CC BY
18
УДК 575.17: 599.9 ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ
В. С. УЧАЕВА1, Ю. А. ВАСИЛЬЕВ2, А. С. ГРАЧЕВА1, О. В. ГУЛЕНКО2, И. Г. УДИНА1
МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКОЕ ИЗУЧЕНИЕ РОЛИ SNP С677Т ГЕНА MTHFR В РАЗВИТИИ ВРОЖДЕННЫХ ИЗОЛИРОВАННЫХ РАСЩЕЛИН ГУБЫ И НЕБА
'Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт общей генетики им. Н.И. Вавилова Российской академии наук, ул. Губкина, д. 3, Москва, Россия, 119991.
2Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования «Кубанский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации, ул. Седина, д. 4, Краснодар, Россия, 350063.
АННОТАЦИЯ
Цель. Проведено ассоциативное популяционно-генетическое исследование для рассмотрения роли SNP C677T гена MTHFR в формировании врожденных пороков развития челюстно-лицевой области (ВПР ЧЛО) - врожденных расщелин губы и/или неба (ВРГ ВРН и ВРГН) в Краснодарском крае с целью установления ассоциаций между SNP C677T гена MTHFR и формированием врожденных расщелин губы и/или неба.
Материалы и методы. В Краснодарском крае изучены особенности распространения SNP C677T гена MTHFR у детей с врожденными расщелинами губы и/или неба (n=233) и их матерей (n=78) в сравнении с контрольной группой (n=124). Для детей с ВПР ЧЛО собраны генетико-демографические анкеты, информация о диагнозе получена из медицинских карт. У детей с патологией и их матерей собраны биологические образцы: кровь или соскобы слизистой оболочки рта, из которых выделена ДНК стандартными методами. У детей с ВРГ, ВРН и ВРГН, их матерей, а также в группе контроля проведено изучение особенностей распределения аллелей SNP C677T гена MTHFR с помощью методов ПЦР-ПДРФ с рестриктазой Hinf I или методом тетрапраймерной ПЦР. Статистическая обработка полученных данных произведена с помощью алгоритмов программы "Statistica".
Результаты. При сравнении профилей частот SNP C677T у детей с ВРГ ВРН и ВРГН с контрольной группой не выявлено достоверных различий ни по частоте данного SNP, ни по особенностям распределения генотипов. Для матерей детей с ВРГ, ВРН и ВРГН установлено достоверное различие c контролем по особенностям распространения генотипов (G=19,5232, d.f.=1, p<0,001), а также объединенных генотипов (С/C и С/T) по отношению к T/T (G=10,4657, d.f.=1; p<0,001) и объединенных генотипов (C/T и T/T) по отношению к C/C (G=15,1896, d.f.=1, p<0,001). Заключение. Установлена ассоциация SNP C677T гена MTHFR c развитием врожденных расщелин губы и / или неба: генотип T/T у матерей сопряжен с повышенным риском рождения детей с ВРГ, ВРН и ВРГН (по сравнению с матерями с генотипами C/C+C/T): odds ratio [OR]=16,63, 95% CI: 3,86-71,71; p=0,0003, а также для матерей с генотипами (C/T+T/T) по сравнению с матерями с генотипами C/C: OR=3,22, CI:1,71-6,08; p=0,0002. У детей с ВПР ЧЛО для генотипа T/T величина риска недостоверна, что позволяет сделать вывод о вкладе SNP C677T гена MTHFR в формирование ВРГ ВРН и ВРГН только в генотипе матери.
Ключевые слова: врожденные расщелины губы и/или неба, C677T гена MTHFR, матери детей с врожденными расщелинами губы и/или неба, фолат, Краснодарский край
Для цитирования: Учаева В.С., Васильев Ю.А., Грачева А.С., Гуленко О.В., Удина И.Г. Молекулярно-генетиче-ское изучение роли SNP C677T гена MTHFR в развитии врожденных изолированных расщелин губы и неба. Кубанский научный медицинский вестник. 2018; 25(5): 104-110. DOI: 10.25207 / 1608-6228-2018-25-5-104-110
For citation: Uchaeva V.S., Vasiliev Yu. A., Gracheva A.S., Gulenko O.V., Udina I.G. Molecular genetic study of the impact of SNP C677T of the gene MTHFR in the development of congenital isolated cleft lip and palate. Kubanskij nauchnyj medicinskij vestnik. 2018; 2018; 25(5): 104-110. (In Russ., English abstract). DOI: 10.25207 / 1608-6228-2018-25-5-104-110
V. S. UCHAEVA1, YU. A. VASILIEV2, A. S. GRACHEVA1, O. V. GULENKO2, I. G. UDINA1
MOLECULAR GENETIC STUDY OF THE IMPACT OF SNP C677T OF THE GENE MTHFR IN THE DEVELOPMENT OF CONGENITAL ISOLATED CLEFT LIP AND PALATE
1Vavilov Institute of General Genetics Russian Academy of Sciences, Gubkin Str., 3, Moscow Russia, 119991. 2Federal State Budgetary Educational Institution of Higher Education Kuban State Medical University of the Ministry of Healthcare of the Russian Federation, Sedina str., 4, Krasnodar, Russia, 350063.
ABSTRACT
Aim. This research was designed to conduct an associative population genetic study for the consideration of the impact of SNP C677T of the gene MTHFR in the congenital maxillofacial developmental anomalies (CMDA): congenital cleft lip (CCL), congenital cleft palate (CCP), congenital cleft lip and palate (CCLP) in the Krasnodar territory. The aim of the study is to establish the associations between SNP C677T of the gene MTHFR and the development of congenital cleft lip and/ or palate.
Materials and methods. In this research, the peculiarities of distribution of SNP C667T of the gene MTHFR in children with congenital cleft lip and/or palate (n=223) and their mothers (n=78) in comparison with the control group (n=124) were studied in the Krasnodar territory. The genetic demographic questionnaires were gathered for children with CMDA, the information about diagnosis was obtained from the medical records. The biological samples, including blood or scrapings of oral mucosa, were collected from children with the pathology and their mothers. The DNA was extracted from the samples by the standard method. The study of the peculiarities of distribution of alleles of SNP C677T of the gene MTHFR was performed by PCR-PFLP with endonuclease Hinf I or by tetra-primer ARMS-PCR method in children with CCL, CCP, CCLP, their mothers and the control group. Statistical processing of the obtained data was performed by the algorithms of the "Statistica" program.
Results. While comparing the profiles of frequencies of SNP C677T in children with CCL, CCP and CCLP with the control group, there were identified no significant differences in the frequency of this SNP and no peculiarities of genotypes distribution. There was identified a significant difference in the peculiarities of genotypes distribution with the control group (G=19,5232, d.f.=1, p<0,001) as well as united genotypes (C/C u C/T) in accordance to T/T (G=10,4657, d.f.=1; p<0,001) and united genotypes (C/T u T/T) in accordance to C/C (G=15,1896, d.f.=1, p<0,001) for the mothers of children with CCL, CCP and CCLP.
Conclusion. As a result of the study, we established the association of SNP C677T of the MTHFR gene with the development of congenital cleft lip and/or palate: mothers' T/T genotype is associated with the increased risk of giving birth to a child with CCL, CCP and CCLP (in comparison with mothers with C/C+C/T genotype): odds ratio [OR]=16,63, 95% CI: 3,86-71,71; p=0,0003 and also for mothers with genotypes (C/T+T/T) in comparison with mothers with genotypes C/C: OR=3,22, CI:1,71-6,08; p=0,0002. The amount of risk is not significant in children with CMDA for T/T genotype. So it is possible to make a conclusion about the impact of C677T of the gene MTHFR in the development of CCL, CCP and CCLP only in mother's genotype.
Keywords: congenital cleft lip and/or palate, C677T of the gene MTHFR, folate, mothers of children with congenital cleft lip and/or palate, the Krasnodar territory
Введение
Врожденные изолированные расщелины губы и/или неба (ВРГ, ВРН и ВРГН) - распространенные патологии у новорожденных, обусловленные как наследственными, так и средовыми факторами. Рассматриваемые врожденные пороки интенсивно изучаются во всем мире. Проведены многочисленные исследования для установления конкретных факторов, включая экологические факторы, влияющих на развитие этих пороков, в том числе, полногеномные ассоциативные исследования [1, 2]. Во многих отдельных исследованиях и при проведении метаанализа публикаций установлены ассоциации полиморфных вариантов гена MTHFR, который является одним из важнейших в обеспечении фолатного обмена, с рождением детей с ВРГ, ВРН и ВРГН [3, 4]. Однако результаты установления ассоциаций иногда противоречивы [5], что зачастую связано с изучением небольших выборок.
Ген MTHFR локализован на 1p36.3 и кодирует 5,10-метилентетрагидрофолатредуктазу, являющуюся ключевым ферментом фолатного обмена, позволяющим переводить фолиевую кислоту в активную форму (5-метилтетрагидрофолат); эта молекула включает метильную группу, которая необходима для реметилирования гомоцистеина. В результате мутации гена C677T в экзоне 4 гена
MTHFR происходит замена аланина на валин (p. Ala222Val) (rs18101133) в каталитическом домене белка-фермента [6]. У гомозигот по мутантному аллелю T/T активность фермента in vitro снижена на 70%, а у гетерозигот C/T - на 35% [7]. Поступление фолата извне с пищей отчасти компенсирует вредное воздействие данной мутации.
Генотип T/T C677T гена MTHFR в совокупности с низким количеством фолата в организме можно считать фактором риска развития заболеваний, сопряженных с нарушением метилирования ДНК (неопластические процессы). Особая функция гена MTHFR определяет его ассоциации со значительным количеством патологий (онкологические, сердечно-сосудистые заболевания, глаукома, неврологические заболевания, психические заболевания, псориаз и другие) [7, 8]. Отмечены повторные случаи невынашивания беременности у женщин с мутациями по MTHFR в генотипе и гипергомоцистеинемией [9]. У детей с ВРГ, ВРН и ВРГН отмечены существенные проблемы стоматологической сферы (формирование твердых тканей зуба, прорезывание зубов, высокие показатели основных стоматологических заболеваний) [10, 11, 12]. Врожденные несращения губы и неба некоторые авторы связывают с врожденными дефектами нервной трубки [13, 14]. В отдельных исследованиях отмечена ассоциация маркеров
гена MTHFR, включая SNP С677Т, с врожденными дефектами нервной трубки, а также с развитием кариеса у них и у детей с врожденными расщелинами губы и неба [14, 15]. Таким образом, роль SNP С677Тгена MTHFR как в развитии ВПР (ВРГ, ВРН и ВРГН), так и в развитии кариеса у детей с ВПР, представляет дополнительный интерес. Для изучения роли этого маркера в развитии кариеса у детей с ВПР ЧЛО необходимо первоначально установить его роль в формировании ВПР данной группы.
В результате анализа географического распространения аллеля Т и генотипов Т/Т по С677Т в Европе выявлен градиент увеличения частоты в направлении с севера на юг, а в Китае градиент изменения частоты имеет противоположное направление [16, 17]. Однако, в обоих случаях особенности распространения связывают с диетой - поступлением в организм внешнего фолата с пищей. Для матерей отмечают, что прием муль-тивитаминов с фолиевой кислотой снижает риск ВРГ до 50% и ВРН от 27-50% по данным разных авторов [18], аналогично показано снижение частоты врожденных дефектов нервной трубки на 50-70% [19]. Очевидно, что особенности диеты и прием фолиевой кислоты нивелируют вредные последствия мутации С677Т. Таким образом, прием мультивитаминов с фолиевой кислотой до зачатия и в первом триместре беременности может быть рассмотрен как фактор профилактики данных ВПР. Представленные данные обусловливают пристальное внимание к изучению рассматриваемой мутации [20].
В связи с перечисленными фактами нами предпринято ассоциативное популяционно-генетиче-ское исследование для рассмотрения роли SNP С677Т гена MTHFR в формировании ВПР ЧЛО (ВРГ, ВРН и ВРГН) в Краснодарском крае, целью исследования является установление ассоциаций между SNP С677Т гена MTHFR и формированием врожденных расщелин губы и неба.
Материалы и методы
В отделении челюстно-лицевой хирургии детской краевой клинической больницы г. Краснодара изучены дети с ВПР (ВРГ, ВРН и ВРГН) (п=233) в возрасте от 0 до 17 лет, госпитализированные в 2011-2017гг., а также изучены их матери (п=78) и контрольная группа детей (п=124) в возрасте от 5 до 17 лет. Все дети родились и проживают в Краснодарском крае. В качестве контроля для группы матерей детей с ВПР использовали ранее опубликованные данные для контрольной группы матерей с двумя и более здоровыми детьми, изученными в Краснодарском крае в период, совпавший с нашим исследованием [21].
Проведено генетико-демографическое анкетирование, включавшее данные о дате и месте рождения, месте проживания, родителях и бабушках и дедушках. Данные о диагнозе взяты из меди-
цинских карт. Сибсы не включались в изученную выборку. В группе матерей также не представлены родственницы.
Для исследования собраны биологические образцы крови или соскобы слизистой оболочки рта. В анкете имеется информированное согласие родителей на анонимное исследование их самих и детей с ВПР с помощью молекулярно-генети-ческих методов. Данное исследование одобрено этическим комитетом Кубанского государственного медицинского университета.
ДНК выделена из биологических образцов с помощью наборов "Изоген" (Москва). Анализ распространения SNP C677T (rs1801133) гена MTH-FR проведено частично методом ПЦР-ПДРФ с ре-стриктазой Hinf I [7], а также методом тетрапрай-мерной ПЦР [22]. Для проведения ПЦР-амплифи-кации использовали наборы для ПЦР, изготовленные фирмой "Изоген" (Москва). ПЦР поведена на приборе фирмы "BioRad" MyCycler: денатурация при 95oC, 5 мин, отжиг праймеров - 57oC, 30 сек, элонгация - 72oC, 30 с, денатурация - 95oC, 15 с (30 циклов), финальная элонгация - 72oC, 4 мин.
Расчеты проведены по алгоритмам программы "Statistica" (сравнение распределения генотипов проведено с помощью G-теста), оценка OR (odds ratio) проведена по алгоритмам WinPepi: http:// www.brixtonhealth.com/pepi4window-s.html.
Результаты и обсуждение
В таблице 1 представлены полученные результаты о распределении C677T гена MTHFR в изученных группах и представлены результаты статистического анализа для частот генотипов в группах детей с ВПР ЧЛО и их матерей по сравнению с контрольными группами.
Частота аллеля T у детей с ВПР ЧЛО (ВРГ, ВРН и ВРГН) практически промежуточная между частотой этого аллеля у матерей детей с ВРГ, ВРН и ВРГН и в контрольной группе (детей). Сравнение распределения генотипов у детей с ВПР не выявило ни отклонения от равновесия Харди-Вайнберга, ни статистически значимых отклонений в оценках наблюдаемой и ожидаемой гетерозиготности. Для матерей детей с ВРГ, ВРН и ВРГН установлено достоверное различие по особенностям распределения генотипов G=19,5232, d.f =2, p<0,001 по сравнению с контрольной группой матерей.
В таблице 2 представлен результат статистического анализа для объединенных генотипов по SNP C677T гена MTHFR в группах детей с ВПР ЧЛО и их матерей по сравнению с контрольными группами. Установлено достоверное отличие по частоте генотипа T/T c двумя мутантными аллелями против объединенного класса генотипов (C/C и C/T) (G= 10,4657, d.f.=1, p<0,001) матерей детей с ВПР ЧЛО по сравнению с контролем, а также генотипа C/C против объединенного класса генотипов (C/T и T/T) (G=15,1896, d.f. =1, р<0,001). Таким образом, матери с генотипами C/T+T/T имеют более высокий
Таблица 1 / Table 1
Распределение SNP C677T гена MTHFR у детей с диагнозами ВПР ЧЛО (ВРГ, ВРН и ВРГН), у их матерей и в контрольных группах
Distribution of SNP C677T of the gene MTHFR in children with diagnosis CMDA (CCL, CCP and CCLP), their mothers and in the control groups
Контрольная группа (дети)
SNP Генотип N.O. F.O. Частота аллеля N.E. G Параметры гетерозиготности
C/C 74 0,5968 PC=0,7863± 76,66 He=0,3361± 0 0298
C/T 47 0,3790 0,0260 41,67 2,0258
Ho=0,3790± 0,0456,
C677T T/T 3 0,0242 5,66 d.f.=1 D=0,1278±
PT=0,2137±0,0260 p>0,05 0,0882, td=0,8143, p>0,05
Сумма 124 1,0000 ne=1,5062± 0,0298
Дети ВРГ+ВРН+ВРГН
SNP Генотип N.O. F.O. Частота аллеля N.E. G Параметры гетерозиготности.
C/C 132 0,5665 PC=0,7575± 133,70 He=0,3674±
C/T 89 0,3820 0,0199 85,60 0,3679 0,0318,
Ho=0,3820±
C677T T/T 12 0,0515 PT=0,2425± 13,70 d.f.=1 0,0204, D=0,0397±
Сумма 233 1,0000 0,0199 ne=1,5807± 0,0204 p>0,05 0,1557, td=0,3859, p>0,05
Сравнение детей с ВПР ЧЛО и контрольной группы: G=1,6666, d.f.=2; p>0,05.
Контрольная группа (матери)
SNP Генотип N.O. F.O. Частота аллеля N.E. G Параметры гетерозиготности
C/C 101 0,7537 PC=0,8769± 103,03 He=0,2159± 0,0302,
0,0201 0,26424
C/T 33 0,2463 28,94 Ho=0,2463± 0,0302, D=0,1404± 0,0996,
C677T T/T 0 0,0000 PT=0,1231± 0,0201 2,03 d.f.=1 p>0,05
Сумма 134 1,0000 ne=1,7423± 0,0285 td=0,6330 , p>0,05
Мате ри пациентов с ВРГ, ВРН и ВРГН
SNP Генотип N.O. F.O. Частота аллеля N.E. G Параметры гетерозигот-ности
C/C 38 0,4872 PC=0,6923± 37,38 He=0,4260± 0,02850,
0,0370 0,1070
C/T 32 0,4102 33,23 Ho=0,4103± 0,0557, D=-0,0370± 0,1105,
C677T T/T 8 0,1026 PT=0,3077± 0,0370 7,38 d.f.=1 p>0,05
Сумма 78 1,0000 ne=1,7423± 0,0285 td=0,2522, p>0,05
Сравнение матерей и контрольной группы (матери): G = 19,5232 , d.f.=2, p<0,001
Примечание: N.0. - наблюдаемая численность генотипов, ^Е. - ожидаемая численность генотипов, РО. - наблюдаемая частота генотипов; Не - теоретическая гетерозиготность, Но - эмпирическая гетерозиготность, D=(Ho-He)/He; п - эффективное число аллелей.
риск рождения ребенка с ВПР (OR=3,22, 95% CI: 1,71-6,08, р=0,0002) по сравнению с матерями с генотипом C/C, а матери с генотипом T/T также имеют более высокий риск рождения ребенка с ВПР ЧЛО данной группы: OR = 16.63, CI :1. 3.86-71.71, p=2.6E-4 по сравнению с матерями с генотипами С/ C+C/T (табл. 2). Ранее повышенный риск рождения
детей с ВПР для матерей, имевших в генотипе аллель T или генотип T/T, отмечен в отдельных исследованиях, а также при проведении метаанализа для обобщения результатов отдельных исследований, направленных на выявление роли генотипа матери по C677T гена MTHFR в рождении ребенка с рассматриваемыми ВПР ЧЛО [23, 24, 25].
Таблица 2 / Table 2
Распределение объединенных классов генотипов по SNP C677T гена MTHFR у пациентов с ВРН, ВРГ и ВРГН, матерей и в группе контроля
Distribution of the united classes of genotypes by SNP C677T of the gene MTHFR in children with CCL, CCP and CCLP, their mothers and in the control groups
Генотип ВРГ, ВРН и ВРГН Контроль (дети)
N.O. F.O. N.O. F.O.
С/С 132 0,5665 74 0,5968
С/Т+Т/Т 101 0,4335 50 0,4032
Сумма 233 1,0000 124 1,0000
Сравнение с контролем G=0,3027 d.f.=1, p>0,05; OR=1,1324, 95% CI: 0.71-1.81, р=0,653
Т/Т 12 0,0515 3 0,0242
С/Т+С/С 221 0,9485 121 0,0968
Сумма 233 1,0000 124 1,0000
Сравнение с контролем G=1,5764, d.f.=1, p>0,05; OR=2,2938, 95% CI: 0.60-12.89, р=0,273
Генотип Матери детей ВРГ, ВРН и ВРГН Контроль (матери)
N.O. F.O. N.O. F.O.
С/С 38 0,4872 101 0,7573
С/Т+Т/Т 40 0,5128 33 0,2463
Сумма 233 1,0000 134 1,0000
Сравнение с контролем G=15,1896 d.f.=1, p<0,001; OR=3,22, 95% CI:1,71-6,08, р=0,0002
Т/Т 8 0,1026 0 0,0000
С/Т+С/С 70 0,8974 134 1,0000
Сумма 78 1,0000 134 1,0000
Сравнение с контролем G= 10, 4657, d.f.=1, p<0,01 OR = 16.63, CI:1. 3.86-71.71, p=0,0003
Примечание: N.0. - наблюдаемая численность генотипов, РО. - наблюдаемая частота генотипов.
При сравнении величин частоты аллеля Т у больных детей и у детей контрольной группы влияние рассматриваемого SNP на формирование ВРГ, ВРН и ВРГН у детей не выявлено, так как не обнаружено статистически значимых оценок при проведении сравнений с контрольной группой (табл. 1, 2). Ранее на меньшей выборке нам также не удалось установить достоверных различий по профилю частот аллелей и генотипов для этого SNP у больных и здоровых детей [26]. Ассоциация рассматриваемого маркера с формированием ВРГ, ВРН и ВРГН у детей не выявлена: для генотипа T/Tвеличина ОЙ недостоверна - OR=2,2938, 95% С1: 0.60-12.89, р=0,273. Таким образом, в дальнейшем возможно изучение вероятной роли этого маркера в развитии кариеса у детей с данной патологией без коррекции на его роль в формировании ВРГ, ВРН и ВРГН. Вероятно, что при рассмотрении влияния этого SNP на развитие кариеса у детей с ВПР ЧЛО не будет наблюдаться его аддитивное влияние на развитие рассматриваемой патологии и на развитие кариеса.
По данным литературы, нельзя исключить внутриутробный отбор, который может влиять на частоту аллеля T у больных детей. По свидетельству [27] мутантные аллели по SNP MTHFR, включая C677T, чаще представлены у спонтанно абортированных плодов. В качестве примера снижение
действия отбора против аллеля T можно привести результаты исследования в Испании, которое показало, что после распространения в популяции обязательного приема фолиевой кислоты и муль-тивитаминов матерями до и после зачатия в стране произошел достоверный рост частоты генотипов Т/Т с 0,19 до 0,27 в течение четырех поколений, который также сопровождался ростом частоты Т/Т среди спонтанно абортированных плодов с 0, 20 до 0,33 (р<0,01) [28]. По мнению авторов, полученные ими результаты свидетельствуют о большей жизнеспособности плодов на ранних стадиях эмбрионального развития (обусловленной приемом витаминов и фолиевой кислоты матерями до и после зачатия), что и приводит, в конечном итоге, к увеличению частоты мутантных генотипов в популяции.
Полученный нами вывод о роли присутствия С677Т гена MTHFR в генотипе матерей с достоверно высокой предрасположенностью к рождению детей с врожденными несращениями губы и/ или неба позволяет предположить важность гено-типирования по SNP С677Т гена MTHFR беременных женщин сразу же после зачатия или заранее при планировании беременности с целью профилактики развития ВПР ЧЛО в Краснодарском крае. В случае обнаружения генотипа Т/Т у беременной женщины следует рекомендовать на основании
данных ранее проведенных исследовании специальное внимание к диете в первом триместре беременности и обязательный регулярный прием фолиевой кислоты в сочетании с мультивитамин-ным комплексом [29]. Доза ежедневного приема фолиевой кислоты должна составлять в первом триместре беременности - 400 мкг [19]. Однако прием фолата должен проводиться с осторожностью с тем, чтобы не превышать допустимые нормы, которые должны также регулироваться в зависимости от генотипа женщины с учетом и других вовлеченных полиморфных локусов, так как избыточное употребление фолата может иметь серьезные, иногда отдаленные последствия, как для матерей, так и для их детей [30].
Заключение
Установленные особенности распределения генотипов по C677T гена MTHFR у матерей по сравнению с контролем предполагают влияние данного SNP на формирование ВПР ЧЛО в Краснодарском крае. Аллель T выступает как аллель риска. Отсутствие ассоциаций с рассматриваемым маркером у детей с ВПР ЧЛО (ВРГ, ВРН и ВРГН) позволяет сделать вывод о его влиянии на формирование врожденных пороков только за счет генотипа матери и о возможной их профилактике.
ЛИТЕРАТУРА / REFERENCES
1. Dixon M.J., Marazita M.L., Beaty T.H., Murray J.C. Cleft lip and palate: synthesizing genetic and environmental influences. Nat. Rev. Genet. 2011; 12(3): 167-178.
2. Mangold E., Reutter H., Birnbaum S., Walier M., Mattheisen M., Henschke H., Lauster C., Schmidt G., Schiefke F., Reich R.H., Scheer M., Hemprich A., Martini M., Braumann B., Krimmel M., Opitz C., Lenz J.H., Kramer F.J., Wienker T.F., Nöthen M.M., Diaz Lacava A.. Genome-wide linkage scan of nonsyndromic orofacial clefting in 91 families of Central European origin. American Journal of Medical Genetics. Part A. 2009; 149A(12): 2680-2694. DOI: 10.1002/ajmg.a.33136.
3. Blanton S.H., Henry R.R., Yuan Q., Mulliken J.B., Stal S., Finnell R.H., Hecht J.T. Folate pathway and nonsyndromic cleft lip and palate. Birth Defects Res. Part A Clin. Mol. Teratol. 2011; 91(1): 50-60. DOI: 10.1002/bdra.20740.
4. Rai V. Strong association of C677T polymorphism of methylenetetrahydrofolate reductase gene with nosyndromic cleft lip/palate (nsCL/P). Indian J Clin Biochem. 2018; 33(1): 5-15. DOI: 10.1007/s12291-017-0673-2.
5. Shi M., Caprau D., Romitti P., Christensen K., Murray J.C. Genotype frequencies and linkage disequilibrium in the CEPH human diversity panel for variants in folate pathway genes MTHFR, MTHFD, MTRR, RFC1, and GCP2. Birth Defects Res A Clin Mol Teratol. 2003; 67(8): 545-549.
6. Isotalo P.A, Wells G.A., Donnelly J.G. Neonatal and fetal methylenetetrahydrofolate reductase genetic polymorphisms: an examination of C677T and A1298C mutations. Am. J. Hum. Genet. 2000; 67(4): 986-990.
7. Micheal Sh., Qamar R., Akhtar F., Khan M.I., Khan W.A., Ahmed A. MTHFR gene C677T and A1298C polymorphisms and
homocysteine levels in primary open angle and primary closed angle glaucoma. Molecular Vision. 2009; 15: 2268-2278.
8. Liewa S.C., Gupta E.D. Methylenetetrahydrofolate reductase (MTHFR) C677T polymorphism: Epidemiology, metabolism and the associated diseases. European Journal of Medical Genetics. 2015; 58(1): 1-10. DOI: 10.1016/j.ejmg.2014.10.004.
9. Serapinasa D., Boreikaiteb E., Bartkeviciuteb A., Bandzeviciene R., Silkunas M., Bartkeviciene D. The importance of folate, vitamins B6 and B12 for the lowering of homocysteine concentrations for patients with recurrent pregnancy loss and MTHFR mutations. Reproductive Toxicology. 2017; 72: 159-163. DOI: 10.1016/j.reprotox.2017.07.001.
10. Kirchberg A., Treide A., Hemprich A. Investigation of caries prevalence in children with cleft lip, alveolus, and palate. J. Cranio-maxillofac. Surg. 2004; 32(4): 216-219.
11. Perdikogianni H., Papaioannou W., Nakou M., Oulis C., Pa-pagiannoulis L. Periodontal and microbiological parameters in children and adolescents with cleft lip and/or palate. Int J Paediatr Dent. 2009; 19(6): 455-467. DOI: 10.1111/j.1365-263X.2009.01020.x.
12. Antonarakis G.S., Palaska P.K., Herzog G. Caries prevalence in non-syndromic patients with cleft lip and/or palate: a meta-analysis. Caries Res. 2013; 47(5): 406-413. DOI: 10.1159/000349911.
13. Weingaetner J., Fanghaenel I., Bienengracher V., Gund-lach K.K. Initial findings on teratological and developmental relationships and differences between neural tube defects and facial clefting. The first experimental results. J Craniomaxillofac Surg. 2005; 33(5): 297-300.
14. Garg A., Utrega A., Singh S.P., Agurana K. Neural tube defects and their significance in clinical dentistry. J Investig Clin Dent. 2013; 4(1): 3-8. DOI: 10.1111/j.2041-1626.2012.00141.x.
15. Fang Y., Zhang R., Zhi X. Zhao L., Cao L., Wang Y., Cai C. Association of main folate metabolic pathway gene polymorphisms with neural tube defects in Han population of Northern China. Childs Nerv Syst. 2018; 34(4): 725-729. DOI: 10.1007/s00381-018-3730-0.
16. Wilcken B., Bamforth F., Li Z., Zhu H, Ritvanen A., Renlund M., Stoll C., Alembik Y., Dott B., Czeizel A.E., Gelman-Kohan Z., Sca-rano G., Bianca S., Ettore G., Tenconi R., Bellato S., Scala I., Mutchi-nick O.M., López M.A., de Walle H., Hofstra R., Joutchenko L., Ka-vteladze L., Bermejo E., Martínez-Frías M.L., Gallagher M., Erickson J.D., Vollset S.E., Mastroiacovo P., Andria G., Botto L.D. Geographical and ethnic variation of the 677C>T allele of 5,10 methylenetetra-hydrofolate reductase (MTHFR):findings from over 7000 newborns from 16 areas world wide. J Med Genet. 2003; 40(8): 619-625.
17. Wang X., Fu J., Li Q., Zeng D. Geographical and ethnic distributions of the MTHFR C677T, A1298C and MTRR A66G gene polymorphisms in Chinese populations: a meta-analysis. PLoS One. 2016; 11(4): e0152414. DOI:10.1371/journal.pone.0152414.
18. Bailey L.B. and Berry R.J. Folic acid supplementation and the occurrence of congenital heart defects, orofacial clefts, multiple births, and miscarriage. Am J Clin Nutr. 2005; 81(5): 1213S-1217S.
19. Van der Linden I.J., Afman L.A., Heil S.G., Blom H.J. Genetic variation in genes of folate metabolism and neural-tube defect risk. Proc. Nutr. Soc. 2006; 65(2): 204-215.
20. Colson N.J., Naug H. L., Nikbakht E., Zhang P., McCor-mack J. The impact of MTHFR 677 C/T genotypes on folate status markers: a meta-analysis of folic acid intervention studies. European Journal of Nutrition.2017; 56(1): 247-260. DOI: 10.1007/ s00394-015-1076-x.
21. Панкова Е.Е., Зинченко Л.В., Матулевич С.А., Голубцов В.И. Полиморфизм С677Т гена MTHFR как фактор риска врожденной патологии у потомства. Кубанский научный медицинский вестник. 2009; 6(111): 144-147. [Pankova E.E., Zinhen-ko L.V., Matulevich S.A., Golubtsov V.I. Polymorphism С677Т of gene MTHFR as the risk factor congenital pathology at posterity. Kubanskij nauchnyj medicinskij vestnik. 2009; 6(111): 144-147. (In Russ., English abstract)].
22. Lajin B., Alachkar A., Sakur A. Triplex tetra-primer ARMS-PCR method for the simultaneous detection of MTHFR c.677C.T and c.1298A.C, and MTRR c.66A.G polymorphisms of the fo-late-homocysteine metabolic pathway. Mol. Cell Probes. 2012; 26(1): 16-20. DOI:10.1016/j.mcp.2011.10.005.
23. Mills J.L., Molloy A.M., Parle-McDermott A., Troendle J.F., Brody L.C., Conley M.R., Cox C., Pangilinan F., Orr D.J., Earley M., McKiernan E., Lynn E.C., Doyle A., Scott J.M., Kirke P.N. Fo-late-related gene polymorphisms as risk factors for cleft lip and cleft palate. Birth Defects Res A Clin Mol Teratol. 2008; 82(9): 636-643. DOI:10.1002/bdra.20491.
24. Pan X., Wang P., Yin X., Liu X., Li D., Li X., Wang Y., Li H., Yu Z. Association between Maternal MTHFR polymorphisms and nonsyndromic cleft lip with or without cleft palate in offspring, a me-ta-analysis based on 15 case-control studies. Int. J. Fertil. Steril. 2015; 8(4): 463-480.
25. Luo Y.L., Cheng Y.L., Ye P., Wang W., Gao X.H., Chen Q. Association between MTHFR polymorphisms and orofacial clefts risk: a meta-analysis. Birth Defects Res A Clin Mol Teratol. 2012; 94(4): 237-244. DOI: 10.1002/bdra.23005.
26. Удина И.Г., Учаева В.С., Васильев Ю.А., Бутовская П.Р, Варапатвелян А.Ф., Плотникова Е.Ю., Курбатова О.Л., Гуленко О.В. Молекулярно-генетическое изучение ВПР челюстно-лице-вой области в Краснодарском крае. Наука Кубани. 2011; 4: 2027. [Udina I.G., Uchaeva V.S., Vasiliev Yu. A., Butovskaya P.R., Ve-rapatvelyan A.F., Plotnikova E. Yu., Kurbatova O.L., Gulenko O.V. Molecular genetic analysis of congenital malformations of orofacial area in Krasnodar region. Nauka Kubani. 2011; 4: 20-27. (In Russ., English abstract)].
27. Callejón G., Mayor-Olea A., Jiménez A.J. Gaitán M.J., Palomares A.R., Martínez F., Ruiz M., Reyes-Engel A. Genotypes of the C677T and A1298C polymorphisms of the MTHFR gene as a cause of human spontaneous embryo loss. Hum. Reprod. 2007; 22(12): 3249-3254.
28. Mayor-Olea A., Callejón G., Palomares A.R., Jiménez A.J., Gaitán M.J., Rodríguez A., Ruiz M., Reyes-Engel A. Human genetic selection on the MTHFR 677C>T polymorphism. BMC Medical Genetics. 2008; 9: 104. DOI 10.1186/471-2350-9-104.
29. Jahanbin A., Shadkam E., Miri H.H., Shirazi A.S., Abtahi M. Maternal folic acid supplementation and the risk of oral clefts in offspring. J. Craniofac. Surg. 2018; May 14. DOI: 10.1097/ SCS.0000000000004488. [Epub ahead of print].
30. Selhub J. and Rosenberg I.H. Excessive folic acid intake and relation to adverse health outcome. Biochimie. 2016; 126: 7178. DOI: 10.1016/j.biochi.2016.04.010.
Поступила /Received 21.08.2018 Принята в печать/Accepted 28.09.2018
Авторы заявили об отсутствии конфликта интересов / The authors declare no conflict of interest
Контактная информация: Удина Ирина Геннадьевна; тел.: (499) 135-42-26, +7(903) 277-41-78; e-mail: irina_udina@mail.ru; Россия, 119991, г. Москва, ул. Губкина, д. 3.
Corresponding author: Irina G. Udina; tel.: (499) 135-42-26, +7(903) 277-41-78; e-mail: irina_udina@mail.ru; 3, Gubkin str., Moscow, Russia, 119991.
Благодарности: Работа частично поддержана грантом РФФИ № р_а 16-44-230646 и Госзаданием № 0112-2018-0025 "Молекулярные подходы к анализу адаптивных генетических и эпигенетических процессов в природных популяциях".
Acknowledgements: Work partially supported by grant No. 16-44-230646 and no. Goszadaniem r_a 0112-2018-0025 "Molecular approaches to the analysis of Adaptive genetic and epigenetic processes in natural populations".
