CC BY
99
выявлено, что для крольчих четвертого и последующих окролов характерно наивысшая сохранность и проявление материнских качеств.
MATERNAL CHARACTERISTICS OF DOE-RABBITS OF BREED
SILVERY
Anisimova E.V., Mukhametgaliyev N.N.
Summary
The article is presented indicators of maternal characteristics of doe-rabbits of breed silvery of the quantities of parturitions. As a result of the spent researches it is revealed, that the highest safety and maternal qualities is characteristically for doe-rabbits in the fourth and subsequent parturition.
УДК 636.2.034:636.2.082.2
МОЛОЧНАЯ ПРОДУКТИВНОСТЬ КОРОВ С РАЗНЫМИ КОМБИНАЦИЯМИ ГЕНОТИПОВ КАППА-КАЗЕИНА И БЕТА-
ЛАКТОГЛОБУЛИНА
Ахметов Т.М., Тюлькин С.В., Валиуллина Э.Ф.
ФГОУ ВПО «Казанская государственная академия ветеринарной медицины имени Н.Э.Баумана»
Ключевые слова: молочная продуктивность, черно-пестро х
голштинская корова, каппа-казеин, бета-лактоглобулин, генотип, ПЦР, ДНК.
Key words: milk production, holstien black-and-white cow, kappa-casein, beta-lactoglobulin, genotype, PCR, DNA.
Опыт многих стран с развитым животноводством свидетельствует о важности использования генетических маркеров, которые связанны с качественными признаками молочной продуктивности крупного рогатого скота. В качестве потенциальных маркеров молочной продуктивности могут рассматриваться гены молочных белков, а именно каппа-казеина и бета-лактоглобулина (Е.С. Усенбеков, 1995; Л.А. Калашникова, 2003; О.В. Костюнина, 2005; Я.А. Хабибрахманова, 2009, О.Г. Зарипов, 2010).
Ген каппа-казеина связан с белковомолочностью и технологическими свойствами молока. Аллель В гена каппа-казеина ассоциирована с более высоким содержанием белка в молоке. Ген бета-лактоглобулина отвечает за белковомолочность и показатель биологической ценности молока (N. Strzalkowska et al., 2002; Н.А.
Зиновьева и др., 2002). Аллель В гена бета-лактоглобулина связана с высоким содержанием в молоке казеиновых белков, высоким процентом жира, тогда как аллель А характеризуется с высоким содержанием сывороточных белков.
В связи с возрастающими требованиями к качеству молока и молочной продукции возникает необходимость использования в селекции генетических маркеров, связанных с признаками молочной продуктивности. В сложившейся ситуации требуется изменение в методах оценки признаков селекции животных. К классическим методам селекции животных необходимо добавить новые подходы, связанные с достижениями генетики и биотехнологии. Одним из современных методов повышения продуктивных качеств животных является маркер-вспомогательная селекция, которая опирается на молекулярногенетические методы анализа, а именно ПЦР-ПДРФ анализ.
Всё выше сказанное говорит о важности изучения молочной продуктивности коров с разными комбинациями генотипов каппа-казеина и бета-лактоглобулина.
Материал и методика исследований. Исследования проводились в ООО им. Тукая Балтасинского района РТ на 107 черно-пёстро х голштинских коровах.
Для проведения ДНК-диагностики и оценки по генам каппа-казеину и бета-лактоглобулину у животных были отобраны пробы крови.
Кровь, полученную из яремной вены животных, вносили в пробирки с 100 мМ ЭДТА до конечной концентрации 10 мМ.
ДНК из крови выделяли комбинированным щелочным способом: 100 мкл крови смешивали с 1 мл дистиллированной воды и центрифугировали при 10000 об/мин в течение 10 мин. Супернатант отбрасывали, а к осадку добавляли 50 мкл 0,2 М NaOH и тщательно встряхивали смесь на вортексе при комнатной температуре до просветления суспензии. Полученный гомогенат выдерживали в термостате при 600С в течение 10 мин. К лизату добавляли равный объем (50 мкл) 1М Трис-HQ (pH 8,0) и тщательно встряхивали смесь на вортексте при комнатной температуре. К полученному гомогенату добавляли 500 мкл 96% этанола и выдерживали полученную смесь при -200С в течение 30 мин. Нуклеопротеидный комплекс осаждали центрифугированием при 12000 об/мин в течение 10 мин. Супернатант отбрасывали, а осадок высушивали при 600С в течение 12 мин с открытой пробиркой. К высушенному осадку добавляли 100 мкл 10% аммиака, тщательно встряхивали смесь на вортексе при комнатной температуре и выдерживали в термостате при 600С в течение 10 мин, затем повторно встряхивали на вортексе и выдерживали в термостате при 600С в течение 10 мин. Полученный гомогенат выдерживали в термостате при 950С в течение 15 мин с открытой пробиркой.
Анализ локуса гена каппа-казеина. ПЦР проводили на программируемом термоциклере «Терцик» (Россия) в объеме 20 мкл, содержащей 60 мМ Трис-HCl (pH 8,5), 1,5 мМ MgCl2, 25 мМ KCl, 10 мМ меркаптоэтанол; 0,1 мМ тритон Х-100; 0,2 мМ дНТФ, 0.5 ед. Taq ДНК полимеразы; по 0,5 мкМ праймеров JK5-hs (состоит из 5-некомплементарного участка (n) длиной 5 нуклеотидов и 3-комплементарного участка (N) длиной 25 нуклеотидов (расчетная nN Tm=700C; N Tm =60,80C) и JK3-hs (состоит из 5-некомплементарного участка (n) длиной 4 нуклеотида и 3-комплементарного участка (N) длиной 26 нуклеотидов (расчетная nN Tm=73,50C; N Tm=66,70C), сконструированных Р.Р. Вафиным и др. (2007); 1 мкл пробы ДНК, в следующих режимах:
х 1: 940С - 4 мин; х40: 940С - 30 сек, 720С - 30 сек; х 1: 720С - 10 мин, х 1: 940С - 4 мин; х40: 940С - 10 сек, 680С - 20 сек; х 1: 720С - 5 мин, х 1: 940С - 4 мин; х40: 940С - 10 сек, 720С - 20 сек; х 1: 720С - 5 мин. Для определения аллельного полиморфизма гена каппа-казеина по вариантам А и В 20 мкл ПЦР пробы обрабатывали 10 ед. эндонуклеазы рестрикции Hinfl в 1хбуфере «О» или 10 ед. эндонуклеазы рестрикции HindHI в хбуфере «W» фирмы СибЭнзим (Россия) при 370C в течение ночи.
Анализ локуса гена бета-лактоглобулина. ПЦР проводили на программируемом термоциклере «Терцик» (Россия) в объеме 20 мкл, содержащей буфер (60 мМ трис-HCl (рН 8,5), 1,5 мМ MgCl2, 25 мМ KCl, 10 мМ меркаптоэталол; 0,1 мМ тритон Х-100), 0,2 мМ dNTP, 0,2 мкл Taq ДНК полимеразы, 0,5 мкМ праймера BLGP3: 5' - GTC CTT GTG CTG GAC ACC GAC TAC A - 3', 0,5 мкМ праймера BLGP4: 5' - CAG GAC ACC GGC TCC CGG TAT ATG A - 3', сконструированных J.F. Medrano и E. Aguilar-Cordova (1990) для амплификации фрагмента гена бета-лактоглобулина длиной 262 пары нуклеотидов, 1 мкл пробы ДНК в следующем режиме: х1:94 0С - 4 мин; х38:94 0С - 10 сек, 60 0С - 10 сек, 72 0С - 10 сек; х1:72 0С - 5 мин; хранение: 4 0С.
Для определения полиморфизма гена бета-лактоглобулина по вариантам А и В 20 мкл ПЦР пробы обрабатывали 5 ед. эндонуклеазы рестрикции Hae III в 1хбуфере «С» фирмы СибЭнзим (Россия) при 37 0С течение ночи.
Идентификация генотипов каппа-казеина и бета-лактоглобулина. Для визуализации фрагментов ДНК пробы вносили в лунки 2,5 % агарозного геля с содержанием этидия бромида (0,5 мкг/мл) и проводили горизонтальный электрофорез при 15 В/см в течение 40 мин в 1хТВЕ буфере. После электрофореза гель просматривали в УФ-трансиллюминаторе при длине волны 310 нм.
Молочную продуктивность определяли ежемесячно путём проведения контрольных доек (ежедекадно). Потом на основании
контрольных доек рассчитывали общую молочную продуктивность за 305 дней лактации, а также за укороченную лактацию, но не меньше 240 дней. Содержание жира и белка в молоке определяли на приборе ЛАКТАН 1-4.
В работе наряду с экспериментальными материалами использовались данные зоотехнического и племенного учета хозяйств, то есть племенные карточки (2-МОЛ).
Полученные результаты в ходе научных исследований обработаны биометрическим методом с использованием ЭВМ и программного приложения Microsoft Excel.
Результаты собственных исследований. Для полного анализа молочной продуктивности нами проведены исследования по изучению таких признаков, как продолжительность лактации, удой, содержание, количество жира и белка в молоке, интенсивность молокоотдачи, удой на 1 день лактации коров с разными комбинациями генотипов каппа-казеина и бета-лактоглобулина.
Исследованиями установлено, что наибольшая продолжительность лактации была у коров-первотелок с комбинацией генотипов CSN3 АВ / LGB АВ и CSN3 АВ / LGB ВВ (298 дн. и 301 дн.), они превосходили коров с другими комбинациями CSN3 / LGB на 2-10 дн (табл. 1).
1. Молочная продуктивность коров с разными генотипами каппа-
казеина и бета-лактоглобулина
Показатели Комбинации генотипов CSN3 / LGB
AA/AA AA/AB AA/BB AB/AA AB/AB AB/BB BB/AB
п 11 31 26 3 26 7 3
дойных дней 296± 2,9 296± 2,4 295± 2,9 291± 10,7 298± 2,4 301± 3,2 293± 8,7
удой, кг 5278± 282,1 4968± 117,0 4860± 148,7 5422± 313,3 5346± 159,5 5044± 280,5 5162± 377,6
жир, % 4,03± 0,06 4,06± 0,04 4,04± 0,04 4,18± 0,08 3,99± 0,02 4,02± 0,05 3,99± 0,10
молочный жир, кг 212,7± 12,25 201,7± 5,16 196,3± 5,49 226,6± 14,93 213,3± 6,84 202,8± 10,67 206,0± 12,40
белок, % 3,18± 0,04 3,15± 0,02 3,12± 0,03 3,26± 0,02 3,22± 0,02 3,20± 0,03 3,31± 0,04
молочный белок, кг 167,8± 9,83 156,5± 3,96 151,6± 4,83 176,8± 11,39 172,1± 5,94 161,4± 9,43 170,9± 14,54
интенсивность молокоотдачи, кг/мин. 1,67± 0,05 1,68± 0,05 1,69± 0,04 1,94± 0,13 1,84± 0,06 1,66± 0,07 1,76± 0,08
удой на 1 день лактации, кг 17,8± 0,92 16,8± 0,33 16,5± 0,49 18,6± 1,29 17,9± 0,50 16,8± 0,90 17,6± 0,81
Наибольший удой за лактацию отмечен в группах животных с комбинацией генотипов СБЫЗ АВ / ЬОВ АА, СБЫЗ АВ / ЬОВ АВ и составил 5422 кг и 5346 кг молока, при этом наименьший удой за лактацию был в группах с комбинацией генотипов СБЫЗ АА / ЬОВ АВ (4968 кг) и СБЫЗ АА / ЬОВ ВВ (4860 кг). Животные с комбинацией генотипов СБЫЗ АВ / ЬОВ АА и СБЫЗ АВ / ЬОВ АВ превосходили сверстниц с другими комбинациями генотипов СБЫЗ / ЬОВ на 68-562 кг молока. При этом достоверная разница по удою выявлена между сверстницами с комбинацией генотипов СБЫЗ АА / ЬОВ ВВ и СБЫЗ АВ / ЬОВ АА - 486 кг (Р<0,05).
По содержанию жира в молоке выгодно отличались животные с комбинацией генотипов СБЫЗ АВ / ЬОВ АА (4,18%), что выше, чем у первотелок с другими комбинациями генотипов СБЫЗ / ЬОВ на 0,12-0,19%. При этом достоверная разница по этому показателю была между первотелками с комбинацией генотипов СБЫЗ АВ / ЬОВ АА и СБЫЗ АВ / ЬОВ АВ - 0,19% (Р<0,05). Коровы с комбинацией генотипов СБЫЗ АВ / ЬОВ АА имели также наибольший выход молочного жира (226,6 кг), они превосходили по данному показателю животных с другими комбинациями генотипов СБЫЗ / ЬОВ на 13,3-30,3 кг.
Первотелки с комбинацией генотипов СБЫЗ АВ / ЬОВ АА, СБЫЗ АВ / ЬОВ АВ и СБЫЗ ВВ / ЬОВ АВ имели наибольшее содержание белка в молоке (3,22-3,31%) и количество молочного белка (170,9-176,8 кг), что выше, чем у животных с другими комбинациями генотипов СБЫЗ / ЬОВ на 0,02-0,19% и 3,1-25,2 кг соответственно. Причем первотелки с комбинациями генотипов СБЫЗ АВ / ЬОВ АА, СБЫЗ АВ / ЬОВ АВ и СБЫЗ ВВ / ЬОВ АВ достоверно превосходили по содержанию белка в молоке сверстниц с комбинациями генотипов СБЫЗ АВ / ЬОВ АА и СБЫЗ АА / ЬОВ ВВ на 0,07-0,19% (Р<0,05-0,001). Тогда как по количеству молочного белка достоверная разница выявлена между животными с комбинациями генотипов СБЫЗ АВ / ЬОВ АВ и СБЫЗ АА / ЬОВ ВВ, которая составила 20,5 кг (Р<0,01).
Наибольшие показатели интенсивности молокоотдачи и удоя на 1 день лактации имели коровы с комбинацией генотипов СБЫЗ АВ / ЬОВ АА (1,94 кг/мин. и 18,6 кг) и СБЫЗ АВ / ЬОВ АВ (1,84 кг/мин. и 17,9 кг), они превосходили по этим показателям сверстниц с другими комбинациями генотипов на 0,08-0,28 кг/мин. и 0,1-2,1 кг соответственно. При этом первотелки с комбинацией генотипов СБЫЗ АВ / ЬОВ АВ достоверно превосходили аналогов, имеющих генотип АА СБЫЗ на 0,15-0,17 кг/мин. (Р<0,05).
Вывод. Более высокой молочной продуктивностью обладали животные с комбинацией генотипов СБЫЗ АВ / ЬОВ АА и СБЫЗ АВ / ЬОВ АВ. При этом наибольшее содержание белка в молоке имели коровы с комбинацией генотипов СБЫЗ ВВ / ЬОВ АВ.
ЛИТЕРАТУРА: 1. Зарипов, О.Г. Генотипирование крупного рогатого скота по генам бета-лактоглобулина и каппа-казеина методами ДНК-технологии : автореф. дисс. ... канд. биол. наук : 03.01.04 / Зарипов Олег Гаязович. - Казань, 2010. - 24 с. 2. Зиновьева, Н.А. Введение в молекулярную генную диагностику сельскохозяйственных животных / Н.А. Зиновьева, Е.А. Гладырь, Л.К.Эрнст, Г. Брем. - Дубровицы, ВИЖ, 2002. - 112 с. 3. Калашникова, Л. А. Возможности использования ДНК маркеров продуктивных качеств животных в практической селекционной работе / Л.А. Калашникова // Современные достижения и проблемы биотехнологии сельскохозяйственных животных. - Дубровицы, 2003. - С. 33-39. 4. Костюнина, О. В. Молекулярная диагностика генетического полиморфизма основных молочных белков и их связь с технологическими свойствами молока : автореф. дисс. канд. биол. наук : 03.00.23 /Костюнина Ольга Васильевна. - Дубровицы. - 2005. - 21 с. 5. Патент РФ на изобретение № 2299240 Способ проведение ПЦР / Рамиль Р. Вафин, Раиф Р. Вафин, Т.М. Ахметов, Ш.К. Шакиров, Ф.Ф. Замалиева, И.В. Пикалова И.В., Р.Х. Равилов, И.Х. Бакиров. - Приоритет изобретения 21.02.2005. -Зарегистр. в Гос. реестре изобретений РФ 20.05.2007. - Бюл. № 14. 6. Усенбеков, Е. С. Генотипирование крупного рогатого скота по локусам каппа-казеина, бета-лактоглобулина и мутации BLAD : автореф. дисс. канд. биол. наук : 03.00.15 / Усенбеков Есенгали Серикович. - СПб-Пушкин, 1995. - 16 с. 7. Хабибрахманова, Я. М. Полиморфизм молочных белков и гормонов крупного рогатого скота : автореф. дисс. канд. биол. наук : 06.02.01 / Хабибрахманова Язиля Аминовна. - Лесные Поляны. - 2009. -23 с. 8. Medrano, J. F. Polymerase chain reaction of bovine yS-lactoglobuline genomic sequences and identification of genetic variants by RFLP analysis. / J. F. Medrano, Е. Aguilar-Cordova // Animal Biotechnology. - 1990. - № 1. - P. 73-77. 9. Strzalkowska, N. Effects of k-casein loci polymorphism, cow's age, stage of lactation and somatic cell count on daily milk yield and milk composition in Polish Black-and-White cattle / N. Strzalkowska [et al.] // Anim. Science Papers and Reports. - 2002. - V. 20. - № 1. - P. 21-35.
МОЛОЧНАЯ ПРОДУКТИВНОСТЬ КОРОВ С РАЗНЫМИ КОМБИНАЦИЯМИ ГЕНОТИПОВ КАППА-КАЗЕИНА И БЕТА-ЛАКТОГЛОБУЛИНА
Ахметов Т.М., Тюлькин С.В., Валиуллина Э.Ф.
Резюме
В данной работе представлены результаты влияния комбинаций генотипов каппа-казеина и бета-лактоглобулина на молочную продуктивность черно-пёстрых голштинских коров. Исследования показали, что наибольшие показатели молочной продуктивности имели коровы с комбинацией генотипов CSN AB / LGB AA и CSN3 AB / LGB AB, а более высокую белковомолочность - CSN BB / LGB AB.
MILK PRODUCTION OF COWS WITH DIFFERENT COMBINATION GENOTYPES OF KAPPA-CASEIN AND BETA-LACTOGLOBULIN
Ahmetov T.M., Tjulkin S.V., Valiullina E.F.
Summary
In given work are presented results of the influence combination genotypes of kappa-casein and beta-lactoglobulin on milk production holstien black-and-white cows. Researches have shown the greatest milk production of cows with combination genotypes CSN3 АВ / LGB АА and CSN3 АВ / LGB АВ and higher protein content in milk of cows with combination genotypes CSN3 ВВ / LGB АВ.
УДК 619:618.21.7:616-084+636.22/.28
РЕЗУЛЬТАТЫ АКУШЕРСКО-ГИНЕКОЛОГИЧЕСКОЙ ДИСПАНСЕРИЗАЦИИ КОРОВ
Багманов М.А., Юсупов С.Р., Файзрахманов Р.Н.
ФГОУ ВПО «Казанская государственная академия ветеринарной медицины имени Н.Э. Баумана»
Ключевые слова: диспансеризация, бесплодие, беременность,
кровь, мастит, искусственное осеменение.
Key words: clinical examination, sterility, pregnancy, blood, mastitis, artificial insemination.
Отличительной особенностью современных молочных комплексов являются большая концентрация поголовья, высокая степень механизации производственных процессов, поточность всех производственных циклов, узкая специализация труда работников. Промышленная технология содержания усложняет организацию воспроизводства стада такими негативными факторами, как недостаточная инсоляция, ограниченный моцион животных, обезличка поголовья, частая смена обслуживающего персонала, проблемы выявления половой охоты и проведения осеменения, постоянные стрессы, несбалансированность кормления в зависимости от физиологического состояния и продуктивности (Ф.Ф. Эйснер и др., 1978).
В связи с этим на молочных фермах и комплексах проведение акушерско-гинекологической диспансеризации является одним из важных методов борьбы с бесплодием и яловостью коров и телок и необходимым практическим мероприятием, направленным на своевременное выявление, устранение заболеваний половой системы и молочной железы (Н.И.
