CC BY
124© Коллектив авторов, 2022 https://doi.org/10.29296/24999490-2022-03-05
МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ РАКА ЭНДОМЕТРИЯ И ИХ ВЗАИМОСВЯЗЬ С КЛИНИКО-МОРФОЛОГИЧЕСКИМИ ХАРАКТЕРИСТИКАМИ
Е.И. Королёва1, А.А. Мусаелян1 2, В.Д. Назаров1, С.В. Лапин1, С.Л. Воробьев3, О.Л. Шарова3, Е.С. Козорезова3, И.М. Кораблина3, В.Л. Эмануэль1, C.B. Орлов1, 2
1ФГБОУ ВО «Первый Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им. академика И.П. Павлова» Минздрава России, Российская Федерация, 197022, Санкт-Петербург, ул. Льва Толстого, д. 6—8; 2ФГБНУ«Научно-исследовательский институт медицинской приматологии» Минобрнауки России, Российская Федерация, 354376, Краснодарский край, Сочи, Адлерский р-н, с. Весёлое, ул. Мира, д. 177; 3ООО «Национальный центр клинической морфологической диагностики», Российская Федерация, 192283, Санкт-Петербург, ул. Олеко Дундича, д. 8, к. 2
СВЕДЕНИЯ ОБ АВТОРАХ
Королёва Екатерина Игоревна — клинический ординатор, сотрудник лаборатории диагностики аутоиммунных заболеваний ФГБОУ ВО «Первый Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им. академика И.П. Павлова» Минздрава России. Тел.: +7(921) 870-48-50. E-mail: katherinakoroleva@mail.ru. ORCID: 0000-0002-8117-981X
Мусаелян Арам Ашотович — клинический ординатор, младший научный сотрудник Лаборатории диагностики аутоиммунных заболеваний ФГБОУ ВО «Первый Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им. академика И.П. Павлова» Минздрава России. Тел.: +7 (999) 026-34-55. E-mail: a.musaelyan8@gmail.com. ORCID: 0000-00027570-2256.
Назаров Владимир Дмитриевич — врач лабораторной диагностики Лаборатории диагностики аутоиммунных заболеваний ФГБОУ ВО «Первый Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им. академика И.П. Павлова» Минздрава России. Кандидат медицинский наук. Тел.: +7 (952) 362-14-17. E-mail: nazarov19932@mail.ru. ORCID: 0000-0002-93548790
Лапин Сергей Владимирович — заведующий Лабораторией диагностики аутоиммунных заболеваний ФГБОУ ВО «Первый Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им. академика И.П. Павлова» Минздрава России. Кандидат медицинский наук. Тел.: +7(812) 338-71-94. E-mail: svlapin@mail.ru. ORCID: 0000-0002-4998-3699
Воробьев Сергей Леонидович — врач-патологоанатом ООО «Национальный центр клинической морфологической диагностики». Кандидат медицинских наук. Тел.: +7(812) 327-29-16. E-mail: ncmd@ncmd.ru. ORCID: 0000-0002-7817-9069
Шарова Ольга Львовна — врач-патологоанатом ООО «Национальный центр клинической морфологической диагностики». Кандидат медицинских наук. Тел.: +7(812) 275-72-89. E-mail: ncmd@ncmd.ru. ORCID: 0000-0002-2354-5754
Козорезова Евгения Сергеевна — врач клинической лабораторной диагностики, ООО «Национальный центр клинической морфологической диагностики». Тел.: +7(812) 244-02-50. E-mail:pdclient@ncmd.ru. ORCID: 0000-0002-3659-7510
Кораблина Инна Михайловна — врач-патологоанатом ООО «Национальный центр клинической морфологической диагностики». Тел.: +7(812) 244-02-50. E-mail: zavighl@ncmd.ru. ORCID: 0000-0002-5067-8288
Эмануэль Владимир Леонидович — заведующий кафедрой клинической лабораторной диагностики ФГБОУ ВО «Первый Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им. академика И.П. Павлова» Минздрава России. Доктор медицинских наук, профессор. Тел.: +7(812) 338-66-11. E-mail: vladimirem1@gmail.com. ORCID: 0000-0002-2079-0439
Орлов Сергей Владимирович — директор ФГБНУ «Научно-исследовательский институт медицинской приматологии». Доктор медицинских наук, профессор, член-корреспондент РАН. Тел.: +7 (862) 243-20-31. E-mail: mail@primatologia.ru. ORCID: 0000-0001-6080-8042
Введение. В 2013 г. группой The Cancer Genome Atlas (TCGA) разработана новая классификация рака эндометрия, в рамках которой выделено 4 молекулярных подтипа — c мутациями POLE, высоким уровнем микросателлитной нестабильности, высоким уровнем копийности TP53, низким уровнем копийности TP53. Установление подтипа необходимо для прогнозирования течения заболевания, а также может способствовать определению оптимальной терапии.
Цель. Оценить распространенность мутаций POLE, MSI и аномальной экспрессии p53 и сравнить молекулярные характеристики и клинико-патологические особенности опухоли.
Материал и методы. Для исследования были отобраны 45 образцов эндометриоидной аденокарциномы, полученных в результате диагностической биопсии или оперативного вмешательства. Каждый образец был подвергнут гистологическому, иммуногистохимическому (ИГХ) и генетическому исследованиям. Генетическое тестирование проводилось секвенированием эк-зонов 9 и 13 гена POLE, а также методом полимеразной цепной реакции для определения микросателлитной нестабильности. ИГХ метод применялся для определения уровня экспрессии белка p53.
Результаты. Среди 45 исследуемых образцов, мутации в гене POLE не выявлены. Микросателлитная нестабильность выявлена в 10 (22%) исследуемых образцах. Аномальная экспрессия p53 не выявлена. Проведено сравнение клинико-патологических характеристик MSI- и MSS-опухолей. Статистически значимая разница наблюдалась в уровне митотической активности исследуемых опухолей — у MSI-опухолей уровень митотической активности был выше. Аналогично отмечался более низкий уровень дифференцировки у MSI опухолей.
Заключение. Полученные результаты подтверждают низкую частоту встречаемости мутаций POLE и аномальной экспрессии белка p53 среди опухолей низкой степени злокачественности. В то же время значительная распространенность микро-сателлитной нестабильности в этой группе опухолей требует дальнейшего изучения влияния данного маркера на течение заболевания.
Ключевые слова: рак эндометрия, молекулярная классификация, POLE, MSI, p53
MOLECULAR MARKERS OF ENDOMETRIAL CARCINOMA AND ASSOCIATED CLINICOPATHOLOGICAL FEATURES E.I. Koroleva1, A.A. Musaelyan1,2, V.D. Nazarov1, S.V. Lapin1, S.L. Vorobev3, O.L. Sharova3, E.S. Kozorezova3, I.M. Korablina3, V.L. Emanuel1, S.V. Orlov1,2 1I.P. Pavlov First Saint-Petersburg State Medical University, Lva Tolstogo Str. 6—8, Saint Petersburg, 197022, Russian Federation;
2Federal State Budget Research Institution "Research Institute of Medical Primatology", Mira str. 177, Veseloe, Adler region, Sochi, Krasnodar krai, 354376, Russian Federation;
3National Centerfor Clinical Morphological Diagnostics, Oleco Dundicha str., k. 2, 8, Saint Petersburg, 192283, Russian Federation
INFORMATION ABOUT THE AUTHORS
Koroleva Ekaterina Igorevna — clinical resident, worker in Laboratory of autoimmune diseases diagnostics in I.P. Pavlov First Saint-Petersburg State Medical University. Tel.: +7(921) 870-48-50. E-mail: katherinakoroleva@mail.ru. ORCID: 0000-0002-8117-981X
Musaelyan Aram Ashotovich — clinical resident, junior research worker in Laboratory of autoimmune diseases diagnostics, I.P. Pavlov First Saint-Petersburg State Medical University. Tel.: +7 (999) 026-34-55. E-mail: a.musaelyan8@gmail.com. ORCID: 0000-0002-75702256.
Nazarov Vladimir Dmitrievich — doctor of clinical laboratory diagnostics in Laboratory of autoimmune diseases diagnostics, I.P. Pavlov First Saint-Petersburg State Medical University. Candidate of medical sciences. Tel.: +7 (952) 362-14-17. E-mail: nazarov19932@ mail.ru. ORCID: 0000-0002-9354-8790
Lapin Sergej Vladimirovich — head of the Laboratory of autoimmune diseases diagnostics in I.P. Pavlov First Saint-Petersburg State Medical University. Candidate of medical sciences. Tel.: +7 (812) 338-71-94. E-mail: svlapin@mail.ru. ORCID: 0000-0002-4998-3699 Vorobev Sergey Leonidovich — pathologist OOO «National center of clinical and morphological diagnostics». Candidate of medical sciences. Tel.: +7(812) 327-29-16. E-mail: ncmd@ncmd.ru. ORCID: 0000-0002-7817-9069
Sharova Olga Lvovna — pathologist OOO «National center of clinical and morphological diagnostics». Candidate of medical sciences. Tel.: +7(812) 275-72-89. E-mail: ncmd@ncmd.ru. ORCID: 0000-0002-2354-5754
Kozorezova Evgeniya Sergeevna — doctor of clinical laboratory diagnostics OOO «National center of clinical and morphological diagnostics». Candidate of medical sciences. Tel.: +7 (812) 244-02-50. E-mail: pdclient@ncmd.ru. ORCID: 0000-0002-3659-7510
Korablina Inna Mihaylovna — pathologist OOO «National center of clinical and morphological diagnostics». Tel.: +7(812) 244-02-50. E-mail: zavighl@ncmd.ru. ORCID: 0000-0002-5067-8288
Emanuel Vladimir Leonidovich — head of clinical laboratory department I.P. Pavlov First Saint-Petersburg State Medical University. Doctor of medical sciences, professor. Tel.: +7 (812) 338-66-11. E-mail: vladimirem1@gmail.com. ORCID: 0000-0002-2079-0439
Orlov Sergey Vladimirovich — head of the Research Institute of Medical Primatology. Doctor of medical sciences, professor, corresponding member of the RAS. Tel.: +7 (862) 243-20-31. E-mail.: mail@primatologia.ru. ORCID: 0000-0001-6080-8042
Introduction. In 2013 The Cancer Genome Atlas research group divided the molecular aberrations in endometrial cancer into four subtypes: POLE mutations, microsatellite instability, copy-number low and copy-number high. These subtypes have different prognosis and could probably mean different therapeutical options.
The aim of the study. To estimate the prevalence of different molecular aberrations and to find out associated clinicopathological features. Methods. The study included 45 samples of endometrial carcinoma. Pathological structure and molecular features of each sample were evaluated. Immunohistochemical testing was used to find out the level of p53 expression. Genetic testing was carried out by PCR for MSI testing and by sequencing POLE exon 9 and exon 13 for point mitations.
Results. Nor POLE mutations, nor abnormal p53 expression level were found in studied samples. The prevalence was 22% for MSI tumors. No significant difference in clinicopathological features was found between MSI and MSS tumors except for mitotic index that was higher in MSI tumors. Similarly, MSI tumors were less differentiated but the difference was not statistically significant.
Conclusion. POLE mutations and abnormal p53 level are rare in low-grade endometrial carcinomas. Nevertheless, MSI tumors are common in this group and further research of their prognostic significance is important. Key words: endometrial cancer, molecular classification, POLE, MSI, p53
ВВЕДЕНИЕ
Основу классификации рака эндометрия (РЭ) традиционно составляют гистологический подтип опухоли, стадия, распространенность процесса, наличие васкулярной инвазии. В случаях эндометри-альной карциномы данные характеристики часто оказываются весьма субъективными, вследствие чего при фактически однотипном процессе может быть назначена различная терапия в зависимости от интерпретации опухоли конкретным специалистом. Кроме того, у пациентов с одинаковыми стадией, гистологическим субтипом опухоли, схожей терапией могут наблюдаться различные исходы заболевания [1]. Все это обусловливает необходимость поиска более объективной, воспроизводимой и информативной системы критериев оценки опухолевого процесса.
Группой исследователей проекта The Cancer Genome Atlas (TCGA, 2013) г. предложена молекулярная классификация, согласно которой РЭ следует разделять на 4 отдельные подгруппы:
♦ c мутациями POLE (ультрамутированный фенотип опухоли);
♦ с высоким уровнем микросателлитной нестабильности (гипермутированный);
♦ с высоким уровнем копийности TP53;
♦ с низким уровнем копийности TP53 [2].
В дальнейшем эта классификация воспроизведена другими исследовательскими группами, такими как TransPORTEC и ProMisE [3, 4]. Однако ее клиническое использование до сих пор является предметом дискуссий, в т.ч. в связи с противоречивыми данными многочисленных исследований.
Первый молекулярный тип РЭ включает опухоли с мутациями в гене POLE, кодирующем экзону-клеазный домен ДНК-полимеразы эпсилон. Данные мутации обнаруживаются у 7—12% пациентов с РЭ. В норме экзонуклеазный домен ДНК-полимеразы эпсилон отвечает за выявление и корректировку ошибок репликации. В результате миссенс-мутаций в гене POLE данная функция нарушается, что приводит к формированию ультрамутированного фенотипа. Так, частота соматических мутаций в таких опухолях превышает 100 на мегабазу. В таких опухолях наблюдается высокая неоантигенная нагрузка и усиленная инфильтрация опухоли лимфоцитами, что обуславливает потенциально хороший ответ на иммунотерапию [5]. По данным многочисленных исследований, опухоли с мутациями в гене POLE ассоциированы с лучшим прогнозом и реже рецидивируют по сравнению с опухолями того же типа, уровня дифференци-ровки и стадии, что подчеркивает важность выявления данного маркера. Следует также отметить, что на данный момент опубликованных исследований, касающихся распространенности мутаций в гене POLE в Российской Федерации, в доступной литературе мы не обнаружили.
Микросателлитная нестабильность встречается у 9—45% пациентов с РЭ и чаще всего наблюдается
при эндометриоидном типе опухоли [6]. Причиной микросателлитной нестабильности являются соматические или (реже) терминальные мутации в генах системы репарации неспаренных оснований ДНК (MMR), ответственной за удаление неправильно спаренных в ходе репликации оснований. Неспособность к удалению неспаренных оснований может быть определена по длине микросателлитов ДНК, которая различна в нормальных и опухолевых клетках. Путем сравнения длины микросателлитных повторов между нормальными и опухолевыми клетками определяется степень нестабильности генома. Выделяют микросателлитно стабильные (MSS) и микросателлитно нестабильные (MSI) опухоли [7]. Исследование уровня микросателлитной нестабильности включено в рекомендации National Comprehensive Cancer Network [8], что обусловлено доказательством наличия клинического ответа на применение пембролизумаба у пациентов данной группы. Примечательно, что в отличие от колорек-тального рака, при котором MSI является маркером благоприятного прогноза, при РЭ влияние микросателлитной нестабильности на клинико-морфоло-гическую картину точно не установлено [4, 9—11]. Надо отметить, что важность выявления MSI у пациенток с РЭ связано также с возможностью наличия у них синдрома Линча, вызываемого герминальными мутациями генов системы репарации неспаренных оснований ДНК.
Мутации в гене TP53 представляют собой одну из самых распространенных аберраций при РЭ. Увеличение или уменьшение количества копий гена TP53, миссенс- и нонсенс-мутации, а также мутации со сдвигом рамки считывания приводят к накоплению белка р53 внутри клеток и феномену «гиперэкспрессии», или к полному отсутствию синтеза белка — «гипоэкспрессии», что чаще всего определяется с помощью иммуногистохимических (ИГХ) методик. Согласно исследованию Yano et al., нормальным уровнем экспрессии предлагается считать 1—80%, а аномальным и ассоциированным с мутациями в TP53 — уровень 0 и >80% [12]. Считается, что исследование мутаций в гене TP53 способствует как определению гистологического типа опухоли, так и прогнозированию течения заболевания [13]. Рядом исследований было показано, что повышение уровня экспрессии p53 ассоциировано с худшим прогнозом [12, 14], однако полученные данные зависят от гистологического типа опухоли и сильно варьировали у разных авторов.
Предполагается, что комбинированное использование упомянутых маркеров позволит улучшить точность прогнозирования РЭ. Однако исследований, посвященных связи клинико-морфологической картины РЭ с данными маркерами в Российской Федерации нам не известны.
Целью данной работы является исследование мо-лекулярно-генетических особенностей РЭ и их связи с клинико-морфологической картиной.
МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ
Для исследования были отобраны 45 образцов эндометриоидной аденокарциномы, полученных в результате диагностической биопсии или оперативного вмешательства. Образцы ткани были фиксированы 10% нейтральным забуференным формалином, обезвожены в 8 порциях изопропилового спирта и залиты в парафиновые блоки. Каждый образец был подвергнут гистологическому, ИГХ и генетическому исследованиям. Результаты морфологического исследования, а также клинические данные приведены в таблице.
Для исследования микросателлитной нестабильности и мутаций в гене POLE были изготовлены по 3 серийных среза из парафиновых блоков ткани опухоли толщиной 10 мкм, выделение ДНК из которых проводилось с использованием готового набора реактивов QIAamp® DNA Mini Kit (Qiagen, Германия). Оценка количества выделенной нуклеиновой кисло-
ты, а также ее чистоты проводилась с помощью спектрофотометра BioDrop UV/VIS (SERVA, Германия).
Для исследования микросателлитной нестабильности применялся метод полимеразной цепной реакции (ПЦР) с последующим фрагментным анализом. Согласно рекомендациям ESMO (2019), была применена панель, включающая 5 мононуклеотидных повторов (BAT-25, BAT-26, NR-21, NR-24, NR-27) [15]. С целью выявления точечных мутаций проводилось секвенирование экзонов 9 и 13 гена POLE. Праймеры и условия ПЦР амплификации могут быть предоставлены по запросу.
Уровень экспрессии белка р53 определялся ИГХ методом на автоматизированной платформе Ventana (США) с использованием антитела компании Roche (don DO7); нуклеарная экспрессия онкопротеина р53 в опухолевых клетках оценивалась количественно (%). При оценке аномальным считался уровень экспрессии белка в >80% ядер. Меньший уровень экспрессии рассматривался как норма.
Продолжение табл. 1 Continuing of table 1
Клинико-морфологические характеристики опухолей Qlinicopathological characteristics of tumor
Характеристика Число пациентов, n (%)
Возраст пациентов (n=45), годы
|<60 25 (56)
>60 20 (44)
Стадия по FIGO, n=35
0 0 (0)
IA 18 (51)
IB 6 (17)
IC 0 (0)
II 2 (6)
IIIA 1 (1)
IIIB 0 (0)
IIIC 5 (14)
IVA 1 (1)
IVB 2 (2)
Группа риска согласно ESMO, n=35
Низкий 18 (51)
Промежуточный 4 (11)
Промежуточный высокий 2 (6)
Высокий 7 (20)
РТМ поздних стадий 2 (6)
Метастатический РТМ 2 (6)
Степень дифференцировки, n=39
G1 17 (44)
G2 22 (56)
G3 0 (0)
Характеристика Число пациентов, n (%)
Лимфоваскулярная инвазия, n=32
Да 7 (22)
Нет 25 (78)
Периневральная инвазия, n=32
Да 1 (3)
Нет 31 (97)
Поражение лимфатических узлов, n=41
Да 5 (12)
Нет 21 (51)
Нет данных 15 (37)
Наличие перитуморальныхлимфоцитов, n=34
Да 31 (91)
Нет 3 (9)
Наличие опухоль-инфильтрирующихлимфоцитов, n=39
Да 37 (95)
Нет 2 (5)
Митотическая активность (на 10 п.з. *400) ср, n=39
<10 22 (56)
>10 17 (44)
Наличие метаплазии, n=39
Нет 12 (31)
Плоскоклеточная 14 (36)
Муцинозная трансформация 11 (28)
Светлоклеточная 2 (5)
Статистический анализ данных был произведен с помощью программы для статистической обработки данных GraphPadPrism 8 (Graph Pad Software Inc., CA, США).
Для сравнения двух выборок прошедших анализ на нормальность распределения использовался t-критерий Стьюдента; если одна или обе выборки имели негауссово распределение, использовался U-критерий Манна—Уитни. Для сравнения трех и более выборок использовался тест ANOVA при нормальном распределении, при негауссовом распределении применялся тест Крускала—Уоллиса. Тест х2 использовали для определения наличия статистически значимых различий значений исследуемых маркеров у пациентов с соответствующей молекулярно-генети-ческой характеристикой. Значимость полученных по результатам проведенных тестов данных подтверждалась при значении p<0,05.
Рис. 1. Митотическая активность Примечание. MSI — опухоли с микросателлитной нестабильностью, MSS — опухоли с микросателлитной стабильностью. Fig. 1. Mitotic activity
Note. MSI—microsatellite instability, MSS — microsatellite stability.
Рис. 2. Степень дифференцировки опухоли Примечание. MSI — опухоли с микросателлитной нестабильностью, MSS — опухоли с микросателлитной стабильностью. Fig. 2. Tumor grade
Note. MSI—microsatellite instability, MSS — microsatellite stability
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
Среди 45 исследуемых образцов, мутации в гене POLE не выявлены. Микросателлитная нестабильность была выявлена в 10 исследуемых образцов, что составило 22% обследуемых. Аномальная экспрессия p53 не выявлена.
Проведено сравнение MSI и MSS опухолей по возрасту, стадии по FIGO, риску по ESMO, степени дифференцировки, наличию лимфоваскулярной и периневральной инвазии, поражению лимфатических узлов, наличию перитуморальных лимфоцитов и опухоль-инфильтрирующих лимфоцитов, уровню митотической активности.
Статистически значимая разница наблюдалась в уровне митотической активности исследуемых опухолей, что отображено на рис. 1.
Кроме того, в образцах с M SI отмечается более высокая степень дифференцировки опухоли, что отчасти связано с митотической активностью, однако данная разница не была статистически значимой, p=0,0518 (рис. 2).
Примечательно, что по результатам исследования не были обнаружены опухоли, характеризующиеся наличием мутации в гене POLE и, соответственно, имеющие наиболее благоприятный прогноз. Мутация в гене POLE при РЭ описаны у 7—10% больных [16]. Причиной, по которой мутации в гене POLE не были обнаружены в ходе текущего исследования, может быть их преимущественная встречаемость в группе опухолей высокой степени злокачественности. К ним относятся эндометриоидные карциномы стадии III по FIGO, светлоклеточные карциномы, серозные карциномы, недифференцированные карциномы и карци-носаркомы [10]. Данным критерием отвечало лишь 10 (20%) исследуемых образцов, что и может объяснить отсутствие мутаций POLE в данном исследовании.
Распространенность микросателлитной нестабильности в проведенном исследовании соответствовала мировым данным и составила 22% [8]. Однако разницы по возрасту, стадии по FIGO, риску по ESMO, степени дифференцировки, наличию ва-скулярной и периневральной инвазии, поражению лимфатических узлов, наличию перитуморальных лимфоцитов и опухоль-инфильтрирующих лимфоцитов, уровню митотической активности между пациентами с MSI и MSS не выявлено. Отсутствие разницы в клинико-морфологических показателях между MSI и MSS РЭ также было отмечено в ряде исследований [9, 17]. Так, в работе Maxwell et al. не выявлено статистически значимой разницы между MSI и MSS опухолями в возрасте пациентов, стадии, глубине инвазии в миометрий, однако был отмечен более высокий показатель 5-летней выживаемости в группе MSI [9]. Аналогичные данные, касающиеся схожести MSI и MSS опухолей в клинико-морфо-логических характеристиках, получены в исследовании Buttin et al. [17]. Вместе с тем в ряде других
исследований показано, что микросателлитная нестабильность чаще обнаруживается у пациенток с низкодифференцированными опухолями, а также с более глубокой инвазией в миометрий и распространенным процессом [4, 11, 15, 16]. В частности, в работе Talhouk et al., посвященной новой молекулярной классификации карциномы эндометрия, подчеркивается, что MSI опухоли отличались глубокой инвазией в миометрий, высокой степенью лимфоваскулярной инфильтрации и имели неблагоприятный прогноз [4]. В исследовании An et al. наблюдалась статистически значимая разница между MSI и MSS опухолями в зависимости от стадии заболевания (MSI опухоли преимущественно имели III стадию), глубине инвазии в миометрий (у MSI опухолей он составлял >/ в 60% случаев, у MSS — в 22%), а также в наличии лимфоваскулярной инвазии (у MSI опухолей она была положительна в 41% случаев, у MSS - в 8%) [11].
Полученные в исследовании данные, касающиеся отсутствия статистически значимой разницы в клинико-морфологических показателях MSS и MSI опухолей, не исключают возможного влияния MSI на прогноз заболевания. Так, согласно ряду исследований, неблагоприятный прогноз выживаемости отмечается у больных с ранними стадиями MSI опухолей [18].
Помимо прогностического значения, выявление MSI является молекулярно-генетическим биомаркером синдрома Линча, в связи с чем используется в его диагностике. Согласно статистическим данным, на наследственные случаи приходится около 5% случаев злокачественных новообразований эндометрия [17]. Среди пациентов с MSI РЭ доля синдрома Линча составляет до 10%. Таким образом, пациентов с выявленным MSI следует рассматривать как кандидатов для дальнейшего тестирования на синдром Линча.
Аномальная экспрессия белка p53, ассоциированная с наличием мутаций в гене TP53, в исследуемых образцах не выявлена. Согласно литературным данным, высокий аномальный уровень экспрессии p53 характерен для серозной карциномы, имеющей неблагоприятный прогноз, а также для низкодифференцированных эндометриоидных карцином и карциносарком [13]. Согласно литературным данным, мутации в гене TP53 встречаются у 15% пациентов эндометриоидной карциномой и у 90% пациентов с серозной карциномой [14]. Таким образом, отсутствие обнаружения аномальной экспрессии TP53 в проведенном исследовании связано с отсутствием образцов низкодифференцирован-ных опухолей, а также опухолей другого гистологического строения. В целом влияние аномальной экспрессии p53 на прогноз у пациентов с эндоме-триоидной карциномой в настоящее время обсуждается: согласно последним данным, этот маркер у
таких больных может быть ассоциирован с худшими показателями выживаемости [12]. Клинически обнаружение мутаций в гене p53 ассоциировано с необходимостью назначения более агрессивного лечения и обширного хирургического вмешательства [14].
Индекс митотической активности является одним из маркеров пролиферативной активности клетки, определяется как количество митозов в 10 п.з., подсчитанных при увеличении ><400. Данный показатель связан с темпом роста опухоли и клиническим прогнозом, что описано при онкологических заболеваниях различной локализации. По нашим данным отмечается значимая зависимость митотической активности клеток от их молекуляр-но-генетических характеристик. Так, в микросател-литно нестабильных опухолях наблюдается более высокий уровень митотической активности, чем в микросателлитно стабильных, что соответствует литературным данным [19]. В ряде работ описывается взаимосвязь между неблагоприятным прогнозом и повышенной митотической активностью при эндометриальной карциноме [20]. Эти данные позволили включить митотический индекс в число факторов, влияющих на определение стадии опухоли по FIGO. Аналогично микросателлитная нестабильность чаще встречается в умеренно и низкодифференцированных опухолях, что также показано в проведенном исследовании [16]. Таким образом, полученные результаты согласуются с мировыми данными и позволяют подчеркнуть связь MSI опухолей с таким традиционными маркерами неблагоприятного прогноза, как низкая степень дифференцировки и высокий уровень митотиче-ской активности.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
Новый молекулярно-генетический подход к классификации РЭ обусловливает необходимость точного выявления распространенности мутаций, их связи с прогнозом и течением заболевания. В нашем исследовании показано, что существует взаимосвязь между основными клинико-морфологическими характеристиками опухоли и ее молекулярным профилем. Дальнейшее изучение клинической значимости молекулярных подгрупп может позволить на основе морфологических и генетических данных разработать наиболее оптимальные подходы к тактике ведения онкологического заболевания у конкретного пациента.
* * *
Конфликт интересов
Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.
Conflict of interest
The authors declare no conflict of interest.
ЛИТЕРАТУРА/REFERENCES
1. McAlpine J., Leon-Castillo A., Bosse Т. The rise of a novel classification system for endometrial carcinoma; integration of molecular subclasses. J. Pathol. 2018; 244 (5): 538-49. https://doi.org/10.1002/ path.5034
2. Levine D., The Cancer Genome Atlas Research Network. Integrated genomic characterization of endometrial carcinoma. Nature. 2013; 497: 67-73. https://doi. org/10.1038/nature12113
3. Stelloo E., Bosse Т., Nout R.A., MacKay H.J., Church D.N., Nijman H.W., Leary A., Edmondson R.J., Powell M.E., Crosbie E.J., Kitchener H.C., Mileshkin L., Pollock P.M., Smit V.T., Creutzberg C.L. Refining prognosis and identifying targetable pathways for high-risk endometrial cancer; a Trans-PORTEC initiative. Mod. Pathol. 2015; 28: 836-44. https://doi.org/10.1038/mod-pathol.2015.43
4. Talhouk A., McConechy M.K., Leung S., Yang W., Lum A., Senz J., Boyd N., Pike J., Anglesio M., Kwon J.S., Karnezis A.N., Huntsman D.G., Gilks C.B., McAlpine J.N. Confirmation of ProMisE: A simple, genom-ics-based clinical classifier for endometrial cancer. Cancer. 2017; 123 (5): 802-13. DOI: 10.1002/cncr.30496
5. Imboden S., Nastic D., Ghaderi M., Ry-dberg F., Rau T.T., Mueller M.D., Epstein E., Carlson J.W. Phenotype of POLE-mutated endometrial cancer. PLoS ONE. 2019; 14 (3): e0214318. https://doi.org/10.1371/jour-nal. pone.0214318
6. Kanopiene D., Vidugiriene J., Valuckas K. P., Smailyte G., Uleckiene S., Bacher J. Endometrial cancer and microsatellite instability status. Open medicine. 2014; 10 (1): 70-6. https://doi.org/10.1515/med-2015-0005
7. Hashmi A.A., Mudassir G., Hashmi R.N., Irfan M., Asif H., Khan E.Y., Abu Bakar S.M., Faridi N. Microsatellite Instability in Endometrial Carcinoma by Immunohistochemistry, Association with Clinical and Histopatho-logic Parameters. Asian Pac. J. Cancer Prev. 2019; 20 (9): 2601-6. https://doi. org/10.31557/APJCP.2019.20.9.2601.
8. National Comprehensive Cancer Network Guidelines 3.2021 Uterine Neoplasms, 2021. https://www.nccn.org/guidelines/ guidelines-detail?category=1&id=1473.
9. Maxwell G.L., Risinger J.I., Alvarez A.A., Barrett J.C., Berchuck A. Favorable survival associated with microsatellite instability in endometrioid endometrial cancers. Obstet. Gynecol. 2001; 97 (3): 417-22. https:// doi.org/10.1016/s0029-7844(00)01165-0.
10. Murali R., Davidson B., Fadare O., Carlson J.A., Crum C.P., Gilks C.B., Irving J.A., Malpi-ca A., Matias-Guiu X., McCluggage W.G., Mittal K., Oliva E., Parkash V., Rutgers J.K.L., Staats P.N., Stewart C.J.R., Tornos C., Soslow R.A. High-grade Endometrial Carcinomas: Morphologic and Immunohistochemi-
cal Features, Diagnostic Challenges and Recommendations. Int. J. Gynecol. Pathol. 2019; 38 (Iss 1 Suppl 1): 40-63. https://doi. org/10.1097/PGP.0000000000000491
11. An H.J., Kim K.I., Kim J.Y., Shim J.Y., Kang H., Kim T.H., Kim J.K., Jeong J.K., Lee S.Y., Kim S.J. Microsatellite Instability in Endo-metrioid Type Endometrial Adenocarci-noma is Associated With Poor Prognostic Indicators. Am. J. Surg. Pathol. 2007; 31 (6): 846-53. https://doi.org/10.1097/01. pas.0000213423.30880.ac
12. Yano M., Ito K., Yabuno A., Ogane N., Katoh T., Miyazawa M., Miyazawa M., Hasegawa K, Narahara H, Yasuda M. Impact of TP53 immunohistochemistry on the histological grading system for endometrial endometrioid carcinoma. Mod. Pathol. 2019; 32: 1023-31. https://doi.org/10.1038/ s41379-019-0220-1
13. Bell D. W., Ellenson L. H. Molecular Genetics of Endometrial Carcinoma. Annu. Rev. Pathol. 2017; 14 (1). https://doi.org/10.1146/annurev-pathol-020117-043609
14. Schultheis A.M., Martelotto L.G., De Filippo M.R., Piscuglio S., Ng C.K., Hussein Y.R., Reis-Filho J.S., Soslow R.A., Weigelt B. TP53 Mutational Spectrum in Endometrioid and Serous Endometrial Cancers. Int. J. Gy-necol. Pathol. 2016; 35 (4): 289-300. https:// doi.org/10.1097/pgp.0000000000000243
15. Luchini C., Bibeau F., Ligtenberg M.J.L., Singh N., Nottegar A., Bosse T., Miller R., Riaz N., Douillard J.Y., Andre F., Scarpa A. ESMO recommendations on microsatellite instability testing for immunotherapy in cancer, and its relationship with PD-1/PD-L1 expression and tumour mutational burden: a systematic review-based approach.
Ann. Oncol. 2019; 30 (8): 1232-43. https:// doi.org/10.1093/annonc/mdz116.
16. McConechy M.K., Talhouk A., Leung S., Chiu D., Yang W., Senz J., Reha-Krantz L.J., Lee C.H., Huntsman D.G., Gilks C.B., McAlpine J.N. Endometrial Carcinomas with POLE Exonuclease Domain Mutations Have a Favorable Prognosis. Clin. Cancer Res. 2016; 22 (12): 2865-73. https://doi. org/10.1158/1078-0432.CCR-15-2233.
17. Buttin B.M., Powell M.A., Mutch D.G., Rader J.S., Herzog T.J., Gibb R.K., Huettner P., Edmonston T.B., Goodfellow P.J. Increased risk for hereditary nonpolyposis colorectal cancer-associated synchronous and metachronous malignancies in patients with microsatellite instability-positive endo-metrial carcinoma lacking MLH1 promoter methylation. Clin. Cancer Res. 2004; 10 (2): 481-90. https://doi.org/10.1158/1078-0432. ccr-1110-03.
18. Steinbakk A., Malpica A., Slewa A., Gudlaugsson E., Janssen E.A., Arends M., Kruse A.J., Yinhua Y., Feng W., Baak J.P.. High frequency microsatellite instability has a prognostic value in endometrial endometrioid adenocarcinoma, but only in FIGO stage 1 cases. Anal. Cell Pathol. (Amst). 2010; 33 (5): 245-55. https://doi. org/10.3233/ACP-CLO-2010-0550
19. Walsh M.D., Buchanan D.D., Cummings M.C., Pearson S.A., Arnold S.T., Clenden-ning M., Walters R., McKeone D.M., Spurdle A.B., Hopper J.L., Jenkins M.A., Phillips K.D., Suthers G.K., George J., Goldblatt J., Muir A., Tucker K., Pelzer E., Gattas M.R., Woodall S., Parry S., Macrae F.A., Haile R.W., Baron J.A., Potter J.D., Le Marchand L., Bapat B., Thibodeau S.N., Lindor N.M., McGuckin M.A., Young J.P. Lynch Syndrome-Associated Breast Cancers: Clinicopathologic Characteristics of a Case Series from the Colon Cancer Family Registry. Clin. Cancer Res. 2010; 16 (7): 2214-24. https://doi. org/10.1158/1078-0432.ccr-09-3058
20. Al Kushi A., Lim P., Aquino-Parsons C., Gilks C. B. Markers of Proliferative Activity Are Predictors of Patient Outcome for Low-Grade Endometrioid Adenocarcinoma But Not Papillary Serous Carcinoma of Endometrium. Mod. Pathol. 2002; 15 (4): 365-71. https://doi.org/10.1038/mod-pathol.3880531
Для цитирования: Королёва Е.И., Мусаелян А.А., Назаров В.Д., Лапин С.В., Воробьев С.Л., Шарова О.Л., Козорезова Е.С., Кора-блина И.М., Эмануэль В.Л., Орлов C.B. Молекулярно-генетические особенности рака эндометрия и их взаимосвязь с клинико-морфо-логическими характеристиками. Молекулярная медицина. 2022; 20 (3): 34-40. https://doi.org/10.29296/24999490-2022-03-05
Поступила 9 декабря 2021 г.
For citation: Koroleva E.I., Musaelyan A.A., Nazarov V.D., Lapin S.V., Vorobev S.L., Sharova O.L., Kozorezova E.S., Korablina I.M., Emanuel V.L., Orlov S.V. Molecular markers of endometrial carcinoma and associated clinicopathological features. Molekulyarnaya meditsina. 2022; 20 (3): 34-40 (in Russian). https://doi.org/10.29296/24999490-2022-03-05
