matushhenko E.V., Abrosimova O.A. i dr. Mikrobiologicheskij monitoring kak osnova e'pidemiologicheskogo nadzora i antimikrobnoj terapii v usloviyax mnogoprofil'nogo stacionara. Klinicheskaya laboratornaya diagnostika. 2018. T.63(2). S. 113-118.
11. Klingenberg C. et al. Persistent strains of coagulase-negative staphylococci in a neonatal intensive care unit: virulence factors and invasiveness. Clinical Microbiology and Infection. 2007. Vol. 13 (11). P.1100-1111.
12. Благонравова А.С., Воробьева О.Н., Ковалишена О.В. и др. Эпидемиологические и микробиологические аспекты госпитальных гнойно-септических инфекций новорожденных, обусловленных коагулазоотрицательными стафилококками. Медицинский альманах. 2009. № 2. С. 72-75.
BlagonravovaA.S., Vorob'evaO.N., KovalishenaO.V. idr. E'pidemiologicheskie i mikrobiologicheskie aspekty' gospital'ny'x gnojno-septicheskix infekcij novorozhdenny'x, obuslovlenny'x koagulazootricatel'nymi stafilokokkami. Medicinskij al'manax. 2009. № 2. S. 72-75.
13. Гриценко В.А., Бирюкова Т.В., Вялкова А.А., Иванов Ю.Б. Видовая структура и характеристика биопрофиля стафилококков - возбудителей перинатальной инфекционно-воспалительной патологии у детей Оренбурга. Журнал микробиологии. 2014. № 5. С. 90-95.
Gricenko V.A., Biryukova T.V., VyalkovaA.A., IvanovYu.B. Vidovayastruktura i xarakteristika bioprofilya stafilokokkov - vozbuditelej perinatal'noj infekcionno-vospalitel'noj patologii u detej Orenburga. Zhurnal mikrobiologii. 2014. № 5. S. 90-95.
14. Кузнецова М.В., Карпунина Т.И., Авдеева Н.С. Мониторинг колонизации условно-патогенной микрофлорой новорожденных в период пребывания в лечебных учреждениях. Медицинский альманах. 2011. № 6. С. 156-159.
Kuznecova M.V., Karpunina T.I., Avdeeva N.S. Monitoring kolonizaciiuslovno-patogennoj mikrofloroj novorozhdenny'x v period preby'vaniya v lechebny'x uchrezhdeniyax. Medicinskij al'manax. 2011. № 6. S. 156-159.
15. Беляева Е.В., Ермолина Г.Б., Борискина Е.В. и др. Биологическая характеристика эковаров коагулазонегативных стафилококков, выделенных от новорожденных пациентов детского стационара. Медицинский альманах. 2016. № 3 (43). С. 36-39.
Belyaeva E.V., Ermolina G.B., Boriskina E.V. i dr. Biologicheskayaxarakteristika e'kovarov koagulazonegativnyxstafilokokkov, vydelenny'x ot novorozhdenny'x pacientov detskogo stacionara. Medicinskij al'manax. 2016. № 3 (43). S. 36-39.
16. Дегтева Г.К., Лавровский С.Н., Беляева Е.В. Микробные гидролазы -ферментные препараты. Н.Новгород: Изд-во ННГУ им. Н.И. Лобачевского. 2001. 224 с.
Degteva G.K., Lavrovskij S.N., Belyaeva E.V. Mikrobny'e gidrolazy -fermentny'e preparaty. N.Novgorod: Izd-vo NNGU im. N.I. Lobachevskogo. 2001.224 s.
17. Беляева Е.В., Ермолина Г.Б., Дегтева Г.К., Немов В.В. Оценка адгезивных свойств коринебактерий дифтерии: пособие для врачей. Н.Новгород. 1999. 10 с.
Belyaeva E.V., Ermolina G.B., Degteva G.K., Nemov V.V. Ocenka adgezivny'x svojstv korinebakterij difterii: posobie dlya vrachej. N.Novgorod. 1999. 10 s.
18. OToole G.F., Kaplan H.B., Kolter R. Biofilm formation as microbial development. Annual Review of Microbiology. 2000. Vol. 54. P. 49-79.
19. Казеева Т.Н., Шевелев А.Б., Леонович О.А. и др. Структурные и функциональные особенности ЮА1-протеаз. Современные проблемы науки и образования. Электронный научный журнал. 2012. № 1. URL: http://science-education. ru/ru/article/view?id=5096 (дата обращения: 06.06.2018).
Kazeeva T.N., ShevelevA.B., Leonovich О.А. i dr. Strukturny'e i funkcional'ny'e osobennosti IGA1-proteaz. Sovremenny'e problemy nauki i obrazovaniya. E'lektronny'j nauchnyj zhurnal. 2012. № 1. URL: http://science-education.ru/ru/ article/view?id=5096(data obrashheniya: 06.06.2018).
20. Шагинян И.А., Данилина Г.А., Чернуха М.Ю. и др. Формирование биопленок клиническими штаммами бактерий комплекса Burkholderia cepacia в зависимости от их фенотипических и генотипических характеристик. Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 2007. № 1. С. 3-9.
Shaginyan I.A, Danilina G.A., Chernuxa M.Yu. i dr. Formirovanie bioplenok klinicheskimishtammamibakterij kompleksa Burkholderia cepacia vzavisimosti ot ix fenotipicheskix i genotipicheskix xarakteristik Zhurnal mikrobiologii, e'pidemiologii iimmunobiologii. 2007. № 1. S. 3-9.
21. Беляева Е.В., Кичикова В.В., Никифоров В.А. Исследование способности к образованию биопленки представителей микробиоценоза слизистой носоглотки практически здоровых людей. Медицинский альманах. 2014. № 4 (34). С. 49-51.
Belyaeva E.V., Kichikova V.V., Nikiforov V.A. Issledovanie sposobnosti k obrazovaniyu bioplenki predstavitelej mikrobiocenoza slizistoj nosoglotki prakticheski zdorovy'x lyudej. Medicinskij al'manax. 2014. № 4 (34). S. 49-51.
22. Беляева Е.В., Ермолина Г.Б., Кичикова В.В., Борискина Е.В. Электрофо-ретическое типирование стафилококков, циркулирующих в акушерском стационаре. Известия Самарского научного центра РАН. Специальный выпуск: материалы XIII Всероссийского конгресса «Экология и здоровье человека». 2008. Т. 1. С. 23-29.
Belyaeva E.V., Ermolina G.B., Kichikova V.V., Boriskina E.V. E'lektroforeticheskoe tipirovanie stafilokokkov, cirkuliruyushhix v akusherskom stacionare. Izvestiya Samarskogo nauchnogo centra RAN. Spetsial'nyj vy'pusk: materialy XIII Vserossijskogo kongressa «E'kologiya i zdorov'e cheloveka». 2008. T. 1 S. 23-29.
