CC BY
13
МАТЕРИАЛЫ КОНФЕРЕНЦИИ
К.С. Афанасьева, О.В. Пирогова, Е.В. Морозова, Ю.Ю. Власова, А.Г. Смирнова, И.С. Моисеев, С.Н. Бондаренко, А.Д. Кулагин
влияние посттрансплантационного назначения ингибиторов тирозинкиназ на долгосрочные результаты терапии у пациентов с ph-позитивным острым лимфобластным лейкозом
«Научно-исследовательский институт детской онкологии, гематологии и трансплантологии имени Р.М. Горбачевой» Федерального государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Первый Санкт-Петербургский государственный медицинский университет имени академика И.П. Павлова» Министерства здравоохранения Российской Федерации, г. Санкт-Петербург
Введение. Широкое внедрение в практику таргетных препаратов - ингибиторов тирозинкиназ (ИТК) в сочетании с химиотерапией и последующей аллогенной трансплантацией гемопоэтических стволовых клеток (алло-ТГСК) привели к значительному улучшению результатов терапии у части пациентов с Р^позитивным острым лимфобластным лейкозом (ОЛЛ). Таким образом, на современном этапе долгосрочная выживаемость пациентов из данной подгруппы может быть сопоставлена с выживаемостью пациентов с Р^негативным ОЛЛ. Тем не менее, рецидивы после алло-ТГСК остаются основной причиной неудач лечения и ассоциированы с неблагоприятным прогнозом. Одной из возможных опций профилактики посттрансплантационных рецидивов является поддерживающая терапия с применением ИТК после алло-ТГСК, однако в настоящее время в литературе данные об оптимальных режимах их назначения ограничены.
Цель. Оценить влияние назначения ИТК в посттрансплантационном периоде на долгосрочные результаты терапии после алло-ТГСК у реципиентов с Р^позитивным ОЛЛ.
Материалы и методы. В данном исследовании проведен ретроспективный анализ 96 пациентов с Р^позитивным ОЛЛ с медианой возраста 30 лет (18-57 лет), которым алло-ТГСК выполнена от полностью совместимого родственного донора (п = 24), гаплоидентичного донора (п = 12) или неродственного донора (п = 60) в НИИ ДОГиТ им. Р.М. Горбачевой с 2007 по 2019 год. Медиана наблюдения за пациентами составила 24,8 месяца (1-98 месяцев). К моменту выполнения алло-ТГСК 54 (56%) пациента были в 1 полной ремиссии, 16 (17%) пациентов - во 2 ремиссии, 10 (10%) пациентов - в 3 или последующих ремиссиях, 16 (17%) пациентов - в активной фазе заболевания (рецидив/резистентность/прогрессирование). 88 (92%) пациентов до алло-ТГСК получали терапию ИТК 1, 2 или 3 поколения. 36 (38%) пациентов к моменту выполнения алло-ТГСК находились в МОБ-отрицательном статусе (по данным ПЦР на определение химерного транскрипта BCR/ABL), 39 (40%) пациентов сохраняли МОБ-позитивность на фоне проведенной терапии, для 21 (22%) пациента МОБ статус не
оценивался. В посттрансплантационном периоде 60 (63%) пациентов получали ИТК (иматиниб или дазатиниб). Целями посттрансплантационного назначения ИТК были: профилактическая - у 43 (72%) пациентов, превентивная - у 8 (13%) пациентов, лечение рецидива - у 9 (15%) пациентов. Медиана назначения ИТК составила 60 дней (30 до 125 дней) после алло-ТГСК. Пациенты, не достигшие приживления, были исключены из анализа. Для оценки результатов выполнено сравнение групп пациентов, которые получали и не получали ИТК в посттрансплантационном периоде с использованием лэндмарк анализа.
Результаты. В общей группе пациентов 5-летняя общая выживаемость (ОВ), бессобытийная выживаемость (БСВ), частота рецидивов составили 59,4%, 45,8% и 35,4%, соответственно. При сравнении выживаемости в группах пациентов, которым ИТК были назначены после алло-ТГСК в качестве профилактики, с пациентами, которые не получали ИТК в качестве профилактики, получены статистически достоверные различия в 5-летней БСВ: в 1-й группе БСВ составила 63,3%, во 2-ой группе 29% (р<0,001). 5-летняя частота рецидивов в 1-й и 2-й группах составила 28,6% и 51,6%, соответственно (р<0,001). Кроме того, выявлена тенденция, демонстрирующая, что поколение ИТК (1 или 2) после алло-ТГСК не влияло на результаты ОВ и БСВ (р<0,427 и р<0,463, соответственно).
Выводы. Полученные нами данные указывают на клиническую значимость назначения ИТК после алло-ТГСК, отражающуюся в значительном улучшении показателей БСВ и частоты рецидивов у пациентов, которые получали терапию ИТК 1 или 2 поколения с профилактической целью. Основываясь на представленных данных, можно заключить, что с целью улучшения долгосрочных результатов терапии у пациентов с Р^позитивным ОЛЛ, предпочтительным является профилактическое назначение ИТК не позднее, чем через 60 дней после алло-ТГСК, в случае отсутствия других факторов, ограничивающих их назначение (гематологическая/негематологическая токсичность ИТК, гипофункция трансплантата и др.).
Э.П. Адильгереева1, А.Г Никитин2, Д.Г. Жегло1, О.А. Шухов3, С.А. Смирнихина1, Е.Ю. Челышева3, А.В. Лавров1, А.Г. Туркина3, С.И. Куцев1
молекулярно-генетические предикторы первичной резистентности хронического миелоидного лейкоза к терапии ингибиторами
тирозинкиназ
1Федеральное Государственное бюджетное научное учреждение «Медико-генетический научный центр имени академика Н.П. Бочкова», г.Москва
2Федеральное государственное бюджетное учреждение «Научно-исследовательский институт пульмонологии
Федерального медико-биологического агентства», г. Москва 3Федеральное Государственное бюджетное учреждение «Национальный медицинский исследовательский центр гематологии» Министерства здравоохранения Российской Федерации, г.Москва
Введение. Разработка таргетных препаратов ИТК позволила значительно улучшить эффективность терапии ХМЛ. Несмотря на впечатляющие успехи лечения ХМЛ, по данным разных авторов, от 5-25% пациентов резистентны к проводимой терапии. На сегодняшний день перед нами стоит задача в определении прогностических факторов неудачи
терапии на этапе диагностики заболевания. Геномные исследования могут заложить основу для улучшения диагностики риска неудачи терапии для более точного раннего выявления устойчивости к ИТК.
Материалы и методы. В исследование было включено 60 пациентов с впервые выявленным ХМЛ. Диагноз был под-
ВЕСТНИК ГЕМАТОЛОГИИ, том XVII, № 2, 2021
твержден цитогенетическими и молекулярно-генетически-ми методами. Минимальный срок наблюдения 12 месяцев. Эффективность терапии оценивали каждые 3 месяца, согласно критериям ELN2013. Спустя 12 месяцев терапии пациенты были разделены на 3 группы: группа оптимального ответа, в которую вошли 33 пациента; группа предупреждения- 15 пациентов; группа резистентных к терапии- 12 пациентов. Периферическую кровь забирали в пробирки с ЭДТА в момент установления диагноза до начала терапии ИТК. В качестве контрольной ткани было произведено взятие букального эпителия. ДНК выделяли с использованием набора Quick-gDNATM Blood Mini Prep (Zymo Research), согласно протоколу производителя. Приготовление библиотек проводилось с использованием набора TruSeq® DNA Library Kit, (Illumina). Секвенирование экзома проводилось на платформе Illumina NextSeq® 550 Sequencing System, с использованием NextSeq® 500/550 High Output Kit v2 (75 cycles), (Illumina). Пробопод-готовка и последующее секвенирование проводились по стандартному протоколу. Среднее покрытие составляет 80x. Этапы биоинформационного анализа включали: удаление адаптеров и последовательностей с низким качеством прочтения; картирование прочтений на референсную последовательность генома человека при помощи алгоритма BWA-MEM; проверка качества исходных данных, выравнивания, обогащения и покрытия целевых регионов с помощью FastQC, BAMQC и NGSrich, маркировка дубликатов, поиск нуклеотид-ных вариаций с помощью GATK HaplotypeCaller + Freebayes + Strelka2 (с получением объединенного VCF-файла); обработка консенсусного VCF-файлов с помощью предобучен-ной нейронной сети для фильтрации ложноположительных результатов; аннотирование с помощью SnpEff (анализ всех транскриптов), ANNOVAR (анализ частот аллелей в ExAC, 1000G и ESP6500, алгоритмы проверки функциональной значимости SIFT, PolyPhen2, MutationTaster, FATMM, CADD, DANN, REVEL и M-CAP) и Alamut Batch (влияние на сплайсинг, базы данных dbSNP, ClinVar, COSMIC, HGMD Professional).
Результаты. По результатам анализа экзомов нам уда-
лось обнаружить семь вариантов, два из которых хорошо описаны и являются патогенными и пять вариантов патогенны, согласно предсказательным программам. У двух пациентов из группы с оптимальным ответом на терапию было выявлено два патогенных варианта, ранее описанных при других онкологических заболевания: c.1849G>T p.V617F в гене }АК2; c.5266dupC p.Q1756fs в гене BRCA1. В группе пациентов, резистентных к терапии, нами было обнаружено 5 вариантов у 4 человек в 2 генах: ASXL1 и DNMT3A. Варианты в данных генах встречаются при различных онкогема-тологических заболеваниях, в том числе при миелодиспла-стическом синдроме и остром миелоидном лейкозе. У трех пациентов встретилось 2 разных варианта в 12 экзоне гена ASXL1, приводящие к потере функций, у одного пациента встретился миссенс вариант в 4 экзоне гена ASXL1. Экзом опухли одного из пациентов содержал одновременно варианты в 12 экзоне гена ASLX1 и 22 экзоне гена DNMT3A. Все пациенты имели смену нескольких линий терапии. Мы провели валидацию найденных вариантов секвенированием по Сенгеру в образцах крови. Также нами была проведена вали-дация в образцах буккального эпителия для двух пациентов, для двух других пациентов материал был недоступен. По результатам валидации миссенс вариант в 4 экзоне гена ASXL1 является терминальным, тогда как вариант в 12 экзоне - соматическим.
Выводы. На основании проведенной работы можно предположить, что выявленные варианты генов ASXL1 и DNMT3A могут быть ассоциированы с резистентностью к терапии ИТК и являться прогностическими маркерами эффективности терапии ИТК на этапе диагностики заболевания. Основываясь на результатах, полученных нами и другими исследователями в области онкологических заболеваний, можно утверждать, что при помощи геномных исследований мы можем обнаружить молекулярно-генетические маркеры эффективности терапии, что, в свою очередь, позволит обеспечить персонализированный подход к назначению таргет-ных препаратов.
Б.В. Бидерман, Е.Б. Ликольд, Н.А. Северина, Т.Н. Обухова, А.Б. Судариков
генетические нарушения у российских пациентов хлл c наиболее распространенными стереотипными антигенными рецепторами
Федеральное государственное бюджетное учреждение «Национальный медицинский исследовательский центр гематологии» Министерства здравоохранения Российской Федерации, г. Москва
Введение. Хронический лимфоцитарный лейкоз отличается от других лимфопролиферативных заболеваний экстремальным сужением репертуара генов ЮНУ В настоящее время показано, что фракция стереотипных антигенных рецепторов (САР) - В-клеточных рецепторов с высокогомологичным строением - составляет более 40% от всех случаев ХЛЛ, при этом 29 таких наиболее распространенных подгрупп составляют более 13% всех случаев ХЛЛ. Часть таких САР уже выделены как независимые факторы прогноза при ХЛЛ (CLL#1, CLL#2, CLL#8 демонстрируют крайне агрессивное течение заболевания, CLL#4 - индолентное). Также было выявлено, что подгруппы САР различаются по частоте встречаемости генетических нарушений.
Цель. Определить частоту встречаемости мутаций в генах ТР53, NOTCH1, SF3B1 и делеции 17р13/ТР53 у больных ХЛЛ с экспрессией групп САР, образованных с участием одинаковых ЮНУ
Материалы и методы. В исследование включены 88 больных с ХЛЛ. Мутационный статус генов ЮНУ всех пациентов был исследован в ФГБУ «НМИЦ Гематологии» МЗ РФ с 2012 по 2020гг. Нуклеотидные последовательности генов ЮНУ и САР определяли согласно методике, рекомендован-
ной ERIC. Мутации в гене NOTCH1 (34 экзон) исследовали методом фрагментного анализа, либо методом NGS с помощью праймеров Campregher et al. Мутации в гене TP53 (2-11 экзо-ны) определяли с помощью NGS согласно Pavlova et al. Мутации в гене SF3B1 (14-16 экзоны) исследовали у 26 пациентов методом NGS. 66-ти больным выполнено FISH-исследование на наличие делеции 17p13/TP53 (Abbott, USA).
Результаты. В данной работе исследовался материал 32 пациентов с CLL#1, 17 с CLL#6, 15 с CLL#3, 12 с CLL#99 и 12 CLL#28A. CDR3 в подгруппах CLL#1 и #99 имеют сходный мотив, отличаются только на 1 аминокислоту и образуются с использованием генов IGHV 1го клана (чаще IGHV1-2). CLL#28A также образуется на основе гена IGHV1-2, в основе CLL#3 и #6 - IGHV1-69.
Мутации в гене TP53 были выявлены с высокой частотой в подгруппах CLL#6, #1, #99 и #28А - соответственно в 6 (35,3%), 1 (34,3%), 4 (33,3%) и 2(16%) случаев. При этом у всех пациентов в подгруппах #99 и #28а были обнаружены только минорные мутации (VAF<5%). У большинства пациентов подгрупп #1 и #6 VAF>10%. У двух пациентов с CLL#6 и одного c CLL#99 наблюдалось по 2 клона. В подгруппе CLL#3 было выявлено только 2 случая с мутациями в данном гене,
