CC BY
121
по сравнению со 2 группой животных. Величина остальных показателей снижалась в среднем на 44% (р<0,05) относительно 1 группы животных (рис. 2).
Таким образом, обработка брюшной полости 0,09% раствором гипохлорита натрия приводит к мобилиза-
ЛИТЕРАТУРА
1. Андреева Л.И., Кожемякин Л.А., Кишкун А.А. Модификация метода определения перекисей липидов в тесте с тиобарбитуровой кислотой // Лабораторное дело. -1988. - №11. - С.41-43.
2. Верболович В.П., Подгорная Л.М. Определение активности глутатионредуктазы и супероксиддисмутазы на биохимическом анализаторе // Лабораторное дело. - 1987. - №2.
- С.17-20.
3. Волчегорский И.А. и др. Сопоставление различных подходов к определению продуктов перекисного окисления липидов в гептан-изопропанольных экстрактах крови // Вопросы медицинской химии. - 1989. - №1. - С.127-131.
4. Ещенко Е.Д. Выделение и очистка субклеточных и клеточных структур // Методы биохимических исследований. / Под ред. М.И. Прохоровой. - Л.: Изд-во Ленинградского унта, 1982. - С.29-53.
5. Каган В.Е. Проблемы анализа эндогенных продуктов перекисного окисления липидов: итоги науки и техники. -М., 1986. - 248 с.
6. Королюк М.А. и др. Метод определения каталазы // Лабораторное дело. - 1988. - № 1. - С.16-19.
ции антиоксидантных ресурсов брюшины за счет активации ферментативного звена, что наряду с умеренной интенсификацией реакций липопероксидации может являться фактором адекватных репаративных процессов.
7. Магомедов М.А. Местная клеточная регуляция в образовании послеоперационных спаек при перитоните // Хирургия. - 2004. - №6. - С.9-11.
8. Майборода А.А., Калягин А.Н., Зобнин Ю.В., Щербатых А.В. Современные подходы к подготовке оригинальной статьи в журнал медико-биологической направленности в свете концепции «доказательной медицины» // Сибирский медицинский журнал (Иркутск). - 2008. - Т. 76. №1. - С.5-8.
9. Моин В.М. Простой и специфический метод определения активности глутатионпероксидазы в эритроцитах // Лабораторное дело. - 1986. - №12. - С.724-727.
10. Петросян Э.А. и др. Гипохлорит натрия в лечении гнойных ран // Вестник хирургии им. Грекова. - 1991. - №1.
- С.40-43.
11. Сажин В.П., АвдовенкоА.П., ЮришевВ.А. Современные тенденции хирургического лечения перитонита // Хирургия.
- 2007. - №11. - С.36-39.
12. Эвентов В.Л., Андрианова М.Ю. Использование электролизного гипохлорита натрия в клинической практике для детоксикации и дезинфекции // Вестник интенсивной терапии. - 1998. - №2. - С.43-46.
Информация об авторах: 672000, г. Чита, ул. Балябина д.14, кв. 910, тел. (3022) 35-37-96, 35-63-06, e-mail: [email protected], Кашафеева Алла Анатольевна - ассистент, Гаймоленко Сергей Григорьевич - заведующий кафедрой, к.м.н., доцент, Хышиктуев Баир Сергеевич - заведующий кафедрой, д.м.н., профессор.
© ИНЖУТОВА А.И., ЛАРИОНОВ А.А., САЛМИНА А.Б., ПЕТРОВА М.М. - 2010
МОЛЕКУЛЯРНО-КЛЕТОЧНЫЕ МЕХАНИЗМЫ ЭНДОТЕЛИАЛЬНОЙ ДИСФУНКЦИИ РАЗЛИЧНОГО ГЕНЕЗА
(СООБЩЕНИЕ 1)
А.И. Инжутова, А.А. Ларионов, А.Б. Салмина, М.М. Петрова (Красноярский государственный медицинский университет им. проф. В.Ф. Войно-Ясенецкого, ректор -д.м.н., проф. И.П. Артюхов, НИИ Молекулярной медицины и патобихимии, руководитель - д.м.н., проф.
А.Б. Салмина, кафедра поликлинический терапии и семейной медицины ИПО, зав. - д.м.н., проф. М.М. Петрова)
Резюме. В статье (сообщение 1, 2) представлены данные исследования молекулярно-клеточных маркеров эндотелиальной дисфункции у больных, страдающих гипертонической болезнью, рефрактерной гипертонией, ишемической болезнью сердца (ИБС) и нейроциркуляторной дистонией (НЦД). Выявлены различия в патогенезе формирования дисфункции эндотелия в изучаемых группах больных. В сообщении 1 освещены результаты исследования межклеточных взаимодействий клеток крови (лимфоциты и тромбоциты), опосредованных молекулами межклеточной адгезии (CD38 и СD31), с эндотелием сосудов; дана оценка феномена блеббинга лимфоцитов в развитии дисфункции эндотелия.
Ключевые слова: кардиоваскулярная патология, эндотелиальная дисфункция, мембран-высвобожденные микрочастицы, блеббинг.
MOLECULAR AND CELLULAR MECHANISMS OF ENDOTHELIAL DYSFUNCTION IN DIFFERENT PATHOLOGY. REPORT 1.
A.I. Inzhutova, A.A. Larionov, A.B. Salmina, M.M. Petrova (Krasnoyarsk State Medical University)
Summary. In the article (report 1 and report 2) is presented a study of molecular and cell markers of endothelial dysfunction in patients with cardio-vascular pathology. The report 1 shows a results of studies of intercellular interactions of blood cells (lymphocytes and platelets) with the vascular endothelium mediated by intercellular adhesion molecules CD38 and CD31.
Key words: cardiovascular pathology, endothelial dysfunction, membrane-derived microparticles, blebbing.
Активное изучение эндотелиальной дисфункции как основного звена патогенеза кардиоваскулярных заболеваний за последние десять лет открыло и продолжает выявлять новые клеточно-молекулярные элементы каскада нарушения функции эндотелия; определение их содержания в периферической крови является общедоступным и информативным маркером патологии сосудистой стенки.
К общепризнанным маркерам эндотелиальной дисфункции относятся: косвенное определение содержания оксида азота (N0) в плазме периферической крови, растворимой формы тромбоцитарно-эндотелиальной молекулы межклеточной адгезии ^РЕСАМ-1) и количества слущенных эндотелиоцитов. Как известно, N0 - основной фактор дилатации сосудистой стенки, вырабатываемый эндотелием; зРЕСАМ-1 - это раство-
римая форма рецептора CD31, экспрессируемого эндо-телиоцитами, тромбоцитами и лейкоцитами. Молекула N0 - нестойкое соединение, поэтому метод косвенного определения имеет ряд погрешностей, в то время как иммуноферментный анализ на зРЕСАМ-1 является дорогостоящим и не позволяет исследовать кровь только одного пациента. Метод определения слущенных эн-дотелиоцитов относительно прост при использовании фазово-контрастной и люминесцентной микроскопии, но несет в себе погрешность, так как в периферической крови содержатся не только слущенные апоптотические эндотелиоциты, но также прогенеторные клетки, функция которых состоит в закрытии дефекта сосудистой стенки. Тем не менее, обнаружено, что количество как слущенных эндотелиоцитов, так и прогенеторных клеток в периферической крови коррелирует со степенью выраженности эндотелиальной дисфункции [4,5,6].
Наиболее изучаемыми маркерами нарушения функции эндотелия являются блеббинг лимфоцитов, содержание мембран высвобожденных микрочастиц в периферической крови и экспрессия клетками крови и эндотелиоцитами различных рецепторов, которые при межклеточном взаимодействии потенциально изменяют физиологический баланс эндотелия.
Блеббинг лимфоцитов как уникальный клеточный процесс, характеризующий измененное состояние иммунологической системы, проявляющийся в виде выпячивания плазматической мембраны лимфоцитов в результате диссоциации белков цитоскелета и экстернали-зации фосфатидил-серина. Блеббинг, возникающий как в ответ на клеточную активацию, так и в процессе апоп-тоза, имеет несколько физиологических предпосылок: рафтинг и кластеризация рецепторов для облегчения и усиления межклеточного контакта, высвобождение активных мембранных микрочастиц или апоптотиче-ских телец. Мембран-высвобожденные микрочастицы
- биологически активные субстанции, которые вызывают самый разнообразный спектр патофизиологических реакций, обусловленных тем, что они репрезентируют на своей поверхности антигены, фосфолипиды, а также, обладая микроскопическими размерами, способны проникать в субъинтиму сосудов [3,7,9].
С научно-практической точки зрения представляется, несомненно, важным понимание патогенеза формирования дисфункции эндотелия на молекулярном уровне. Взаимодействие рецептор/лиганд и биологические эффекты такого контакта зависят напрямую от типа рецептора. Причем специфичность антигенов рецептора определяет уникальность клеточных изменений. Так, взаимодействие CD38, экспрессируемого лимфоцитами периферической крови или мембран-высвобожденными микрочастицами, с CD31 на поверхности эндотелиоцитов способствует не только ролингу лимфоцитов по поверхности эндотелия и проникновению его в межэндотелиоцитарные щели, но и запускает каскад внутриклеточных процессов, заключающихся в стимуляции выделения цитокинов, увеличения содержания внутриклеточного кальция и запуску процессов апоптоза эндотелиоцитов, что в конечном итоге, может привести к формированию раневого дефекта сосудистой стенки [2,8].
Таким образом, изучение механизмов формирования эндотелиальной дисфункции должно носить комплексный характер, что позволит понять последовательность патогенеза нарушения функции эндотелия и выявить триггерные точки, воздействие на которые будет способствовать предупреждению возникновения эндотелиальной дисфункции или ее обратному развитию.
Вместе с тем, очевидно, что патогенез эндотелиальной дисфункции при различных кардиоваскулярных заболеваниях на фоне универсальности патологического процесса имеет ряд особенностей, что может быть обусловлено различным диаметром сосудов, физиологической нагрузкой и, наконец, доминирующим фактором
развития патологии и ее осложнений [1,10].
Целью проведенного исследования явилась идентификация различий в патогенезе эндотелиальной дисфункции при различной кардиоваскулярной патологии.
Материалы и методы
В исследовании с информированного согласия приняли участие 110 пациентов обоего пола в возрасте 3065 лет, находящиеся на амбулаторном лечении в МУЗ ГП №14, страдающие:
1) Гипертонической болезнью II стадии, риск 3 (30 человек, женщин 18, мужчин 12, средний возраст 46 лет);
2) ИБС: стенокардия напряжения II ф.к., ХСН1 (NYHA2) (20 человек, женщин 7, мужчин 13, средний возраст 39 лет);
3) Рефрактерной гипертонической болезнью (15 человек, женщин 13, мужчин 2, средний возраст 40 лет);
4) Нейроциркуляторной дистонией смешанного типа (15 человек, женщин 9, мужчин 6, средний возраст 32 года);
5) Контрольная группа: практически здоровые люди обоего пола соответствующего возрастно-полового состава (30 человек).
Все пациенты исследуемых групп обратились за медицинской помощью впервые или не получали регулярного терапевтического лечения по указанным заболеваниям в течение не менее 3 лет. Пациенты с сочетанной кардиоваскулярной патологией не были включены в проводимое научное исследование.
Критерии исключения: острые и хронические инфекционные заболевания, ранее перенесенные сердечнососудистые катастрофы, сахарный диабет, заболевания почек и соединительной ткани, иммунологические расстройства, онкологические заболевания.
У больных исследовалась иммуноцитохимия (оценка экспрессии и особенностей локализации CD38 и CD31 на лимфоцитах, тромбоцитах, мембран-высвобожденных микрочастицах; установление природы мембран-высвобожденных микрочастиц путем определения их связывания со специфическими антителами и корреляционным анализом). Выполнялась фазово-контрастная микроскопия (оценка феномена блеббинга лейкоцитов и тромбоцитов периферической крови).
Статистические методы исследования с использованием для непараметрических показателей критерий W Уилкоксона, критерий T Манна-Уитни, Wilcoxon Matched Pairs test; Levene and Brown-Forsythe tests; для исследования взаимосвязи коэффициент ранговой корреляции Спирмена. Критический уровень значимости при проверке гипотез р=0,05.
Результаты и обсуждение
Экспрессия лимфоцитами CD38 статистически значимо (p<0,05) преобладала в группе пациентов, страдающих гипертонической болезнью и рефрактерной гипертонией (51,8% и 47,4%, соответственно), в то время как в группах пациентов с ИБС и НЦД статистически значимо повышена экспрессия CD31 (37,4% и 19,1%, соответственно, p<0,05). Это может свидетельствовать о том, что развитие эндотелиальной дисфункции этих состояний носит различный характер. Так, если CD31
- играет основную роль в адгезии лимфоцитов к сосудистой стенке, то CD38, как полипотентный рецептор-энзим, участвует в активации лимфоцитов и продуцировании ими цитокинов, а также запуске каскада апоп-тотических процессов в интактном эндотелиоците за счет изменения кальциевого баланса. Следовательно, лимфоциты CD31-позитивные вызывают локальное асептическое воспаление сосудистой стенки, в то время как CD38-позитивные лимфоциты способны разрушать апоптотическим путем эндотелий сосудов (рис. 1).
Рис. 1.
Во всех исследуемых группах лимфоциты, экспрессирующие CD38 и CD31, преобладающе находились в блеббинге. Однако, процент блеббингующих CD38-позитивных лимфоцитов был значимо (р<0,01) выше по сравнению с CD31-позитивными лимфоцитами. Так же следует отметить, что в группе с рефрактерной артериальной гипертонией был значимо выше процент блеб-бингующих CD38-позитивных лимфоцитов по сравнению с другими группами (рис. 1).
Во всех группах процент экспрессии рецептора на одном полюсе клетки был не высок. Однако, блеб-бинг - это волнообразное перемещение мембраны, в ходе которого происходит кластеризация рецептора, в то же время, для активного рафтинга и кластеризации рецептора необходима клеточная активация. Этот процесс был показан для больных с ишемическим инсультом, когда в острой фазе клеточная активация лимфоцитов достигала максимума, в течение хронической патологии порог активации лимфоцитов повышен, а, следовательно, процесс кластеризации рецептора снижен. Показательно это подтверждает самый низкий процент кластеризации рецептора в группе больных с рефрактерной гипертонией, когда хроническое высокое артериальное давление значимо повышает порог активации лимфоцитов. При НЦД
- воздействие этиологического фактора активации лимфоцитов незначительное, а, следовательно, уровень кластеризации рецептора низкий (рис. 1).
Мы исследовали содержание CD38 и CD31-позитивных тромбоцитов. Обнаружено, что CD31-позитивных тромбоцитов было значимо больше (р<0,05) в группах с рефрактерной гипертонии (44,4%), ИБС (12,78%), НЦД (29,05%). При этом значимо выше (р<0,01) по сравнению с остальными процент содер-
жания CD31-позитивных тромбоцитов был в группе пациентов с рефрактерной гипертонией. В то же время доля содержания CD38-позитивных тромбоцитов преобладал в группе пациентов с гипертонической болезнью (24,28%, р<0,05). Преобладание тромбоцитов CD31-позитивных - это физиологическая норма. Так как CD31 обеспечивает адгезию тромбоцитов к сосудистой стенке. На что здесь стоит обратить внимание, что у больных ИБС уровень содержания CD31-позитивных тромбоцитов был ниже, чем в остальных группах пациентов. Возможно, это свидетельствует, что при ИБС эндотелиальная дисфункция носит локальный характер, затрагивая только коронарные сосуды (необходимо отметить, что при дуплексном сканировании сосудов шеи у этих пациентов не было обнаружено атеросклероза сонных артерий) (рис. 2).
Рис. 2.
Преобладание CD38-позитивных тромбоцитов в группе пациентов с гипертонической болезнью может быть обосновано эндотелиальной дисфункцией сосудов и повышенной их хемоаттрактантной способностью. В то же время, это указывает на риск развития осложнений в этой группе пациентов. Что интересно, в группе пациентов с рефрактерной гипертонией был самый
низкий уровень содержания CD38-позитивных тромбоцитов (3,1%). В то время как, в группе НЦД содержание CD38-позитивных тромбоцитов (16,5%) преобладало по сравнению с другими группами. Для рефрактерной гипертонии это свидетельствует о том, что длительное и хроническое устойчивое высокое артериальное давление формирует патологический клеточно-гуморальный баланс. Вместе с тем, уровень CD38-позитивных тромбоцитов явно свидетельствует об эндотелиальном дис-
ЛИТЕРАТУРА
1. Агеев Ф.Т. Коррекция эндотелиальной дисфункции -ключ к успеху лечения сердечно-сосудистых заболеваний // Сердечная недостаточность. - 2000. - №1 - С.22.
2. Инжутова А.И., Салмина А.Б., Петрова М.М., Ларионов А.А. Роль CD38 в межклеточных взаимодействиях при эндотелиальной дисфункции // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. - 2008. - Т. 145. №6. - С.648-652.
3. Инжутова А.И., Салмина А.Б., Петрова М.М. и др. Регистрация блеббинга плазматической мембраны лимфоцитов периферической крови как экспресс-метод оценки тяжести состояния больных осложненными формами гипертонической болезни // Бюллетень СО РАМН. - 2007. - Т. 123. №1. - С.6-10.
4. Казачкина С.С., Лупанов В.П., Балахонова Т.В. Функция эндотелия при ишемической болезни сердца и атеросклерозе и влияние на нее различных сердечно-сосудистых препаратов // Сердечная недостаточность. - 2004. - №1. - С.315-316.
5. Курбанов Р.Д., Елисеева М.Р., Турсунов Р.Р. Гуморальные
балансе при НЦД (рис. 2).
Таким образом, в исследуемых группах заболеваний существенно различаются механизмы межклеточной коммуникации в патогенезе дисфункции эндотелия, что необходимо учитывать в назначении сердечнососудистой терапии. Корреляционный анализ и принципиальная таблица параметров патогенеза дисфункции эндотелия приведены в Сообщении 2.
маркеры дисфункции эндотелия при эссенциальной гипертонии // Кардиология. - 2003. - №7. - С.61-64.
6. Cines D.B., Pollak E.S. Endothelial cells in physiology and in the pathophysiology of vascular disorders // Blood. - 1998. - Vol. 91. №10. - P.3527-3561.
7. Corp van M.A.R., Broers J.L.V., Reutelingsperger Ch.P.M. Peroxide-induced membrane blebbing in endothelial cells associated with glutathione oxidation but not apoptosis // AJR. -Cell. Physiology. - 1999. - Vol. 277, №1. - P.20-28.
8. Deaglio S., Morra M., Mallone R. Human CD38 (ADP-ribosyl cyclase) is a counter-receptor of CD31, an Ig superfamily member // The J. Immunol. - 1998. - Vol. 160. - P.395-402.
9. VanWijk M.J., VanBavel E., Sturk A. Microparticles in cardiovascular diseases // Cardiovasc. Res. - 2003. - Vol. 59. -P.277-287.
10. Verma S., Anderson T.J. Fundamentals of Endothelial Function for the Clinical Cardiologist // Circulation. - 2002. -№105. - Р46-49.
Работа выполнена при поддержке внутривузовского гранта КрасГМУ (2008г) и гранта ККФПН и НТД (2009г), Красноярск
Информация об авторах: 660022, г. Красноярск, ул. П. Железняка, 1, кафедра биохимии, [email protected], Инжутова Алёна Ивановна - научный сотрудник, старший преподаватель, к.м.н.; Ларионов Алексей Анатольевич - студент 6 курса лечебного факультета; Салмина Алла Борисовна - проректор по международной деятельности, зав. кафедрой, руководитель НИИ, д.м.н., профессор; Петрова Марина Михайловна - проректор по научной работе, зав. кафедрой, д.м.н., проф.
© ТРАЩЕНКО А.С., АХМЕДОВ В.А. - 2010
ДИНАМИКА КОНЦЕНТРАЦИИ ПРОВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ ЦИТОКИНОВ (ИЛ-1В, ИЛ-6) У БОЛЬНЫХ ИНФАРКТОМ МИОКАРДА С ЗУБЦОМ Q НА ФОНЕ ТРОМБОЛИТИЧЕСКОЙ ТЕРАПИИ
А.С. Тращенко, В.А. Ахмедов (Омская государственная медицинская академия, ректор - д.м.н., проф. А.И. Новиков, кафедра факультетской терапии, зав. - д.м.н., проф. В.А. Остапенко)
Резюме. Обследовано 64 больных первичным инфарктом миокарда с зубцом Q, с целью изучения динамики концентрации провоспалительных цитокинов (ИЛ-ф, ИЛ-6) в разные временные интервалы в зависимости от начала проводимой тромболитической терапии. Установлено, что у больных, которым тромболизис проводился до 90 минут от начала болевого приступа на 7-е сутки заболевания наблюдалось значительное снижение медианы ИЛ-1^ (p=0,041) в 1,9 раза в сравнении с исходным уровнем, которое продолжилось и на 14-е сутки до 2 раз (р=0,001), в то время как у больных, которым тромболизис проводился до 3-х часов от начала болевого приступа отмечена противоположная тенденция. Снижение концентрации интерлейкина-1^ и интерлейкина-6 может свидетельствовать об эффективном проведении тромболитической терапии.
Ключевые слова: инфаркт миокарда, тромболитическая терапия, провоспалительные цитокины.
DYNAMICS OF CYTOKINES (IL-1B, IL-6) CONCENTRATION IN THE PATIENTS WITH MYOCARDIAL INFARCTION
ON THE BACKGROUND OF THROMBOLYTIC THERAPY
A.S. Traschenko, V.A. Akhmedov (Omsk State Medical Academy)
Summary. 64 patients with transmural myocardial infarction were investigated in different periods after thrombolytic therapy. Te aim of the study was to estimate the serum levels of pro-inflammatory cytokines (IL-1p, IL-6). There was established that on the 7 day after infarction in group of patients with early thrombolytic therapy (till 90 minutes after pain onset) 1,9 decrease of IL-1P mediane, (p=0,041) compared with the first day, took place. In the group with later thrombolytic therapy (till 3 hours) the contrary tendency was noticed. In the patients with myocardial infarction the increase in concentration of cytokines was noticed. The decrease of IL-1p, IL-6 activity allows to conclude about successful thrombolytic therapy of patients with transmural myocardial infarction.
Key words: myocardial infarction, thrombolytic therapy, pro-inflammatory cytokines.
aa
